一种瑞香素的应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种瑞香素的应用，具体涉及瑞香素在治疗和预防特应性皮炎药物中的应用。
背景技术
特应性皮炎(Atopic Dermatitis, 简称 AD) 是一种常见的慢性、复发性、炎症性皮肤病。各年龄段均可发病，儿童最常见，全世界约 10%～20%儿童和 1%～3%成人罹患 AD。流行病学研究发现在过去的 30 年中，世界多数国家，特别是经济发达国家 AD 的患病率大幅度增加，在欧美国家儿童患病率甚至高达 10%～20%；在我国，20 年来特应性皮炎的患病率也在逐步上升。本病临床上一般分为 3 期：婴儿期、儿童期、青少年及成年期。45岁以后发病者较少见，顽固者至 50～60 岁方可治愈。其主要临床特征为皮肤广泛红斑、丘疹、脱屑和顽固的瘙痒及皮肤干燥，且患者常有“异位性”家族史。经常搔抓导致皮肤增厚、苔藓样变，且常伴有速发型 (Ⅰ型) 变态反应。AD患者大多为青少年及儿童，而目前大多采用抗组胺药、激素类药、抗生素等，副作用大，长期使用对生长发育有许多不利因素，因此寻找毒副作用小、疗效明确的药物势在必行。
中医认为皮肤病不仅仅是皮肤的病变，也是全身免疫功能失调的结果，故从改善全身状态、辨证进行治疗。中医主要发挥内治法的优势，根据病情变化随证加减，通常可以收到较好效果。但临床常用治疗婴幼儿和儿童 AD 的中药复方中常含有木通，木通因其苦寒而大泄心肾之气及其可引起肾功能衰竭而不宜久用和大量应用，因而限制了中药在治疗AD中的应用。
瑞香素（Daphnetin, Dap.）别名祖师麻甲素，是瑞香科植物长白瑞香中提取出的有效成分。长白瑞香味苦、辛，性温，归心、肝、肺三经；功善舒筋活络、活血化瘀。瑞香素无臭无味，为类白色或灰白色粉末，在甲醇中略溶，乙醇中微溶，不溶于水。化学名为 7,8-二羟基香豆素，分子式为C9H6O4，结构式为
发明人在研究过程中，发现瑞香素具有治疗和预防特应性皮炎的作用。
发明内容
本发明的目的在于提供瑞香素在治疗和预防特应性皮炎药物中的应用。
本发明的目的是这样实现的：
瑞香素能够保护特应性皮炎患者的皮肤，使得皮损处长出部分新生毛发，丘疹、结痂得到改善，瑞香素结构式如下：
瑞香素能够保护特应性皮炎患者皮肤增厚、水肿以及炎性细胞浸润等的情况。
瑞香素抑制皮损处肥大细胞数目。
瑞香素降低IgE水平。
瑞香素抑制Th2型细胞因子IL-4、IL-6、IL-13的表达。
特应性皮炎是指为特应性皮炎、湿疹、神经性皮炎或脂溢性皮炎。
药物的剂型为口服剂型或外用剂型。
瑞香素的剂量为每日3次，每次0.5-2g。
瑞香素的剂量为每日3次，每次1g。
本发明优点：
1、本发明提供实验研究证明了瑞香素能保护特应性皮炎模型小鼠的皮肤，使得皮损处长出部分新生毛发，丘疹、结痂得到改善。
2、本发明提供了瑞香素的应用，即瑞香素在制备治疗特应性皮炎药物上的应用，并且瑞香素能够保护特应性皮炎模型小鼠的瑞香素可有效抑制特应性皮炎模型小鼠皮肤增厚、水肿以及炎性细胞浸润等的情况。瑞香素作用于特应性皮炎模型小鼠后对皮损处肥大细胞数目有一定的抑制作用。瑞香素能降低IgE水平和抑制Th2型细胞因子IL-4、IL-6、IL-13的表达。
附图说明
图1为小鼠皮损外观情况；
图2为AD小鼠背部皮损组织HE 染色病理形态观察（200×）；
图3为AD小鼠皮损组织肥大细胞浸润情况（200×）；
图4为瑞香素对AD小鼠血清中IgE表达量的影响；
注：##：P<0.01；*：P<0.05；**：P<0.01；ns：无显著性差异；
图5为瑞香素对AD小鼠血清中细胞因子表达量的影响；
注：####：P<0.0001；##：P<0.01；*：P<0.05；**：P<0.01；***：P<0.005；
***：P<0.001；ns：无显著性差异。
具体实施方式
下面对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明所作的任何变换，均属于本发明的保护范围。
瑞香素在制备治疗和预防特应性皮炎药物中的应用。
瑞香素能够保护特应性皮炎患者的皮肤，使得皮损处长出部分新生毛发，丘疹、结痂得到改善，瑞香素结构式如下：
瑞香素能够保护特应性皮炎患者皮肤增厚、水肿以及炎性细胞浸润等的情况。
瑞香素抑制皮损处肥大细胞数目。
瑞香素降低IgE水平。
瑞香素抑制Th2型细胞因子IL-4、IL-6、IL-13的表达。
特应性皮炎是指为特应性皮炎、湿疹、神经性皮炎或脂溢性皮炎。
药物的剂型为口服剂型或外用剂型。
瑞香素的剂量为每日3次，每次0.5-2g。
瑞香素的剂量为每日3次，每次1g。
实施例1：
1 实验材料
1.1 动物
雌性BALB/c小鼠48只，SPF级6-8周龄，体重（20±2）g，购买于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物许可证号[SCXK（湘）2016-0002] 。适应性饲养1周，饲养在无特定病原体、空气流动、温度（23±2）℃、湿度（55±5）％、光暗每12小时为一个循环、小鼠能自由获取食物和水的洁净动物室内。
1.2 药物和主要试剂
瑞香素，上海源叶生物科技有限公司；醋酸地塞米松，浙江仙琚制药股份有限公司，生产批号：170512；2,4-二硝基氯苯，成都贝斯特试剂有限公司，生产批号：Z0016B5；丙酮，云南杨林工业开发区油滇药业有限公司，生产批号：20160325；橄榄油，山东鲁花集团有限公司，生产批号：20180803；羧甲基纤维素钠，天津市光复精细化工研究所，生产批号：50116；Elisa试剂盒，达优，生产批号：1218202。
1.3 主要实验器材及设备
全波长多功能酶标仪，倍捷科技，型号：Plus384；-80℃超低温冰箱，美国Thermo Forma公司，型号：Forma 902；低温高速离心机，德国Eppendorf公司，型号：5810R；电子分析天平，奥豪斯仪器有限公司，型号：AR224CN。
2 实验方法
2.1 模型复制、分组及给药
BALB/c小鼠经适应性饲养1周后用于实验，将其随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组（醋酸地塞米松2 mg/kg）、瑞香素低、中、高剂量组（25、50、100 mg/kg），每组8只。实验前1天，所有小鼠用电推剪加脱毛膏进行背部脱毛（2 cm×2 cm），暴露皮肤；实验第 1、2 天，除空白对照组以外，对其他组小鼠在背部已脱毛的皮肤上涂抹以丙酮-橄榄油混合溶液为溶媒配制的 1% 2,4-二硝基氯苯（DNCB）溶液，100 μL/次，第3~6天不作任何处理，第7天开始每隔1天涂抹1次0.3%DNCB溶液，70 μL/次，直至第28天。空白对照组小鼠背部已脱毛的皮肤仅涂抹丙酮-橄榄油混合溶液，涂抹时间和体积与造模组一致。自实验第1天开始各组分别灌胃给予相应药物，1次/d，连续给药28d。
2.2 样本选取及处理
末次给药后禁食12 h，麻醉动物收集腹主动脉血，剖取脾脏和胸腺，剪取背部造模处皮损组织切为2部分，一部分置于-80℃冰箱，一部分置于10%中性福尔马林溶液中。
2.3 测定指标及方法
（1）小鼠一般情况观察
每天称量并记录小鼠体重；每次造模后一天，观察小鼠背部皮损情况，包括红斑（出血）、红疹（丘疹）、表皮剥落（抓痕）、鳞屑（干燥）等，并拍照记录。
（2）一般组织病理学观察
将置于10%中性福尔马林溶液中固定的皮损组织取出，经脱水、透蜡、包埋、切片等制备成病理切片，然后进行HE染色。
（3）皮损组织肥大细胞浸润数目
石蜡切片，脱蜡，甲苯胺蓝（TB）染色，洗净，晾干，封片，显微镜下观察小鼠皮肤组织真皮层中肥大细胞（Mast cell，MC）的浸润情况，每组随机选取8个视野，拍照，封片，统计肥大细胞的浸润数量。
（4）血清总IgE和Th2型细胞因子表达情况
Elisa法测定血清中总IgE和细胞因子IL-6、IL-4、IL-13细胞因子的含量。
2.4 统计学处理
采用Graphpad prism 8.0.2软件对所得数据进行统计学分析 ，数据以平均值±标准差表示，使用单因素方差分析和t检验分析，P＜0.05的值表示差异具有统计学意义。
3 实验结果
3.1瑞香素对AD模型小鼠皮损组织的影响
3.1.1 小鼠皮损外观
空白对照组小鼠皮肤正常，组织结构基本正常；模型对照组小鼠皮肤可见红斑、干燥、鳞屑、丘疹、结痂等皮损改变；连续给药28天后，阳性对照组小鼠背部皮肤较光滑，仅可见极少量鳞屑；瑞香素高剂量组小鼠背部有少量鳞屑，无明显红斑且个别动物在实验结束时背部皮损处已长出部分新生毛发，中、低剂量组小鼠丘疹、结痂有一定改善，结果见图1。
3.1.2 小鼠皮损一般组织病理学
HE染色显示，空白对照组小鼠皮肤结构完整，形态正常，且真皮层未见血管扩张及炎症细胞浸润；模型对照组小鼠背部受试区皮肤结构严重受损，角化过度，棘层肥厚明显伴灶性海绵水肿，真皮血管扩张充血并伴有大量炎症细胞浸润，毛囊结构减少；与模型对照组相比，阳性对照组小鼠表皮各层结构较清晰，表皮增厚明显减轻，真皮未见血管扩张，炎性细胞较模型组明显减轻，毛囊结构明显增多；瑞香素高、中剂量组小鼠皮肤角化程度降低，棘层肥厚和伴灶性海绵水肿明显减轻，且真皮层炎性细胞浸润明显减轻，毛囊结构明显增多，具体结果见图2。提示瑞香素可有效抑制AD模型小鼠皮肤增厚、水肿以及炎性细胞浸润等的情况。
3.2 瑞香素对AD模型小鼠皮损处肥大细胞浸润情况的影响
甲苯胺蓝染色结果显示，空白对照组仅可见少量肥大细胞；与空白对照组相比，模型对照组可见较多的肥大细胞；与模型对照组相比，阳性对照组小鼠皮损处可见少量的肥大细胞，数目显著减少；瑞香素高、中、低剂量均可显著减少AD模型小鼠皮损处肥大细胞数目，其中瑞香素高剂量组肥大细胞数目略高于阳性对照组，具体见图3。提示瑞香素作用于AD模型小鼠后对皮损处肥大细胞数目有一定的抑制作用。
3.3 瑞香素对AD模型小鼠血清总IgE及细胞因子含量的影响
与空白对照组相比，模型对照组小鼠血清总IgE和IL-4、IL-6、IL-13含量均显著升高；与模型对照组相比，瑞香素各剂量均能显著降低血清总IgE水平及IL-4、IL-6、IL-13含量，结果见图4和图5；提示瑞香素能降低IgE水平和抑制Th2型细胞因子的表达。
4. 结论
在本发明所述的小鼠AD模型试验中，瑞香素的剂量为每日1次，每次25、50、100 mg/kg。换算为人（以成人体重60kg计算）剂量为每日1次，每次1.5、3、6 g。考虑到服用情况，推荐剂量为每日3次，每次0.5-2g。最常用的剂量为每日3次，每次1g。
本发明提供的瑞香素，能够保护AD模型小鼠的皮肤，使得皮损处长出部分新生毛发，丘疹、结痂得到改善。瑞香素可有效抑制AD模型小鼠皮肤增厚、水肿以及炎性细胞浸润等的情况。瑞香素作用于AD模型小鼠后对皮损处肥大细胞数目有一定的抑制作用。瑞香素能降低IgE水平和抑制Th2型细胞因子IL-4、IL-6、IL-13的表达。
