无刺激性克拉霉素冻干粉及其制备方法
技术领域
本发明属于大环内酯类抗生素制备技术领域，具体的涉及一种无刺激性克拉霉素冻干粉及其制备方法。
背景技术
克拉霉素为半合成的大环内酯类抗生素，由红霉素A的6位羟基经甲基化制得。甲基化后，克拉霉素因其脂溶性增加，有效地改善了其药代动力学性质，口服吸收迅速，细胞穿透性能好，组织分布广。克拉霉素抗菌机理是作用于细菌70S系统中的核蛋白体50S亚单位，阻碍细菌蛋白质的合成，属长期抑菌剂。对革兰氏阳性菌如金黄色葡萄糖菌、链球菌、肺炎球菌等有抑制作用，对部分革兰氏阴性菌如流感嗜血杆菌、百日咳杆菌、淋病奈瑟茵、嗜肺军团菌和部分厌氧菌如脆弱拟杆菌、消化链球菌、痤疮丙酸杆菌等也有抑制作用。克拉霉素在体外的抗菌活性与红霉素相似，但其在体内对部分细菌的抗菌活性比红霉素强。
克拉霉素由于抗菌活性强、生物利用度高，较红霉素易于胃肠道吸收，半衰期较长，组织分布广而且浓度高，具有非常广泛的临床应用。克拉霉素普通静脉注射剂在静脉注射后，由于药物本身的性质而存在严重的血管刺激性，可引起注射局部疼痛，严重时可导致静脉炎，使患者不易耐受，影响了药物静脉注射剂的临床应用和推广，导致部分厂商的该剂型规模逐步萎缩。由于克拉霉素在水中几乎不溶，这是制备静脉注射制剂的工艺难题；为了解决其溶解性问题，法国雅培公司的克拉霉素粉针剂是用乳糖酸与克拉霉素成盐来提高其溶解度，但临床使用时发现注射部位疼痛及静脉炎的发生率较高，大大限制了其在临床上的应用。
发明内容
本发明的目的是：提供一种无刺激性克拉霉素冻干粉。所述的克拉霉素冻干粉刺激性、副作用及毒性小，将克拉霉素包裹于油相中，具有长效缓释作用；本发明同时提供了其制备方法。
本发明所述的无刺激性克拉霉素冻干粉，由克拉霉素脂质体和冻干保护剂组成，每100mL脂质体溶液中加入18-30g的冻干保护剂；所述100mL脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素2.0g，胆固醇硫酸钠1.8-2.2g，卵磷脂6.0-6.4g，柠檬酸0.5-0.6g，蔗糖8-20g，葡萄糖8-15g，余量为磷酸盐缓冲溶液。
优选的，所述100mL脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素2.0g，胆固醇硫酸钠2.0g，卵磷脂6.0g，柠檬酸0.6g，蔗糖10g，葡萄糖8g，余量为磷酸盐缓冲溶液。
本发明所述的无刺激性克拉霉素冻干粉的制备方法，首先采用薄膜分散法制备克拉霉素脂质体，然后采用冷冻干燥法制备得到无刺激性克拉霉素冻干粉。
优选的，本发明所述的无刺激性克拉霉素冻干粉的制备方法，由以下步骤组成：
(1)将克拉霉素、胆固醇硫酸钠、卵磷脂和柠檬酸溶解于无水乙醇中得到油相，并恒温一段时间；
(2)旋转蒸发除去油相中的无水乙醇，然后用氮气吹干，得到薄膜；
(3)将磷酸盐缓冲液于65-75℃恒温20-30min，得到水相；
(4)氮气保护气氛下，将水相添加到旋转蒸发器中，水化薄膜，然后超声分散，冷却至室温，0.22μm滤膜过滤，得克拉霉素脂质体溶液；
(5)将蔗糖和葡萄糖添加到克拉霉素脂质体溶液中，搅拌溶解；
(6)采用0.22μm滤膜超滤除菌，然后冷冻干燥，制备得到无刺激性克拉霉素冻干粉。
其中：
步骤(1)中所述的于68-72℃恒温28-35min。
步骤(3)中所述的磷酸盐缓冲液的pH为6.5-7.5。
步骤(4)中所述的65-75℃水化薄膜40-45min，然后超声分散70-75min。
步骤(6)中所述的首先于-50～-45℃快速预冻9-11h，再启动冻干程序，冷冻干燥18-22h，得冻干粉。
为了降低克拉霉素静脉使用时引起的刺激性，通过脂质体对克拉霉素进行包裹，以掩蔽克拉霉素的药物分子，避免静脉使用时药物与血管的直接作用。药物包裹于油相中，可以降低克拉霉素的副作用、毒性，降低静脉注射时由于药物与血管壁直接接触引起的局部刺激作用；克拉霉素包裹于油相中，还可以克服克拉霉素在水中几乎不溶的难题；并且具有长效作用，实现缓释，减少给药次数。因此，以脂质体作为克拉霉素的给药载体，是降低克拉霉素静脉注射所引起刺激性的理想选择。
本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：
(1)本发明所述的无刺激性克拉霉素冻干粉，采用胆固醇硫酸钠、卵磷脂、柠檬酸与克拉霉素组方，制备克拉霉素脂质体，不仅能够减小脂质体粒径，而且还能增加其表面的电荷，使脂质体稳定，包封率高，粒径小。
(2)本发明所述的无刺激性克拉霉素冻干粉，采用蔗糖、葡萄糖与克拉霉素脂质体组方，制备注射用克拉霉素脂质体复合物，工艺稳定，成品具有良好的外观，且脂质体粒子在冻干过程中被完好保护；成品室温条件下稳定，能够满足静脉注射的要求。
(3)本发明所述的无刺激性克拉霉素冻干粉的制备方法，脂质体对克拉霉素进行包裹，掩蔽克拉霉素的药物分子，避免静脉使用时药物与血管的直接作用，可以降低克拉霉素的副作用、毒性，降低静脉注射时由于药物与血管壁直接接触引起的局部刺激作用；克拉霉素包裹于油相中，还可以克服克拉霉素在水中几乎不溶的难题；也具有长效作用，实现缓释，减少给药次数。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步描述。
实施例1
本实施例1所述的无刺激性克拉霉素冻干粉，由克拉霉素脂质体和冻干保护剂组成，每100mL脂质体溶液中加入25g的冻干保护剂；所述100mL脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素2.0g，胆固醇硫酸钠2.0g，卵磷脂6.0g，柠檬酸0.6g，蔗糖15g，葡萄糖10g，余量为磷酸盐缓冲溶液。
本实施例1所述的无刺激性克拉霉素冻干粉的制备方法，由以下步骤组成：
(1)将克拉霉素、胆固醇硫酸钠、卵磷脂和柠檬酸溶解于无水乙醇中得到油相，并于70℃恒温30min；
(2)旋转蒸发除去油相中的无水乙醇，然后用氮气吹干，得到薄膜；
(3)将pH值为7.0的磷酸盐缓冲液于70℃恒温25min，得到水相；
(4)氮气保护气氛下，将水相添加到旋转蒸发器中，70℃水化薄膜45min，然后超声分散70min，冷却至室温，0.22μm滤膜过滤，得克拉霉素脂质体溶液；
(5)将蔗糖和葡萄糖添加到克拉霉素脂质体溶液中，搅拌溶解；
(6)采用0.22μm滤膜超滤除菌，然后置于西林瓶中冷冻干燥，制备得到无刺激性克拉霉素冻干粉。
其中：
步骤(6)中所述的首先于-45℃快速预冻11h，再启动冻干程序，冷冻干燥20h，得冻干粉。
实施例2
本实施例2所述的无刺激性克拉霉素冻干粉，由克拉霉素脂质体和冻干保护剂组成，每100mL脂质体溶液中加入18g的冻干保护剂；所述100mL脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素2.0g，胆固醇硫酸钠2.2g，卵磷脂6.2g，柠檬酸0.5g，蔗糖10g，葡萄糖8g，余量为磷酸盐缓冲溶液。
本实施例2所述的无刺激性克拉霉素冻干粉的制备方法，由以下步骤组成：
(1)将克拉霉素、胆固醇硫酸钠、卵磷脂和柠檬酸溶解于无水乙醇中得到油相，并于68℃恒温35min；
(2)旋转蒸发除去油相中的无水乙醇，然后用氮气吹干，得到薄膜；
(3)将pH值为7.5的磷酸盐缓冲液于65℃恒温30min，得到水相；
(4)氮气保护气氛下，将水相添加到旋转蒸发器中，75℃水化薄膜40min，然后超声分散75min，冷却至室温，0.22μm滤膜过滤，得克拉霉素脂质体溶液；
(5)将蔗糖和葡萄糖添加到克拉霉素脂质体溶液中，搅拌溶解；
(6)采用0.22μm滤膜超滤除菌，然后置于西林瓶中冷冻干燥，制备得到无刺激性克拉霉素冻干粉。
其中：
步骤(6)中所述的首先于-50℃快速预冻9h，再启动冻干程序，冷冻干燥18h，得冻干粉。
实施例3
本实施例3所述的无刺激性克拉霉素冻干粉，由克拉霉素脂质体和冻干保护剂组成，每100mL脂质体溶液中加入30g的冻干保护剂；所述100mL脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素2.0g，胆固醇硫酸钠2.2g，卵磷脂6.4g，柠檬酸0.6g，蔗糖20g，葡萄糖10g，余量为磷酸盐缓冲溶液。
本实施例3所述的无刺激性克拉霉素冻干粉的制备方法，由以下步骤组成：
(1)将克拉霉素、胆固醇硫酸钠、卵磷脂和柠檬酸溶解于无水乙醇中得到油相，并于72℃恒温33min；
(2)旋转蒸发除去油相中的无水乙醇，然后用氮气吹干，得到薄膜；
(3)将pH值为6.5的磷酸盐缓冲液于68℃恒温28min，得到水相；
(4)氮气保护气氛下，将水相添加到旋转蒸发器中，65℃水化薄膜42min，然后超声分散73min，冷却至室温，0.22μm滤膜过滤，得克拉霉素脂质体溶液；
(5)将蔗糖和葡萄糖添加到克拉霉素脂质体溶液中，搅拌溶解；
(6)采用0.22μm滤膜超滤除菌，然后置于西林瓶冷冻干燥，制备得到无刺激性克拉霉素冻干粉。
其中：
步骤(6)中所述的首先于-47℃快速预冻10h，再启动冻干程序，冷冻干燥20h，得冻干粉。
对比例1
本对比例1所述的无刺激性克拉霉素冻干粉，由克拉霉素脂质体和冻干保护剂组成，每100mL脂质体溶液中加入25g的冻干保护剂；所述100mL脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素2.0g，胆固醇硫酸钠2.0g，卵磷脂6.0g，己酸0.6g，蔗糖15g，葡萄糖10g，余量为磷酸盐缓冲溶液。
本对比例1所述的无刺激性克拉霉素冻干粉的制备方法与实施例1相同。
对实施例1-3和对比例1制备的无刺激性克拉霉素冻干粉的性能进行测试，结果如下表1所示：
表1无刺激性克拉霉素冻干粉性能测试结果
对实施例1-3和对比例1制备的无刺激性克拉霉素冻干粉的稳定性进行测试，结果如下表2所示：
表2稳定性试验结果(25±2℃)
