藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素在制备降血糖及降血压的药物组合物中的应用
技术领域
本发明属于天然提取物技术领域，具体涉及藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素在制备降血糖及降血压的药物组合物中的应用。
背景技术
糖尿病的药物治疗又分为口服降血糖药或注射胰岛素；当口服降血糖药治疗后，血糖仍控制不佳时，即可能需要改为以注射胰岛素治疗。但随着药品作用机制的不同，服药的时间也有所区别：其一，饭前30分钟服用、饭前立即服用或随餐服用的药品，此类药品多具刺激胰岛素分泌的功能；其二，饭后服用的药品，其用于改善胰岛素抗药性及减少肝脏的葡萄糖输出，但其作用大多在于肠胃道，因此病患于饭后服用可避免肠胃不适的副作用。在使用降血糖药品的副作用中，一般低血糖为最常见者，尤其当病患服用药品时，并未配合饮食时间，或未进食又从事会消耗血糖的活动时更容易发生；其次是肠胃不适；另外还可能引发肝毒性。
注射用的胰岛素与人体内产生的胰岛素相同或几乎相同，目前被广泛使用，对于糖尿病能够达到最有效的治疗，减少血糖控制不良可能导致的问题，如眼睛、肾脏及周边神经的病变。然而其注射位置、注射深度、运动、剂量皆会影响胰岛素的吸收。为了获得稳定的胰岛素吸收和作用，须注意在同一个注射区内的注射次数不宜过于频繁，故不宜每次皆注射在同一点上，注射点应与上一次的注射点保持三根指头的距离，方能确保胰岛素的稳定吸收，不致延后吸收，以避免因同一区域内注射次数过于频繁而引起注射部位皮下组织的伤害。
高血压是最常见的慢性病(收缩压≥140毫米汞柱，舒张压≥90毫米汞柱)，也是心脑血管病最主要的危险因素，在临床上高血压可分为两类：1.原发性高血压占所有高血压患者的90％以上，病因尚未明确的独立疾病。2.继发性高血压又称症状性高血压，在这类疾病中病因明确，血压可暂时性或持久性升高。高血压是受1.遗传因素大约60％的高血压患者有家族史，是多基因遗传所致，30％～50％的高血压患者有遗传背景。2.精神和环境因素3.年龄因素40岁以上者发病率高。4.生活习惯因素吸烟可加速动脉粥样硬化的过程，为高血压的危险因素。5.药物的影响6.其他疾病的影响，例如：肥胖、糖尿病、睡眠呼吸暂停低通气综合征、甲状腺疾病、肾动脉狭窄、肾脏实质损害、肾上腺占位性病变、嗜铬细胞瘤、其他神经内分泌肿瘤等。另一方面，高血压常常与其他心、脑血管病的危险因素合并存在，例如高胆固醇血症、肥胖、糖尿病等，协同加重心血管疾病危险。对症给药及长期控制最为重要。
目前糖尿病与高血压的治疗方法皆分为三个部分：规律运动、控制饮食及药物治疗。其中高血压的药物治疗通常为长期间按时服药，以达到有效的治疗，并减少中风、心脏病、肾脏病等并发症的发生。然而有些种类的高血压药物会引发副作用，造成患者服用后身体不适，因此目前的高血压药物都是以大规模研究、经过疗效与副作用的评估后，才被采用。
藤黄属(Garcinia)为植物分类中藤黄科(Clusiaceae)以下的一个属，该属植物的多数种的果实皆可食用；种子富含油脂；黄色树脂供药用。有些种为著名的药用藤黄和高级黄色颜料。藤黄属果实的医疗保健功效近年来逐渐受到关注，但用于降血糖或降血压的应用仍未出现于市面上。
发明内容
本发明的目的在于提供藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素在制备降血糖及降血压的药物组合物中的应用。
本发明的另一目的在于提供一种降血糖及降血压的口服药物组合物。
本发明的技术方案如下：
藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素在制备降血糖及降血压的药物组合物中的应用，该药物组合物为口服制剂，且该藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素由包括果皮、果肉或种子在内的藤黄属果实经萃取溶剂萃取后干燥而得，其中含有γ-倒捻子素，该萃取溶剂由水与aqueous micellar biphasic systems组成，该藤黄属果实包括莽吉柿(又名山竹、芒翕、山竺、山竹子、倒捻子或凤果)、钮扣山竹和柠檬山竹中的至少一种。
在本发明的一个优选实施方案中，所述萃取溶剂中，水与aqueous micellarbiphasic systems的体积比为1∶25-30。
在本发明的一个优选实施方案中，所述藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的用于降血糖的有效量为4-8mg/kg ICR小鼠B.W./day，成人等效剂量为37-73mg/day，用于降血压的有效量为0.7-1.5mg/kg第一期高血压P1-HT大鼠B.W./day，成人等效剂量为7-14mg/day。
在本发明的一个优选实施方案中，所述口服药物组合物的剂型包括丸剂、锭剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、小瓶剂、滴剂或乳剂。
在本发明的一个优选实施方案中，所述口服药物组合物还包括至少一种药学可接受的佐剂、载体和/或赋形剂。
本发明的另一技术方案如下：
一种降血糖及降血压的口服药物组合物，所述有效成分包括藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素，该藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素由包括果皮、果肉或种子在内的藤黄属果实经萃取溶剂萃取后干燥而得，该萃取溶剂由水与aqueous micellar biphasic systems组成，该藤黄属果实包括莽吉柿、钮扣山竹和柠檬山竹中的至少一种。
在本发明的一个优选实施方案中，所述萃取溶剂中，水与aqueous micellarbiphasic systems的体积比为1∶25-30。
在本发明的一个优选实施方案中，所述藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素用于降血糖的有效量为4-8mg/kg ICR小鼠B.W./day，成人等效剂量为37-73mg/day；所述藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素用于降血压的有效量为0.7-1.5mg/kg第一期高血压P1-HT大鼠B.W./day，成人等效剂量为7-14mg/day。
在本发明的一个优选实施方案中，所述口服药物组合物的剂型包括丸剂、锭剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、小瓶剂、滴剂和乳剂。
在本发明的一个优选实施方案中，所述口服药物组合物还包括至少一种药学可接受的佐剂、载体和/或赋形剂。
本发明的有益效果是：
1、本发明中的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的降血糖的功效近似于现有技术中被广泛使用且最有效的降血糖药物如胰岛素，长期施用无不良反应，并具保肝及固肾功能；
2、本发明中的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素是口服施用，不像注射用的胰岛素会因诸多因素影响疗效及因同一区域内注射次数过于频繁而引起注射部位皮下组织的伤害。
3、本发明中的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素对于高血压的个体具有降血压的功效。对于血压正常的个体不会造成血压异常。对于高血压的个体不会造成心律过快的副作用；而其对于血压正常的个体亦无影响。
附图说明
图1为本发明实施例2中检测藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素对糖尿病ICR小鼠给予葡萄糖造成血糖变化的反应曲线图；
图2为本发明实施例2中换算图1曲线下方的面积(area under the curve，本发明中简称AUC)，比较藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素试验各组对糖尿病ICR小鼠造成血糖变化的柱状图。
图3为本发明实施例2中检测藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素对糖尿病ICR小鼠给予淀粉造成血糖变化的反应曲线图；
图4为本发明实施例2中换算图3曲线下方的面积(area under the curve，本发明中简称AUC)，比较藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素试验各组对糖尿病ICR小鼠造成血糖变化的柱状图。
图5为本发明实施例3中检测长期给予藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素对糖尿病ICR小鼠造成空腹血糖变化的曲线图；
图6为本发明实施例3中换算图5曲线下方的面积(area under the curve，本发明中简称AUC)，比较藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素试验各组对糖尿病ICR小鼠造成空腹血糖变化的柱状图。
图7为本发明实施例3中检测长期给予藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素提升肝功能的效果
图8为本发明实施例3中检测长期给予藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素提升肾功能的效果
图9为本发明实施例3中检测长期给予藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素降低胆固醇(CHO)的效果
图10为本发明实施例3中检测长期给予藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素改善三酸甘油酯(TG)的效果
图11为本发明实施例4中的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素施用一次后对第一期高血压P1-HT大鼠的降血压功效之柱状图；
图12为本发明实施例4中的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素施用一次后对正常血压SD大鼠的降血压功效之柱状图；
图13为本发明实施例4中的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素对第一期高血压P1-HT大鼠施用一次后、对正常血压SD大鼠施用一次后造成的心律变化之柱状图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式结合对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
本发明中所用的藤黄属(Garcinia)是指植物分类中藤黄科(Clusiaceae)以下的一个属。莽吉柿(学名：Garcinia mangostana)，又名山竹、芒翕、山竺、山竹子、倒捻子、凤果，为藤黄科藤黄属下的一个种。与山竹同属的包括钮扣山竹(G.prainiana)和柠檬山竹(G.madruno)，近缘种是福木(G.subelliptica)。主治脾虚腹泻、口渴口干、烧伤、烫伤、湿疹、口腔炎。外果皮粉末内服可治腹泻、赤痢，外敷可治皮肤病，干燥的山竹叶可用来泡茶。本发明中的藤黄属果皮或果肉(包括莽吉柿、钮扣山竹和柠檬山竹)中可萃取及分离三种倒捻子素，已确定结构的主要有三种倒捻子素，α-、β-、和γ-倒捻子素，其中α-、γ-倒捻子素又称α-、γ-山竹黄铜。
本发明中的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素以及其他类似用语是指将植物的果实(视需要洗净)打碎后和一萃取溶剂接触而制得的混合物。所述萃取溶剂由aqueousmicellar biphasic systems与水以1∶25-30的体积比组成。所述的萃取物包含粗萃取物(crude extract)以及经处理、纯化后的精制萃取物(refiined extract)，更明确地说，粗萃取物是经简单萃取而得的产物，其中所选的植物部分和至少一萃取接口活性剂接触，在可任选的情形中，之后可将所得的粗萃取物进行一或多种分离及/或纯化处理，以得到精制萃取物。果实萃取物可以是液体形式(如，溶液、浓缩物或蒸馏物)，也可以是去除溶剂的固形物(如，膏、颗粒或干燥后的粉末)，且该固形物可进一步溶于油中，可使用的油为例如但不限于食用油，如黄豆油。
本发明中所用的有效量(effective amount)是指一药物组合物的用量足以产生期望的治疗结果，其中结果的确切性质根据被治疗的具体疾病而变化。具体的有效量取决于多种因素，如欲治疗的特定状况、患者的生理条件(如，患者体重、年龄或性别)、接受治疗的动物类型、治疗持续时间、投药方式、目前疗法(若有)的本质以及所用的具体配方和化合物或其衍生物的结构。有效量亦指一种化合物或组合物，其治疗利益效果超越其毒性或有害影响。举例来说，可将有效量表示成药物的总重量(譬如以克、毫克或微克为单位)或表示成药物重量与体重的比例(其单位为毫克/公斤(mg/kg))。
本发明中所用的药物组合物是指由两种或两种以上物质组成的混合物或化合物并包含本发明的萃取物或纯化后γ-倒捻子素做为活性成份，不论其为气体、液体、粉末或固体。经口投与的药物组合物可呈胶囊、扁囊剂、丸剂锭剂、口含锭、散剂、颗粒剂形式或呈于水溶液或非水性液体中的溶液或悬浮液形式，或呈水包油或油包水液体乳液形式，或糖浆形式，或呈片剂其类似物的形式。在用于经口投与的药物组合物的固体剂型(胶囊、锭剂、丸剂、糖衣药丸、散剂、颗粒剂及其他口服剂型)中，本发明的药物组合物可用于例如制造食品、医药品、工业原料等的用途。本发明食品的例可列举营养补助食品、健康食品、机能性食品、老人用食品等。
实施例1藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的制备
分别将藤黄属果实洗净后烘干切碎并打成粉状，加入萃取溶剂(aqueousmicellar biphasic systems与水的体积比为1∶25-30)，固液分离后，液体放在室温风干，即得所述藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素。藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素在使用前以2mg/mL的浓度溶于黄豆油中。
上述aqueous micellar biphasic systems具体请见期刊文献Recovery ofmangostins from Garcinia mangostana peels with an aqueous micellar biphasicsystem(Grace Yin Tze Tan，Wolfgang Zimmermann，Ka-Heng Lee，John Chi-Wei Lan，HipSeng Yim，Tau Chuan Linge，Hui Suan Ng，Food and Bioproducts Processing，Volume102，March 2017，Pages 233-240)。
实施例2测试实施例1制得的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的降血糖效果
(一)实验过程：
在晚间23:00开始将高油饲料诱导糖尿病ICR小鼠(饥饿血糖＞130mg/dL)断水断食10小时。隔天早上9:00先测定初始血糖值后，每只管喂0.2mL的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素(50g ICR小鼠投予4-8mg/kg B.W./day；若换算为人类则低于75mg/60kgB.W./day即具备调降血糖功效)，其次再给予4g/kg葡萄糖或3g/kg淀粉，并开始计时，每隔30分钟使用Accu-chek(机型Instant)血糖机由小鼠尾静脉扎针测定血糖一次，共测定0、30、60、90、120分钟五个时间点。给予淀粉中共测定0、30、60、90、120分钟五个时间点采用分别由所制备的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素进行实验组。本实验以给予糖尿病ICR小鼠4g/kg葡萄糖前仅喂食0.2mL灭菌水作为空白对照组；以给予糖尿病ICR小鼠4g/kg葡萄糖前不喂食藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素，且进行皮下注射20pM胰岛素(insulin)或给予5mg/kg二甲双胍(临床用药)作为二个正对照组。
(二)实验结果：
以下依据图1与图2阐述本实验的结果。本实验的资料是以平均值±标准误差(SE)显示，使用图凯(Tukey’s)测试的单向ANOVA进行显着分析，以确定实验组与对照组的处理结果的差异，以GraphPad Prism 7.04(La Jolla，CA，USA)构建数据柱状图。*(p＜0.05)、**(p＜0.01)、***(p＜0.001)和****(p＜0.0001)是统计学显着性水平。
如图1所示，仅给予4g/kg葡萄糖的糖尿病ICR小鼠的血糖值在30分钟后上升至最高，且高于任一实验组或对照组，其后续血糖值降低的状况则明显地较缓慢。进行皮下注射胰岛素、喂食二甲双胍、藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的糖尿病ICR小鼠在30分钟后的血糖值相对于空白对照组则皆上升较慢，且其后续血糖值降低的状况相对于空白对照组则皆有明显较快速的趋势。由此可知，所述藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素具有降血糖的功效，且其效果与常见的降血糖药物胰岛素及二甲双胍相近。
如图2所示，换算图1的数据，转换为柱状图的后，能够更明确地比较不同处理方式对于血糖变化的影响。据此，藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素当中的降血糖功效为最佳，且几乎等同于施打胰岛素的效果；其降血糖功效胜过二甲双胍。
如图3所示，仅给予3g/kg淀粉的糖尿病ICR小鼠共测定0、30、60、90、120、180分钟五个时间点的血糖值，在90分钟后上升至最高且高于任一实验组或对照组，其后续血糖值降低的状况则明显地较缓慢。进行喂食阿卡波糖、藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的糖尿病ICR小鼠在90分钟后的血糖值相对于空白对照组则皆上升较慢，且其后续血糖值降低的状况相对于空白对照组则皆有明显较快速的趋势。由此可知，所述藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素具有降血糖的功效，且其效果胜过常见的降血糖药物阿卡波糖。
如图4所示，换算图3的数据，转换为柱状图的后，能够更明确地比较不同处理方式对于血糖变化的影响。
实施例3测试长期给予实施例1制得的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的降血糖效果
(一)实验过程：
对照组以给予灭菌水和实验组以低剂量(4mg/kg)及高剂量(8mg/kg)藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素给予糖尿病ICR小鼠为期4周共28天，每7天检测空腹血糖值及采血检测其肝、肾功能，胆固醇和三酸甘油脂的变化。
如图5所示为本发明检测长期给予藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素对糖尿病ICR小鼠造成空腹血糖变化的曲线图；经4周给予藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素可改善糖尿病ICR小鼠造成空腹血糖。
如图6所示，换算图5的数据，转换为柱状图的后，能够更明确地比较不同处理方式对于血糖变化的影响。能够更明确地比较不同处理方式对于血糖变化的影响。
如图7所示，长期给予藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的提升肝功能效果。
如图8所示，长期给予藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的提升肾功能效果。
如图9所示，长期给予藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的降胆固醇(CHO)效果。
如图10所示，长期给予藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的改善三酸甘油酯(TG)效果。
实施例4测试实施例1制得的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的降血压的效果
(一)实验过程：
急性(acute)：
将正常血压SD大鼠及第一期高血压P1-HT大鼠断食10小时。透过气体麻醉机麻醉，经由股动脉插管通过PowerLab传递到LabChart 7(Colorado Springs CO 80906，USA)检测及记录初始血压值。待血压稳定3分钟后，每只管喂0.2mL藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素(300g正常血压SD大鼠及第一期高血压P1-HT大鼠投予0.7-1.5mg/kg B.W./day；若换算为人类则低于16mg/60kgB.W./day即具备调降血压功效)，给药后持续监测30分钟内的血压及心律变化。
(二)实验结果：
以下依据各图式阐述本实验的结果。本实验的资料是以平均值±标准误差(SE)显示，使用Tukey测试的单向ANOVA进行显着分析，以确定处理前及处理后的差异，以GraphPadPrism 7.04(La Jolla，CA，USA)构建数据柱状图。*(p＜0.05)、**(p＜0.01)、***(p＜0.001)和****(p＜0.0001)是统计学显着性水平。
如图11所示，第一期高血压P1-HT大鼠服用藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素30分钟后，其收缩压皆有显着的下降，其中以藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素的降血压功效为最显着。由此可见，藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素对于高血压的个体具有降血压的功效。
如图12所示，正常血压SD大鼠服用藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素30分钟后，其血压未有急遽的变化。据此，藤黄属果实萃取物对于血压正常的个体不会造成血压异常。
如图13所示，服用藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素一次的第一期高血压P1-HT大鼠，未产生心律过快的现象；而正常血压SD大鼠服用藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素后，其心律未造成影响。据此，藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素对于高血压的个体不会造成心律过快的副作用；而其对于血压正常的个体亦无影响。即藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素不仅可用于制备降血压药物组合物的用途，亦得以经评估后用于制备日常保健食品的用途。
综上所述，本发明的藤黄属果实萃取物γ-倒捻子素可用于制备降血糖(人类的建议用量为75mg/60kg B.W./day即具备调降血糖功效)或降血压(人类的建议用量为16mg/60kg B.W./day即具备调降血压功效)的药物组合物。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。
