一种用于分离和扩增培养脐带间充质干细胞的试剂盒
技术领域
本实用新型涉及生物医药设备相关技术领域，特别涉及一种用于分离和扩增培养脐带间充质干细胞的试剂盒。
背景技术
脐带间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞，具有广阔的临床应用前景。
现有技术中，已经能够从围产期的胎盘、脐带、脐带血，抽脂术来源的脂肪以及流产胎儿中分离获得增殖能力好、低免疫原性的MSCs。并且，由于脐带属于医疗废弃物，具有易于获得、来源稳定可控、无伦理争议问题的特点，具有良好的研究价值和应用前景。但是，由于MSCs的采集技术要求严格，配套仪器精密、成本高，不宜应用推广。
因此，需要研发一款能够较好地实现脐带间充质干细胞分离和扩增培养试剂盒，来帮助MSCs的应用推广。
实用新型内容
针对现有技术存在的需要研发一款能够较好地实现脐带间充质干细胞分离和扩增培养试剂盒，来帮助MSCs的应用推广的技术问题，本实用新型提供一种用于分离和扩增培养脐带间充质干细胞的试剂盒。
为实现上述目的，本实用新型的技术方案为：
一种用于分离和扩增培养脐带间充质干细胞的试剂盒，包括盒体，所述盒体内部设置有消毒灭菌装置和至少9个相互独立的功能区；9个所述功能区中依次存放有脐带采集保存液存放容器、脐带洗涤液存放容器、脐带间充质干细胞培养液存放容器、细胞洗涤液存放容器、细胞消化液存放容器、细胞冻存液存放容器、完全培养液存放容器、六孔细胞培养板和器械耗材；所述脐带采集保存液存放容器、所述脐带洗涤液存放容器、所述脐带间充质干细胞培养液存放容器、所述细胞洗涤液存放容器、所述细胞消化液存放容器、所述细胞冻存液存放容器与所述完全培养液存放容器的盖子的颜色均不相同且分别设置有对应的标签。
优选的，所述消毒灭菌装置为紫外灭菌灯。
进一步的，所述器械耗材包括1把一次性无菌剪刀、2把一次性无菌塑料镊子、4只一次性无菌250mL塑料杯和1个一次性无菌100um细胞滤网。
进一步的，所述盒体与各个所述功能区之间，以及各个相邻的所述功能区相互之间，至少有一处设置有减震结构。
优选的，所述减震结构为无菌橡胶隔垫。
进一步的，所述盒体上开关的位置设置有密码锁。
本实用新型具有如下优点：
1.本实用新型的结构简单，各个功能区相互独立，便于不同的功能容器的存放；
2.不同功能容器的盖子的颜色均不相同且分别设置有对应的标签，让使用者一目了然，便于操作，避免出错
3.结构简单，成本低廉，便于推广。
附图说明
为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本实用新型的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本实用新型的结构示意图。
图中:1-盒体；2-消毒灭菌装置；3-功能区。
具体实施方式
下面结合附图对本实用新型的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本实用新型，但并不构成对本实用新型的限定。此外，下面所描述的本实用新型各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
如图1所示，一种用于分离和扩增培养脐带间充质干细胞的试剂盒，包括盒体1，盒体1内部设置有消毒灭菌装置2和至少9个相互独立的功能区3；9个功能区3中依次存放有脐带采集保存液存放容器、脐带洗涤液存放容器、脐带间充质干细胞培养液存放容器、细胞洗涤液存放容器、细胞消化液存放容器、细胞冻存液存放容器、完全培养液存放容器、六孔细胞培养板和器械耗材；脐带采集保存液存放容器、脐带洗涤液存放容器、脐带间充质干细胞培养液存放容器、细胞洗涤液存放容器、细胞消化液存放容器、细胞冻存液存放容器与完全培养液存放容器的盖子的颜色均不相同且分别设置有对应的标签，亦即这些存放容器的盖子没有一个的颜色与其他存放容器的盖子的颜色相同。
自然，脐带采集保存液存放容器、脐带洗涤液存放容器、脐带间充质干细胞培养液存放容器、细胞洗涤液存放容器、细胞消化液存放容器、细胞冻存液存放容器、完全培养液存放容器中分别存放有脐带采集保存液、脐带洗涤液、脐带间充质干细胞培养液、细胞洗涤液、细胞消化液、细胞冻存液、完全培养液；具体而言：
脐带采集保存液：为经过0.22μm过滤除菌的含有200U/mL青霉素和200μg/mL链霉素的生理盐水；
脐带洗涤液：为经过0.22μm过滤除菌的含有100U/mL青霉素和0.01g/100mL链霉素的PBS缓冲液；
脐带间充质干细胞培养液：为450mL低糖DMEM细胞培养液、50mL胎牛血清、10mL浓度为250ng/mLbFGF和250ng/mLEGF混合液，不用时-20℃保存，用前4℃过夜解冻后混匀；
细胞洗涤液为无菌生理盐水；
细胞消化液：为浓度为1mg/mL的胶原酶A和浓度为1mg/mL的中性蛋白酶按照1：2体积比的混合液；
细胞冻存液：为细胞培养液、FBS、DMSO按1:3:1的体积比的混合液。
试剂盒平时在-20℃条件下保存，使用之前置于4℃冰箱内解冻，具体使用过程如下：
1、脐带采集，即获取10cm剖腹产新生儿脐带组织，保存在脐带采集保存液中，并于24h内送至实验室；
2、于超净工作台中取出脐带，用脐带洗涤液对脐带进行充分洗涤，去除血污；
3、将脐带剪成长约1～3cm的小段，进行机械法分离，钝性剥离华通氏胶，同时去除脐动脉和脐静脉后剪成约1～3mm3的组织块；
4、将剪碎华通氏胶转移到六孔细胞培养板里铺匀，待组织块牢固贴在六孔细胞培养板以后，加入少量的脐带间充质干细胞培养液至刚好没过组织块；
5、连续两三天并通过观察培养基的颜色，判断有无污染，然后于第7天左右，通过显微镜观察，吸掉游离出细胞的组织，然后隔天半量换液一次；
6、至游离出细胞的孔中出现细胞集落，且密度较高时，准备传代；
剩余未游离出细胞或者少量游离出细胞可继续培养，至游离出细胞的孔中出现细胞集落，且密度较高时再传代；
7、细胞传代：
7.1、吸掉脐带间充质干细胞培养液，用细胞洗涤液清洗六孔细胞培养板，然后加入细胞消化液，置于37℃、5％CO2的培养箱中消化处理2小时，期间每20分钟取出检测消化情况，待显微镜下观察到大部分细胞变圆时，用完全培养液终止消化；
7.2、用滴管轻轻吹打六孔细胞培养板，将液体转移到离心管，然后以2000rpm的转速离心5分钟，弃去上清液；
7.3、加入脐带间充质干细胞培养液重悬细胞，隔天换液，待细胞80～90％融合时再次传代；
8、细胞的冻存
8.1、用细胞消化液消化细胞后转移到离心管，2000rpm离心5min，弃去上清液；
8.2、加入适当体积的完全培养液重悬细胞，然后将细胞悬液与冻存液以1:1比例后分装到冻存管中冷冻。
本实用新型提供了一种能够较好地实现脐带间充质干细胞分离和扩增培养试剂盒，有助于MSCs的应用推广。以上为本实用新型实施例的基本型，为了改进技术效果，还可对本实施的基本型做如下改进，以下改进没有矛盾的地方均可相互结合。
其中，用于分离和扩增培养脐带间充质干细胞的试剂盒内，消毒灭菌装置2为紫外灭菌灯，紫外灭菌灯设置于盒体1的盒盖内侧。
用于分离和扩增培养脐带间充质干细胞的试剂盒里，器械耗材包括1把一次性无菌剪刀、2把一次性无菌塑料镊子、4只一次性无菌250mL塑料杯和1个一次性无菌100um细胞滤网。
用于分离和扩增培养脐带间充质干细胞的试剂盒中，盒体1与各个功能区3之间，以及各个相邻的功能区3相互之间，至少有一处设置有无菌橡胶隔垫或其他结构的减震结构，具体实施时，盒体1与各个功能区3，以及各个功能区3之间只要是相邻的两个之间，均设置有减震结构。
用于分离和扩增培养脐带间充质干细胞的试剂盒中，盒体1上开关的位置设置有密码锁，可以避免盒体1被他人随意打开造成污染。
以上结合附图对本实用新型的实施方式作了详细说明，但本实用新型不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本实用新型原理和精神的情况下，在没有做出创造性劳动前提下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本实用新型的保护范围内。
