一种抗流感病毒的蒙药、药物组合物及其制备方法和应用
技术领域
本公开涉及一种抗流感病毒的蒙药、药物组合物及其制备方法和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本公开的总体背景的一些理%20解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技%20术人员所公知的现有技术。
流行性感冒病毒简称流感病毒，它分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型。%20流感病毒可引起人、禽、猪、马、蝙蝠等多种动物感染和发病，是人流感、禽%20流感、猪流感、马流感等人与动物疫病的病原。人流感主要是甲型流感病毒和%20乙型流感病毒引起的。甲型流感病毒经常发生抗原变异，可以进一步分为%20H1N1、H3N2、H5N1、H7N9等亚型(其中的H和N分别代表流感病毒两种%20表面糖蛋白)。
对于流感患者，多使用西药干扰素、金刚烷胺、奥司他韦等药物进行治疗，%20但是西药副作用大，且易产生耐药性。针对此问题，本发明人团队前期研究得%20到旋覆花对一些流感具有显著的疗效，不产生耐药性。
发明内容
针对以上背景技术，本发明人团队对旋覆花进行了深入研究，发现单独采%20用旋覆花抗H1N1等流感病毒效果较为优异，但是针对H3N2的抗性较弱。针%20对此问题，本公开提供一种抗流感病毒的蒙药、药物组合物及其制备方法和应%20用，所述抗流感病毒的蒙药与沙蓬和旋覆花配伍，得到的药物组合物不仅具有%20优异的抗H1N1作用，还具有优异的抗H3N2作用。
具体的，本公开采用以下技术方案：
在本公开的第一个方面，提供地肤子和/或地肤子水提取物和/或地肤子醇%20提取物在制备抗流感病毒药物组合物或药物制剂中的应用。
在本公开的第二个方面，提供地肤子和/或地肤子水提取物和/或地肤子醇%20提取物在制备能够抑制流感病毒感染引起的细胞病变效应以及流感病毒感染%20细胞中病毒基因组RNA复制的药物组合物或药物制剂中的应用。
在本公开中，所述地肤子，为藜科植物地肤子Kochia%20scoparia(L.)Schrad.，%20在本公开中，地肤子的地上部分以及地肤子的果实均具有抗流感病毒的作用。
地肤子多被用为治疗皮肤瘙痒的中药原料，而本发明人经过研究，惊奇地%20发现，地肤子和/或地肤子水提取物和/或地肤子醇提取物具有较为优异的抗流%20感病毒作用，尤其是能够有效抑制流感病毒感染引起的细胞病变效应以及能够%20有效抑制流感病毒感染细胞中病毒基因组RNA复制。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述流感病毒为甲型流感病毒和/或%20乙型流感病毒，所述甲型流感病毒为甲型H1N1流感病毒和/或甲型H3N2流感%20病毒。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述地肤子水提取物是通过以下方法%20制备得到的：
取地肤子地上部分，加水煎煮，过滤；残渣再加水煎煮，合并滤液，即可%20得到地肤子水提取物。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述地肤子醇提取物为地肤子乙醇提%20取物。
进一步的，所述地肤子乙醇提取物是通过以下方法制备得到的：
取地肤子地上部分，加入乙醇溶液进行煎煮，过滤；残渣再加乙醇溶液煎%20煮，合并滤液，即可得到地肤子乙醇提取物。
更进一步的，所述乙醇溶液的体积分数为90～95％，能够有效提取抗流感%20病毒的活性成分。
在本公开的第三个方面，提供一种抗流感病毒的药物组合物，所述药物组%20合物包括地肤子或地肤子的有效成分。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述地肤子的有效成分是通过水提或%20醇提制备得到的。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述药物组合物是由以下重量份的原%20料制备而成：
沙蓬45～55份，旋覆花25～35份，地肤子15～25份。
进一步的，所述药物组合物是由以下重量份的原料制备而成：
沙蓬50份，旋覆花30份，地肤子20份。
进一步的，采用沙蓬的地上部分和种子、旋覆花的花和地肤子的果实入药，%20经过试验验证，取用上述部位入药，抗流感病毒的效果更加优异。
本公开中，所述沙蓬为蒙药，蒙药名为楚力给日(《蒙药正典》)，学名为Agriophyllum%20squarrosum(L.)Moq.，属于藜科沙蓬属植物。经相关记载，主治：%20治瘟疫，头痛，赤眼，黄疸，肾热，尿道灼痛，口渴，口疮，胃"赫依"，毒热。
本公开中，所述旋覆花为蒙药，蒙药名为阿拉坦-导苏乐-其其格，学名为%20Inulabritanica%20L.var.japonica(Thubn.)Franch.et%20Sav.，属于菊科旋覆花属植物。%20经相关记载，主治：治"粘"刺痛症，"发症"，骨折，金伤。
本公开的药物组合物是根据传统的蒙医理论和中医理论构建而成，包括一%20味中药和两味蒙药，其为一个有机整体，缺一不可，各组分间具有协同增效作%20用，能够有效解决单一抗H1N1的技术问题。经过试验验证，发明人发现，减%20少任一药物原料，或以具有相似药性的原料药对上述药物组合物的原料组分进%20行替换，则药物组合物的整体效果显著降低；增加其他原料组分，药物组合物%20的技术效果也未有明显的提高，并且还有整体技术效果降低的情况出现。
在本公开的第四个方面，提供所述抗流感病毒的药物组合物的制备方法，%20该制备方法包括以下步骤：
将一定重量比例的各原料药混合，采用乙醇溶液或水提取数次，获得的提%20取液即为药物组合物。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述乙醇溶液的体积分数为90～95％，%20能够有效提取抗流感病毒的活性成分。
在本公开的第五个方面，提供一种抗流感病毒的药物制剂，是由所述的药%20物组合物和药学上可接受的辅料制备而成。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述药物制剂可以制成各种药物剂型，%20如汤剂、丸剂、胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂或口服液等。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述药物制剂中药学上可接受的辅料%20包括但不限于：稀释剂包括但不限于，山梨醇、甘露醇、淀粉、乳糖、粉状或%20微晶状纤维素、二钙磷酸盐，三钙磷酸盐、糖等；填充剂：羧甲基纤维素钠、%20羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、胶化淀粉等；%20崩解剂：干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代%20羟丙基纤维素等；润滑剂：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠或微粉硅胶；其它辅料%20包括结合剂、流动剂、复合形成剂、塑化剂、着色剂、甜味剂、黏度增强剂、%20保存剂或抗氧化剂中的一种或多种。
与本发明人知晓的相关技术相比，本公开其中的一个技术方案具有如下有%20益效果：
本公开的药物组合物具有优异的抗H1N1和/或抗H3N2流感病毒的效果、%20无毒副作用，相比于单一的药材，其具有更加优异的抗H3N2流感病毒的效果。%20进一步的，通过后续的流感动物模型验证，本公开的药物组合物对流感全身症%20状具有明显缓解作用，主要症状包括发汗、退热、止痛等。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本公开提供进一步的说明。%20除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属技术领域的%20普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图%20限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确%20指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说%20明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们%20的组合。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本公开的技术方案，以下将%20结合具体的实施例详细说明本公开的技术方案。
实施例1地肤子果实和地上部分提取物的制备
(1)水提取物
取地肤子干燥成熟果实50g，加15倍量水，煎煮40分钟，4层纱布过滤，%20残渣上再加10倍量水，煎煮20分钟，合并滤液，在水浴锅上放至膏状，获得%2012g膏状地肤子水提取物。
取干燥地肤子地上部分(去除果实)50g，加16倍量水，煎煮40分钟，4%20层纱布过滤，残渣上再加10倍量水，煎煮20分钟，合并滤液，在水浴锅上放%20至膏状，获得11g膏状地肤子地上部分水提取物。
(2)乙醇提取物
取地肤子干燥成熟果实50g，加15倍量95v/v％乙醇溶液，煎煮30分钟，%204层纱布过滤，残渣上再加10倍量95v/v％乙醇溶液，煎煮15分钟，合并滤%20液，在水浴锅上放至膏状，3.9g膏状地肤子地上部分乙醇提取物。
取干燥地肤子地上部分50g，加14倍量95v/v％乙醇溶液，煎煮30分钟，%204层纱布过滤，残渣上再加10倍量95v/v％乙醇溶液，煎煮15分钟，合并滤%20液，在水浴锅上放至膏状，3.7g膏状地肤子地上部分乙醇提取物。
实施例2复方提取物的制备
干燥的旋复花的花，地肤子的干燥果实和沙蓬地上部分及种子，按照2:3:5%20的质量比例混合，取混合药材50g，粉碎均匀，加14倍量水，煎煮30分钟，4%20层纱布过滤，残渣上再加7倍量水，煎煮15分钟，合并滤液，形成膏状，即%20复方制剂水提取物。
干燥的旋复花的花，地肤子的干燥果实和沙蓬地上部分及种子，按照2:3:5%20的质量比例混合，粉碎均匀，用15倍质量体积分数95％乙醇溶液进行第一%20次回流4小时，剩余药渣用12倍质量体积分数95％乙醇溶液进行第二次回%20流4小时，再将所剩药渣用10倍质量体积分数95％乙醇溶液进行第三次回%20流4小时，提取液减压浓缩，将其混悬于水中，依次用石油醚、二氯甲烷萃取，%20分别得到石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物和乙醇萃取物，即复方制剂石油醚提%20取物、复方制剂二氯甲烷提取物和复方制剂乙醇提取物。
实施例3药物的抗流感病毒
旋复花的花和地上部分提取物的制备
(1)水提取物
取干燥旋复花的花50g，加12倍质量水，煎煮30分钟，4层纱布过滤，%20残渣上再加8倍量水，煎煮15分钟，合并滤液，形成膏状。在水浴锅上形成%20膏状，先在大的蒸发皿，然后再倒在小的蒸发皿里，最后形成膏状，获得9.3g%20旋覆花水提取物。
取干燥旋复花地上部分(去除花)50g，加15倍质量水，煎煮40分钟，4%20层纱布过滤，残渣上再加10倍量水，煎煮20分钟，合并滤液，形成膏状，获%20得8.7g旋覆花地上部分水提取物。
(2)乙醇提取物
取干燥旋复花的花50g，加14倍质量95v/v％乙醇溶液，煎煮20分钟，4%20层纱布过滤，残渣上再加6倍质量95v/v％乙醇溶液，煎煮15分钟，合并滤液，%20形成膏状，获得2.6g旋覆花醇提取物。
取干燥旋复花地上部分(去除花)50g，加12倍质量95v/v％乙醇溶液，%20煎煮30分钟，4层纱布过滤，残渣上再加10倍质量95v/v％乙醇溶液，煎煮%2015分钟，合并滤液，形成膏状，获得1.5g旋覆花地上部分醇提取物。
细胞病变效应抑制率
以3×104个/孔接种MDCK细胞于96孔细胞板中(每孔100μL)，37℃%205％%20CO2孵育24h，当细胞密度达到80％时，进行后续试验；
1)将细胞培养上清液吸弃，加入50μL梯度浓度的药物病毒培养基处理细%20胞，采用实施例1、2和3的旋覆花水提取物、旋覆花醇提取物、旋覆花地上%20部分水提取物、旋覆花地上部分醇提取物、地肤子水提取物、地肤子醇提取物、%20地肤子地上部分水提取物、地肤子地上部分醇提取物、复方制剂水提取物、复%20方制剂醇提取物、复方制剂二氯甲烷提取物、复方制剂石油醚提取物，使其终%20浓度分别如下表1～14。
2)同时，药物组加入50μL流感病毒感染。分别为H1N1型流感病毒%20(A/17/California/2009/38株，后简称H1N1(California))(MOI＝0.005)，H1N1%20型流感病毒(A/New-York/61/2015-CDC-LV16A株，后简称H1N1(New-York))%20(MOI＝0.005)，H3N2型流感病毒(A/17/HongKong/2014/8296株，后简称H3N2%20(HongKong))(MOI＝0.04)病毒培养基；并设置未加入病毒的细胞对照组及%20未加药物的病毒对照组，每个浓度设置3个复孔，放入35℃含5％CO2的培养%20箱感染1h，每间隔半小时晃动细胞板一次；
3)1h后，每孔用100μL无菌PBS缓冲液清洗一遍，再加入药物终浓度相%20应的病毒培养基；
4)在给药的48h后，向每孔加入CellTiter-
5)根据荧光信号，计算各药物浓度下细胞病变效应抑制率＝[(感染并给药组 荧光值-感染对照组荧光值)/细胞对照组荧光值]×100％。
抗流感实验结果如表1～8所示：旋复花水提取物、旋复花醇提取物、旋复 花地上部分水提取物、旋复花地上部分醇提取物对甲型H1N1(California)和 H1N1(New-York)流感病毒感染引起的细胞病变效应具有较强的抑制作用， 但是对甲型H3N2(HongKong)流感病毒感染引起的细胞病变效应的抑制性较 弱。同样地，地肤子水提取物、地肤子醇提取物、地肤子地上部分水提取物、 地肤子地上部分醇提取物对H1N1(California)和H1N1(New-York)流感病 毒感染引起的细胞病变效应具有较强的抑制作用，但是对甲型H3N2(HongKong)流感病毒感染引起的细胞病变效应的抑制性较弱。
表1旋复花水提取物对H1N1(California)、H1N1(New-York)、H3N2 (HongKong)流感病毒感染引起的细胞病变效应的抑制作用
表2旋复花醇提取物对H1N1(California)、H1N1(New-York)、H3N2 (HongKong)流感病毒感染引起的细胞病变效应的抑制作用
表3旋复花地上部分水提取物对H1N1(California)、H1N1(New-York)、H3N2(HongKong)流感病毒感染引起的细胞病变效应的抑制作用
表4旋复花地上部分醇提取物对H1N1(California)、H1N1(New-York)、H3N2(HongKong)流感病毒感染引起的细胞病变效应的抑制作用
表5地肤子水提取物对H1N1(California)、H1N1(New-York)、H3N2 (HongKong)流感病毒感染引起的细胞病变效应的抑制作用
表6地肤子醇提取物对H1N1(California)、H1N1(New-York)、H3N2 (HongKong)流感病毒感染引起的细胞病变效应的抑制作用
表7地肤子地上部分水提取物对H1N1(California)、H1N1(New-York)、H3N2(HongKong)流感病毒感染引起的细胞病变效应的抑制作用
表8地肤子地上部分醇提取物对H1N1(California)、H1N1(New-York)、H3N2(HongKong)流感病毒感染引起的细胞病变效应的抑制作用
抗流感实验结果如表9～14所示：复方制剂水提取物和复方制剂醇提取物 具有优异的抗H1N1(California)、抗H1N1(Nork York)和抗H3N2(Hong Kong) 效果；而复方制剂二氯甲烷提取物、复方制剂石油醚提取物对H1N1 (California)、H1N1(Nork York)和H3N2(Hong Kong)抗性较弱。
表9复方制剂水提取物对H1N1(California)流感病毒感染引起的细胞病变效 应的抑制作用
表10复方制剂水提取物对H1N1(New-York)流感病毒感染引起的细胞病变 效应的抑制作用
表11复方制剂水提取物对H3N2(HongKong)流感病毒感染引起的细胞病变 效应的抑制作用
表12复方制剂醇提取物对H1N1(California)流感病毒感染引起的细胞病变 效应的抑制作用
表13复方制剂醇提取物对H1N1(New-York)流感病毒感染引起的细胞病变 效应的抑制作用
表14复方制剂醇提取物对H3N2(HongKong)流感病毒感染引起的细胞病变 效应的抑制作用
实施例4药物抑制流感病毒核酸复制
1)以2×105个/孔接种MDCK细胞于24孔细胞板中(每孔500μL培养液)， 37℃ 5％CO2孵育24h，当细胞密度达到80％时，进行后续试验；
2)吸弃上清，加入250μL含药物的病毒培养基，使药物终浓度分别为： 旋复花水提取物：200μg/mL；旋复花地上部分水提取物：100μg/mL；旋复花 地上部分醇提取物：100μg/mL；地肤子地上部分水提取物：50μg/mL；地肤 子地上部分醇提取物：200μg/mL；复方制剂水提取物：100μg/mL；复方制剂 醇提取物：100μg/mL；
3)同时，给药组加入含250μL H1N1(California)(MOI＝0.005)，H1N1 (New-York)(MOI＝0.005)，H3N2(HongKong)(MOI＝0.04)病毒培养基； 并设置未感染病毒的对照组及未用药物处理的病毒对照度，不同药物设置3个 平行对照，放入35℃含5％CO2的培养箱中感染1h，每间隔半小时晃动细胞 板一次；
4)1h后，每孔用100μL无菌PBS缓冲液清洗一遍，再加入含药物(终浓 度同上)的培养液500μL；12h后，弃上清收取细胞；
5)按照说明书使用病毒检测用RNA提取试剂盒(天根)提取病毒RNA；
6)按照说明书使用One Step
核酸实验结果如表15～17所示：旋复花水提取物、旋复花醇提取物、旋复 花地上水提取物、旋复花地上醇提取物、地肤子地上水提取物、地肤子地上醇 提取物抗H1N1(California)，而对H1N1(Nork York)和H3N2(Hong Kong) 的抗性较弱。复方制剂水提取物和复方制剂醇提取物抗H1N1(California)、 抗H1N1(Nork York)、抗H3N2(Hong Kong)较强。
表15单味药提取物对H1N1(California)流感病毒感染细胞中病毒基因组RNA 复制的抑制作用
表16复方制剂水提取物对H1N1(California)、H1N1(New-York)、H3N2 (HongKong)流感病毒感染细胞中病毒基因组RNA复制的抑制作用
表17复方制剂醇提取物对H1N1(California)、H1N1(New-York)、H3N2 (HongKong)流感病毒感染细胞中病毒基因组RNA复制的抑制作用
对比例1
本发明人将实施例2中的复方制剂的沙蓬替换成栀子，进行抗流感病毒试 验，发现其对H3N2的抗性较弱，与实施例2的复方制剂水提取物或醇提取物 抗H3N2的效果差异显著。
本发明人还进行了其他药性相近的替换试验，其抗H3N2的效果均较弱。
对比例2
在实施例2复方制剂的基础上，加入一定量的草乌叶、蒙古黄芪、沙棘和 金莲花，发现相同的药物浓度，与实施例2的复方制剂水提取物或醇提取物抗 H1N1和抗H3N2的效果差异显著，其抗H1N1和抗H3N2均较弱。
对比例3
将实施例2中的干燥的旋复花的花、地肤子的干燥果实和沙蓬地上部分及 种子，按照4:2:4或1:1:1的质量比例混合，制备得到的复方制剂，进行抗流感 病毒试验，其抗H1N1和抗H3N2均较弱，与实施例2的复方制剂水提取物或 醇提取物抗H1N1和抗H3N2的效果差异显著。
上述实施例为本公开较佳的实施方式，但本公开的实施方式并不受上述实 施例的限制，其他的任何未背离本公开的精神实质与原理下所作的改变、修饰、 替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本公开的保护范围之内。
