包含TLR7激动剂的组合药物
技术领域
本发明涉及TLR7激动剂与免疫检查点抑制剂的组合。
发明背景
作为涉及病毒、微生物等等的异生物质识别的受体之一，Toll样受体（TLR）是已知的。TLR是一类模式识别受体（PRR），因为它们可以识别病毒或细菌的模式。迄今为止，已经在人类中发现了其10种亚型。已经清楚的是，TLR的每种亚型识别不同的配体，例如，这些亚型识别细菌表面上的脂多糖（LPS）、脂蛋白、鞭毛蛋白、病毒双链RNA或包含在细菌DNA或病毒DNA中的未甲基化的CpG岛。
当激活TLR时，激活的TLR通过体液因子如细胞因子激活自然免疫以消除异生物质。为了消除癌细胞，细胞介导免疫，尤其是细胞毒性T淋巴细胞（称为“CTL”）起着重要的作用。CTL通过前体T细胞的分化和增殖而产生，所述前体T细胞识别癌细胞上的抗原肽（癌抗原肽）和MHC（主要组织相容性复合物）I类的复合物，产生的CTL攻击癌细胞。
与TLR家族的其它成员相比，TLR7在核内体中高度表达，其可以识别衍生自病毒的主要为单链的RNA。TLR7在免疫细胞，尤其是浆细胞样树突状细胞（pDC）中高度表达。当在pDC中刺激TLR7时，主要分泌作为I型干扰素的干扰素α。当激活TLR7时，MYD88组装并由此启动信号级联。并且，许多免疫因子的转录通过作为转录因子的NF-κB或IRF7来激活。干扰素α是一类细胞因子，其具有抗病毒活性和抗肿瘤活性，并且干扰素α是一种已经实际用于治疗HCV和HBC以及癌症的细胞因子。
当刺激TLR时，包括树状细胞的抗原呈递细胞使衍生自癌细胞的抗原内化，随后增强CD8阳性T细胞的抗原识别能力以激活CTL诱导。激活的CTL识别肿瘤，并通过细胞毒性作用或细胞因子产生对肿瘤发挥抗肿瘤作用。
例如，作为TLR7和TLR8激动剂的咪喹莫特已经实际用作治疗基底细胞癌的药物。作为其它TLR7激动剂，已经报道了TLR7和TLR8激动剂如瑞喹莫德（R848）、MEDI-9197和PF-4878691（852A）。此外，作为TLR7激动剂，已经报道了咪喹莫特、洛索立宾和专利文献1中公开的化合物。
即使CTL存在于癌症附近，癌症有时也不会减小或小时。作为原因之一，有人提出肿瘤附近的CTL可能早早耗尽；并且针对癌细胞的细胞毒性可能小时，并且多种细胞因子的生产/增殖能力可能小时，因此CTL进入细胞死亡。已经阐明，耗竭是由来自在CTL的细胞膜表面上表达的免疫检查点分子的负信号所引起的。
迄今为止，已经报道了CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG-3、KIR、TIM-3、B7-H3、B7-H4、VISTA/PD-1H、HVEM、BTLA、CD160、GAL9、TIGIT、PVR、BTNL2、BTN1A1、BTN2A2、BTN3A2、CSF-1R等等作为免疫检查点分子（非专利文献1）。例如，PD-1是在活化的淋巴细胞（T细胞、B细胞和NKT细胞）和骨髓细胞上表达的归类为CD28家族的受体，并连接到在抗原呈递细胞中表达的PD-1配体（PD-L1和PD-L2）上，以便将抑制信号传递至淋巴细胞，并由此将淋巴细胞的活性模式调节为阴性。已经阐明，除了抗原呈递细胞之外，PD-L1也在各种癌细胞中表达，也就是说，癌症可以通过PD-L1逃避CTL的攻击。
近来，已经开始开发可以抑制免疫检查点分子的功能的抗体（非专利文献2）。这些抗体可以恢复CTL的耗竭状态。例如，抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体可以抑制PD-1和PD-L1的结合以恢复CTL的细胞毒性活性。实际上，已经对患有非小细胞肺癌或黑素瘤的患者进行了抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体的临床试验，并且一些患者已经获得了显著的效果。但是，患者获得此类显著效果在所有病例中仅占大约20至30%，一些患者经历了严重的免疫相关不良事件。也就是说，使用抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体的治疗方法尚有不足之处。
近来，据报道，抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体与已知作为TLR7和TLR8激动剂的MEDI-9197的组合可以增强抗PD-1抗体/抗PD-L1抗体的抗肿瘤免疫活性（非专利文献3）。
现有技术
（专利参考文献）
[专利文献1] WO 2013/172479
（非专利参考文献）
[非专利文献1] Nat Rev Cancer. 2012; 12: 252-64
[非专利文献2] Nat Rev Drug Discov. 2015 Aug; 14 (8): 561-8
[非专利文献3] J Immunol. 2014 Nov 1; 193(9):4722-31。
发明概述
（技术问题）
本发明的目的可以是提供一种治疗或预防癌症的药物，其特征在于长期的免疫诱导活性。此外，本发明的目的还可以是提供一种用于治疗或预防癌症的药物，其特征在于该药物可以在对免疫检查点抑制剂具有不应性的患者或癌症复发的患者中显示功效。
（问题的解决方案）
本发明人进行了广泛的研究，随后发现通过组合使用免疫检查点抑制剂和TLR7激动剂可以提高癌细胞中MHC I类的表达，并且该组合的抗癌活性比单独使用每种药剂更有效。此外，本发明人还发现上述组合可以增加在肿瘤中浸润的淋巴细胞中的效应记忆T细胞以维持长期的抗癌免疫力，并可阻止肿瘤再移植的着床（engraftment）。基于这些发现，完成了本发明。
因此，如下描述本发明：
（项目1）诱导效应记忆T细胞的药剂，包含TLR7激动剂，其与免疫检查点抑制剂组合使用。
（项目2）诱导MHC I类的药剂，包含TLR7激动剂，其与免疫检查点抑制剂组合使用。
（项目3）项目1或2的药剂，其用于治疗癌症或感染。
（项目4）项目1或2的药剂，其用于治疗癌症。
（项目5）项目3或4的药剂，其中该癌症选自非小细胞肺癌；小细胞肺癌；胰腺癌；恶性黑素瘤；肾细胞癌；胃癌；结肠癌；直肠癌；小肠癌；乳腺癌；生殖细胞癌；膀胱癌；前列腺癌；子宫内膜癌；子宫颈癌；卵巢癌；肝癌；Merkel细胞癌；骨癌；头颈癌；皮肤或眶内恶性黑色素瘤；肛门癌；睾丸癌；食管癌；内分泌系统癌；甲状腺癌；甲状旁腺癌；肾上腺癌；软组织肉瘤；尿路上皮癌；阴茎癌；多形性成胶质细胞瘤；脑肿瘤；慢性或急性白血病，包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病和慢性淋巴细胞性白血病；恶性淋巴瘤，包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；骨髓增生异常综合征；和多发性骨髓瘤。
（项目6）项目1至5任一项的药剂，其施用于对免疫检查点抑制剂具有不应性的患者。
（项目7）项目1至6任一项的药剂，其施用于癌症复发的患者。
（项目8）项目1至7任一项的药剂，其具有长期抗癌免疫力。
（项目9）项目1至8任一项的药剂，其中该TLR7激动剂是具有嘧啶骨架、腺嘌呤骨架、咪唑喹啉骨架、鸟嘌呤骨架或二氢蝶啶骨架的化合物；或其可药用盐。
（项目10）项目9的药剂，其中该TLR7激动剂是具有嘧啶骨架、腺嘌呤骨架或咪唑喹啉骨架的化合物；或其可药用盐。
（项目11）项目1至8任一项的药剂，其中该TLR7激动剂是咪喹莫特、洛索立宾、或以下化合物中的任一种：
N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸，
N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸，
6-氨基-2-(丁氨基)-9-({6-[2-(二甲基氨基)乙氧基]吡啶-3-基}甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，
6-氨基-9-({6-[2-(二甲基氨基)乙氧基]吡啶-3-基}甲基)-2-乙氧基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，和
N-(4-{[6-氨基-2-(丁氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基]甲基}苯甲酰基)甘氨酸，或
其可药用盐。
（项目12）项目11的药剂，其中该TLR7激动剂是以下化合物中的任一种：
N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸，
N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸，
6-氨基-2-(丁氨基)-9-({6-[2-(二甲基氨基)乙氧基]吡啶-3-基}甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，和
6-氨基-9-({6-[2-(二甲基氨基)乙氧基]吡啶-3-基}甲基)-2-乙氧基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，或
其可药用盐。
（项目13）项目12的药剂，其中该TLR7激动剂是N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸、N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸或其可药用盐。
（项目14）项目1至13任一项的药剂，其中该免疫检查点抑制剂是至少一种可以抑制分子功能的药物，所述分子选自：
（1）CTLA-4，
（2）PD-1，
（3）LAG-3，
（4）BTLA，
（5）KIR，
（6）TIM-3，
（7）PD-L1，
（8）PD-L2，
（9）B7-H3，
（10）B7-H4，
（11）HVEM，
（12）GAL9，
（13）CD160，
（14）VISTA，
（15）BTNL2，
（16）TIGIT，
（17）PVR，
（18）BTN1A1，
（19）BTN2A2，
（20）BTN3A2，和
（21）CSF-1R。
（项目15）项目14的药剂，其中该免疫检查点抑制剂是至少一种可以抑制分子功能的药物，所述分子选自CTLA-4、PD-1、LAG-3、TIM-3、BTLA、VISTA、HVEM、TIGIT、PVR、PD-L1和CD160。
（项目16）项目的药剂14，其中该免疫检查点抑制剂是至少一种可以抑制分子功能的药物，所述分子选自PD-1、LAG-3、TIM-3、BTLA、VISTA、HVEM、TIGIT、PVR、PD-L1和CD160。
（项目17）项目的药剂14，其中该免疫检查点抑制剂是可以抑制PD-1或PD-L1的分子功能的药物。
（项目18）项目14至17任一项的药剂，其中该免疫检查点抑制剂是针对该分子的抗体。
（项目19）项目18的药剂，其中该免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体。
（项目20）项目18的药剂，其中该免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。
（项目21）项目19或20的药剂，其中该抗PD-1抗体是纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗、信迪利单抗、JNJ-3283、BI-754091、INCMGA-00012、ABBV-181、CC-90006、AGEN-2034w、GSL-010、LZM-009、Sym-021、AB-122、AK-105、CS-1003、HLX-10或BCD-100。
（项目22）项目19或20的药剂，其中该抗PD-L1抗体是度伐鲁单抗、阿妥珠单抗、阿维鲁单抗、STI-1014、CK-301、BMS-986189、LY-3300054、CX-072、CBT-502、FAZ-053、FS-118、HTI-1088、MSB-2311、BGB-A333、IMC-001、HLX-20、A-167或BMS-936559。
（项目23）项目18的药剂，其中该免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体。
（项目24）项目19或23的药剂，其中该抗CTLA-4抗体是伊匹单抗、替西木单抗、BMS-986218、MK-1308、ADU-1604、BMS-986249、CS-1002、BCD-145或REGN-4659。
（项目25）项目1至24任一项的药剂，其中该TLR7激动剂与该免疫检查点抑制剂同时施用。
（项目26）项目1至24任一项的药剂，其中该TLR7激动剂与该免疫检查点抑制剂分开施用。
（项目27）项目1至24任一项的药剂，其中该TLR7激动剂在该免疫检查点抑制剂之前施用。
（项目28）项目1至24任一项的药剂，其中该TLR7激动剂在该免疫检查点抑制剂之后施用。
（项目29）项目1至28任一项的药剂，进一步包含可药用载体。
（项目30）诱导效应记忆T细胞的药剂的试剂盒，包含TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂。
（项目31）诱导MHC I类的药剂的试剂盒，包含TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂。
（项目32）诱导效应记忆T细胞或诱导MHC I类的方法，该方法包括向哺乳动物施用治疗有效量的TLR7激动剂和治疗有效量的免疫检查点抑制剂。
（项目33）用于诱导效应记忆T细胞或诱导MHC I类的TLR7激动剂，其与免疫检查点抑制剂一起使用。
（项目34）用于诱导效应记忆T细胞或诱导MHC I类的免疫检查点抑制剂，其与TLR7激动剂一起使用。
（项目35）TLR7激动剂在制造用于诱导效应记忆T细胞或诱导MHC I类的药物中的用途，其与免疫检查点抑制剂一起使用。
（项目36）免疫检查点抑制剂在制造用于诱导效应记忆T细胞或诱导MHC I类的药物中的用途，其与TLR7激动剂一起使用。
（项目37）TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂在制造用于诱导效应记忆T细胞或诱导MHC I类的药物中的用途。
（项目38）用于治疗或预防癌症的药剂，包含N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸、N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸或其可药用盐，其与免疫检查点抑制剂一起使用。
（项目39）项目38的药剂，其中该免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体。
（项目40）项目38的药剂，其中该免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。
（项目41）项目38的药剂，其中该免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体。
（项目42）项目39或40的药剂，其中该抗PD-1抗体是纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗、信迪利单抗、JNJ-3283、BI-754091、INCMGA-00012、ABBV-181、CC-90006、AGEN-2034w、GSL-010、LZM-009、Sym-021、AB-122、AK-105、CS-1003、HLX-10或BCD-100。
（项目43）项目39或40的药剂，其中该抗PD-L1抗体是度伐鲁单抗、阿妥珠单抗、阿维鲁单抗、STI-1014、CK-301、BMS-986189、LY-3300054、CX-072、CBT-502、FAZ-053、FS-118、HTI-1088、MSB-2311、BGB-A333、IMC-001、HLX-20、A-167或BMS-936559。
（项目44）项目39或41的药剂，其中该抗CTLA-4抗体是伊匹单抗、替西木单抗、BMS-986218、MK-1308、ADU-1604、BMS-986249、CS-1002、BCD-145或REGN-4659。
（项目45）项目38至44任一项的药剂，其施用于耐受免疫检查点抑制剂的患者。
（项目46）项目38至44任一项的药剂，其施用于癌症复发的患者。
（项目47）项目38至44任一项的药剂，其具有长期抗癌免疫力。
（项目48）项目38至44任一项的药剂，其中N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸、N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸或其可药用盐，以及，
免疫检查点抑制剂
同时或分开施用。
（项目49）项目38至44任一项的药剂，其中N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸、N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸或其可药用盐在该免疫检查点抑制剂之前或之后施用。
（项目50）项目38至44任一项的药剂，进一步包含可药用载体。
（项目51）治疗或预防癌症的药剂的试剂盒，包含N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸、N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸或其可药用盐，以及
免疫检查点抑制剂。
（项目52）治疗或预防癌症的方法，其包括向哺乳动物施用治疗有效量的TLR7激动剂和治疗有效量的免疫检查点抑制剂。
（项目53）用于治疗或预防癌症的TLR7激动剂，其与免疫检查点抑制剂一起使用。
（项目54）用于治疗或预防癌症的免疫检查点抑制剂，其与TLR7激动剂一起使用。
（项目55）TLR7激动剂在制造用于治疗或预防癌症的药物中的用途，其与免疫检查点抑制剂一起使用。
（项目56）免疫检查点抑制剂在制造用于治疗或预防癌症的药物中的用途，其与TLR7激动剂一起使用。
（项目57）TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂在制造用于治疗或预防癌症的药物中的用途。
（项目58）项目52的方法、项目53或54的药剂、或项目55至57任一项的用途，其中该TLR7激动剂是N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸、N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸，或其可药用盐。
（发明效果）
本发明提供了：
诱导效应记忆T细胞的药剂或诱导MHC I类的药剂，其中TLR7激动剂与免疫检查点抑制剂一起使用，
包含TLR7激动剂的药物，其与免疫检查点抑制剂一起使用，和
诱导效应记忆T细胞的药剂或诱导MHC I类的药剂的试剂盒，包含TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂，
等等。
附图概述
图1显示了每个给药组的肿瘤生长曲线。纵坐标表示肿瘤体积，横坐标表示肿瘤细胞移植后经过的天数。
图2显示了每个给药组中，在CD8阳性细胞中效应记忆T细胞的每个比，其通过FACS分析获得。
图3显示了每个给药组中H-2Kd的每个MFI，其通过FACS分析获得。
图4显示了每个给药组中治疗应答受试者的数量和再次移植后移植可接受的受试者数量。
图5显示了每个给药组的肿瘤生长曲线。纵坐标表示肿瘤体积，横坐标表示肿瘤细胞移植后经过的天数。
图6显示了每个给药组中，在CD8阳性细胞中效应记忆T细胞的每个比，其通过FACS分析获得。
实施方案描述
在下文中详细解释本发明的实施方案。
本文中使用的TLR7激动剂（其增强TLR7的生物活性，即具有TLR7受体激动剂活性）是指增强TLR7受体功能的化合物，但不限于此。
本文中使用的TLR7激动剂优选是低分子量化合物，例如其分子量为200-600、优选250-500、更优选300-500。
本文中使用的TLR7激动剂优选包括TLR7选择性激动剂。“TLR7选择性”在这里是指除TLR7受体之外的TLR受体的激动剂活性低于TLR7受体的激动剂活性。例如，可以例举其中TLR7受体激动剂活性比以单链RNA作为内源性配体的TLR8受体激动剂活性更有效的情况，更详细地为其中TLR7受体激动剂活性（EC50值）是TLR8受体效力的30倍以上的情况。
本文中使用的TLR7激动剂优选包括具有腺嘌呤骨架、嘧啶骨架、咪唑喹啉骨架、鸟嘌呤骨架或二氢蝶啶骨架的化合物，更优选具有腺嘌呤骨架、嘧啶骨架或咪唑喹啉骨架的化合物。
具有腺嘌呤骨架的化合物包括具有4-氨基-8-氧代-嘌呤（8-氧代腺嘌呤）骨架的化合物，例如具有4-氨基-8-氧代-嘌呤骨架的化合物，其第9位被烷基取代（例如直链C1-6烷基），所述烷基可以被5-至6-元芳族碳环基、5-至6-元芳族杂环基或4-至7-元脂族含氮杂环基取代。例如，其包括GSK-2245035（6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮）、PF-4171455（4-氨基-1-苄基-6-三氟甲基-1,3-二氢咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮）等等，其公开在MedChemComm 2011, 2, 185中；或WO 1998/01448、WO 1999/28321、WO 2002/085905、WO 2008/114008、WO 2008/114819、WO 2008/114817、WO 2008/114006、WO 2010/018131、WO 2010/018134、WO 2008/101867、WO 2010/018133、WO 2009/005687等等中公开的化合物。具有腺嘌呤骨架的化合物优选包括6-氨基-9-({6-[2-(二甲基氨基)乙氧基]吡啶-3-基}甲基)-2-乙氧基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮、6-氨基-2-(丁氨基)-9-({6-[2-(二甲基氨基)乙氧基]吡啶-3-基}甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮和CL264（N-(4-{[6-氨基-2-(丁氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基]甲基}苯甲酰基)甘氨酸）。
具有嘧啶骨架的化合物包括具有2,4-二氨基嘧啶骨架的化合物，例如具有2,4-二氨基嘧啶的化合物，其第6位被烷基取代，且其第5位被烷基取代（例如直链C1-6烷基），所述烷基可以被5-至6-元芳族碳环基、5-至6-元芳族杂环基或4-至7-元脂族含氮杂环基取代。其可以包括例如WO 2000/12487、WO 2010/133885、WO 2013/172479和WO 2012/136834中公开的一些化合物。优选的具有嘧啶骨架的化合物包括N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸（下文显示的专利文献1，实施例1，式(I)）、N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸（下文显示的专利文献1，实施例3，式(II)）。
具有咪唑喹啉骨架的化合物包括具有4-氨基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉骨架的化合物，如咪喹莫特、瑞喹莫德和852A（N-[4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)丁基]甲磺酰胺），并且例如4-氨基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉，其第1位被C1-6烷基或C1-6烷氧基取代，并且其第2位被C1-6烷基或C1-6烷氧基取代。其可以包括例如WO 2010/48520、WO 2008/135791、US 4689338、US 4698348和WO 2007/030777中公开的一些化合物。
具有咪唑喹啉骨架的化合物优选包括咪喹莫特。
具有鸟嘌呤骨架的化合物包括具有2-氨基-6-氧代嘌呤骨架的化合物，例如洛索立宾。
具有二氢蝶啶骨架的化合物包括具有4-氨基-7,8-二氢蝶啶-6(5H)-酮骨架的化合物，例如维沙莫德（4-氨基-2-丁氧基-8-[[3-[(吡咯烷-1-基)甲基]苯基]甲基]-7,8-二氢蝶啶-6(5H)-酮）。
此外，作为TLR7激动剂的低分子量化合物可以包括艾托立宾、ANA-773和WO 2010/077613中公开的一些化合物。
本文中所用的“免疫检查点抑制剂”是指可以抑制癌细胞或抗原呈递细胞引起的免疫抑制的物质。该免疫检查点抑制剂包括可以抑制已经报道充当免疫抑制剂的分子的功能的药物，但不限于此，例如已经报道充当免疫抑制剂的以下化合物：（1）CTLA-4（如伊匹单抗、替西木单抗、BMS-986218、MK-1308、ADU-1604、BMS-986249、CS-1002、BCD-145和REGN-4659）；（2）PD-1（如纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗、信迪利单抗、JNJ-3283、BI-754091、INCMGA-00012、ABBV-181、CC-90006、AGEN-2034w、GSL-010、LZM-009、Sym-021、AB-122、AK-105、CS-1003、HLX-10和BCD-100）；（3）PD-L1（如度伐鲁单抗、阿妥珠单抗、阿维鲁单抗、STI-1014、CK-301、BMS-986189、LY-3300054、CX-072、CBT-502、FAZ-053、FS-118、HTI-1088、MSB-2311、BGB-A333、IMC-001、HLX-20、A-167和BMS-936559）；（4）PD-L2；（5）LAG-3（如IMP-321和BMS-986016）；（6）KIR（如IPH2101）；（7）TIM-3；（8）B7-H3（如MGA-271）；（9）B7-H4；（10）VISTA；（11）HVEM；（12）BTLA；（13）CD160；（14）GAL9；（15）TIGIT；（16）PVR；（17）BTNL2；（18）BTN1A1；（19）BTN2A2；（20）BTN3A2（Nat Rev Drug Discov. 2013; 12: 130-146；Nikkei MedicalCancer Review 2014; 9；Nat Rev Immunol. 2014; 14: 559-69）；和（21）CSF1-R。
该免疫检查点抑制剂优选包括可以抑制CTLA-4、PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3、VISTA、HVEM、BTLA、CD160、TIGIT或PVR的功能的药物，更优选可以抑制CTLA-4、PD-1或PD-L1的功能的药物。
该免疫检查点抑制剂还优选包括针对上述分子的抗体，例如抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗LAG-3抗体、抗TIM-3抗体、抗VISTA抗体、抗HVEM抗体、抗BTLA抗体、抗CD160抗体、抗TIGIT抗体或抗PVR抗体。
抗CTLA-4抗体是识别CTLA-4分子的蛋白质，其具有Y型四链结构（轻链和重链的两条多肽链各有两个），并且其选择性识别具有其片段抗原结合位点（在下文中称为“Fab位点”）的一种分子。该抗CTLA-4抗体可以通过使产生抗体的B细胞与骨髓瘤发生细胞融合以制备杂交瘤，并随后纯化培养基上清液中分泌的抗体来制备。
抗PD-1抗体是识别PD-1分子的蛋白质，其具有Y型四链结构（轻链和重链的两条多肽链各有两个），并且其选择性识别具有Fab位点的分子。该抗PD-1抗体可以通过使产生抗体的B细胞与骨髓瘤发生细胞融合以制备杂交瘤，并随后纯化培养基上清液中分泌的抗体来制备。
抗PD-L1抗体是识别PD-L1分子的蛋白质，其具有Y型四链结构（轻链和重链的两条多肽链各有两个），并且其选择性识别具有Fab位点的一种分子。该抗PD-L1抗体可以通过使产生抗体的B细胞与骨髓瘤发生细胞融合以制备杂交瘤，并随后纯化培养基上清液中分泌的抗体来制备。
以相同的方式，抗LAG-3抗体、抗TIM-3抗体、抗VISTA抗体、抗HVEM抗体、抗BTLA抗体、抗CD160抗体、抗TIGIT抗体或抗PVR抗体是识别各分子的蛋白质，其具有Y型四链结构（轻链和重链的两条多肽链各有两个），并且其选择性识别一种分子。这些抗体可以通过使产生各抗体的B细胞与骨髓瘤发生细胞融合以制备杂交瘤，并随后纯化培养基上清液中分泌的各抗体来制备。
例如，作为免疫检查点抑制剂的抗体优选包括抗CTLA-4抗体（如伊匹单抗、替西木单抗、BMS-986218、MK-1308、ADU-1604、BMS-986249、CS-1002、BCD-145和REGN-4659）、抗PD-1抗体（如纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗、信迪利单抗、JNJ-3283、BI-754091、INCMGA-00012、ABBV-181、CC-90006、AGEN-2034w、GSL-010、LZM-009、Sym-021、AB-122、AK-105、CS-1003、HLX-10和BCD-100）、抗PD-L1抗体（如度伐鲁单抗、阿妥珠单抗、阿维鲁单抗、STI-1014、CK-301、BMS-986189、LY-3300054、CX-072、CBT-502、FAZ-053、FS-118、HTI-1088、MSB-2311、BGB-A333、IMC-001、HLX-20、A-167和BMS-936559）、抗LAG-3抗体（如IMP-321和BMS-986016）、抗TIM-3抗体、抗VISTA抗体、抗HVEM抗体、抗BTLA抗体、抗CD160抗体、抗TIGIT抗体和抗PVR抗体。更优选地，其包括抗CTLA-4抗体（如伊匹单抗、替西木单抗、BMS-986218、MK-1308、ADU-1604、BMS-986249、CS-1002、BCD-145和REGN-4659）、抗PD-1抗体（如纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗、信迪利单抗、JNJ-3283、BI-754091、INCMGA-00012、ABBV-181、CC-90006、AGEN-2034w、GSL-010、LZM-009、Sym-021、AB-122、AK-105、CS-1003、HLX-10和BCD-100）和抗PD-L1抗体（如度伐鲁单抗、阿妥珠单抗、阿维鲁单抗、STI-1014、CK-301、BMS-986189、LY-3300054、CX-072、CBT-502、FAZ-053、FS-118、HTI-1088、MSB-2311、BGB-A333、IMC-001、HLX-20、A-167和BMS-936559）。特别优选地，其包括抗CTLA-4抗体（伊匹单抗、替西木单抗）、抗PD-1抗体（纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗、信迪利单抗）和抗PD-L1抗体（度伐鲁单抗、阿妥珠单抗、阿维鲁单抗）。
作为本文中所用的诱导效应记忆T细胞的药剂或诱导MHC I类的药剂，
TLR7激动剂与免疫检查点抑制剂的组合的一个实施方案包括TLR7激动剂与抑制分子功能的药物的组合，所述分子选自：（1）CTLA-4；（2）PD-1；（3）PD-L1；（4）PD-L2；（5）LAG-3；（6）KIR；（7）TIM-3；（8）B7-H3；（9）B7-H4；（10）VISTA；（11）HVEM；（12）BTLA；（13）CD160；（14）GAL9；（15）TIGIT；（16）PVR；（17）BTNL2；（18）BTN1A1；（19）BTN2A2；（20）BTN3A2；和（21）CSF1-R。
TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的组合的另一实施方案包括TLR7激动剂与抑制分子功能的药物的组合，所述分子选自：CTLA-4；PD-1；PD-L1；LAG-3；TIM-3；VISTA；HVEM；BTLA；CD160；TIGIT；和PVR。
TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的组合的另一实施方案包括具有腺嘌呤骨架、嘧啶骨架、咪唑喹啉骨架、鸟嘌呤骨架或二氢蝶啶骨架的TLR7选择性激动剂；和可以抑制分子功能的药物的组合，所述分子选自：CTLA-4；PD-1；PD-L1；LAG-3；TIM-3；VISTA；HVEM；BTLA；CD160；TIGIT；和PVR。
TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的组合的另一实施方案包括具有腺嘌呤骨架、嘧啶骨架或咪唑喹啉骨架的TLR7选择性激动剂；和抗体的组合，所述抗体选自：抗CTLA-4抗体（如伊匹单抗、替西木单抗、BMS-986218、MK-1308、ADU-1604、BMS-986249、CS-1002、BCD-145和REGN-4659）；抗PD-1抗体（如纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗、信迪利单抗、JNJ-3283、BI-754091、INCMGA-00012、ABBV-181、CC-90006、AGEN-2034w、GSL-010、LZM-009、Sym-021、AB-122、AK-105、CS-1003、HLX-10和BCD-100）；抗PD-L1抗体（如度伐鲁单抗、阿妥珠单抗、阿维鲁单抗、STI-1014、CK-301、BMS-986189、LY-3300054、CX-072、CBT-502、FAZ-053、FS-118、HTI-1088、MSB-2311、BGB-A333、IMC-001、HLX-20、A-167和BMS-936559）；抗LAG-3抗体（如IMP-321和BMS-986016）；抗TIM-3抗体；抗VISTA抗体；抗HVEM抗体；抗BTLA抗体；抗CD160抗体；抗TIGIT抗体；和抗PVR抗体。
TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的组合的另一实施方案包括以下的组合：TLR7选择性激动剂，其选自：咪喹莫特；洛索立宾；N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸；N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸；6-氨基-2-(丁氨基)-9-({6-[2-(二甲基氨基)乙氧基]吡啶-3-基}甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮；6-氨基-9-({6-[2-(二甲基氨基)乙氧基]吡啶-3-基}甲基)-2-乙氧基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮；N-(4-{[6-氨基-2-(丁氨基)-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基]甲基}苯甲酰基)甘氨酸（CL264），及其可药用盐；和抗体，所述抗体选自：抗CTLA-4抗体（如伊匹单抗、替西木单抗、BMS-986218、MK-1308、ADU-1604、BMS-986249、CS-1002、BCD-145和REGN-4659）；抗PD-1抗体（如纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗、信迪利单抗、JNJ-3283、BI-754091、INCMGA-00012、ABBV-181、CC-90006、AGEN-2034w、GSL-010、LZM-009、Sym-021、AB-122、AK-105、CS-1003、HLX-10和BCD-100）；和抗PD-L1抗体（如度伐鲁单抗、阿妥珠单抗、阿维鲁单抗、STI-1014、CK-301、BMS-986189、LY-3300054、CX-072、CBT-502、FAZ-053、FS-118、HTI-1088、MSB-2311、BGB-A333、IMC-001、HLX-20、A-167和BMS-936559）。
TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的组合的另一实施方案包括以下的组合：TLR7选择性激动剂，其选自：N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸；N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸；6-氨基-2-(丁氨基)-9-({6-[2-(二甲基氨基)乙氧基]吡啶-3-基}甲基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮；6-氨基-9-({6-[2-(二甲基氨基)乙氧基]吡啶-3-基}甲基)-2-乙氧基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，及其可药用盐；和抗体，所述抗体选自：抗CTLA-4抗体（如伊匹单抗、替西木单抗、BMS-986218、MK-1308、ADU-1604、BMS-986249、CS-1002、BCD-145和REGN-4659）；抗PD-1抗体（如纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗、信迪利单抗、JNJ-3283、BI-754091、INCMGA-00012、ABBV-181、CC-90006、AGEN-2034w、GSL-010、LZM-009、Sym-021、AB-122、AK-105、CS-1003、HLX-10和BCD-100）；和抗PD-L1抗体（如度伐鲁单抗、阿妥珠单抗、阿维鲁单抗、STI-1014、CK-301、BMS-986189、LY-3300054、CX-072、CBT-502、FAZ-053、FS-118、HTI-1088、MSB-2311、BGB-A333、IMC-001、HLX-20、A-167和BMS-936559）。
TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的组合的另一实施方案包括以下的组合：TLR7选择性激动剂，其选自：N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸；N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸，及其可药用盐；和抗体，所述抗体选自：抗PD-1抗体（如纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗和信迪利单抗）；抗CTLA-4抗体（如伊匹单抗和替西木单抗）；和抗PD-L1抗体（如度伐鲁单抗、阿妥珠单抗和阿维鲁单抗）。
本发明的另一实施方案包括用于治疗或预防癌症的药剂，包含TLR7激动剂，其是N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸、N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸或其可药用盐，其与免疫检查点抑制剂一起使用。在这里，TLR7激动剂与免疫检查点抑制剂的组合的一个实施方案包括以下的组合：TLR7激动剂，其为N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸、N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸或其可药用盐；和可以抑制分子功能的药物，所述分子选自：（1）CTLA-4；（2）PD-1；（3）PD-L1；（4）PD-L2；（5）LAG-3；（6）KIR；（7）TIM-3；（8）B7-H3；（9）B7-H4；（10）VISTA；（11）HVEM；（12）BTLA；（13）CD160；（14）GAL9；（15）TIGIT；（16）PVR；（17）BTNL2；（18）BTN1A1；（19）BTN2A2；（20）BTN3A2；和（21）CSF1-R。
TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的组合的另一实施方案包括以下的组合：TLR7激动剂，其为N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸、N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸或其可药用盐；和可以抑制分子功能的药物，所述分子选自：CTLA-4；PD-1；PD-L1；LAG-3；TIM-3；VISTA；HVEM；BTLA；CD160；TIGIT；和PVR。
TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的组合的另一实施方案包括以下的组合：TLR7激动剂，其选自：N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸、N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸及其可药用盐；和抗体，其选自：抗CTLA-4抗体（如伊匹单抗、替西木单抗、BMS-986218、MK-1308、ADU-1604、BMS-986249、CS-1002、BCD-145和REGN-4659）；抗PD-1抗体（如纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗、信迪利单抗、JNJ-3283、BI-754091、INCMGA-00012、ABBV-181、CC-90006、AGEN-2034w、GSL-010、LZM-009、Sym-021、AB-122、AK-105、CS-1003、HLX-10和BCD-100）；抗PD-L1抗体（如度伐鲁单抗、阿妥珠单抗、阿维鲁单抗、STI-1014、CK-301、BMS-986189、LY-3300054、CX-072、CBT-502、FAZ-053、FS-118、HTI-1088、MSB-2311、BGB-A333、IMC-001、HLX-20、A-167和BMS-936559）；抗LAG-3抗体（如IMP-321和BMS-986016）；抗TIM-3抗体；抗VISTA抗体；抗HVEM抗体；抗BTLA抗体；抗CD160抗体；抗TIGIT抗体；和抗PVR抗体。
TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的组合的另一实施方案包括以下的组合：TLR7激动剂，其选自：N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸、N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2-二氟乙基)甘氨酸及其可药用盐；和抗体，其选自：抗CTLA-4抗体（如伊匹单抗、替西木单抗、BMS-986218、MK-1308、ADU-1604、BMS-986249、CS-1002、BCD-145和REGN-4659）；抗PD-1抗体（如纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗、信迪利单抗、JNJ-3283、BI-754091、INCMGA-00012、ABBV-181、CC-90006、AGEN-2034w、GSL-010、LZM-009、Sym-021、AB-122、AK-105、CS-1003、HLX-10和BCD-100）；和抗PD-L1抗体（如度伐鲁单抗、阿妥珠单抗、阿维鲁单抗、STI-1014、CK-301、BMS-986189、LY-3300054、CX-072、CBT-502、FAZ-053、FS-118、HTI-1088、MSB-2311、BGB-A333、IMC-001、HLX-20、A-167和BMS-936559）。
TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的组合的另一实施方案包括以下的组合：TLR7激动剂，其为N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸或其可药用盐；和抗PD-1抗体（纳武单抗、派姆单抗、西米单抗、替雷利珠单抗、多塔利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、杰诺单抗、信迪利单抗）；抗PD-L1抗体（度伐鲁单抗、阿妥珠单抗、阿维鲁单抗）；或抗CTLA-4抗体（伊匹单抗、替西木单抗）。
本文中所用的“效应记忆T细胞”是指CD8阳性T细胞的细胞群生物体内长时间循环，并且当该细胞发现在癌细胞的细胞表面上表达的抗原时，该细胞可以在短时间内增殖以杀死癌细胞。诱导效应记忆T细胞的药剂是可以通过诱导效应记忆T细胞来长期维持其抗癌活性并能抑制癌症的恶化或复发的药物。由此，包含免疫检查点抑制剂和TLR7激动剂的组合的本发明中的诱导效应记忆T细胞的药剂可以用作用于治疗癌症、预防癌症或预防癌症复发的药物。
本文中所用的“MHC I类”是指可以与在癌细胞上表达的癌抗原的肽片段结合以便在细胞外呈递该抗原肽片段的分子。诱导MHC I类的药剂是可以提高在癌细胞上的抗原呈递的量，并增强CTL的识别能力来攻击癌细胞以增强抗癌免疫学效果的药物。由此，本发明中的诱导MHC I类的药剂（其包含免疫检查点抑制剂和TLR7激动剂的组合）可以用作治疗或预防癌症的药物，其表现出比各种单独给药更有效的抗癌效果。
本文中所用的“癌症”是指包括实体癌和血癌的广义概念。
实体癌包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、恶性黑素瘤、肾细胞癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、小肠癌、乳腺癌、生殖细胞癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、Merkel细胞癌、骨癌、头颈癌、皮肤或眶内恶性黑色素瘤、肛门癌、睾丸癌、食管癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿路上皮癌、阴茎癌、多形性成胶质细胞瘤和脑肿瘤。
血癌包括慢性或急性白血病，包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病和慢性淋巴细胞性白血病；骨髓增生异常综合征；多发性骨髓瘤；恶性淋巴瘤，包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。
本文中所用的“癌细胞”是指构成实体癌或血癌的单个细胞，其无限地增殖。
“癌症复发”或“癌症再发”是指在治疗实体癌时，通过外科手术或已经存在的治疗方法，肿瘤的生长抑制/减轻在一定时间内进展良好，但随后肿瘤在初始部位或远隔部位再次发展。在治疗血癌时，这意味着通过现有的治疗方法，血液学缓解（这是保持血液中一定水平或更低的癌细胞的状态）或细胞遗传学缓解（这是其中在血液中检测不到癌症相关基因的状态）在一定时间内进展良好，但是癌细胞随后在血液中再次出现。
“对免疫检查点抑制剂具有不应性”对实体癌而言是指即使通过施用免疫检查点抑制剂也不能抑制肿瘤扩大的状态。“对抗PD-1抗体具有不应性对”是指即使通过施用上述抗PD-1抗体也不能抑制肿瘤扩大的状态。“对抗PD-L1抗体具有不应性对”是指即使通过施用上述抗PD-L1抗体也不能抑制肿瘤扩大的状态。
对血癌而言，“对免疫检查点抑制剂具有不应性”是指即使通过施用免疫检查点抑制剂也不能抑制血液中癌细胞数量增加的状态。“对抗PD-1抗体具有不应性对”是指即使通过施用上述抗PD-1抗体也不能抑制血液中癌细胞数量增加的状态。“对抗PD-L1抗体具有不应性对”是指即使通过施用上述抗PD-L1抗体也不能抑制血液中癌细胞数量增加的状态。
“具有长期抗癌免疫力”是指识别癌细胞特异性抗原的免疫细胞长期生存，并由此可以长期保持抗癌效果。众所周知，即使癌症治疗暂时处于成功状态，即癌细胞消退或癌细胞数量减少，随着可以在体内识别癌细胞并攻击它们的免疫细胞的数量经时减少，癌细胞再次增多，导致癌症复发。但是，如果记忆癌症特异性抗原的免疫细胞长期生存，有可能在成功治疗癌症之后降低癌症复发的可能性。
本发明的药物通过组合使用TLR7激动剂与免疫检查点抑制剂而表现出有效的抗癌效果。通过在多重组合中进一步使用一些其它药物或治疗方法（例如联合化疗），可以进一步增强该效果，并可以改善患者的QOL。要在多重组合中进一步使用的药物或治疗方法包括例如化疗剂（如异环磷酰胺、环磷酰胺、达卡巴嗪、替莫唑胺、尼莫司汀、白消安、美法仑、依诺他滨、卡培他滨、卡莫氟、吉西他滨、阿糖胞苷、喃氟啶、奈拉滨、氟尿嘧啶、氟达拉滨、培美曲塞、喷司他丁、甲氨喋呤、依立替康、依托泊苷、索布佐生、多西他赛、紫杉醇、长春瑞滨、长春新碱、长春地辛、长春花碱、放线菌素D、阿柔比星、伊达比星、表柔比星、道诺霉素、阿霉素、吡柔比星、博来霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、米托蒽醌、奥沙利铂、卡铂、顺铂和奈达铂）、激酶抑制剂（如吉非替尼、厄洛替尼、奥希替尼、阿法替尼、伊马替尼、达沙替尼、博舒替尼、凡德他尼、舒尼替尼、阿昔替尼、帕唑帕尼、乐伐替尼、拉帕替尼、尼达尼布、尼罗替尼、依鲁替尼、克唑替尼、色瑞替尼、阿来替尼、托法替尼、巴立替尼、鲁索替尼、奥拉帕尼、索拉非尼、威罗非尼、达拉菲尼、曲美替尼和帕博西尼）、单克隆抗体（如利妥昔单抗、西妥昔单抗、曲妥珠单抗、贝伐单抗、莫加替珠单抗、帕妥珠单抗、阿仑单抗、帕尼单抗、奥法木单抗、雷莫卢单抗和地诺单抗）、免疫刺激剂（如TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR8激动剂、TLR9激动剂、STING激动剂和NOD2激动剂）、癌症疫苗（MHC I类——衍生自癌抗原蛋白的癌抗原肽，所述癌抗原蛋白质选自WT1、MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A6、MAGE-A10、MAGE-A12、BAGE、DAM-6、DAM-10、GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7B、GAGE-8、NA88-A、NY-ESO-1、NY-ESO-1a、MART-1/Melan-A、MC1R、Gp100、PSA、PSM、酪氨酸酶、蛋白酶3、TRP-1、TRP-2、ART-4、CAMEL、CEA、Ep-CAM、Cyp-B、Her2/neu、VEGFR、hTERT、hTRT、iCE、MUC1、MUC2、PRAME、P15、RU1、RU2、SART-1、SART-2、SART-3、AFP、β-连环蛋白、半胱天冬酶-8、CDK-4、ELF2、GnT-V、G250、HSP70-2M、HST-2、KIAA0205、MUM-1、MUM-2、MUM-3、肌球蛋白、RAGE、SART-2、TRP-2、707-AP、存活素、Livin和SYT-SSX）和放射疗法。本发明可以与上述一种或多种药物或疗法一起使用。优选其包括放射疗法。
本发明的药物可以用作用于口服给药的固体或液体药物、或用于肠胃外给药的注射剂、局部用药、栓剂、吸入剂或鼻吸收剂。用于口服给药的固体药物包括片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂和颗粒剂。该胶囊包括硬胶囊和软胶囊。并且，该片剂包括舌下片剂、口腔贴片和口服快速崩解片剂。
关于上述用于口服的固体药物，一种或多种活性成分可以直接施用，或可以与赋形剂（如乳糖、甘露醇、葡萄糖、微晶纤维素和淀粉）、粘合剂（如羟丙基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮和铝硅酸镁）、崩解剂（如纤维素乙二醇酸钙）、润滑剂（如硬脂酸镁）、稳定化剂、增溶剂（如谷氨酸盐和天冬氨酸盐）等等混合以便以常规方式配制，并可以施用该制剂。并且，如果需要的话，该制剂可以用包衣剂（如绵白糖、明胶、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯）包衣，或具有两个或多个包衣层。此外，上述用于口服的固体药物还包括由可吸收材料如明胶组成的胶囊制剂。并且，可以向其中适当地添加常规的防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂等等。
上述口服快速崩解片剂可以以已知方式制备。例如，一种或多种活性成分可以直接施用，或者其散装粉末或散装粉末的颗粒状粒子可以用包衣剂和增塑剂包衣，与赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、分散剂、稳定化剂、增溶剂、香料等等混合以便以常规方式配制，并可以施用该制剂。并且，如果需要的话，该制剂可以用包衣剂包衣，或具有两个或多个包衣层。并且，可以向其中适当地添加常规的防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂等等。
上述用于口服的液体药物可以包括可药用水基液体、混悬剂、乳剂、糖浆剂、酏剂等等。为了制备这些液体制剂，在常规稀释剂如纯净水、乙醇及其混合物中溶解、悬浮或乳化一种或多种活性成分。此外，这些液体制剂可以包含保湿剂、悬浮剂、乳化剂、甜味剂、香料、香精、防腐剂、缓冲剂等等。
上述用于肠胃外给药的注射剂可以包括溶液、混悬剂、乳剂和用于注射的固体（其可以在使用前溶解或悬浮）。要使用的上述注射剂通过在溶剂中溶解、悬浮或乳化一种或多种活性成分来制备。本文中所用的溶剂包括例如注射用蒸馏水、生理盐水、植物油、醇（如丙二醇、聚乙二醇和乙醇）及其混合物。此外，本文中使用的注射剂可以包含稳定化剂、增溶剂（例如氨基酸，如甘氨酸、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、聚山梨醇酯TM 80等等）、通常用于药物制剂的pH调节剂（例如盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、马来酸、磷酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氨水、水合乙酸钠、无水乙酸钠、水合柠檬酸钠、柠檬酸二氢钠、酒石酸钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸三钠等等）、悬浮剂、乳化剂、分散剂、安抚剂、缓冲剂、防腐剂、着色剂等等。这些制剂在最终过程中消毒，或以无菌程序制备。此外，制备了无菌固体制剂如冻干制剂，其可以在使用前溶解在无菌/灭菌的注射用蒸馏水或其它溶剂中之后使用。
用于肠胃外给药的其它组合物包括用于直肠给药的栓剂和用于阴道给药的阴道栓剂，其包含一种或多种活性成分，并以常规方式施用。
在一个实施方案中，包含TLR7激动剂的药物组合物可以包含一种或多种可药用载体，所述可药用载体选自海藻糖、甘露醇、甘氨酸、蛋氨酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸、乙酸、三氟乙酸和pH调节剂。
在一个实施方案中，包含免疫检查点抑制剂的药物组合物可以包含一种或多种可药用载体，所述可药用载体选自甘露醇、水合柠檬酸钠、氯化钠、二亚乙基三胺五乙酸、聚山梨醇酯TM 80和pH调节剂。
TLR7激动剂或免疫检查点抑制剂的施用方法可以根据各种条件合适地选择，所述条件例如疾病类型、患者病情以及目标部位。上述施用方法包括例如通过注射或灌注的静脉内、肌内、真皮内、腹膜内、皮下或椎管内施用，或其它胃肠外施用路径。本文中使用的“胃肠外施用”是指除肠内或局部施用外的正常注射的施用方式，其包括静脉内、肌内、动脉内、鞘内、被膜下、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、被膜下、蛛网膜下、椎管内、硬膜外和胸骨注射或输注，但不限于此。
本发明中的TLR7激动剂与非药物疗法以及免疫检查点抑制剂结合可以有效地预防或治疗癌症。非药物疗法包括例如外科手术、放射疗法、基因疗法、热疗法、冷冻手术和激光消融，这些疗法的两种或多种可以组合。使用此类非药物疗法的时机没有限制，但是，例如，本发明的药物或要与本发明的药物一起施用的免疫检查点抑制剂可以在使用非药物疗法如外科手术之前或之后、或在两种或三种非药物疗法之前或之后施用。这些组合可以增强非药物疗法的效果，如抑制耐受性发展、延长无病生存期、抑制癌症转移或复发、以及生存益处。
TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的剂量、其剂型、施用频率、一次给药的期限等等可以根据各种条件如疾病类型、患者病情和目标部位来合适地选择。TLR7激动剂一次的剂量通常为0.0001 mg-1000 mg、优选0.001 mg-1000 mg、优选0.01 mg-100 mg、更优选0.1mg-10 mg。每千克体重的免疫检查点抑制剂的剂量通常为0.0001 mg-1000 mg、优选0.001mg-1000 mg、优选0.01 mg-100 mg、更优选0.1 mg-10 mg。TLR7激动剂的每日施用频率没有限制，但包括每天大约1至4次、优选每天大约1至3次。TLR7激动剂的每日施用频率优选为一次。
TLR7激动剂与免疫检查点抑制剂的组合的施用方案包括每周一次向患者以0.001mg-1000 mg/受试者的剂量施用TLR7激动剂，共4-6次；并在2-3周后，一次施用与上文相同的剂量；随后在3-4周后，一次施用与上文相同的剂量；在该TLR7激动剂的施用期内，每两周或三周一次以0.01 mg-1000 mg/受试者的剂量向患者施用免疫检查点抑制剂。在该施用方案中，一剂TLR7激动剂优选包括0.001-0.01 mg/受试者、0.01-0.1 mg/受试者、0.1 mg-1mg/受试者、1 mg-3 mg/受试者、3 mg-10 mg/受试者、10-30 mg/受试者、30-100 mg/受试者、100-300 mg/受试者和300-1000 mg/受试者。并且，对每剂TLR7激动剂，一剂免疫检查点抑制剂优选包括0.01-0.1 mg/受试者、0.1-1 mg/受试者、1 mg-10 mg/受试者、10-100 mg/受试者、100-400 mg/受试者和400 mg-1000 mg/受试者。在联合疗法中，一剂TLR7激动剂与一剂免疫检查点抑制剂或组合药物的重量比包括例如0.1-1000、优选0.1-100、0.1-10、0.1-1、1-1000、10-1000、100-1000、1-100、1-10和10-100。
本文中所用的“治疗有效量”是指TLR7激动剂或免疫检查点抑制剂的量、或两种或多种TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的组合的量，其可以完全或部分抑制癌症进展，或至少部分缓解癌症的一种或多种病症。该有效量可以是治疗有效量或预防有效量。应当根据患者的年龄和性别、待治疗的病症、病症的严重程度、期望的结果等等来确定该有效量。对特定患者的有效量可以基于本领域技术人员已知的方法来确定。
在本发明中，还预期由TLR7激动剂诱导的CTL活性可以进一步被免疫检查点抑制剂的组合来激活，以加强宿主中的肿瘤应答。在这里，作为目标的癌症在本发明中包括下文例举的实体癌或血癌。
本文中的实体癌包括非小细胞肺癌；小细胞肺癌；胰腺癌；恶性黑素瘤；肾细胞癌；胃癌；结肠癌；直肠癌；小肠癌；乳腺癌；生殖细胞癌；膀胱癌；前列腺癌；子宫内膜癌；子宫颈癌；卵巢癌；肝癌；Merkel细胞癌；骨癌；头颈癌；皮肤或眶内恶性黑色素瘤；肛门癌；睾丸癌；食管癌；内分泌系统癌；甲状腺癌；甲状旁腺癌；肾上腺癌；软组织肉瘤；尿路上皮癌；阴茎癌；多形性成胶质细胞瘤；和脑肿瘤。
本文中的血癌包括慢性或急性白血病，包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病和慢性淋巴细胞性白血病；恶性淋巴瘤，包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；骨髓增生异常综合征；和多发性骨髓瘤。
本发明中的癌症的实施方案优选包括头颈癌、黑素瘤、肾癌、霍奇金病、尿路上皮癌、肝癌、非小细胞肺癌、小细胞癌、胃癌和Merkel细胞癌。
本发明中的癌症的实施方案更优选包括头颈癌、肾细胞癌、霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌和胃癌。
此外，诱导效应记忆T细胞或诱导MHC I类可以促进对病原体如细菌、真菌和病毒以及癌症的免疫应答。由此，关于治疗感染如HCV、HBV和HIV的效应记忆T细胞的诱导剂，或治疗感染如HCV、HBV和HIV的MHC I类的诱导剂，其包含TLR7激动剂与免疫检查点抑制剂的组合，二者均可以在本发明之内。
本文中所用的“哺乳动物”包括人类和非人类动物。非人类动物包括例如非人类的灵长类动物、绵羊、狗、猫、马和牛，但不应限于此。本文中所用的哺乳动物优选是人类，特别是需要增强免疫应答的人类患者。由此，本发明特别适于治疗患有预期通过促进T细胞介导的免疫应答而治愈的疾病的人类患者。
在本发明中，TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂可以包含在分开的剂型中或包含在单一剂型中。也就是说，本发明的药物可以是包含TLR7激动剂的药物以便与免疫检查点抑制剂一起使用，包含免疫检查点抑制剂的药物以便与TLR7激动剂一起使用，或包含TLR7激动剂与免疫检查点抑制剂的药物（即组合药物）。本发明可以作为试剂盒提供，例如此类试剂盒可以包含含有TLR7激动剂的药物和含有免疫检查点抑制剂的药物。本发明的药物和试剂盒可以与包装插页、包装容器、使用说明书等等一起提供，其描述了关于组合使用TLR7激动剂与免疫检查点抑制剂的剂量和给药。在本发明的实施方案中，本发明的药物和试剂盒可以作为治疗癌症的药物提供。
在本发明，TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂可以同时或分开施用。此外，TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂可以与附加的组合药物同时或分开施用。本文中所用的“同时施用”是指按照共同的施用方案来施用，其中活性成分可以包含在单一剂型中或分开的剂型中。当每种成分包含在分开的剂型中时，所有剂型应单次施用。本文中所用的“分开施用”是指以不同的施用方案“施用”，即施用一种药物，随后以一定间隔施用另一药物，但是也可以首先施用任一药物，并且该间隔没有限制。每种活性成分的施用频率可以相同或不同，例如一种药物可以每天施用一次，另一药物可以每天施用两次或多次。
在活性成分包含在单一剂型中的情况下，可以根据施用的患者、施用路径、目标疾病、症状或其组合来适当地选择组合比。在施用患者例如是人类的情况下，免疫检查点抑制剂或组合药物可以以每一重量份TLR7激动剂0.1-1000重量份、优选0.1-100重量份、0.1-10重量份、0.1-1重量份、1-1000重量份、10-1000重量份、100-1000重量份、1-100重量份、1-10重量份或10-100重量份的量使用。
本发明的药物组合物可以进一步与另一药物如止吐药、睡眠诱导药和抗癫痫药组合使用以抑制副作用。
TLR7激动剂是用于激活肿瘤中的癌症反应性CTL的药物，由此在与TLR7激动剂组合的情况下，免疫检查点抑制剂的剂量可以降低。这意味着该组合有可能减少不良事件。由此，TLR7激动剂和免疫检查点抑制剂的组合使用可以向患者提供具有更高功效和更高安全性的疗法。
实施例
在下文中参照实施例更详细地解释本发明，但是，本发明不限于此。
实施例1：抗PD-1抗体和TLR7激动剂的组合使用的抗肿瘤活性
将1×106个鼠结肠癌细胞系CT26（ATCC）的细胞移植到48只雌性6周龄Balb/c小鼠的腹侧。五天后，将小鼠分为四组。在媒介物给药组中，每周一次静脉内施用生理盐水，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在TLR7激动剂给药组中，以每周一次5 mg/kg的剂量将TLR7激动剂N-{4-[(2-氨基-4-{[(3S)-1-羟基己-3-基]氨基}-6-甲基嘧啶-5-基)甲基]-3-甲氧基苄基}-N-(2,2,2-三氟乙基)甘氨酸（在下文中称为“化合物1”）施用到静脉中，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在抗PD-1抗体给药组中，每周两次腹膜内施用200 μg的抗PD-1抗体（Bioxcell）。在化合物1和抗PD-1抗体的组合组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的抗PD-1抗体（Bioxcell）。在移植肿瘤细胞后，每周两次测量肿瘤体积，并每周检查一次体重，直到第23天。通过测量肿瘤的长轴和短轴并通过(短轴)×(短轴)×(长轴)×0.5的数学公式进行计算来获得肿瘤体积。
结果显示在图1中。该图显示了每个给药组的肿瘤生长曲线。纵坐标表示肿瘤体积，横坐标表示肿瘤细胞移植后经过的天数。
结果表明，抗PD-1抗体（单一药物）给药组中的肿瘤体积变化与媒介物给药组并无太大差异，而在化合物1（单一药物）给药组和化合物1与抗PD-1抗体的组合组中观察到肿瘤生长抑制作用。此外，与化合物1（单一药物）给药组相比，化合物1与抗PD-1抗体的组合组显示了显著的肿瘤生长抑制作用。由此认为通过组合抗PD-1抗体和化合物1，可以协同增强抗肿瘤活性。
实施例2：肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）对提高效应记忆T细胞的效果
将1×106个鼠结肠癌细胞系CT26（ATCC）的细胞移植到48只雌性6周龄Balb/c小鼠的腹侧。五天后，将小鼠分为四组。在媒介物给药组中，每周一次静脉内施用生理盐水，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在化合物1给药组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在抗PD-1抗体给药组中，每周两次腹膜内施用200 μg的抗PD-1抗体（Bioxcell）。在化合物1和抗PD-1抗体的组合组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的抗PD-1抗体（Bioxcell）。在移植肿瘤细胞后，在第23天取出肿瘤，并通过使用肿瘤解离试剂盒（Miltenyi）和gentle macs解离器（Miltenyi）制备肿瘤的细胞悬浮液。该细胞悬浮液用Percoll进行密度梯度离心以获得其中淋巴细胞浓缩的细胞悬浮液。此外，用ACK缓冲液处理该细胞悬浮液以使红细胞溶解。获得的细胞悬浮液用荧光的抗CD8、抗CD62L和抗CD127抗体染色，并通过流式细胞术（FACS）方法进行分析。含有CD8阳性细胞、CD62L阴性细胞和CD127阳性细胞的细胞群（其各自是效应记忆T细胞的细胞表面抗原）用作效应记忆T细胞。
结果显示在图2中。该图显示了在每个给药组的CD8阳性细胞中效应记忆T细胞的每个比，其通过FACS分析获得。结果表明，CD8阳性细胞中效应记忆T细胞的比在化合物1与抗PD-1抗体的组合组中显著提高。
在化合物1或抗PD-1抗体的单一药物给药组中，效应记忆T细胞的比与媒介物给药组相比并未提高，而在化合物1与抗PD-1抗体的组合组中效应记忆T细胞的比显著提高。由此，已经发现，通过组合化合物1和抗PD-1抗体可以增强长期抗肿瘤免疫活性。
实施例3：肿瘤上的MHC I类（H-2Kd）的提高效果
将1×106个鼠结肠癌细胞系CT26（ATCC）的细胞移植到48只雌性6周龄Balb/c小鼠的腹侧。五天后，将小鼠分为四组。在媒介物给药组中，每周一次静脉内施用生理盐水，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在化合物1给药组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在抗PD-1抗体给药组中，每周两次腹膜内施用200 μg的抗PD-1抗体（Bioxcell）。在化合物1和抗PD-1抗体的组合组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的抗PD-1抗体（Bioxcell）。在移植肿瘤细胞后，在第23天取出肿瘤，并通过使用肿瘤解离试剂盒（Miltenyi）和gentle macs解离器（Miltenyi）制备肿瘤的细胞悬浮液。该细胞悬浮液用荧光的抗CD45抗体和抗H-2Kd抗体染色，并通过流式细胞术方法作为CD45阴性和H-2Kd阳性分数检测癌细胞上的H-2Kd。
结果显示在图3中。该图显示了各给药组中H-2Kd的各MFI，其通过FACS分析获得。结果表明，化合物1与抗PD-1抗体的组合组中H-2Kd的平均荧光强度（MFI）显著高于任何其它组。
在化合物1或抗PD-1抗体的单一药物给药组中，H-2Kd的平均荧光强度与媒介物给药组并无太大差异，而化合物1与抗PD-1抗体的组合组中H-2Kd的平均荧光强度显著高于任何其它组。由此认为，通过组合化合物1和抗PD-1抗体协同增强了抗肿瘤活性。
实施例4：排斥再移植后的着床（engraftment）的记忆效应
将1×106个鼠结肠癌细胞系CT26（ATCC）的细胞移植到48只雌性6周龄Balb/c小鼠的腹侧。五天后，将小鼠分为四组。在媒介物给药组中，每周一次静脉内施用生理盐水，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在化合物1给药组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在抗PD-1抗体给药组中，每周两次腹膜内施用200 μg的抗PD-1抗体（Bioxcell）。在化合物1和抗PD-1抗体的组合组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的抗PD-1抗体（Bioxcell）。在移植肿瘤细胞后，将第23天肿瘤体积不超过500 mm3的小鼠分离作为治疗应答受试者，切除其肿瘤，随后将小鼠再饲养5周。在将CT26细胞的1×106个细胞再移植至活小鼠中时，在化合物1和抗PD-1抗体的组合组中的6例受试小鼠中的6只小鼠未接受着床。
结果显示在图4中。该图显示了每个给药组中治愈的小鼠的数量和再移植后肿瘤生长的小鼠的数量。结果表明，在化合物1和抗PD-1抗体的组合中未观察到再移植后的肿瘤生长。由此，预期该组合具有长期的抗肿瘤活性并防止复发。
实施例5：抗CTLA-4抗体和TLR7激动剂的组合使用的抗肿瘤活性
将1×106个鼠结肠癌细胞系CT26（ATCC）的细胞移植到40只雌性7周龄Balb/c小鼠的腹侧。七天后，将小鼠分为四组。在媒介物给药组中，每周一次静脉内施用生理盐水，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在TLR7激动剂给药组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在抗CTLA-4抗体给药组中，每周两次腹膜内施用200 μg的抗CTLA-4抗体（Bioxcell）。在化合物1和抗CTLA-4抗体的组合组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的抗CTLA-4抗体（Bioxcell）。在移植肿瘤细胞后，每周两次测量肿瘤体积，并每周检查一次体重，直到第23天。通过测量肿瘤的长轴和短轴并通过(短轴)×(短轴)×(长轴)×0.5的数学公式进行计算来获得肿瘤体积。
结果显示在图5中。该图显示了每个给药组的肿瘤生长曲线。纵坐标表示肿瘤体积，横坐标表示肿瘤细胞移植后经过的天数。
结果表明，抗CTLA-4抗体（单一药物）给药组或化合物1给药组的肿瘤体积变化与媒介物给药组并无太大差异，而在化合物1和抗CTLA-4抗体的组合组中观察到显著的肿瘤生长抑制作用。此外，与化合物1给药组或抗CTLA-4抗体给药组相比，化合物1和抗CTLA-4抗体的组合组显示出显著的肿瘤生长抑制作用。由此，认为通过组合抗CTLA-4抗体和化合物1可以协同增强抗肿瘤活性。
实施例6：肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）对增加效应记忆T细胞的效果
将1×106个鼠结肠癌细胞系CT26（ATCC）的细胞移植到40只雌性6周龄Balb/c小鼠的腹侧。七天后，将小鼠分为四组。在媒介物给药组中，每周一次静脉内施用生理盐水，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在化合物1给药组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在抗CTLA-4抗体给药组中，每周两次腹膜内施用200 μg的抗CTLA-4抗体（Bioxcell）。在化合物1和抗CTLA-4抗体的组合组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的抗CTLA-4抗体（Bioxcell）。在移植肿瘤细胞后，在第26天取出肿瘤，并通过使用肿瘤解离试剂盒（Miltenyi）和gentle macs解离器（Miltenyi）制备肿瘤的细胞悬浮液。该细胞悬浮液用Percoll进行密度梯度离心以获得其中淋巴细胞浓缩的细胞悬浮液。此外，用ACK缓冲液处理该细胞悬浮液以使红细胞溶解。获得的细胞悬浮液用荧光抗CD8、抗CD62L和抗CD127抗体染色，并通过流式细胞术（FACS）方法进行分析。含有CD8阳性细胞、CD62L阴性细胞和CD127阳性细胞的细胞群（其各自是效应记忆T细胞的细胞表面抗原）用作效应记忆T细胞。
结果显示在图6中。该图显示了每个给药组的CD8阳性细胞中效应记忆T细胞的每个比，其通过FACS分析获得。结果表明，与媒介物给药组相比，CD8阳性细胞中效应记忆T细胞的比在化合物1和抗CTLA-4抗体的组合组中显著提高。
在化合物1或抗CTLA-4抗体的单一药物给药组中，效应记忆T细胞与媒介物给药组相比并未增多，而效应记忆T细胞的比在化合物1和抗CTLA-4抗体的组合组中显著提高。由此发现，可以通过组合化合物1和抗CTLA-4抗体增强长期抗肿瘤免疫活性。
实施例7：对肿瘤上的MHC I类（H-2Kd）的效果
将1×106个鼠结肠癌细胞系CT26（ATCC）的细胞移植到40只雌性6周龄Balb/c小鼠的腹侧。七天后，将小鼠分为四组。在媒介物给药组中，每周一次静脉内施用生理盐水，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在化合物1给药组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的Rat IgG2a同型对照抗体（Bioxcell）。在抗CTLA-4抗体给药组中，每周两次腹膜内施用200 μg的抗CTLA-4抗体（Bioxcell）。在化合物1和抗CTLA-4抗体的组合组中，以每周一次5 mg/kg的剂量静脉内施用化合物1，并每周两次腹膜内施用200 μg的抗CTLA-4抗体（Bioxcell）。在移植肿瘤细胞后，在第26天取出肿瘤，并通过使用肿瘤解离试剂盒（Miltenyi）和gentle macs解离器（Miltenyi）制备肿瘤的细胞悬浮液。该细胞悬浮液用荧光的抗CD45抗体和抗H-2Kd抗体染色，并通过流式细胞术方法作为CD45阴性和H-2Kd阳性分数检测癌细胞上的H-2Kd。
结果表明，各组之间没有显著差异。但是，化合物1和抗CTLA-4抗体的组合组中的H-2Kd的平均荧光强度趋于上升，并且实施例5显示出协同抗肿瘤活性，由此认为在组合组中肿瘤中的MHC I类（H-2Kd）增强。
工业实用性
本发明可用于药物领域，例如用于开发治疗和预防癌症的药物，或用于其制造。
