一种提高断奶仔猪免疫力的中药制剂及制备方法
技术领域
本发明涉及兽用中药制剂技术领域，更具体的说是涉及一种提高断奶仔猪免疫力的中药制剂及制备方法。
背景技术
随着规模化猪业的发展，仔猪早期断奶技术成为了提高生产效率的主要手段。由于仔猪消化系统发育不完善、自身免疫系统发育不健全、正常的肠道微生态系统尚未建立，早期断奶带来的心理、环境、营养及免疫等应激反应，易诱发“仔猪早期断奶综合征”，主要表现为仔猪消化功能紊乱、免疫功能低下、肠道微生态失调进而导致腹泻、生长停滞甚至死亡，给养猪业带来巨大的经济损失。以前主要通过在饲料中添加促生长类抗生素预防仔猪腹泻，但随着限抗、禁抗的政策实施，寻找安全、新型的抗生素类饲料添加剂替代品的研究，已在全球引起了广泛的关注和高度重视。中草药制剂具有安全、无残留、不易产生抗药性等独特优势，越来越受到人们青睐，因此研究新型中草药制剂增强断奶仔猪免疫功能，缓解断奶应激，提高养殖效率，成为亟需解决的问题。
中草药具有营养和保健的双重功能，复方中草药是经过科学组方配伍制成，多数以天然植物为原料。但是，现有技术中的中草药组方多注重药效，而不注重口感，由于中草药独特的气味会影响仔猪进食，达不到提高仔猪免疫力的目的。如专利CN103549222B公开了一种抗仔猪腹泻的复合饲料添加剂及其制备方法，该复合饲料添加剂是由紫锥菊提取物、姜黄素、盐酸小檗碱、丁酸钠、蛋氨酸锌、乌梅、儿茶制备而成，通过提高动物免疫力、降低肠道pH值、改善肠黏膜的吸收状况来抑制有害微生物繁殖，从而达到防腹泻、促生长、提高饲料效率和改善仔猪皮毛感观等方面效果。但是，该添加剂中姜黄素不溶于水，导致仔猪吃后难以吸收，盐酸小檗碱口服吸收差，导致该添加剂无法发挥最大的药效。因此，寻求口感好、安全、高效、无残留的绿色饲料添加剂已成为当务之急。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种兼有药性和营养性的双重作用的中药制剂，既可防病，又可提高生产性能。断奶仔猪由于消化系统尚未发育完全，而又处于快速成长阶段，如果能在这个阶段饲养的好，最大可能避免应激性疾病症状的出现，能够提高仔猪的生产性能，为以后生长打下坚实基础。
为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种提高断奶仔猪免疫力的中药制剂，包括以下重量份数的原料：
优选的，一种提高断奶仔猪免疫力的中药制剂，包括以下重量份数的原料：
优选的，所述茯苓提取物、鱼腥草提取物、白头翁提取物、白术提取物、麦冬提取物、党参提取物、当归提取物、姜黄提取物的制备方法为：将原料清洗干净，放入提取罐中，加入9-10倍量体积分数为75-85%的乙醇，回流提取1-3次，每次提取1-3h，过滤，合并提取液;将提取液减压回收乙醇，并浓缩至密度为1.20-1.25,得提取物浸膏;提取物浸膏经喷雾干燥机干燥即可。
其中姜黄提取物的主要成分为姜黄酮，姜黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基;也可以改善血液循环，可以降低胆固醇，温胃散寒、消食止痛。
优选的，所述喷雾干燥机的进风温度为160-170℃，出风温度为75-85℃，进料速度为7-10ml/min，进料温度为45-50℃。
本发明的另一目的是提供一种提高断奶仔猪免疫力的中药制剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将茯苓提取物、鱼腥草提取物、白头翁提取物、白术提取物、麦冬提取物、党参提取物、当归提取物、姜黄提取物经过50-60目筛，备用;
2)将步骤1)筛选的各提取物干粉加入混合机中混合10-15min，得到混合物;
3)将称取的葡萄糖经过75-95目筛，备用;
4)将山楂粉碎成颗粒，加水浸泡1-3h，加入原料8-12倍量水煎煮2-3次，过滤，合并煎煮液;将煎煮液减压浓缩至密度为1.20-1.25,喷雾干燥后得混合提取物;
5)将蒙脱石研磨成粉状，与步骤2)得到的混合物、步骤3)得到的葡萄糖和步骤4)得到的混合提取物混合，搅拌20-30min，即得中药制剂。
优选的，所述中药制剂为散剂。
本发明将制备的中药制剂应用于断奶仔猪的饲料中，按饲料重量的0.3%-0.5%添加。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明有益效果如下：
1、本发明制备的中药制剂作为饲料添加剂，可提高仔猪生产性能、增强仔猪免疫力，具有明显的抗应激促生长作用。
2、本发明制备的中药制剂添加的各中草药提取物与葡萄糖、山楂等相复配，易溶于水，易吸收，适口性好，符合断奶仔猪的口味。
3、本发明将茯苓提取物、鱼腥草提取物、白头翁提取物、白术提取物、麦冬提取物、党参提取物、当归提取物、姜黄提取物等中草药配伍在一起，这几种药具有显著的协同增效功效，相比于其它的药物组合，这几种药物的组合能够更有效的提高断奶仔猪的生长性能，并具有最佳的抗腹泻效果，平均日增重显著提高，料重比、腹泻率以及死亡率均显著降低;本发明制备的中药制剂可显著提升断奶仔猪的机体免疫力，有效对抗断奶应激对仔猪造成的伤害，具有明显的抗炎、抗应激、促生长作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为中药制剂对仔猪生产性能的影响;
图2附图为中药制剂对仔猪血清激素水平的影响;
图3附图为中药制剂对仔猪血清免疫球蛋白的的影响;
图4附图为中药制剂对仔猪肠黏膜上皮内淋巴细胞、杯状细胞数量的影响(个/100个柱状细胞);
图5附图为中药制剂对仔猪肠黏膜肥大细胞数量的影响(个/肠断面);
图6附图为中药制剂对LPS应激断奶仔猪外周血中细胞因子的影响(pg/ml)。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1-3、对比例
其中，表1中的实施例1中的茯苓提取物、鱼腥草提取物、白头翁提取物、白术提取物、麦冬提取物、党参提取物、当归提取物、姜黄提取物的制备方法为：将原料清洗干净，放入提取罐中，加入9倍量体积分数为75%的乙醇，回流提取3次，每次提取1h，过滤，合并提取液;将提取液减压回收乙醇，并浓缩至密度为1.25,得提取物浸膏;提取物浸膏经喷雾干燥机干燥(喷雾干燥机的进风温度为160℃，出风温度为75℃，进料速度为7ml/min，进料温度为45℃)即可。
实施例2、实施例3中的茯苓提取物、鱼腥草提取物、白头翁提取物、白术提取物、麦冬提取物、党参提取物、当归提取物、姜黄提取物的制备方法为：将原料清洗干净，放入提取罐中，加入10倍量体积分数为85%的乙醇，回流提取12次，每次提取2h，过滤，合并提取液;将提取液减压回收乙醇，并浓缩至密度为1.20,得提取物浸膏;提取物浸膏经喷雾干燥机干燥(喷雾干燥机的进风温度为170℃，出风温度为85℃，进料速度为10ml/min，进料温度为50℃)即可。
对比例中中草药提取物的制备与实施例3相同。
实施例4
实施例1的中药制剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将茯苓提取物、鱼腥草提取物、白头翁提取物、白术提取物、麦冬提取物、党参提取物、当归提取物、姜黄提取物经过50目筛，备用;
2)将步骤1)筛选的各提取物干粉加入混合机中混合10min，得到混合物;
3)将称取的葡萄糖经过75目筛，备用;
4)将山楂粉碎成颗粒，加水浸泡1h，加入原料8倍量水煎煮2次，过滤，合并煎煮液;将煎煮液减压浓缩至密度为1.20,喷雾干燥后得混合提取物;
5)将蒙脱石研磨成粉状，与步骤2)得到的混合物、步骤3)得到的葡萄糖和步骤4)得到的混合提取物混合，搅拌20min，即得中药制剂。
实施例5
实施例2的中药制剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将茯苓提取物、鱼腥草提取物、白头翁提取物、白术提取物、麦冬提取物、党参提取物、当归提取物、姜黄提取物经过60目筛，备用;
2)将步骤1)筛选的各提取物干粉加入混合机中混合15min，得到混合物;
3)将称取的葡萄糖经过95目筛，备用;
4)将山楂粉碎成颗粒，加水浸泡3h，加入原料12倍量水煎煮3次，过滤，合并煎煮液;将煎煮液减压浓缩至密度为1.25,喷雾干燥后得混合提取物;
5)将蒙脱石研磨成粉状，与步骤2)得到的混合物、步骤3)得到的葡萄糖和步骤4)得到的混合提取物混合，搅拌30min，即得中药制剂。
实施例6
实施例3的中药制剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将茯苓提取物、鱼腥草提取物、白头翁提取物、白术提取物、麦冬提取物、党参提取物、当归提取物、姜黄提取物经过55目筛，备用;
2)将步骤1)筛选的各提取物干粉加入混合机中混合12min，得到混合物;
3)将称取的葡萄糖经过85目筛，备用;
4)将山楂粉碎成颗粒，加水浸泡2h，加入原料10倍量水煎煮2次，过滤，合并煎煮液;将煎煮液减压浓缩至密度为1.20,喷雾干燥后得混合提取物;
5)将蒙脱石研磨成粉状，与步骤2)得到的混合物、步骤3)得到的葡萄糖和步骤4)得到的混合提取物混合，搅拌25min，即得中药制剂。
实施例7
对比例的中药制剂制备方法与实施例6相同。
实施例8
试验动物为相同饲养条件的120头28日龄(杜×长×大)三元杂交仔猪，初始体重相接近，组间差异不显著。随机分为4组，空白对照组1(28日龄不断奶，饲喂基础饲粮)，空白对照组II(28日龄断奶，饲喂基础饲粮)，实施例3组(28日龄断奶，饲喂基础饲粮+0.3%实施例3制得的中药制剂)，对比例组(28日龄断奶，饲喂基础饲粮+0.3%对比例制得的中药制剂)。试验期为14d，于2015年7月27日-8月9日在山西太原某猪场进行。
饲养管理：猪舍、饲养条件、卫生环境、饲料品质及其他饲养管理等均相同，试验猪常规免疫，自由采食和饮水。
数据处理：死亡率用%表示;其余试验数据采用SPSSl7.0统计软件中的ANOVA程序进行方差分析和邓肯氏(Duncan)多重比较，结果以均值±标准差表示。
1、生长性能的指标测定
根据仔猪试验始末的空腹体重、全期给料量和剩料量，计算平均日增重、平均日采食量和料重比;根据腹泻头数和腹泻持续天数，计算腹泻频率，腹泻频率(%)=腹泻头次总数/(试验猪头数*试验天数)*100%，每头仔猪腹泻1d为1个腹泻头次;根据仔猪死亡头数，计算死亡率，死亡率=死亡头数/饲养总数*100%。结果见表1和说明书附图图1。
表1中药制剂对仔猪生产性能的影响
注：同行肩标相邻字母表示差异显著(P<0.05)，相间字母表示差异极显著(P<0.01)，有相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
由图1和表1可知，实施例3组的平均日采食量和平均日增重极显著高于空白对照组II(P<0.01)，显著高于对比例组(P<0.05)，与空白对照组1差异不显著(P>0.05);实施例3组的料重比极显著低于空白对照组II(P<0.01)，显著低于空白对照组1和对比例组(P<0.05);实施例3组的腹泻率极显著低于空白对照组II和对比例组(P<0.01)，显著低于空白对照组1(P<0.05)。实施例3组的死亡率极显著低于空白对照组II(P<0.01)，显著低于对比例组(P<0.05)。
试验结果表明：饲粮中添加实施例3组制得的中药制剂可显著提高断奶仔猪的平均日增重和算平均日采食量，显著降低料重比、腹泻率和死亡率，能有效对抗断奶应激对仔猪造成的伤害。
2、血样采集与血清制备
试验结束时，从各组随机选取5头仔猪，空腹清晨称重后，从前腔静脉采血5mL于离心管中，室温下放置20min，以3000r/min离心10min，吸取血清，置于-20℃冰箱保存备用。
3、血清激素水平的指标测定
血清皮质醇、胰岛素生长因子-1、生长激素、三碘甲状腺素、四碘甲状腺素和胃泌素含量采用放射免疫分析法测定。结果见说明书附图图2和表2。
表2中药制剂对仔猪血清激素水平的影响
注：同行肩标相邻字母表示差异显著(P<0.05)，相间字母表示差异极显著(P<0.01)，有相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
皮质醇水平的高低反映机体遭受创伤程度的强弱，是判定动物遭受应激程度的一个敏感而有效的指标;研究表明，处于应激状态下的动物，其生长激素、甲状腺素等的合成与分泌减少。生长激素是调控整个机体生长的最重要的激素之一，通过与受体结合诱导肝细胞产生胰岛素生长因子-1，其直接作用于体内的多种组织，促进蛋白质的合成，促进细胞增殖，进而促进肌肉、内脏和骨骼的生长;三碘甲状腺素、四碘甲状腺素能提高基础代谢率，增强糖原、蛋白、脂肪的分解，促进动物生长;胃泌素具有促进胃肠道上皮增生，增加胃蠕动、促进胃酸、胃蛋白酶原分泌的作用，还能促进胰脏、小肠和胆囊的分泌活动等。
由图2和表2可知，实施例3组的皮质醇含量极显著低于空白对照组II(P<0.01)，显著低于对比例组(P<0.05)，与空白对照组1差异不显著(P>0.05);实施例3组的生长激素、胰岛素生长因子-1、三碘甲状腺素、四碘甲状腺素和胃泌素含量极显著高于空白对照组II(P<0.01)，显著高于对比例组(P<0.05)，与空白对照组1差异不显著(P>0.05)。
试验结果表明：饲粮中添加实施例3组制得的中药制剂具有明显的抗应激促生长作用。中药制剂通过降低机体内源性皮质醇的分泌而减轻应激对仔猪生长的不利影响;通过提高生长激素、胰岛素生长因子-1、三碘甲状腺素、四碘甲状腺素水平发挥作用，从而促进仔猪生长;通过提高胃泌素的分泌，促进胃肠道上皮增生、胃酸和胃蛋白酶原分泌等，进而促进消化系统的发育。4、血清免疫球蛋白的指标测定
血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白M(IgM)的含量用ELISA方法进行测定。结果见说明书附图图3和表3。
表3中药制剂对仔猪血清免疫球蛋白的的影响(g/L)
注：同行肩标相邻字母表示差异显著(P<0.05)，相间字母表示差异极显著(P<0.01)，有相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
免疫球蛋白的主要作用是与抗原起免疫反应，生成抗原-抗体复合物，使病原体失去致病作用。因此血清中维持较高水平的免疫球蛋白是保证仔猪健康和平稳度过断奶关的重要基础。
由图3和表3可知，实施例3组的免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M含量极显著高于空白对照组II(P<0.01)，显著高于对比例组(P<0.05)，与空白对照组1差异不显著(P>0.05)。试验结果表明：饲粮中添加实施例3组制得的中药制剂能够明显提高断奶应激仔猪的体液免疫功能，在一定程度上增强断奶仔猪免疫力。
5、肠黏膜免疫细胞的指标测定
试验结束时，每组随机抽取3头猪，麻醉(15%复方噻胺酮，0.1mL/kg体重)后，剖开腹腔，剪取十二指肠、空肠、回肠段各1cm的样品，制作病理切片(甲醛固定→脱水→包蜡→切片→染色)，分析肠黏膜免疫细胞的数量和分布。结果见说明书附图图4、图5和表4。
表4中药制剂对仔猪肠黏膜免疫细胞的影响
注：同行肩标相邻字母表示差异显著(P<0.05)，相间字母表示差异极显著(P<0.01)，有相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
肠黏膜是机体抵御外源物质以及微生物的重要屏障，上皮内淋巴细胞是黏膜免疫系统中最先接触抗原的免疫活性细胞，在肠道黏膜中起重要的免疫屏障作用;杯状细胞分泌粘液，保护肠黏膜，是构成肠道机械屏障的结构之一;肥大细胞是抗感染免疫的第一线细胞，且能通过所分泌的细胞因子参与获得性免疫，是重要的免疫活性细胞。
由图4、图5和表4可知，实施例3组十二指肠、空肠、回肠的上皮内淋巴细胞数量，与空白对照组1差异不显著(P>0.05)，极显著高于空白对照组II(P<0.01)，显著高于对比例组(P<0.05);实施例3组的杯状细胞数量，在十二指肠段、空肠段与空白对照组1差异不显著(P>0.05)，极显著高于空白对照组II(P<0.01)、显著高于对比例组(P<0.05);在回肠段与空白对照组1、对比例组差异不显著(P>0.05)，极显著高于空白对照组II(P<0.01);实施例3组的肥大细胞数量，在十二指肠段显著高于空白对照组I(P<0.05)，极显著高于空白对照组II、对比例组(P<0.01);在回肠段与显著高于空白对照组I、对比例组(P<0.05)，极显著高于空白对照组II(P<0.01);在回肠段显著高于空白对照组I(P<0.05),极显著高于空白对照组II、对比例组(P<0.01)。
试验结果表明：饲粮中添加实施例3组制得的中药制剂，能促进小肠上皮内淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞的增殖，提高肠道的免疫学屏障功能。
实施例9
1、试验设计：选用48头28日龄断奶的体重相近的“杜长大”三元杂交仔猪，随机分为4组进行试验，试验猪常规免疫，自由采食和饮水。试验期为14d，于2015年8月16日-8月29日在山西太原某猪场进行。
空白对照组：饲喂基础饲粮，35日龄腹腔注射100μg/kgBW的生理盐水;
实施例3组：饲喂基础饲粮+0.3%实施例3制得的中药制剂，35日龄腹腔注射100μg/kgBW的生理盐水;
内毒素(LPS)组：饲喂基础饲粮，35日龄腹腔注射100μg/kgBW的LPS;
复合试验组：饲喂基础饲粮+0.3%实施例3制得的中药制剂，35日龄腹腔注射100μg/kgBW的LPS。
2、血样采集和血清制备
试验开始第7天，LPS注射后3h，从各组随机选取6头仔猪，前腔静脉采血10mL于离心管中，室温下放置20min，以3000r/min离心10min，吸取血清，置于-20℃冰箱保存备用。
3、血清细胞因子的指标测定
血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量用ELISA法进行测定;试验数据采用SPSSl7.0统计软件中的ANOVA程序进行方差分析和邓肯氏(Duncan)多重比较，结果以均值±标准差表示。结果见说明书附图图6和表5。
表5中药制剂对LPS应激断奶仔猪外周血中细胞因子的影响pg/ml
注:同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，肩标不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)，肩标相同字母标注表示差异不显著(P>0.05)。
细胞因子是一种主要由单核细胞或巨噬细胞产生的重要细胞因子和多肽调节因分子，在免疫应答与免疫调节中发挥重要作用。IL-1β参与机体的炎症和免疫防御反应;白细胞介素-6是具有多种生物活性的细胞因子，可促进T细胞分化增殖，诱导B细胞成熟产生免疫球蛋白。在炎性或应激状态下，白细胞介素-6主要由免疫细胞分泌，并参与机体的免疫调节;肿瘤坏死因子-α主要是由活化的单核细胞或巨嗜细胞产生的一种能够杀伤和抑制肿瘤细胞作用的物质。既具有调节机体的免疫功能，能使某些肿瘤细胞坏死，又可以介导炎症过程、组织损伤、休克等病理生理反应。研究表明，在免疫应激期间，细胞因子，尤其是单核细胞和巨噬细胞产生的炎性细胞因子可进一步促进免疫细胞増殖和分化，从而提高机体的抵抗力。
由图6和表5可知，实施例3组的白细胞介素-1β极显著低于空白对照组(P<0.01)，内毒素组的白细胞介素-1β极显著高于空白对照组(P<0.01)，复合试验组的白细胞介素-1β极显著低于内毒素组(P<0.01)，极显著高于实施例3组(P<0.01);实施例3组的白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α与空白对照组差异不显著(P>0.05)，内毒素组的白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α极显著高于空白对照组(P<0.01)，复合试验组的白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α极显著低于内毒素组(P<0.01)，极显著高于实施例3组(P<0.01)。
试验结果表明：实施例3组制得的中药制剂，极显著降低了正常断奶仔猪血清白细胞介素-1β的含量(P<0.01)，内毒素极显著提高了断奶仔猪血清白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α的含量(P<0.01)，实施例3组制得的中药制剂极显著降低了肉毒素对断奶仔猪血清白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α含量的影响(P<0.01)。结果显示例3组制得的中药制剂有抗内毒素的作用，可能通过抑制LPS引起的白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α的高表达，调节白细胞介素-1β的水平，缓解炎症反应。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
