一种茅莓分级多糖、制备方法和在抗抑郁中的应用
技术领域
本发明涉及多糖领域，具体涉及一种茅莓分级多糖、制备方法和在抗抑郁中的应用。
背景技术
抑郁症是一种情感性精神障碍疾病，由遗传、内分泌、代谢、神经生物学和环境因素引起，临床主要表现为情绪低落、兴趣缺乏、快感缺失等症状。抑郁症具有很高的复发率和自杀率，世界卫生组织指出抑郁症或将成为继冠心病之后的第二大疾病。目前西医治疗在一定程度上可以缓解抑郁症状，但往往存在复发率高、副作用大等问题。
天然活性多糖是广泛存在于植物、动物及微生物中由若干单糖以α-或β-糖苷键构成的天然大分子，因其具有多种生物活性和无毒副作用，在保健食品及医疗行业中被广泛利用。
目前未见茅莓多糖的提取分离和在抗抑郁治疗方面的应用。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术中存在的缺陷和不足，提供一种茅莓分级多糖、制备方法和在抗抑郁中的应用。
实现上述目的的技术方案如下：
一种茅莓分级多糖，为从茅梅叶中提取分离的醇溶性介于40％～50％之间的分级多糖。
上述茅莓分级多糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)将干燥的茅莓叶脱脂；
(2)取上述脱脂后的茅梅叶，加入蒸馏水加热提取，过滤收集滤液和滤渣，滤渣重复提取一次，将两次提取所得提取液合并后减压浓缩，离心去除不溶物，加入四倍体积乙醇搅拌均匀后静置沉淀，然后离心收集沉淀；将沉淀用蒸馏水复溶，用8000～14000Da透析袋蒸馏水透析，收集透析袋内液体浓缩后冻干，得到总多糖；
(3)将上述总多糖用蒸馏水复溶，离心去除不溶物，加入等体积乙醇搅拌均匀后静置沉淀，然后离心收集沉淀；将沉淀用蒸馏水复溶，用8000～14000Da透析袋蒸馏水透析，收集透析袋内液体浓缩后冻干，得到粗多糖；
(4)将上述粗多糖用蒸馏水复溶，离心去除不溶物，按照体积比7:3加入乙醇搅拌均匀后静置沉淀，然后离心收集上清，浓缩后冻干，得分级多糖。
优选地，步骤(1)中用无水乙醇浸泡脱脂。
优选地，步骤(1)中加热提取的温度为85℃。
上述茅莓分级多糖在制备抗抑郁药物中的应用。
有益效果：
1、本发明提供了一种从茅梅叶中提取分离得到的醇溶性介于40％～50％之间的分级多糖，其中多糖含量为(95.3±2.7)％，纯度高。
2、本发明发现上述茅莓分级多糖在小鼠悬尾测试和小鼠强迫游泳测试中可以显著缩短悬尾不动时间和游泳不动时间，发挥了与阳性药类似的作用，具有明显的抗抑郁活性。
3、本发明提供的茅莓分级多糖为一种天然活性多糖，无毒副作用。
附图说明
图1为茅莓分级多糖的SEM图(500×)；
图2为茅莓分级多糖的FT-IR图；
图3为小鼠悬尾测试结果；
图4为小鼠游泳测试结果。
具体实施方式
实施例1：
收集茅莓(RubusparvifoliusL.)的叶，洗净阴干后粉碎备用。
取干燥的茅梅叶按1:10的料液比(w/v)加入无水乙醇，浸泡48h，过滤，收集脱脂后的茅梅叶，挥干溶剂备用。
取上述脱脂后的茅梅叶1kg，加入10L蒸馏水，于85℃加热提取2h，过滤收集滤液和滤渣，滤渣重复提取一次，将两次提取所得提取液合并后减压浓缩至2L，离心去除不溶物，加入8L乙醇搅拌均匀后静置沉淀12h，然后离心收集沉淀。沉淀用蒸馏水复溶，用8000～14000Da透析袋蒸馏水透析48h，收集透析袋内液体浓缩后冻干，得到总多糖约16g。
将上述总多糖用40mL蒸馏水复溶，离心去除不溶物，加入40mL乙醇搅拌均匀后静置沉淀12h，然后离心收集沉淀。沉淀用蒸馏水复溶，用8000～14000Da透析袋蒸馏水透析48h，收集透析袋内液体浓缩后冻干，得到粗多糖9.7g。
将上述粗多糖用70mL蒸馏水复溶，离心去除不溶物，加入30mL乙醇搅拌均匀后静置沉淀12h，然后离心收集上清，浓缩后冻干，得分级多糖4.4g。
苯酚-硫酸法测定结果显示，茅莓分级多糖的多糖含量为(95.3±2.7)％。图1为其SEM图(500×)，图2为其FT-IR图。
实施例2：
一、试验材料
茅莓分级多糖按照实施例1方法制备，4℃保存备用。
SPF级雄性昆明种小鼠，体质量(20±2)g，购自南京市江宁区青龙山动物繁殖场。实验过程中小鼠自由饮水、摄食，实验前适应性喂养一个星期。
二、试验方法
1、小鼠悬尾测试
取正常小鼠40只，随机分为4组：模型组(只悬尾不给药)、阳性药组(给予氟西汀，20mg/kg/d)、低剂量药物组(给予茅莓分级多糖，30mg/kg/d)、高剂量药物组(给予茅莓分级多糖，60mg/kg/d)，每组10只。连续灌胃给药7d，末次给药1h后将小鼠尾巴固定在回形针上，放入悬尾测试仪箱内，使其呈倒挂状态，适应2min后，开始记录4min内的不动时间。判断标准：小鼠悬挂期间，没有任何活动时，定为不动状态。
2、小鼠强迫游泳测试
取正常小鼠40只，随机分为4组：模型组(只悬尾不给药)、阳性药组(给予氟西汀，20mg/kg/d)、低剂量药物组(给予茅莓分级多糖，30mg/kg/d)、高剂量药物组(给予茅莓分级多糖，60mg/kg/d)，每组10只。连续灌胃给药7d，末次给药1h后将小鼠置于水深10cm、水温(25±2)℃的圆桶中，观察6min，比较各组在后4min内的不动时间。不动状态为：小鼠在水中停止挣扎，或呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面的状态。
3、统计学方法
采用SPSS19.0进行分析，数据均采用均值±s表示，采用单因素方差分析及独立样本t检验进行分析，p＜0.05代表差异具有统计学意义。
三、试验结果
1、小鼠悬尾测试结果
结果如表1和图3所示，与模型组相比，阳性药组小鼠悬尾不动时间显著缩短，说明造模成功，阳性药具有抗抑郁作用；与模型组相比，低剂量药物组、高剂量药物组均能不同程度缩短小鼠悬尾不动时间，高剂量药物组缩短更明显，说明本发明提供的茅莓分级多糖具有明显的抗抑郁作用。表1和图3中，***代表与模型组相比差异具有统计学意义，p＜0.05。
表1小鼠悬尾测试结果
2、小鼠强迫游泳测试结果
结果如表2和图4所示，与模型组相比，阳性药组小鼠游泳不动时间显著缩短，说明造模成功，阳性药具有抗抑郁作用；与模型组相比，低剂量药物组、高剂量药物组均能不同程度缩短小鼠游泳不动时间，高剂量药物组缩短更明显，说明本发明提供的茅莓分级多糖具有明显的抗抑郁作用。表2和图4中，***代表与模型组相比差异具有统计学意义，p＜0.05。
表2小鼠游泳测试结果
小鼠悬尾测试和小鼠强迫游泳测试是常用的抑郁造模方法，通过悬尾不动时间和游泳不动时间是否明显缩短判断待测试药物是否发挥了抗抑郁作用。上述试验结果表明，本发明提供的茅莓分级多糖具有明显的抗抑郁作用。
