A-失碳-5α雄甾烷化合物类药物与抗癌药物的联合应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及通过联合用药治疗肿瘤疾病，特别涉及A-失碳-5α雄甾烷化合物(ACP)类化合物和抗肿瘤药物联合用药治疗肿瘤疾病。
背景技术
恶性肿瘤已逐渐取代心脑血管疾病成为全球头号杀手。第五届亚太癌症预防组织大会发表的《2010年癌症报告》警告说，今后20年世界癌症患者人数将呈快速上升趋势。从2008年至2030年，全球新增癌症患者人数将从每年的1240万增至2640万，其中亚太地区患者占全世界癌症患者总数的60％。
2007年全球有760万人死于恶性肿瘤。在发达国家，恶性肿瘤死亡率占其总死亡人数的21.6％。在中国，恶性肿瘤发病率上升尤其明显，每年发病人数约260万，死亡180万，在30年中死亡率增加了80％，已成为中国城市和农村居民的第一位死因。在我国，常发性恶性肿瘤以肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌为主。癌症的传统治疗有手术、放疗、化疗。目前使用的大多数抗肿瘤药物缺少选择性抑制肿瘤的作用，在抑制恶性肿瘤生长发育的同时，对机体的正常细胞，特别是增殖旺盛的骨髓细胞、消化道粘膜上皮细胞、生殖细胞等有明显的损伤作用，并对机体的重要器官：肝、肾、心、肺、神经系统等也都有一定的毒性作用。甚至有骨髓抑制、消化道反应、脱发、肝损害、心脏毒性、泌尿生殖系统毒性、致癌致畸等毒副作用等。因此，研究开发毒副反应小、疗效好的抗恶性肿瘤的药物是一直关注的热点问题。
近年来，随着细胞和分子生物学研究的不断深入，研发用于治疗恶性肿瘤的药物，尤其是筛选高效低毒的抗肿瘤药物。A-失碳-5α雄甾烷化合物(ACP)是2000年李瑞麟等人自主研发合成的全新化合物。
截止目前，本领域尚无关于ACP的联合用药研究。因此，本领域尚缺乏一种治疗效果好，能够显著提高ACP的肿瘤抑制效果的联合用药方案。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗效果好，能够显著提高其他抗肿瘤药物的肿瘤抑制效果的联合用药方案。
本发明第一方面是提供一种抗肿瘤药物组合物，所述组合物包含：
(A)治疗有效量的第一活性成分，所述的第一活性成分具有下式I所示的A-失碳-5α雄甾烷化合物；
式中，R1、R2各自独立地选自：H、取代或未取代的-C1-10烷基、取代或未取代的-C3-8环烷基、取代或未取代的苯环、取代或未取代的苯甲酰基、取代或未取代的-COCnH2n+1、取代或未取代的-COCrH2rCOOCmH2m++1、或-COCpH2pCOO-W；其中，n、p、r、m各自独立地为0～18的整数，W为H+、Na+、K+、NH4+、1/2Ca2+、1/2Mg2+、1/2(AlOH)2+、或1/2Zn2+，
R为选自下组的基团：取代或未取代的C1-4炔基、氰基；
所述取代是指具有一个或多个(如1-3个)以下取代基团：羟基、卤素、硝基、氨基、胺基、羧基；
和(B)治疗有效量的第二活性成分，所述的第二活性成分为第二抗肿瘤药物。
在另一优选例中，所述A-失碳-5α雄甾烷化合物选自下组：
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-二醇；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基双乙酸酯；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基双丙酸酯；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基-2β-单琥珀酸酯；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β--双羟基双琥珀酸酯；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基双丁酸酯；
2α，17α-双羟丙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-二醇；
2α，17α-双氰基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-二醇；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基双三氯乙酸酯；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基-2β-丙酸酯-17β琥珀酸酯；
2α，17α-双丙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-二醇；或
2α，17α-双丙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基双丙酸酯。
在另一优选例中，所述的药物组合物中，式I所示的化合物和第二抗肿瘤药物的质量比为1:10000至10000：1；较佳地为1:1000至1000：1。
在另一优选例中，所述的第二抗肿瘤药物选自下组：化学药物、生物制剂、或其组合。
在另一优选例中，所述的第二抗肿瘤药物选自下组：细胞毒类抗肿瘤药物、靶向抑制剂、抗体类药物、抗体-药物偶联物(ADC)、免疫检测点抑制剂或其组合。
在另一优选例中，所述的靶向抑制剂选自：索拉菲尼、舒尼替尼、拉帕替尼(lapatinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、阿西替尼(axitinib)、阿帕替尼(apatinib)、尼达尼布(nintedanib)、贝伐珠单抗、或其组合。
在另一优选例中，所述的靶向抑制剂选自下组：VEGF抑制剂、激酶抑制剂、EGFR抑制剂、Her2抑制剂、或其组合。
在另一优选例中，所述的靶向抑制剂选自VEGF抑制剂：索拉菲尼、舒尼替尼、贝伐珠单抗、或其组合。
在另一优选例中，所述的免疫检测点抑制剂包括PD-1单抗、PD-L1单抗、或其组合。
在另一优选例中，所述的细胞毒类抗肿瘤药物选自下组：生物碱类抗肿瘤药、抗代谢类抗肿瘤药、抗生素类抗肿瘤药、烷化剂类抗肿瘤药、铂剂类抗肿瘤药，或其组合。
在另一优选例中，所述的生物碱抗肿瘤药选自：紫杉醇、长春瑞滨、长春新碱、长春地辛、羟基喜树碱、多西他赛、伊立替康(CPT-11)。
另一优选例中，所述的抗代谢类抗肿瘤药选自：吉西他滨、阿糖胞苷、替加氟、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶(5-FU)、亚叶酸钙、巯基嘌呤、培美曲塞、喷司他丁、四氢叶酸钙(LV)。
另一优选例中，所述的抗生素类抗肿瘤药选自：阿霉素(多柔比星)、放线菌素-D、放线菌素-C、丝裂霉素-C、盐酸柔红霉素、盐酸表柔比星、盐酸佐柔比星、盐酸米托蒽醌、米托坦。
另一优选例中，所述的烷化剂类抗肿瘤药选自：环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、达卡巴嗪、福莫司汀、泼尼莫司汀、卡莫司汀、曲他胺、美法仑。
另一优选例中，所述的铂剂类抗肿瘤药选自：顺铂、卡铂、奥沙利铂(OXA)。
另一优选例中，所述的第二抗肿瘤药物为伊立替康(CPT-11)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、四氢叶酸钙(LV)、和贝伐珠单抗的组合。
在另一优选例中，所述的药物组合物还包括：(C)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的第二抗肿瘤药物选自下组：索拉菲尼、贝伐珠单抗、伊立替康(CPT-11)、吉西他滨、5-氟尿嘧啶(5-FU)、四氢叶酸钙(LV)、阿霉素(多柔比星)、环磷酰胺、奥沙利铂(OXA)，或其组合。
在另一优选例中，所述肿瘤疾病选自下组：胰腺癌、肝癌、肺癌、前列腺癌、肾癌、结肠腺癌、结直肠癌、黑色素瘤、食道癌、淋巴癌、胸腔癌、消化道癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、胆管癌、睾丸癌、血癌、中枢神经癌。
在另一优选例中，所述的肿瘤疾病为胰腺癌。
在另一优选例中，所述的肿瘤疾病为肝癌。
在另一优选例中，所述的肿瘤疾病为肺癌。
在另一优选例中，所述的肿瘤疾病为结肠腺癌。
本发明第二方面是提供一种活性成分的组合，所述的组合包括：
(A)治疗有效量的第一活性成分，所述的第一活性成分具有下式I所示的A-失碳-5α雄甾烷化合物；
式中，R1、R2各自独立地选自：H、取代或未取代的-C1-10烷基、取代或未取代的-C3-8环烷基、取代或未取代的苯环、取代或未取代的苯甲酰基、取代或未取代的-COCnH2n+1、取代或未取代的-COCrH2rCOOCmH2m++1、或-COCpH2pCOO-W；其中，n、p、r、m各自独立地为0～18的整数，W为H+、Na+、K+、NH4+、1/2Ca2+、1/2Mg2+、1/2(AlOH)2+、或1/2Zn2+，
R为选自下组的基团：取代或未取代的C1-4炔基、氰基；
所述取代是指具有一个或多个(如1-3个)以下取代基团：羟基、卤素、硝基、氨基、胺基、羧基；
和(B)治疗有效量的第二活性成分，所述的第二活性成分为第二抗肿瘤药物。
本发明第三方面是提供一种药盒，所述的药盒包含：(a)第一方面所述的药物组合物，或如第二方面所述的活性成分组合；(b)容器；和(c)使用说明书或标签，所述使用说明书或标签显示将上述药物组合对对象进行给药用于治疗癌症。
在另一优选例中，所述的式I化合物和所述的第二抗肿瘤药物可以同时、分开或顺序给药。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，发现现有的抗癌药物ACP及其类似物可以与多种抗癌药物组合使用，并显示出协同用药效果。这一类的抗癌药物组合具有低毒性和优异的治疗效果，适合用于临床治疗。基于上述发现，发明人完成了本发明。
ACP类药物
本发明中，术语“ACP类药物”是指A-失碳-5α雄甾烷化合物，具有如下结构：
式中，R1、R2独立地选自：H、取代或未取代的-C1-10烷基、取代或未取代的-C3-8环烷基、取代或未取代的苯环、取代或未取代的苯甲酰基、取代或未取代的-COCnH2n+1、取代或未取代的-COCrH2rCOOCmH2m++1、或-COCpH2pCOO-W；其中，n、p、r、m各自独立地为0～18的整数，W为H+、Na+、K+、NH4+、1/2Ca2+、1/2Mg2+、1/2(AlOH)2+、或1/2Zn2+；
R为选自下组的基团：取代或未取代的C1-4炔基、氰基；
所述取代是指具有一个或多个(如1-3个)以下取代基团：羟基、卤素、硝基、氨基、胺基、羧基。
较佳地，A-失碳-5α雄甾烷化合物为：
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-二醇(Ia)；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基双乙酸酯(Ib)；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基双丙酸酯(Ic)；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基-2β-单琥珀酸酯(Id)；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双琥珀酸酯(Ie)；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双丁酸酯(If)；
2α，17α-双羟丙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-二醇(Ig)；
2α，17α-双氰基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-二醇(Ih)；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基双三氯乙酸酯(Ii)；
2α，17α-双乙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基-2β-丙酸酯-17β琥珀酸酯(Ij)；
2α，17α-双丙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-二醇(Ik)；或
2α，17α-双丙炔基-A-失碳-5α-雄甾烷-2β，17β-双羟基双丙酸酯(Il)。
组合物、药盒、活性成分组合和药物组合物
本发明所述组合物可以是药物组合物(药品)、食品或保健品，所述组合物包括：
(A)治疗有效量的ACP类作为第一活性成分；
(B)治疗有效量的第二种抗肿瘤药物作为第二活性成分；
并且所述第一活性成分与所述第二活性成分的质量比为1:10000至10000：1；较佳地为1:1000至1000：1。
在本发明的药物组合物中，第一活性成分的含量范围为0.01％至99.99％，以组合物的总重量计。优选为0.1％至99.9％，更优选为20％至99％。第二活性成分的含量范围为0.01％至99.99％，以组合物的总重量计。优选为1％至99％，更优选为1％至90％。
必要时，所述组合物还可以包括药学、食品学、保健品学上可接受的载体。如本文所用，术语“药学、食品学或保健品学上可接受的”的成分是指适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即有合理的效益/风险比的物质。如本文所用，术语“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。
本发明所述的含有第一活性成分、第二活性成分、或它们的衍生物、代谢物的药品、食品、保健品组合物，可以是适宜口服给药的各种剂型外，还可以是各种外用给药制剂或其它胃肠道外给药制剂。例如，本发明所述的外用给药制剂，还可以通过添加表面活性剂、透皮吸收促进剂、防腐剂、溶剂、抗氧剂、保湿剂、pH调节剂、着色剂、香料等辅料，进一步制备成(包括但不限于)：搽剂、酊剂、油剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、熨剂、贴膏、贴片、涂膜剂、膜剂、凝胶剂、巴布剂、穴位贴敷剂、喷雾剂、气雾剂、植入剂、乳剂等。对于癌症，优选的剂型包括：口服给药的各种剂型、植入剂、注射剂。
本发明的组合物所添加的辅料为制剂领域常用辅料，其种类、使用方法、来源为本领域技术人员所熟知。
本发明还提供了一种活性成分的组合，所述组合包括以下组分或由以下组分组合而成：
(A)第一活性成分，所述第一活性成分为ACP类化合物；
(B)第二活性成分，所述第二活性成分为抗肿瘤药物。
所述组合中，所述第一活性成分与所述第二活性成分的质量比为1:10000至10000：1。
本发明还提供了一种药盒，所述的药盒包括：
(1)A-失碳-5α雄甾烷化合物与第二抗肿瘤药物的药物组合物或活性成分组合；(2)容器；和(3)使用说明书或标签，所述使用说明书或标签显示将上述药物组合对对象进行给药用于治疗癌症。
本发明的组合物、活性成分组合、药物组合物、药盒、食品和保健品均可采用常规方法和设备进行制备。
组合物、活性成分组合、药物组合物、药盒的用途和给药方式
本发明提供了上述组合物、活性成分组合、药物组合物在制备抑制癌细胞的药物、保健品或食品，或用于制备抗癌的药物保健品或食品，或用于制备抗癌的药物中的应用。
本发明提供的组合物、药盒、活性成分组合以及药物组合物可对胰腺癌、肝癌、肺癌、前列腺癌、肾癌、结肠腺癌、结直肠癌、黑色素瘤、食道癌、淋巴癌、胸腔癌、消化道癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、胆管癌、睾丸癌、血癌、中枢神经癌等癌细胞的抑制产生协同作用。不限于理论，本发明所述的组合物、药盒、活性成分组合以及药物组合物抑制癌细胞生长和转移作用的机制很可能是多层次和多靶点的。它对癌细胞的抑制可以通过几种不同的机理和途径完成。
在使用本发明的组合物、活性成分组合、药物组合物以及药盒之前、同时或之后，可配合使用其他治疗癌症的活性物质、实施针对癌症的外科手术或给予针对癌症的放射性治疗，或与基因治疗联合使用，或与生物调节剂联合使用。
在联用本发明的药盒中的第一制剂(含有第一活性成分)和第二制剂(含有第二活性成分)时，第一制剂和第二制剂可以同时给药、分别给药或顺序给药。第一制剂活性成分的安全有效的日使用剂量一般为0.1mg-2000mg，较佳地为1mg-500mg，更佳地为1mg-300mg，第二制剂的活性成分安全有效的日使用剂量一般为0.01mg-1500mg，较佳地为为0.1-1500mg，更佳地，为1mg-1500mg，更佳地，为1mg-500mg)给药方式包括：联合用药时，第一制剂可以口服给药，还可以是外用给药或其他胃肠道外给药，第二制剂可以口服给药，还可以是外用给药或其他胃肠道外给药。
联合用药过程中，药物的相互作用根据药物共同使用时的效应分为加合作用、协同作用、拮抗作用，协同作用是指联合用药的药物共同使用时的效应要比单独使用大很多倍，加和作用是指联合用药的药物共同使用时的效应要与单独使用相当，拮抗作用是指联合用药的药物共同使用时的效应要比单独使用小。在本发明中，首次发现第一制剂和第二制剂合用具有协同作用。
本发明还提供了一种癌症的治疗方法，所述的方法包括步骤：给需要的对象，施用本发明的组合物、活性成分组合、药物组合物以及药盒。其中日施用活性成分量为1mg至10g。所述的对象为哺乳动物，优选地为人。
在抑制癌细胞生长和治疗癌症时，本发明的施用方式包括先后依次施用第一活性成分和第二活性成分，或同时施用第一活性成分和第二活性成分。
在施用本发明的组合物、活性成分组合、药物组合物时，是将安全有效量的本发明组合物、活性成分组合、药物组合物施用于哺乳动物，其中，第一活性成分的安全有效日使用剂量通常至少约0.1mg，而且在大多数情况下不超过约2000mg。较佳地，该剂量是1mg-500mg；第二活性成分的安全有效量通常至少约0.01mg，而且在大多数情况下不超过1500mg。较佳地，该剂量范围是0.1mg至1500mg。(其中，第一活性成分的安全有效量通常不超过约2000毫克/千克体重。较佳地，该剂量是约100微克/千克体重至约1000毫克/千克体重；第二活性成分的安全有效量通常不超过约2000毫克/千克体重。较佳地，该剂量是约10微克/千克体重至约1000毫克/千克体重。)当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是在熟练医师技能范围之内的。当先后依次施用第一活性成分和第二活性成分时，施用的间隔时间无特别要求。本发明的组合物、活性成分组合、药物组合物以及药盒中的第一制剂和第二制剂分别以相同或不同的途径同时或相继给药，其中包括但并不限于：口服给药、注射给药、瘤内给药、植入给药、腔内给药、肛门给药、透皮给药、内外敷；
优选的注射给药包括：静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腔内注射。
药效评价指标：
Ki-67是一种存在于细胞核中的蛋白，命名Ki是因为发现它的城市是德国基尔(Kiel)，67这个数字来源于实验编号。Ki-67在细胞增殖的过程中很活跃，但在增殖停止的时候就消失不见，所以可以作为细胞增殖状态的标志，来判断多种恶性肿瘤的恶性程度。
Ki-67阳性表达率越高，就说明肿瘤细胞增殖活性越强，恶性程度就越高，患者的复发转移风险也就越高。几乎所有的癌症，在做病理的时候都会检查Ki67，包括肺癌、乳腺癌、前列腺癌、宫颈癌、结直肠癌、膀胱癌等。Ki67数值越高越不好，但任何事情都有两面性，Ki67阳性率高的肿瘤，往往对化疗更加敏感，化疗效果会更好。
本发明在具体的动物实验中，应用多个将来自于病人的肿瘤组织植入高度免疫缺陷模型NCG(NOD-Prkdcem26Il2rgem26Nju)建立的SuperPDTX小鼠模型，ACP联合吉西他滨、奥沙利铂、索拉菲尼的肿瘤的抑制作用优于单独给药，表现出协同作用。在一例结肠腺癌肝转移患者的治疗中，FOLFIRI方法与贝伐珠单抗，同时伴行口服ACP治疗，治疗前后肝部转移灶明显缩小。ACP联合小剂量的环磷酰胺或阿霉素对人体肿瘤肝癌QGY-7703、胰腺癌PANC-1、肺癌A549的生长抑制有相加作用，具有一定合并用药效应。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另有说明，本说明书中使用的全部专业术语和科学用语的含义均与本发明所属技术领域的技术人员一般理解的含义相同。
实施例1 ACP联合吉西他滨治疗胰腺癌的SuperPDTX小鼠模型药效实验
1.实验设计
药效学实验设计如表1
表1.
2.材料
小鼠：NCG(NOD-Prkdcem26Il2rgem26Nju)，南京大学生物医药研究院
胰腺癌组织块来源于胰腺癌患者的样品接种小鼠后P2代冻存样品，此实验所用样品为传代后的P3代样品。
3.实验方法
在受试小鼠体内接种胰腺癌样品，接种组织块大小为：1*1*4mm3，接种当天将小鼠随机分入4个实验组，每组6只，每笼4只。分组当天定义为第0天。根据实验方案给药7天，并于给药结束后24小时对受试小鼠进行取样试验。末次用药后24h结束实验，处死小鼠后剥取小鼠肿瘤，显微镜下剔除周围结缔组织和肌肉组织等，将其置于10％甲醛中保存。
4、结果
样本检测结果如表2所示。
表2
与空白对照组比较，*p<0.05，**p<0.01；与ACP单药组比较，#p<0.05，##p<0.01；联合用药组与吉西他滨组比较，△△p<0.01
与空白对照组比较，ACP组肿瘤Ki67的表达有下降趋势，但未见统计学差异；ACP单药对肿瘤增殖活性有一定的抑制作用，ACP与吉西他滨联合给药对肿瘤增殖活性的抑制作用显著优于ACP单药(p<0.01)和吉西他滨单药(p<0.01)，杀伤作用也显著优于单药组，二者联合具有显著的协同增效作用。
实施例2 ACP联合奥沙利铂或索拉菲尼治疗肝癌的SuperPDTX小鼠模型药效实验。
1.实验设计
表3
2.材料
小鼠：NCG(NOD-Prkdcem26Il2rgem26Nju)，南京大学生物医药研究院
3.实验方法
3.1肿瘤接种与分组
肝癌组织块来源于肝癌患者的样品接种小鼠后P1代冻存样品，此实验所用样品为传代后的P2代样品。在受试小鼠体内接种肝癌样品，接种组织块大小为：1*1*4mm3，接种当天将小鼠随机分入6个实验组，每组6只，每笼4只。分组当天定义为第0天。根据实验方案给药7天，并于给药结束后24小时对受试小鼠进行取样试验。末次用药后24h结束实验，处死小鼠后剥取小鼠肿瘤，显微镜下剔除周围结缔组织和肌肉组织等，将其置于10％甲醛中保存。
4、结果
结果如表4所示。
表4
*与空白对照组比较，p<0.05
实验结果表明，ACP+奥沙利铂组与ACP+索拉非尼组与空白对照组比较，均对肿瘤的杀伤作用均有明显的提升(p<0.05)，有一定的协同增效作用。
实施例3 ACP联合环磷酰胺或阿霉素对人体肿瘤肝癌QGY-7703、胰腺癌PANC-1、肺癌A549体内试验模型研究
1.给药方案
ACP给药组：口服给药剂量为5、2.5及1.25mg//kg；每天口服给药2次(中间间隔约6小时)，连续14天。
ACP+阿霉素或环磷酰胺给药组：ACP口服给药剂量为5、2.5及1.25mg/kg；每天口服给药2次(中间间隔约6小时)，连续14天；阿霉素1mg/kg或环磷酰胺15mg/kg，于每天首次完成ACP给药后10分钟再腹腔给药1次，如此连续7天。
阳性对照组：阿霉素2mg/kg/次或环磷酰胺30mg/kg/次，每天腹腔给药1次，连续7天；
阴性对照组：给予与试验组等体积的相应溶剂，给药方案同试验组
2.体内试验模型建立
取液氮冻存的人体肿瘤细胞株，复苏后，置37℃、5％CO2条件下培养。经传代培养后，取对数生长期的细胞，用生理盐水制备成约(1-2)×107细胞/ml浓度的细胞悬液，接种于裸鼠右腋皮下0.2ml/鼠。无菌条件下取体内生长旺盛的第2代或后几代人体肿瘤肝癌QGY-7703、胰腺癌PANC-1、肺癌A549异种移植模型体内传代的肿瘤组织，切割成1-2mm3大小的均匀小块，用套管针于每只裸小鼠右腋皮下接种一块。待接种肿瘤生长至大于100mm3后，随机分组，按实验设计方案给药。
3.体内试验检测指标
给药后开始动态观察和测试肿瘤大小以及称量荷瘤鼠体重，每3天用卡尺测量各裸鼠肿瘤的短径(a)及长径(b)，按(a2×b)/2公式计算肿瘤体积。根据测量计算的肿瘤体积计算出相对肿瘤体积(RTV),RTV＝Vt/V0。其中V0为随机分组(即d0)时的肿瘤体积，Vt为每一次测量即(dn)时的肿瘤体积。三周左右处死各组动物，继续测量肿瘤体积并剖取肿瘤称重，按下列公式计算肿瘤相对肿瘤增殖率和肿瘤抑制率：
4.结果如下表
表5 ACP样品合并环磷酰胺对人肝癌QGY-7703裸鼠异种移植模型抗肿瘤疗效(以肿瘤重量统计)
与溶剂对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
表6 ACP样品合并阿霉素对人胰腺癌PANC-1裸鼠异种移植模型抗肿瘤疗效(以肿瘤重量统计)
与溶剂对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
表7ACP样品合并阿霉素对人肺癌A549裸鼠异种移植模型抗肿瘤疗效(以肿瘤重量统计)
与溶剂对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
上述表5-7的结果表明，ACP联合小剂量的环磷酰胺或阿霉素对人体肿瘤肝癌QGY-7703、胰腺癌PANC-1、肺癌A549的生长抑制有相加作用，具有一定合并用药效应。
统计数据显示，联合用药时均对肿瘤的杀伤作用均有明显的提升(p<0.05)，有一定的协同增效作用，尤其是当ACP的用药量为低剂量(如约1.25mg/kg)时，协同增效更为显著。
实施例4 ACP联合用药对结肠腺癌肝转移患者的作用
1.实验设计
联合化疗：FOLFIRI方法进行化疗：伊立替康(CPT-11)+5-氟尿嘧啶(5-FU)+四氢叶酸钙(LV)：2014年11月27日开始
靶向治疗：贝伐珠单抗，时间和FOLFIRI方法同时。
伴行口服ACP治疗：2014年11月27日开始，每日四次，每次一片。上述化疗进行了5个周期，ACP持续用药。
联合化疗结果：治疗前后肝部转移灶明显缩小。
表8
肿瘤标志物CA125和CEA在联合化疗后结果如表9所示：
表9
FOLFIRI方法进行化疗：术后辅助治疗2个疗程，ACP持续用药至康复。
结果表明：对于原本无手术指证的病人，采用ACP+第二抗肿瘤药物联合治疗后，获得了手术根治的机会。该病人在术后，继续服用ACP，目前状态良好，无复发。
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