乳酸菌培养方法 1篇：
乳酸菌培养物以及其制造方法
第一、技术领域
本发明涉及培养乳酸菌而得到的乳酸菌培养物以及其制造方法。
第二、背景技术
乳酸菌的培养以各种方式进行，为了乳酸菌制剂的制造或发酵乳、乳酸 菌饮料、奶酪等的制造而将畜奶作为培养基来进行的情况最多。然而，通常 乳酸菌根据其种类不同营养的需求性不同，因此在仅由畜奶形成的培养基中 几乎不增殖，即便为增殖活性较优异的菌株，在仅由畜奶形成的培养基中， 为了得到与发酵乳、乳酸菌饮料等的制造相应的充分的酸度的发酵物，也必 须进行数天的培养。
然而，乳酸菌的长时间培养成为导致活菌数降低的原因，因此作为用于 期待各种生理效果的重视活菌数的乳酸菌饮料、发酵乳等的制造的培养未必 是优选的方法。
此外，为了将培养乳酸菌而得到的发酵物的风味作为课题的各种食品饮 品的制造，不能仅从增殖性的观点出发，选定使用菌株，因此也存在选择虽 然增殖性差但得到风味良好的发酵物的乳酸菌来使用的情况。
因此，熟知的是，在乳酸菌的培养中，以提高培养效率的目的将各种增 殖促进物质预先添加到培养基中是常规方法。通常，若例示出作为增殖促进 物质有效的物质，则可以列举出小球藻提取物(chlorella extracts)、铁盐、维 生素类、含有氨基酸或肽的蛋白分解物、酵母提取物等。
本申请人也报告了为了在乳酸菌的培养中提高增殖性、存活性而添加甜 茶提取物等(专利文献1)。
然而，添加有甜茶提取物的发酵乳等的产品虽然可以提高乳酸菌的增殖 性、存活性，但存在源自甜茶的苦味，在风味上存在问题。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开WO2006/126476号
第三、发明内容
发明要解决的问题
因此，本发明以提供维持甜茶提取物在乳酸菌的培养中的提高增殖性、 存活性的效果并改善风味的技术为课题。
用于解决问题的方案
本发明涉及一种乳酸菌培养物，其特征在于，其是在含有甜茶精(essence of Rubus suavissimus S.Lee)的培养基中培养乳酸菌而得到的，所述甜茶精 是对在甜茶提取物中添加了无机盐的物质进行电渗析从而以浓缩液的形式 得到的。
此外，本发明涉及一种乳酸菌培养物的制造方法，其特征在于，其在培 养基中培养乳酸菌而得到乳酸菌培养物，制造中，在任意的阶段将甜茶精配 合到培养基中，所述甜茶精是对在甜茶提取物中添加了无机盐的物质进行电 渗析从而以浓缩液的形式得到的。
进而，本发明涉及一种乳酸菌的增殖促进方法，其特征在于，将甜茶精 配合到培养基中，培养乳酸菌，所述甜茶精是对在甜茶提取物中添加了无机 盐的物质进行电渗析从而以浓缩液的形式得到的。
发明的效果
本发明的乳酸菌培养物由于添加了甜茶精，因此乳酸菌的增殖性、存活 性高，从而活菌数多，此外，维持该性能，同时没有源自甜茶的苦味、风味 良好;所述甜茶精是是对在甜茶提取物中添加了无机盐的物质进行电渗析从 而以浓缩液的形式得到的。
因此，本发明的乳酸菌培养物没有风味上的问题，可以用于各种发酵乳 食品。并且，该发酵乳食品在保存时风味劣化、活菌数的降低也少，有用性 高，有助于增进健康。
第四、具体实施方式
本发明的乳酸菌发酵物是在含有甜茶精的培养基中培养乳酸菌而得到 的，所述甜茶精是对在甜茶提取物中添加了无机盐的物质进行电渗析从而以 浓缩液的形式得到的。
得到上述乳酸菌发酵物时所使用的、对在甜茶提取物中添加了无机盐的 物质进行电渗析从而以浓缩液的形式而得到的甜茶精如下操作而得到。首 先，将蔷薇科悬钩子属的甜茶(学名：Rubus suavissimus S.Lee(Rosaceae))的 叶、茎、优选为叶直接或者根据需要实施清洗、脱皮、干燥、粉碎等处理之 后用溶剂提取，得到甜茶提取物。
对上述甜茶提取物的制造中所使用的溶剂没有特别限定，例如，可以列 举出水、乙醇等碳数1～5的低级醇、醋酸乙酯、甘油、丙二醇等有机溶剂等， 它们可以单独使用1种也可以混合2种以上。这些溶剂之中，特别优选水或者 水-低级醇等水性溶剂。
此外，对使用上述溶剂的甜茶提取物的提取方法没有特别限定，例如， 优选酸提取法。此外，该酸提取在pH4.0以下、优选为pH3.0～4.0的酸性条件 下进行是更优选的。进行该酸提取时，作为为了调整溶剂的pH而使用的酸成 分，只要为酸性的物质则可以没有特别限定地使用，作为优选的物质，可以 列举出柠檬酸、苹果酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、醋酸等有机酸。
进而，对使用上述溶剂的甜茶提取物的提取条件没有特别限定，例如， 在0℃以上且100℃以下的温度、更优选为10℃以上且40℃以下的温度下进行 30～60分钟左右的提取处理是优选的。
如此操作而得到的甜茶提取物根据需要进行过滤、离心分离等之后，进 一步添加无机盐实施电渗析。
作为添加到甜茶提取物中的无机盐，只要为由无机酸和无机碱形成的盐 则没有特别限定，例如，可以列举出选自氯化钾等钾盐、氯化钠等钠盐、氯 化钙等钙盐、氯化镁等镁盐中的1种或者2种以上。这些无机盐之中，优选镁 盐、更优选氯化镁。此外，对无机盐的添加量没有特别限定，以非水合物换 算计优选为0.01～0.5mol/L、更优选为0.02～0.2mol/L。需要说明的是，这些无 机盐可以为水合物也可以为非水合物。
此外，作为电渗析中所使用的电渗析处理装置，例如，可以列举出阴极 与阳极之间被多个阳离子交换膜与阴离子交换膜交替地隔开，具备阴极室、 阳极室、多个脱盐室以及多个浓缩室的装置等。用这样的电渗析处理装置可 以得到浓缩了离子性的物质的液体(浓缩液)、和去除了离子性的物质的液体 (脱盐液)。即，用处于阳极侧的阳离子交换膜和处于阴极侧的阴离子交换膜 隔开的部分为浓缩室，浓缩室中回流的液体为浓缩液。并且，用处于阳极侧 的阴离子交换膜和处于阴极侧的阳离子交换膜隔开的部分为脱盐室，脱盐室 中回流的液体为脱盐液。电渗析处理装置也以ACILYZER(ASTOM Corporation)等名称被市售，因此可以也可以利用它们。
上述甜茶精可以如下得到：在电渗析装置的脱盐室中使添加有无机盐的 甜茶提取物回流，在浓缩室中使水等回流，进行电渗析处理，回收浓缩液从 而得到。对该电渗析的条件没有特别限制，例如可以列举出下述方法：浓缩 室中使相当于甜茶提取物的5～50质量%(以下，仅称为“%”)的量、优选为相当 10～30%的量的水回流，在阴极与阳极之间施加10～200V的电压、优选为 50～100V的电压，通过10～200A、优选为50～100A的电流，进行电渗析处理直 至脱盐室的电导率为平衡(2毫西门子每厘米(mS/cm))为止，回收浓缩液从而 得到。回流于浓缩室中的液体除水以外例如也可以使用食盐水、柠檬酸水等 电解质溶液。
如上所述而得到的甜茶精可以以电渗析后的状态直接来使用，此外，也 可以将所得到的甜茶精利用超滤、离心分离等方法进行纯化/浓缩，以所得的 浓缩物形式使用，或者对其进一步通过喷雾干燥、冷冻干燥等方法使其干燥， 以所得的粉末状来使用。
对将上述甜茶精添加到乳酸菌可生长发育的培养基中时的添加量没有 特别限制，例如，作为Brix.12的甜茶精，以培养基中的浓度计为0.01～1.0%、 优选为0.01～0.5%、更优选为0.02～0.2%。需要说明的是，Brix(白利糖度) 为例如利用RX-7000α(ATAGO CO.,LTD.)等数字折射计来测定的值。
此外，上述甜茶精向培养基添加的添加时间优选在使乳酸菌发酵之前， 但不限于此，可以在乳酸菌的发酵的中途添加，此外也可以在乳酸菌的发酵 终止后添加。此外，也可以分多次添加。尤其，在乳酸菌的发酵前添加上述 甜茶精时，可以维持培养终止时菌数多、和菌的存活性高的状态，因此优选。
进而，作为添加上述甜茶精的培养基，可以列举出由牛奶、山羊奶、马 奶、羊奶等鲜奶、脱脂奶粉、全脂奶粉、鲜奶油等乳产品等而成的畜奶培养 基或豆奶等源自植物的液态乳、各种合成培养基。并且，该培养基可以为添 加了通常的乳酸菌培养基中所使用的成分的培养基。作为这样的成分，例如， 可以列举出维生素A、维生素B类、维生素C、维生素E等维生素类、各种肽、 氨基酸类、钙、镁等的盐类。
需要说明的是，在上述培养基中可以添加油酸类。作为这样的油酸类， 可以列举出油酸或油酸钠、油酸钾等油酸的盐、甘油油酸酯、聚甘油油酸酯、 蔗糖油酸酯等油酸酯等油酸的衍生物等。作为这些油酸类换算为油酸时的浓 度，以大致在培养基中为5～50ppm、优选为5～25ppm的方式添加即可。
为了得到本发明的乳酸菌发酵物，作为所培养的乳酸菌，只要为通常食 品制造中所使用的乳酸菌则没有特别限定，例如可以列举出干酪乳杆菌 (Lactobacillus casei)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus)、乳脂乳杆菌(Lactobacillus cremoris)、瑞士乳杆菌 (Lactobacillus helveticus)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、发酵乳杆菌 (Lactobacillus fermentum)、日本乳杆菌(Lactobacillus yoghurti)、德氏乳杆菌 保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)、德氏乳杆菌德氏亚 种(Lactobacillus delbrueckii subsp.delbrueckii)、约翰逊氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)等乳杆菌属细菌;嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)等链球菌 属细菌;乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)、乳酸乳球菌乳 脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)、植物乳球菌(Lactococcus plantarum)、棉子糖乳球菌(Lactococcus raffinolactis)等乳球菌属细菌;粪肠球 菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)等肠球菌属细菌。 这些乳酸菌之中，优选选自由乳杆菌属细菌、链球菌属细菌以及乳球菌属细 菌组成的组中的乳酸菌中的1种以上，它们之中，优选干酪乳杆菌或者加氏 乳杆菌，特别优选干酪乳杆菌YIT9029(FERM BP-1366、受托日：昭和56年1 月12日、独立行政法人产品评价技术基础机构专利生物保藏中心(〒305-8566 日本国茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6))。需要说明的是，本发明中， 乳酸菌是指兼性厌氧细菌，不包含作为专性厌氧细菌的双歧杆菌属细菌。
对用于得到本发明的乳酸菌发酵物的乳酸菌的培养条件没有特别限定， 例如，可以列举出下述条件：将乳酸菌接种到培养基中以使培养基中的菌数 为1.0×103～1.0×109cfu/ml左右，将其在30～40℃左右的温度下进行1～7天左右 的培养。此外，作为此时的培养条件，从静置、搅拌、振荡、通气等中适宜 选择适于所使用的乳酸菌的培养的方法来进行即可。
结果所得到的乳酸菌发酵物的活菌数多，此外，在维持该效果的同时没 有源自甜茶的苦味、风味良好。并且，对于该乳酸菌发酵物，其可以单独或 者与被认可的通常在发酵乳食品中添加的其它的辅助原料混合从而制成发 酵乳食品。
在此，发酵乳食品包含发酵豆奶或者奶等根据政府命令而确定的发酵 乳、乳产品乳酸菌饮料等饮料、凝固型酸奶(hard yogurt)、液体型酸奶(soft yogurt)、原味酸奶(plain yogurt)、以及克非尔(kefir)、奶酪等。此外，本发明 的发酵乳食品中，包含利用各种乳酸菌的食品饮品，例如，原味型(plain type)、 调味型(flavored type)、水果型(fruit type)、甜味型、液体型(soft type)、可饮 型(drinkable type)、凝固型(hard type)、冷冻型(frozen type)等发酵乳、乳酸菌 饮料、克非尔、奶酪等。
这些发酵乳食品可以如下得到：在上述的乳酸菌发酵物中根据需要配合 除浆液等甜味剂之外的各种食品原料、例如、各种糖质、增稠剂、乳化剂、 各种维生素剂等任意成分而得到。作为这些食品原料的具体的物质，可以列 举出蔗糖、葡萄糖、果糖、帕拉金糖、海藻糖、乳糖、木糖、麦芽糖等糖质; 山梨糖醇、木糖醇、赤藓醇、乳糖醇、帕拉金糖醇、还原饴糖、还原麦芽饴 糖等糖醇;阿斯巴甜、奇异果甜蛋白、蔗糖素、安赛密K、甜叶菊等高甜度 甜味剂;琼脂、明胶、角叉菜胶、愈创木脂、黄原胶、果胶、刺槐豆胶、吉 兰糖胶、羧甲基纤维素、大豆多糖类、藻酸丙二醇酯等各种增稠(稳定)剂; 蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、脱水山梨醇脂肪酸酯、卵 磷脂等乳化剂;奶油、黄油、酸味奶油等乳脂;柠檬酸、乳酸、醋酸、苹果 酸、酒石酸、葡糖酸等酸味剂;维生素A、维生素B类、维生素C、维生素E 类等各种维生素类;钙、镁、锌、铁、锰等矿物质成分;酸奶系;浆果(berry) 系;橘(orange)系;温柏(quince)系;紫苏(perilla)系;柑橘(citrus)系;苹果系; 薄荷系;葡萄系;杏(apricot)系;梨、乳蛋糕乳脂、桃、甜瓜、香蕉、热带 系;香草系;红茶、咖啡系等气味类。
结果，所得到的发酵乳食品为风味良好的食品，并且为保存时风味劣化、 活菌数的降低也少、有用性高的食品，有助于增进健康。
实施例
以下，列举出实施例来详细地说明本发明，但本发明并不受这些实施例 的限定。
参考例1
甜茶提取物的制造：
对甜茶叶实施粉碎等处理之后，添加甜茶叶的15倍量的水与相当于甜茶 叶的5%的量的柠檬酸，将pH调整为3.8，在20℃下进行60分钟的提取。进而， 用蒸发器将所得到的提取液浓缩5倍，得到白利糖度(Brix.)为13的甜茶提 取物。
制造例1
甜茶精的制造(1)：
在上述的20℃、60分钟的提取后，在得到的甜茶提取物中添加氯化镁六 水合物以使其成为0.05mol/L的浓度。接着，将其投入到电渗析装置(电渗析 膜：AC220-50、产品名：MICRO ACILYZERS-3、装置制造商：ASTOM Corporation)的脱盐室中，在浓缩室中投入相当于提取物的17%的水，进行电 渗析处理直至脱盐室的电导率变为平衡为止，具体而言直至电导率为2毫西 门子每厘米(mS/cm)为止，回收浓缩液。进而，用蒸发器将该浓缩液浓缩至5 倍，得到白利糖度为12的甜茶精1。
实施例1
培养物的制造(1)：
将10%脱脂奶粉溶液制成基本培养基，在其中添加0.2%由实施例1制备 的甜茶精1，在100℃下进行15分钟加热杀菌，制备培养的培养基。在这些培 养基中接种0.1%干酪乳杆菌(YIT9029)的起始物(起始菌数：1.5×106cfu/ml)， 在37℃下进行24小时培养之后，冷却至10℃以下，得到培养物。此外，为了 比较，用在基本培养基中添加0.2%甜茶提取物代替甜茶精1的培养基，也得 到与上述同样地制造的培养物。
使用pH计(HORIBA F-52)测定培养物的pH，使用BCP培养基(EIKEN CHEMICAL CO.,LTD.)测定乳酸菌数。此外，测定培养物的酸度(取培养物 9g，用0.1N苛性钠对其中的有机酸进行滴定至变为pH8.5为止时的滴定值： 单位ml)。进而，由3名专业评价小组成员基于下述评价基准对所得到的乳产 品的风味进行评价，将其结果示于表1。
<风味评价基准>
评分 内容
5：完全没有感觉到苦味
4：几乎没有感觉到苦味
3：稍稍感觉到苦味
2：感觉到苦味
1：强烈感觉到苦味
[表1]
由表1明确的那样，确认到添加有甜茶提取物或者甜茶精1的乳产品中， 与仅为基本培养基的乳产品相比，培养物的pH变低，可以得到高活菌数。此 外，甜茶精1与甜茶提取物相比，确认到pH以及活菌数几乎等同，但风味相 当好。
制造例2
甜茶精的制造(2)：
制造例1中，等量地使用氯化钠、氯化钾、氯化钙或者柠檬酸三钾代 替氯化镁六水合物，除此以外同样地操作，制造甜茶精2～5。
实施例2
培养物的制造(2)：
实施例1中，使用等量的制造例2中制造的甜茶精2～5代替甜茶精1，除 此以外同样地操作，得到培养物(起始菌数：1.5×106cfu/ml)。对于这些培养 物，与实施例1同样操作，测定培养物的pH、酸度、活菌数，评价风味。将 这些结果示于表2。
[表2]
如表2明确地那样，确定添加氯化镁而得到的甜茶精与添加其它的盐而 得到的甜茶精相比增殖促进效果优异。此外，确认到作为有机盐的柠檬酸三 钾中，仅有少许乳酸菌的增殖促进效果。
制造例3
甜茶精的制造(3)：
制造例1中，使用0.01、0.02、0.1、0.2或者0.5mol/L氯化镁代替0.05mol/L 氯化镁，除此以外同样地操作，制造甜茶精6～10。
实施例3
培养物的制造(3)：
实施例1中，使用等量的实施例5中制造的甜茶精6～10代替甜茶精1， 除此以外同样地操作，得到培养物(起始菌数：1.5×106cfu/ml)。对于这些培 养物，与实施例1同样操作，测定培养物的pH、酸度、活菌数，评价风味。 将这些结果示于表3。
[表3]
如表3明确的那样，对于乳酸菌的增殖促进效果，通过使用甜茶提取物 中添加氯化镁进行电渗析，以浓缩液的形式而得到的甜茶精、尤其是添加 0.02%以上的氯化镁的甜茶精，从而确认到变明显的倾向。此外，确认到添 加氯化镁时，若为0.2%以下，则不对风味产生不良影响。
实施例4
培养物的制造(4)：
实施例1中，将甜茶精1的添加量设为0.01、0.02、0.05、0.1、0.5%， 除此以外同样地操作，得到培养物(起始菌数：1.5×106cfu/ml)。对于这些培 养物，与实施例2同样操作，测定培养物的pH、酸度、活菌数，评价风味。 将这些结果示于表4。需要说明的是，表4的培养的培养基5与添加了实施例1 的甜茶精1的培养基相同。
[表4]
如表4明确的那样，通过添加甜茶精，从而确认到乳酸菌的增殖促进效 果而对乳产品的风味几乎不产生影响。尤其，可知通过添加0.02～0.2%的甜 茶精，从而得到高活菌数与良好的风味。
实施例5
培养物的制造(5)：
作为乳酸菌，使用干酪乳杆菌(YIT9029)或者加氏乳杆菌(YIT0192)， 使用基本培养基与含有0.2%的甜茶精的培养基(培养的培养基5)，与实施例1 同样操作，得到培养物(起始菌数：干酪乳杆菌1.5×106cfu/ml、加氏乳杆菌 4.5×105cfu/ml)。对于这些培养物，与实施例1同样操作，测定培养物的pH、 酸度、活菌数，评价风味。将这些结果示于表5。
[表5]
如表5明确的那样，通过添加甜茶精，从而对于即便在加氏乳杆菌那样 的基本培养基中几乎不增殖的乳酸菌也确认到增殖促进效果。
实施例6
培养物的制造(6)：
将包含4%的葡萄糖与3%的果糖的15%脱脂奶粉制成基本培养基，在 其中添加0.2%制造例1中制备的甜茶精1，在100℃下加热杀菌60分钟，制备 培养的培养基。在这些培养基中接种0.5%的干酪乳杆菌(YIT9029)的起始物 (起始菌数：7.6×107cfu/ml)，在37℃下进行培养直至pH3.7为止，然后，冷却 至10℃以下，得到培养物。对于这些培养物，测定培养所需要的时间和与实 施例1同样操作的培养物的活菌数。将这些结果示于表6。
[表6]
如表6明确的那样，通过将甜茶精添加到培养基中，从而可以将干酪乳 杆菌的培养所需要的时间缩短至3分之2。
实施例7
乳酸菌饮料的制造：
在于15MPa下将实施例6中制造的培养物均质化而成的物质25重量份 中，添加在100℃下对包含30%的葡萄糖果糖液糖、25%的还原饴糖、0.3% 的维生素C、0.3%的大豆多糖类以及0.03%的三氯蔗糖的水溶液杀菌10分钟 而成的物质75重量份，添加0.1%的酸奶香料(Kabushiki Kaisha Yakult Material 制造)，制造乳酸菌饮料。在65mL容量的聚苯乙烯制造的容器中填充该乳酸 菌饮料，与实施例1同样地测定刚刚制造所得到的乳酸菌饮料之后(产品化时) 与10℃下保存21天之后的活菌数，评价风味。将该结果示于表7。此外，通 过以下的式子求出该乳酸菌饮料的在10℃下保存21天后的存活率。
[表7]
[数学式1]
存活率(%)=在10℃下保存21天后的活菌数/产品化时的活菌数×100
如表7明确的那样，表明由含有甜茶精的培养基制造的乳酸菌饮料与由 不含甜茶精的培养基制造的乳酸菌饮料相比，保存后的活菌的减少受到抑 制。
产业上的可利用性
本发明的乳酸菌培养物可以用于有助于增进健康的发酵乳食品饮品等。
乳酸菌培养方法 2篇：
乳酸菌培养基
第一、技术领域
本发明涉及一种培养基，特别涉及一种乳酸菌培养基。
第二、背景技术
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)被公认为是胃炎、消化性溃疡和胃癌 的主要致病因子，医学上治疗幽门螺杆菌感染的常用方法是利用质子泵抑制 剂加两种抗生素的三联疗法，但由于随之产生的耐药菌株的增多，使得疗效 下降。研究结果表明，某些特定的乳酸菌对幽门螺杆菌具有抑制乃至杀灭作 用，可以缓解甚至治愈幽门螺杆菌引起的相关疾病，因此，在医学上有很好 的应用价值，逐渐成为国际上的研究热点。
目前在国内外，已有一些关于利用乳酸菌抑制幽门螺杆菌的体内、体外 实验报道，但几乎所有报道都没有提到一个事实，那就是在以往的对乳酸菌 的体外筛选实验中所使用的乳酸菌培养基(如MRS培养基作为乳酸菌的选 择性培养基被广泛使用，商业化产品以Merck公司和Oxoid公司的最为常见) 本身对幽门螺杆菌的抑制作用。本发明申请人发现，在筛选对幽门螺杆菌有 抑制作用的乳酸菌的体外实验中，作为乳酸菌最常采用的MRS培养基自身 对幽门螺杆菌具有很强的抑制作用，这种抑制会造成筛选实验的假相，对筛 选过程产生一定的干扰。因此，本领域特别需要有一种培养基既能保证乳酸 菌的良好生长，又能消除培养基本身对幽门螺杆菌的抑制作用，从而获得真 实的体外筛选结果。
第三、发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服以往在筛选抑制幽门螺杆菌的 乳酸菌时，所用的乳酸菌培养基本身对幽门螺杆菌存在抑制作用，从而干扰 筛选结果的缺陷，而提供一种既能保证乳酸菌的良好生长，且对幽门螺杆菌 没有抑制作用的培养基。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案之一为：一种乳酸菌培养 基，所述的乳酸菌培养基由如下组分组成：
1)蛋白胨10～12g/L;
2)酵母提取物4～6g/L;
3)葡萄糖6～22g/L;
4)酸碱缓冲剂2～7g/L，所述的酸碱缓冲剂为柠檬酸铵和/或磷酸氢二钾;
5)生长因子0.15～0.4g/L，所述的生长因子为硫酸镁和/或硫酸锰;
6)牛肉浸膏0～10g/L;
7)可溶性淀粉0～15g/L;
8)果糖0～3g/L;和
9)琼脂0～20g/L;
所述培养基的pH值为5.8-6.9。
本发明中，所述的乳酸菌培养基中含有牛肉浸膏0～10g/L;较佳地，所 述的乳酸菌培养基中含有牛肉浸膏8～10g/L。
本发明中，所述的乳酸菌培养基中含有可溶性淀粉0～15g/L;较佳地， 所述的乳酸菌培养基中含有可溶性淀粉5～15g/L。
本发明中，所述的乳酸菌培养基中含有果糖0～3g/L;较佳地，所述的乳 酸菌培养基中含有果糖3g/L。
本发明中，所述的乳酸菌培养基中含有琼脂0～20g/L;较佳地，所述的 乳酸菌培养基中含有琼脂10～20g/L。
本发明优选地，所述的蛋白胨为胰蛋白胨和/或酪蛋白胨。
本发明优选地，所述的柠檬酸铵不超过5g/L;所述的磷酸氢二钾不超过 2.5g/L;所述的硫酸镁不超过0.3g/L;所述的硫酸锰不超过0.2g/L。
本发明更优选地，所述的乳酸菌培养基由如下组分组成：胰蛋白胨 10～12g/L、牛肉浸膏9～10g/L、酵母提取物4～5g/L、葡萄糖20～22g/L、柠檬 酸铵1.5～2.0g/L、磷酸氢二钾2.0～2.5g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.04～0.2g/L 和琼脂10～14g/L，所述培养基的pH值为6.88-6.91。
本发明中，溶解所述乳酸菌培养基的介质为本领域常规，较佳地为水; 所述水为本领域常规所述，如去离子水、蒸馏水、双蒸水等。
本发明的乳酸菌培养基的制备方法为本领域常规，只需将其包含的各组 分简单混合，然后按照本领域常规微生物培养基的制备条件制备即可。
本发明提供的技术方案之二为：如前所述的乳酸菌培养基在筛选对幽门 螺杆菌有抑制作用的乳酸菌中的应用。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发 明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明的培养基可供乳酸菌良好生长，且克服了以往几乎所有商业化的 MRS培养基对幽门螺杆菌有抑制作用的问题，可用于筛选对幽门螺杆菌有 抑制作用的乳酸菌，在筛选实验中得到真实可靠的筛选结果;同时，本发明 的培养基大大降低了乳酸菌培养基的成本。本发明申请人发现了之前相关研 究中从未提及的重要现象，即乳酸菌培养基本身对幽门螺杆菌存在抑制作 用，而使用本发明的培养基可以排除乳酸菌筛选实验中的干扰，将为筛选对 幽门螺杆菌有抑制作用的乳酸菌的实验带来根本的改观，从而为今后相关研 究获得真实的结论奠定基础。
第四、附图说明
图1为Merck公司和Oxoid公司的MRS培养基对幽门螺杆菌抑制作用的结 果图，其左边为Oxoid公司的培养基，右边为Merck公司的培养基。
图2为本发明的培养基与Merck公司和Oxoid公司的MRS培养基在抑制幽 门螺杆菌作用方面的对比结果图，其中，a为本发明的培养基，b为Oxoid公 司的MRS培养基，c为Merck公司的MRS培养基。
第五、具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在 所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常 规方法和条件，或按照商品说明书选择。
下述实施例中所用药品如无特别说明，均购自国药集团药业股份有限公 司。商品化MRS培养基购自Merck公司和Oxoid公司。
实施例1
本实施例的乳酸菌培养基所包含的各组分如下表所示：
其制备方法如下：
以1L的量进行配制，准确称取以上各组分，加入蒸馏水至1L，加热搅 拌，至组分完全溶解，121℃，15min灭菌处理后待用，其最终pH值为6.91。
实施例2
本实施例的乳酸菌培养基所包含的各组分如下表所示：
其制备方法同实施例1，其最终pH值为6.65。
实施例3
本实施例的乳酸菌培养基所包含的各组分如下表所示：
其制备方法同实施例1，其最终pH值为6.88。
实施例4
本实施例的乳酸菌培养基所包含的各组分如下表所示：
其制备方法同实施例1，其最终pH值为6.70。
实施例5
本实施例的乳酸菌培养基所包含的各组分如下表所示：
其制备方法同实施例1，其最终pH值为5.84。
实施例6
本实施例的乳酸菌培养基所包含的各组分如下表所示：
其制备方法同实施例1，其最终pH值为6.20。
实施例7
本实施例的乳酸菌培养基所包含的各组分如下表所示：
其制备方法同实施例1，其最终pH值为6.05。
实施例8
本实施例的乳酸菌培养基所包含的各组分如下表所示：
其制备方法同实施例1，其最终pH值为6.15。
实施例9
本实施例的乳酸菌培养基所包含的各组分如下表所示：
其制备方法同实施例1，其最终pH值为6.55。
实施例10
本实施例的乳酸菌培养基所包含的各组分如下表所示：
其制备方法同实施例1，其最终pH值为5.96。
实施例11
其制备方法同实施例1，其最终pH值为6.68。
效果实施例1乳酸菌生长状况测试
将植物乳杆菌(Lb.plantarum)ST-Ⅲ菌株(CGMCC NO.0847，购自光 明乳业研究院基础研究部，该菌株信息在CN1467290A中有披露)以1%(v/v) 的接种量分别接入商品化的MRS培养基和本发明实施例3、4、9和11的培养 基(均去掉其中的琼脂粉)中，37℃厌氧培养24h，通过测定发酵后培养液 的pH值和OD值，观察菌种生长状况。结果记录在下表中。(注：琼脂粉在培 养基中仅起凝块的作用，因此，同一培养基的固体和液体形式，仅相差琼脂 粉。)
测定指标 商品化MRS(Merck) 实施例3 实施例4 实施例9 实施例11 初始pH值 5.84 6.88 6.70 6.55 6.68 发酵后pH值 3.98 4.05 4.00 3.95 3.98 初始OD600值 0.131 0.140 0.135 0.138 0.140 发酵后OD600值 2.530 2.152 2.078 2.057 2.086
从上表可以看出，发酵后培养液的吸光度增长率没有显著性差异;同时 测定了上述各发酵液中乳酸菌菌落总数，均在108cfu/mL以上。
由此说明，本发明的培养基可供乳酸菌良好地生长。
效果实施例2指示平板抑菌实验
指示菌平板的制备：将幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)(购自ATCC， ATCC NO:43504)菌体悬浮于Columbia培养基(加入10%的羊血清)中，制 成约109cfu/mL的菌悬液，倒平板，待凝固后作为指示平板。
将Merck公司、Oxoid公司的MRS培养基和本发明实施例3、5、9、10的 培养基，分别配制、灭菌、倒平板，待凝固后，以打孔器取出直径5～15mm 的圆形培养基凝块，置于上述指示菌培养基的上方，在幽门螺杆菌适于生长 的条件下，即三气培养箱(O2:CO2:N2=5:10:85，37℃)中培养48～72h，观察 圆形培养基凝块对指示菌的抑制情况。其中，实施例3的结果如图1和图2所 示。
图1的左边和右边分别为Merck公司和Oxoid公司的MRS培养基，可以从 图中看到，两者的周围均出现了非常明显的抑菌圈，说明Merck公司和Oxoid 公司的MRS培养基本身对于幽门螺杆菌有抑制作用。
图2为本发明实施例3的培养基与Merck公司和Oxoid公司的MRS培养基 在抑制幽门螺杆菌作用方面的对比结果图，其中，a为本发明实施例3的培养 基，b为Oxoid公司的MRS培养基，c为Merck公司的MRS培养基。从图中可以 看出，Merck公司和Oxoid公司的MRS培养基，均对于幽门螺杆菌有抑制作用 (出现抑菌圈);而本发明的培养基，对幽门螺杆菌没有抑制作用(没有抑 菌圈)。
实施例5、9和10的实验结果与实施例3是一致的，均显示对幽门螺杆菌 无抑制作用(没有出现抑菌圈)，其他实施例在平板抑菌方面也有与实施例3 相当的结果。
本发明所有的实施例均能达到既不抑制幽门螺杆菌，又能保证乳酸菌良 好生长的目的。以上效果实施例说明本发明的培养基既能保证乳酸菌的良好 生长，又对幽门螺杆菌没有抑制作用，从而可以保证在筛选对幽门螺杆菌有 抑制作用的乳酸菌时，其结果的可靠性，克服了传统的乳酸菌培养基本身对 幽门螺杆菌有抑制作用带来的缺陷。
乳酸菌培养方法 3篇：
乳酸菌培养基、乳酸菌微生物肥及其应用
第一、技术领域
本发明涉及微生物培养及应用技术领域，特别提供了乳酸菌培养基、乳酸菌微生物肥及其应用。
第二、背景技术
微生物肥料中含有大量有益微生物，它的主要作用是通过有益微生物的生命活动，来实现物质间的转化和有益代谢产物形成。微生物肥料可以活化土壤，固定氮素，改善作物营养条件，通过调解良好的土壤微生态环境来促进作物的生长。在农业科学技术不断发展的今天，现代农业技术对我国农业生产带来了巨大贡献，但同时由于农药和化肥的大量使用，也导致了对环境的破坏，以及对农田土壤和农产品质量造成不良影响。
正是由于现代农业带来一系列环境污染问题，人们努力探索平衡施肥、提高化肥利用率、倡导循环农业、改善作物品种的发展途径。在这样的背景下，微生物肥料的作用逐渐体现出来。长期施用微生物肥料，既能保证作物增产，提高品质，又减少了化肥使用量，降低成本，同时还能改善土壤，减少污染，有利于农业的可持续发展。
乳酸菌作为微生物肥料中常用的一种微生物菌种，在农业生产中发挥着重要的作用。乳酸菌能生成乳酸和其他生命活性物质，促进纤维素分解，能够与很多有益微生物共生，提高了土壤生物活性和缓冲能力，抑制了土壤中有害微生物的生长，促进土壤微生态平衡。因此，有必要对乳酸菌进行更深入研究，开发出更多的乳酸菌培养方法。
第三、发明内容
鉴于此，本发明的目的在于提供一种乳酸菌培养基、乳酸菌微生物肥及其应用，以解决农用乳酸菌生长速度慢，生产流程复杂、生产成本高等问题。
本发明一方面提供了一种乳酸菌培养基，其配方为：麦芽浸膏3～4g/L、骨髓浸膏7～10g/L、木醋液10～18ml/L、肉鸡粪处理原料15～30g/L、糖蜜20～35g/L，PH为4.8～5.2，以水配制。
优选，所述乳酸菌培养基，其配方为：麦芽浸膏3.5g、骨髓浸膏8g、木醋液15ml、肉鸡粪处理原料25g、糖蜜30g、水1000ml。
进一步优选，所述的木醋液为农用级木醋液。
进一步优选，所述肉鸡粪处理原料的制备方法包括如下步骤：
(1)选择新鲜肉鸡鸡粪作材料，加入3～4倍水稀释，充分搅拌，清除漂浮杂物，去除底部杂质，得去杂混合液;
(2)取步骤1中得到的去杂混合液，经50目网压榨过滤，挤出多余水分，得肉鸡粪混合物;
(3)将步骤2中得到的肉鸡粪混合物在100～110℃条件下滚动风干至含水量30～40%，得肉鸡粪处理原料。
本发明还提供了一种乳酸菌微生物肥，包括上述乳酸菌培养基和乳酸菌种子液，其中，所述乳酸菌培养基与乳酸菌种子液按体积比100:25～30接种，并置于27～30℃厌氧条件下，厌氧培养30天或30天以上，至乳酸菌培养基和乳酸菌种子液的混合液中不产生气泡，得到所述乳酸菌微生物肥。
本发明还提供了上述乳酸菌微生物肥在农业生产中的应用。
本发明具有以下的优点：
1.本发明提供的乳酸菌培养基根据乳酸菌所特有的生物特性，结合新鲜肉鸡鸡粪中的有效成分，采用合适的处理方法将肉鸡鸡粪中的有效成分分离出来作为培养乳酸菌的原料，具有变废为宝的特点，肉鸡粪处理原料中含有鱼粉、骨粉和多种微量元素，这与目前其他农用乳酸菌培养基以C源作为主要原料有着明显区别;
2.本发明提供的乳酸菌培养基将木醋液作为原料，将pH值调节至4.8～5.2，适合乳酸菌生长，同时对其他微生物有抑制作用，同时，丰富了培养基中的营养成分，适合乳酸菌生长，同时对其他微生物有抑制作用;
3.本发明提供的乳酸菌微生物肥中培养基与乳酸菌种子液按体积比100:25～30接种，结合木醋液的作用，能够使乳酸菌快速成为优势菌群，其他微生物因没有良好的生长条件而受到抑制，简化了生产流程，降低了生产成本;
4、乳酸菌微生物肥的应用能够促进土壤微生态平衡。
第四、具体实施方式
下面将结合具体的实施方案对本发明进行进一步的解释，但并不局限本发明。
实施例1
1、选用含水量84.7%的新鲜肉鸡鸡粪1kg，加入3kg水充分搅拌15min，清除悬浮的羽毛和杂物，去除底层沙粒，取上层悬浮液，经50目滤网挤压脱水后，散开放入干燥箱中，100℃烘干30min，得到含水量30%的肉鸡粪处理原料0.37kg;
2、取1000mL水加热将麦芽浸膏21g，骨髓浸膏70g，糖蜜245g溶解，再加入步骤1中获得的肉鸡粪处理原料105g，充分搅拌后加入到发酵容器中，添加水至7000ml，再加入木醋液126ml，得到乳酸菌培养基;
3、取2100mL培养好的乳酸菌种子液加入到步骤2中配制好的乳酸菌培养基中，在27℃条件下厌氧培养30天，直到发酵装置中不再产生气泡，去掉损耗，制得乳酸菌微生物肥。
实施例2
1、选用含水量84.7%的新鲜肉鸡鸡粪1kg，加入4kg水充分搅拌20min，清除悬浮的羽毛和杂物，去除底层沙粒，取上层悬浮液，经50目滤网挤压脱水后，散开放入干燥箱中，110℃烘干25min，得到含水量40%的肉鸡粪处理原料0.40kg;
2、取1000mL水加热将麦芽浸膏28g，骨髓浸膏49g，糖蜜140g溶解，再加入步骤1中获得的肉鸡粪处理原料210g，充分搅拌后加入到发酵容器中，添加水至7000ml，再加入木醋液70ml，得到乳酸菌培养基;
3、取1750mL培养好的乳酸菌种子液加入到步骤2中配制好的乳酸菌培养基中，在30℃条件下厌氧培养35天，直到发酵装置中不再产生气泡，去掉损耗，制得乳酸菌微生物肥。
实施例3
1、选用含水量71.8%的新鲜肉鸡鸡粪300kg，加入1100kg水充分搅拌15min，清除悬浮的羽毛和杂物，去除底层沙粒，取上层悬浮液，经50目滤网挤压脱水后，送入烘干滚筒，105℃烘干30min，得到含水量39.7%的肉鸡粪处理原料95.3kg;
2、取200L水加热将麦芽浸膏3.5kg，骨髓浸膏8kg，糖蜜30kg溶解，再加入步骤1中获得的肉鸡粪处理原料25kg，充分搅拌后加入到发酵容器中，添加水至1000L，再加入木醋液15L，得到乳酸菌培养基;
3、取培养好的乳酸菌种子液300L加入到装有步骤2中配制好的乳酸菌培养基的发酵容器中，在28℃条件下厌氧培养30天，直到发酵装置中不再产生气泡，制得农用乳酸菌微生物肥。
实施例4
取实施例1至3中获得的农用乳酸菌微生物肥，分别与水按1：500倍的比例稀释，得样品1、样品2和样品3，利用样品1、样品2和样品3分别对3组番茄幼苗进行灌根，且均喷施1次，番茄幼苗生长过程中，均未出现根腐病、青枯病等疫病，而将现有乳酸菌微生物肥施用于番茄幼苗，番茄幼苗均出现根腐病、青枯病等疫病，另外，多数现有乳酸菌微生物肥与水的稀释比例均为1：200-300倍。
实施例5
取实施例1至3中获得的农用乳酸菌微生物肥，按每亩5L的用量，分别于翻地时喷施于三片土壤内，且均喷施1次，均能达到了控制土传传染病的效果。
而利用现有乳酸菌微生物肥达到同等效果，每亩使用量在10-15L左右，并且，有的品种需要多次喷施。
实施例6
取实施例1至3中获得的农用乳酸菌微生物肥和现有乳酸菌微生物肥，均与水按1：500倍的比例稀释，得样品4、样品5、样品6和样品7，利用样品4、样品5、样品6和样品7分别对3组番茄进行叶面喷施，10天1次，每个生长季喷施3次，样品4、样品5和样品6能够起到防治叶斑病、炭疽病、霜霉病的效果，且相比样品7喷施的番茄，样品4、样品5、样品6喷施的番茄的叶片浓绿，生长旺盛，果实口感更好。
乳酸菌培养方法 4篇：
乳酸菌培养基和乳酸菌发酵的方法
第一、技术领域
本发明涉及菌类培养领域，具体涉及一种乳酸菌培养基和乳酸菌发酵的方法。
第二、背景技术
长期以来，饲料中添加抗生素对畜牧业发展起到了巨大的推动作用，但随着饲用抗生素的广泛应用，造成动物肠道菌群失调、二重感染以及细菌耐药性等不良反应也逐渐凸显，给养殖业和饲料工业带来了严重威胁。因此，开发无毒副作用、无污染和无残留的抗生素替代品，对畜牧业意义重大。
植物乳杆菌是人和动物肠道内主要的益生菌群，具有维持肠道内菌群平衡、提高机体免疫力和促进营养物质吸收等多种功能;同时还能产生细菌素等抑菌物质，抑制大肠杆菌和沙门氏菌等病原菌的生长，改善肠道微环境。另外，乳酸菌为消化道内正常存在的一类微生物，在肠黏膜具有较强的耐受和定植能力，并且是一种兼性厌氧的乳酸菌，与厌氧、培养保存条件苛刻的双歧杆菌相比，更适合于生产和应用。传统的静置发酵法得到的发酵液中菌体的发酵密度较低，植物乳杆菌活菌数在5-10亿左右，为了得到更多的活菌数，就需要增加生物反应器的体积或增加发酵次数等，但这增加了生物量的分离费用，延长了生产周期，从而提高了生产成本、降低了生产效率。植物乳杆菌目前仍难以实现高密度发酵，难以实现的主要问题是发酵培养基及其发酵方法，发酵后期营养物质不足和代谢产物(主要是乳酸)积累抑制菌体生长，导致高密度发酵难以实现。
第三、发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的难以实现高密度发酵的问题，提供一种新的乳酸菌培养基和使用该乳酸菌培养基的乳酸菌发酵的方法，从而实现了乳酸菌的高密度发酵和乳酸菌发酵液的长时间保存。
本发明的发明人意外发现，通过向乳酸菌培养基(通常为MRS培养基)中加入一定量的碳酸钙和淀粉，并且上调葡萄糖、酵母浸粉和硫酸镁的含量，无须加入牛肉粉和蛋白胨，就可以有效地促进菌体生长，实现高密度发酵，并且乳酸菌发酵液的保存时间(低温或常温)也获得了显著的延长;并且，不加入牛肉粉和蛋白胨可以使得成本显著降低。
由此，本发明提供一种乳酸菌培养基，其中，该乳酸菌培养基包含葡萄糖、酵母浸粉、碳酸钙、淀粉、硫酸镁、醋酸钠、柠檬酸铵、磷酸氢二钾、硫酸锰和吐温，其中所述葡萄糖的含量为25-60g/L，所述酵母浸粉的含量为10-50g/L，所述硫酸镁的含量为0.1-0.3g/L，所述碳酸钙的含量为5-40g/L，所述淀粉的含量为5-50g/L。
本发明还提供一种乳酸菌发酵的方法，其中，该方法包括：将乳酸菌接种至本发明所述的乳酸菌培养基中进行发酵培养。
将乳酸菌在本发明的乳酸菌培养基中培养可以实现高密度发酵，提高发酵设备的利用效率，无须加入牛肉粉和蛋白胨，从而使得发酵成本显著降低;并且可以有效延长乳酸菌发酵液的保存时间，确保乳酸菌发酵液中的活菌数不会显著下降。本发明所述培养和储存方法简单合理，操作快捷，成本较低，并且可以在中试大试规模中稳定实施，具有很好的应用前景。
本发明的其他技术特征和优点将在具体实施方式中进行说明。
第四、具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明提供了一种乳酸菌培养基，其中，该乳酸菌培养基包含葡萄糖、酵母浸粉、碳酸钙、淀粉、硫酸镁、醋酸钠、柠檬酸铵、磷酸氢二钾、硫酸锰和吐温，其中所述葡萄糖的含量为25-60g/L，所述酵母浸粉的含量为10-50g/L，所述硫酸镁的含量为0.1-0.3g/L，所述碳酸钙的含量为5-40g/L，所述淀粉的含量为5-50g/L。
根据本发明的乳酸菌培养基，所述乳酸菌培养基可以像现有技术一样含有牛肉粉和蛋白胨，但是对于本申请的乳酸菌培养基的配方来说，不添加牛肉粉和蛋白胨依然可以有效地促进菌体生长，实现高密度发酵，并且可以使成本显著降低。因此，根据本发明一种优选的实施方式，本发明的乳酸菌培养基不含有牛肉粉和蛋白胨。
根据本发明的乳酸菌培养基，本发明的发明人发现葡萄糖的含量应当相较于市售的乳酸菌培养基即MRS肉汤培养基中葡萄糖的含量提高，提高到25-60g/L的范围即可以有效地提高发酵效率，延长乳酸菌发酵液的保存时间。在优选的情况下，所述葡萄糖的含量为30-55g/L，更优选为35-50g/L。
根据本发明的乳酸菌培养基，所述“酵母浸粉”为本领域常规的含义，即为本领域常规所说的“粉状酵母浸出物”。本发明可以使用各种商购的酵母浸粉，例如可以用厂家为安琪酵母公司牌号为812的酵母浸粉。
根据本发明的乳酸菌培养基，本发明的发明人发现，当将酵母浸粉的含量大大提高到10-50g/L的范围内时(市售的MRS肉汤的酵母浸粉含量只有5g/L)，配合本发明的培养基中其他的成分，非常有利于菌体富集，并且可以有效地实现高密度发酵并延长乳酸菌发酵液的保存时间，确保乳酸菌发酵液的一定活菌数。在优选的情况下，所述酵母浸粉的含量为20-40g/L，更优选为25-35g/L。
根据本发明的乳酸菌培养基，本发明的发明人意外地发现，向乳酸菌培养基中加入碳酸钙，并将碳酸钙的用量控制在5-40g/L时，并配合本发明的乳酸菌培养基中的其它成分，可以有效地提高发酵效率，实现高密度发酵并延长乳酸菌发酵液的保存时间。在优选的情况下，所述碳酸钙的含量为10-30g/L，更优选为15-25g/L。
根据本发明的乳酸菌培养基，本发明的发明人意外地发现，向乳酸菌培养基中加入淀粉，并将淀粉的用量控制在5-50g/L时，并配合本发明的乳酸菌培养基中的其它成分，可以有效地延长乳酸菌发酵液在低温或常温下的保存时间，提高发酵效率。在优选的情况下，所述淀粉的含量为10-30g/L，更优选为15-25g/L。
根据本发明的乳酸菌培养基，本发明的发明人发现，将市售的MRS肉汤中硫酸镁的含量略微地提高，并配合本发明的乳酸菌培养基中的其它成分，可以有效地提高发酵效率并延长保存时间。优选的，所述硫酸镁的含量为0.15-0.25g/L，更优选为0.18-0.22g/L。
根据本发明的乳酸菌培养基，所述葡萄糖、酵母浸粉、硫酸镁、碳酸钙和淀粉的含量满足上述范围时便可以实现本发明的目的，在更为优选的情况下，还应当控制它们之间的配比，例如，所述葡萄糖、酵母浸粉、硫酸镁、碳酸钙和淀粉的含量比优选为1：0.65-0.85：0.004-0.006：0.3-0.7：0.3-0.7，更优选为1：0.7-0.8：0.0045-0.0055：0.4-0.6：0.4-0.6。
根据本发明的乳酸菌培养基，醋酸钠、柠檬酸铵、磷酸氢二钾、硫酸锰和吐温80的含量按照本领域常规的乳酸菌培养基中的含量进行选择，例如可以参考市售MRS肉汤中醋酸钠、柠檬酸铵、磷酸氢二钾、硫酸锰和吐温80的含量。例如，在本发明的乳酸菌培养基中，所述醋酸钠的含量为3-7g/L，所述柠檬酸铵的含量为1-3g/L，所述磷酸氢二钾的含量为1-3g/L，所述硫酸锰的含量为0.03-0.07g/L，以及所述吐温为吐温80，所述吐温80的含量为0.5-1.5ml/L;优选地，所述醋酸钠的含量为4-6g/L，所述柠檬酸铵的含量为1.5-2.5g/L，所述磷酸氢二钾的含量为1.5-2.5g/L，所述硫酸锰的含量为0.04-0.06g/L，以及所述吐温80的含量为0.8-1.2ml/L。
本发明还提供了一种乳酸菌发酵的方法，其中，该方法包括：将乳酸菌接种至本发明所述的乳酸菌培养基中进行发酵培养。
乳酸菌发酵的具体方法和参数的控制都可以按照本领域常规的方式进行。在将乳酸菌接种至本发明提供的乳酸菌培养基进行扩培之前，还可以将乳酸菌菌种在常规的MRS培养基中进行摇瓶培养，其中，所述摇瓶培养培养的级数可以为1-3级，本领域技术人员可以根据实际情况进行具体的选择。
根据本发明的乳酸菌发酵的方法，所述扩培可以在扩培罐中进行，在扩培罐中发酵的条件优选为：接种量为0.15-0.25体积%，温度为36-37.8℃，搅拌速度为30-110rpm，培养时间为10-20小时。
通过使用本发明的乳酸菌培养基，在乳酸菌发酵时，可以有效地促进菌体生长，实现高密度发酵，达到1012cfu/mL级别的菌落数;并且乳酸菌发酵液的保存时间也获得了显著的延长，达到在15℃下至少存放60天而菌落数没有明显下降。
通过使用本发明的乳酸菌培养基，所述乳酸菌优选为乳杆菌，更优选为植物乳杆菌。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
在以下实施例中，采用以下材料：
(1)种子液：使用来自于中粮营养健康学院菌种保藏中心的植物乳杆菌(编号为BC00171，以下记为乳杆菌BC)制备若干完全相同的冻存管备用;
(2)市售MRS肉汤：厂家为北京陆桥技术有限公司，牌号为CM187。
(3)酵母浸粉：厂家为安琪酵母公司，牌号为812，在表1中，除了对比例1中使用的是上述市售MRS肉汤中含有的酵母粉，其他实施例和对比例中均使用的是酵母浸粉。
在以下实施例中，培养终点的培养基的OD值使用分光光度计(上海精密科学仪器有限公司，722N沪制01040048，编号070708040154)进行测量，测量时取培养终点的培养基稀释26倍，然后用滤纸过滤之后(以排除碳酸钙的影响)测得OD值，将5个平行样的OD值分别去掉一个最高值去掉一个最低值后取平均值。
实施例1A-7A和对比例1A-2A用于说明实验室规模下的情况。
实施例1A
(1)按照表1所示的配方配制乳酸菌培养基放入扩培罐中。
(2)将预先制备的5份冻存管(为了保证结果的准确性而设置的平行实验)分别依次接入一级摇瓶、二级摇瓶和扩培罐，按照以下的条件进行发酵：
一级摇瓶：培养基为市售MRS肉汤，成分如表1所示;接种量为0.2%，在35℃下静置培养16小时，并且测定OD值满足0.3-0.65的范围即可;
二级摇瓶：培养基为市售MRS肉汤，成分如表1所示;接种量为0.2%，在35℃下静置培养16小时，并且测定OD值满足0.3-0.65的范围即可;
扩培罐：培养基为如表1所示配方的乳酸菌培养基;接种量为0.2%，在37℃下，以80rpm的速度培养18小时，并且测定OD值满足0.3-0.65的范围即可。培养基的体积占扩培罐容量的80%，所用扩培罐的容量为500mL。
(3)进行如下测试：
a、测试培养终点的菌落数，将5个平行样的培养终点的菌落数分别去掉一个最高值去掉一个最低值后取平均值填入表2;
b、将培养终点后的发酵液在15℃下静置保存，将5个平行样分别在第10、15、30、60和90天时取出，晃匀后测试发酵液中的菌落数并填入表2。
实施例2A-7A和对比例1A-2A
与实施例1A的操作方式相同，唯一不同的是，扩培罐中乳酸菌培养基的配方按照表1中各自的配方进行。
将测试结果计入表2中。
结合表1和表2可以看出，在实验室规模下，采用本发明的乳酸菌培养基进行乳酸菌发酵所得到的发酵液中的菌落数可以达到1012cfu/mL数量级;而使用市售的MRS肉汤进行发酵的对比例1A所得到的发酵液中的菌落数只有109cfu/mL数量级，与本申请有1000倍的差异;而没有添加淀粉的对比例2A所得到的发酵液中的菌落数只有1010cfu/mL数量级，与本申请有100倍的差异。可以看出，在实验室条件下，本申请的乳酸菌培养基能够有效地实现高密度发酵，从而显著地提高发酵设备的利用效率。
并且，从表2可以看出，当所得的发酵液存放不同的天数时，本申请的发酵液的菌落数在90天内都没有发生显著的下降，更没有发生数量级的改变;而使用市售的MRS肉汤进行发酵的对比例1A所得到的发酵液中的菌落数在90天后数量级降低了1，菌落数是最初的35分之一;而没有添加淀粉的对比例2A所得到的发酵液中的菌落数在90天后也降低了1个数量级，菌落数是最初的10分之一。
通过比较实施例1A-7A可以看出，实施例4A和实施例5A均采用了相对于实施例1A-3A更高或更低的物料含量，可以看出发酵终点的菌落数和存放90天的菌落数均相对于实施例1A-3A有一定的下降。实施例6A和实施例7A相对于实施例1A分别增加了牛肉膏和蛋白胨，可以看出，实施例6A和实施例7A发酵终点的菌落数和存放90天的菌落数与实施例1A相比大致相等但仍有略微的下降，但是牛肉膏和蛋白胨是非常昂贵的两种原料，它们的加入会大大增加乳酸菌培养基的成本。例如对比例1A比实施例1A增加了牛肉膏和蛋白胨，虽然在葡萄糖、酵母粉、硫酸镁、碳酸钙和淀粉这五种原料的用量上都远低于本申请，但通过成本核算发现，对比例1A的MRS肉汤的成本仍然比实施例1A的乳酸菌培养基的成本还高了约10%。
实施例1B-7B和对比例1B-2B用于说明中试规模下的情况。
实施例1B-7B和对比例1B-2B与实施例1A-7A和对比例1A-2A的操作方式相同，唯一不同的是，将扩培罐改为容量为5L的扩培罐。所测得的结果计入表3中。
表3
从表3可以看出，在中试规模下使用本发明的乳酸菌培养基进行乳酸菌发酵的结果与表2所示实验室条件下的结果基本一致，仍然可以达到1012cfu/mL数量级，与对比例1B有1000倍的差异，与对比例2B有100倍的差异。可以看出，在中试下，本申请的乳酸菌培养基能够有效地实现高密度发酵，从而显著地提高发酵设备的利用效率。在保存实验中，与表2相同地，本申请没有发生数量级的改变，对比文件1和对比文件2均有数量级的改变，并且分别降到了最初值的33分之一和11分之一。实施例1B-7B之间的关系也与表2中相一致。
实施例1C-7C和对比例1C-2C用于说明大试规模下的情况。
实施例1C-7C和对比例1C-2C与实施例1A-7A和对比例1A-2A的操作方式相同，所不同的是，将扩培罐改为容量为500L的扩培罐，并且在扩培到第12小时时，发酵液的pH值开始升高，结束培养。所测得的结果计入表4中。
表4
从表4可以看出，在大试规模下使用本发明的乳酸菌培养基进行乳酸菌发酵的结果与表2所示实验室条件下的结果基本一致，仍然可以达到1012cfu/mL数量级，与对比例1B有1000倍的差异，与对比例2B有100倍的差异。可以看出，在中试下，本申请的乳酸菌培养基能够有效地实现高密度发酵，从而显著地提高发酵设备的利用效率。在保存实验中，与表2相同地，本申请没有发生数量级的改变，对比文件1和对比文件2均有数量级的改变，并且分别降到了最初值的31分之一和11分之一。实施例1B-7B之间的关系也与表2中相一致。
综合上述实验室规模、中试规模和大试规模的实验可以看出，本申请的乳酸菌培养基可以在中试大试规模中稳定实施，具有很好的应用前景。将乳酸菌在本发明的乳酸菌培养基中培养可以实现高密度发酵，提高发酵设备的利用效率，无须加入牛肉粉和蛋白胨，从而使得发酵成本显著降低;并且可以有效延长乳酸菌发酵液的保存时间。
另外，还可以将发酵终点后的发酵液进行离心得到菌泥，将菌泥进行保存、运输等后续操作更为方便。并且发明人已经实验证明，菌泥的存在形式并不会对菌落数产生影响，90天的保存情况与发酵液的保存情况一致。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。
乳酸菌培养方法 5篇：
液态发酵食用菌丝制备高效乳酸菌培养基的方法
第一、技术领域
本发明涉及一种食用菌丝制备高效液态培养乳酸菌培养基的方法。
第二、背景技术
乳酸菌是一种可以提高动物免疫能力、消化能力以及代谢能力等，且具有严格营养要求的革兰氏阳性菌。选择乳酸菌培养基时应该有利于乳酸菌的生长和快速繁殖，同时能适当的提高菌体细胞的抗逆性。在工业生产中应用的培养基，培养基必须成本低、原料易得、菌体获得率高。乳酸菌培养基虽种类众多，但基础培养基大致可以分为4类：乳清蛋白培养基、脱脂乳乳酶解液培养基、脱脂乳培养基、MRS乳酶解液培养基。MRS培养基适合各种乳杆菌生长，但乳酸菌在培养基中生长速度慢、配方复杂、成本高，且因口感不佳并不适合于食品生产中应用。
脱脂乳培养基是国内乳酸菌工业生产中主要使用的一种培养基，脱脂乳培养基虽然成本低，原料经济易得、但是粘度大、不利于乳酸菌浓缩分离。乳清蛋白培养基是国外乳酸菌工业生产中主要使用的一种培养基，但乳清蛋白培养基中的乳清蛋白易发生热变性而沉淀、导致乳酸菌活菌数低。
目前国内繁殖乳酸菌的培养基大部分是在经典的MRS培养基的基础上进行改良而来，因大部分添加酵母粉、牛肉膏等昂贵成分，培养基成本可占生产成本的10%以上。传统MRS培养基成分复杂，培养乳酸菌成本高，使得规模化工业化培养乳酸菌面临经济成本问题。为了降低成本，满足生产需要或提高目的物产量，很多研究对MRS培养基进行优化和调整。故如何优化乳酸菌培养基配方并能够降低成本、提高活菌数和乳酸产量，成为乳酸菌培养基研究的热点。
第三、发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术中MRS培养基成分复杂，培养乳酸菌成本高的缺陷，提供一种食用菌丝制备高效液态培养乳酸菌培养基的方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：
一种食用菌丝制备高效液态培养乳酸菌培养基的方法，包括以下步骤：
S1、称取适量食用菌丝体研磨成浆，向菌丝体浆中加入适量水，煮沸15～25分钟，然后用两层医用纱布过滤，通过补充水将滤液的最终体积定容至合适体积;
S2、将pH值调节至6.2-6.8之间，得到滤液培养基，将其分装到50mL锥形瓶中，121℃灭菌20min;
S3、将乳酸菌种子液接种到上述滤液培养基中，并在37℃下培养。
进一步的，S1中所述的食用菌丝为液态发酵香菇菌丝体，在破壁机中加水高速研磨制成菌丝体浆，S3中的乳酸菌为植物乳杆菌LP-G18。
进一步的，香菇菌丝体的用量为225g/1000mL滤液培养基。
进一步的，S1中，定容前加入乙酸钠4～6g/L、核黄素0.4～0.6mg/L。
进一步的，S1中所述的食用菌丝为杏鲍菇菌丝体，在搅拌器中加水高速研磨制成菌丝体浆，S3中的乳酸菌为鼠李糖乳酸菌。
进一步的，S1中，定容前加入柠檬酸胺1.5～2.5g/L、MgSO4·7H2O 0.1～0.3mg/L。
对比文件2015107987146公开了一种低成本高效乳酸菌培养基及用途，公开了一种将杏鲍菇加入到乳酸菌培养基中，但是其加入的杏鲍菇的子实体，而食用菌的菌丝体中多糖含量高，还含有丰富的蛋白质和游离氨基酸，尤其是天冬氨酸，谷氨酸和精氨酸等乳酸菌生长所需氨基酸，提供良好的营养成分而且菌丝体的发酵周期短，投入成本较低，生产操作简单，产量较大，容易控制，比较适合工业化生产等，可缓解子实体带来的栽培周期长，人工投入大，易受气候条件的限制和造成重金属富集污染等弊端。因此本申请利用食用菌的液态发酵生产的菌丝体来制成相应的培养基，以提高乳酸菌的生存条件。
本发明所达到的有益效果是：本发明制备的液态培养乳酸菌培养基成本低廉，制作简单，菌丝体中丰富的蛋白质和游离的核苷酸可有效减少乳酸菌死亡数量，推迟死亡时间，避免菌体退化、变异;与普通MRS培养基进行比较，培养18h之后OD600值明显优于MRS培养基，最终优化后的培养基OD600值是普通的MRS培养基OD600值的1.05倍以上。
第四、附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1是实施例1的培养基与MRS培养基的对比;
图2是实施例2的培养基与MRS培养基的对比。
第五、具体实施方式
以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
一种液态发酵食用菌丝制备高效乳酸菌培养基的方法，包括以下步骤：
S1、称取适量液态发酵的香菇菌丝体225g，在破壁机中加水高速研磨制成菌丝体浆，向菌丝体浆中加入适量水，煮沸15～25分钟，然后用两层医用纱布过滤，加入乙酸钠5g、核黄素0.6mg，通过补充水将滤液的最终体积定容至1000mL;
S2、将pH值调节至6.2-6.4之间，得到滤液培养基，将其分装到50mL锥形瓶中，121℃灭菌20min;
S3、将植物乳杆菌LP-G18种子液接种到上述滤液培养基中，并在37℃下培养。
杏鲍菇的菌丝体中含有丰富的蛋白质和游离氨基酸，尤其是天冬氨酸、谷氨酸和精氨酸，本实施例的培养基OD值是普通的MRS培养基OD值1.05倍，在培养后期优化培养基中的乳酸菌存活率更高。
实施例2
一种液态发酵食用菌丝制备高效乳酸菌培养基的方法，包括以下步骤：
S1、称取适量液态发酵的香菇菌丝体200g，加水高速研磨制成菌丝体浆，向菌丝体浆中加入适量水，煮沸15～25分钟，然后用两层医用纱布过滤，加入柠檬酸铵1.5g/L，MgSO4·7H2O 0.3mg，通过补充水将滤液的最终体积定容至1000mL;
S2、将pH值调节至6.8之间，得到滤液培养基，将其分装到50mL锥形瓶中，121℃灭菌20min;
S3、将鼠李糖乳酸菌种子液接种到上述滤液培养基中，并在37℃下培养。
香菇菌丝体中含有丰富的氨基酸、维生素和矿物质本实施例的培养基OD值是普通的MRS培养基OD值1.1倍，在培养后期优化培养基中的乳酸菌存活率更高，是一种优良的乳酸菌培养基，适用于工业大规模生产。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
乳酸菌培养方法 6篇：
动物饲料生产用乳酸菌培养基及其制备和应用
第一、技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种动物饲料生产用乳酸菌培养基及其制备和应用。
第二、背景技术
以乳酸菌作为益生菌已广泛使用于养殖业中。由于乳酸菌在代谢过程中会产生乙酸、乳酸等酸性物质，使pH降低，可调节肠道酸碱环境，促进饲料的消化吸收，同时乳酸菌在代谢过程中也会产生一些抗菌肽、细菌素、生长因子等物质，这些产物可在一定程度上抑制有害菌的生长，提高动物体的免疫力。目前水产养殖业多用乳酸菌治疗白便等水产生物常见肠道疾病;同时乳酸菌在畜禽上也大量使用，特别是断奶仔猪教槽料的发酵上。
现阶段乳酸菌发酵培养基多用MRS培养基，其中碳源和氮源的价格较为昂贵，为在大量生产过程中降低成本，目前已有一些专利采用了豆粕、鱼粉、中药粉等物质来提高乳酸菌的活菌数，效果也确实得到了一定改善。然而现有技术手段在成本控制上还不具备优势，且无法满足保持或促进乳酸菌生长及其对病原菌的抑制作用。
第三、发明内容
鉴于此，有必要针对上述问题，提供一种在降低饲用乳酸菌培养基原料成本的同时，能有效保持或促进乳酸菌生长及其对病原菌的抑制作用，从而有利于推广至大规模生产及应用的动物饲料生产用乳酸菌培养基及其制备和应用。
为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：
本发明的动物饲料生产用乳酸菌培养基，其配方为：玉米粉25-35g/L、豆粕55-65g/L、糖蜜10-18g/L、果糖10-18g/L、K2HPO4·3H2O 0-2g/L、乙酸钠4-7g/L、柠檬酸二铵0-3g/L、MgSO4·7H2O 0-0.5g/L、MnSO4·H2O 0.2-0.5g/L、吐温-80 1-2ml/L、抗坏血酸0.5-3g/L，以水配制，乳酸菌培养基的pH值控制在6.8-7.2。
作为优选的，动物饲料生产用乳酸菌培养基，其配方为：玉米粉30g/L、豆粕60g/L、糖蜜15g/L、果糖15g/L、K2HPO4·3H2O 2g/L、乙酸钠5g/L、柠檬酸二铵2g/L、MgSO4·7H2O0.5g/L、MnSO4·H2O 0.5g/L、吐温-80 1ml/L、抗坏血酸1g/L，以水配制。
作为优选的，配方中组分：玉米粉30g/L、豆粕60g/L、糖蜜15g/L、果糖15g/L。
作为优选的，豆粕的蛋白含量大于38%，玉米粉的碳水化合物含量不低于40%。
上述乳酸菌培养基的制备，步骤如下：
1)称取豆粕，加10-12倍蒸馏水，打成浆，用六层纱布过滤，滤液待用;
2)称取玉米粉，加9-11倍蒸馏水，煮沸至粘稠，用六层纱布过滤，放凉，滤液待用;
3)称取L-抗坏血酸，溶于适量蒸馏水中，过滤除菌，滤液待用;
4)分别称取糖蜜、果糖、K2HPO4·3H2O、乙酸钠、柠檬酸二铵、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、吐温-80，溶于适量蒸馏水中，加入1)、2)中的溶液，加适量蒸馏水，混匀，灭菌;
5)将4)中溶液灭菌后，冷却至50℃或以下，加入3)所得滤液，混匀。
采用上述培养基培养乳酸菌的方法，具体为：
取乳酸菌于MRS平板进行三区划线，培养活化;在平板上挑取单菌落接种于MRS培养基中培养后，以1-2%的接种量接种于MRS培养基中培养后，再以2-5%的接种量接种于本发明的培养基中培养。
本发明的有益效果为：
本发明的培养基采用玉米粉和豆粕作为培养基氮源，并对培养基的碳源组分进行了优化，可以在降低培养基原料成本的同时，保持或提高乳酸菌的活菌数，并且对于水产养殖常见致病菌(如副溶血弧菌)的抑制效果也起到了促进作用。
第四、附图说明
图1为实施例1的培养基培养乳酸菌的抑菌效果图，图中“新培养基”为本实施例的培养基;
图2为实施例2的培养基培养乳酸菌的抑菌效果图，图中“新培养基”为本实施例的培养基;
图3为实施例3的培养基培养乳酸菌的抑菌效果图，图中“新培养基”为本实施例的培养基;
图4为实施例4的培养基培养乳酸菌的抑菌效果图，图中“新培养基”为本实施例的培养基。
第五、具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案作进一步清楚、完整地描述。需要说明的是，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
上述的乳酸菌发酵培养基的制备，步骤如下：
1)取60g豆粕，加500ml蒸馏水，打成浆，用六层纱布过滤，滤液待用;
2)取30g玉米粉，加300ml蒸馏水，煮沸至粘稠(大约20min)，用六层纱布过滤，放凉，滤液待用;
3)称取L-抗坏血酸1g，溶于10ml蒸馏水中，过滤除菌，滤液待用;
4)称取糖蜜15g、果糖15g、K2HPO4·3H2O 2g、乙酸钠5g、柠檬酸二铵2g、MgSO4·7H2O0.5g、MnSO4·H2O 0.5g、吐温-80 1ml，溶于200ml蒸馏水中，加入1)、2)所得滤液，加入蒸馏水定容至990ml，混匀，121℃灭菌15分钟;
5)将4)中溶液灭菌后，冷却至50℃，加入3)所得滤液，混匀。
采用上述培养基进行乳酸菌培养及测试，具体为：
1.1本实验受试菌株：唾液乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、粪肠球菌。主要来源：本实验室从水产动物肠道内分离获得的菌种，并于自有实验室-80℃的甘油管保藏。
1.2本实验所用指示菌：副溶血弧菌ATCC 17802。主要来源：购买于环凯试剂公司。
1.3实验方案：先将上述四株乳酸菌用MRS培养基进行三区划线活化，37℃培养24h;然后挑取单菌落于MRS培养基2ml EP管中，37℃培养18h;再以2%的接种量接于MRS培养基(100ml离心管)，37℃培养18h;最后以3%的接种量接种于本实施例制备得的培养基中，37℃培养，不同时间点进行取样，测定抑菌效果，并测定48h活菌数。
1.4实验结果：a.48h唾液乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、粪肠球菌活菌数分别为(单位CFU/ml，下同)：4.10×109、4.5×109、4.7×109、4.3×109，如表1所示;b.抑菌效果见图1所示。
实施例2
1)本实施例的培养基配方如下：玉米粉27g/L、豆粕55g/L、糖蜜12g/L、果糖12g/L、K2HPO4·3H2O 2g/L、乙酸钠5g/L、柠檬酸二铵2g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、MnSO4·H2O 0.5g/L、吐温-80 1ml/L、抗坏血酸1g/L，以水配制。配制方法与实施例1相同。
1.1本实验受试菌株：与实施例1相同。
1.2本实验所用指示菌：与实施例1相同。
1.3实验方案：本实施例与实施例1的区别在于：最后以3%的接种量接种于本实施例制备所得的培养基中，37℃培养，不同时间点进行取样，测定抑菌效果，并测定48h活菌数。
1.4实验结果：a.48h唾液乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、粪肠球菌活菌数分别为：4.35×109、4.7×109、4.5×109、4.3×109，如表1所示;b.抑菌效果见图2所示。
实施例3
本实施例的培养基配方如下：玉米粉35g/L、豆粕65g/L、糖蜜18g/L、果糖18g/L、K2HPO4·3H2O 2g/L、乙酸钠5g/L、柠檬酸二铵2g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、MnSO4·H2O 0.5g/L、吐温-80 1ml/L、抗坏血酸1g/L，以水配制。配制方法与实施例1相同。
1.1本实验受试菌株：与实施例1相同。
1.2本实验所用指示菌：与实施例1相同。
1.3实验方案：本实施例与实施例1的区别在于：最后以3%的接种量接种于本实施例制备得到的培养基中，37℃培养，不同时间点进行取样，测定抑菌效果，并测定48h活菌数。
1.4实验结果：a.48h唾液乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、粪肠球菌活菌数分别为：4.2×109、4.8×109、4.9×109、4.4×109，如表1所示;b.抑菌效果见图3所示。
实施例4
本实施例的培养基配方如下：胰蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母提取物5.0g、糖蜜15g/L、果糖15g/L、K2HPO4·3H2O 2g/L、乙酸钠5g/L、柠檬酸二铵2g/L、MgSO4·7H2O0.5g/L、MnSO4·H2O 0.5g/L、吐温-80 1ml/L，以水按常规配制。
1.1本实验受试菌株：与实施例1相同。
1.2本实验所用指示菌：与实施例1相同。
1.3实验方案：本实施例与实施例1的区别在于：最后以3%的接种量接种于本实施例制备得到的培养基中，37℃培养，不同时间点进行取样，测定抑菌效果，并测定48h活菌数。
1.4实验结果：a.48h唾液乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、粪肠球菌活菌数分别为：3.6×109、3.5×109、4.2×109、4.0×109，如表1所示;b.抑菌效果见图4所示.
对照例1
对照例为常用的MRS培养基，具体配方如下：胰蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母提取物5.0g，葡萄糖20.0g、K2HPO4·3H2O 2g/L、乙酸钠5g/L、柠檬酸二铵2g/L、MgSO4·7H2O0.5g/L、MnSO4·H2O 0.5g/L、吐温-80 1ml/L，以水配制。
1.1本实验受试菌株：与实施例1相同。
1.2本实验所用指示菌：与实施例1相同。
1.3实验方案：本实施例与实施例1的区别在于：最后以3%的接种量接种于本实施例制备得到的培养基中，37℃培养，不同时间点进行取样，测定抑菌效果，并测定48h活菌数。
1.4实验结果：a.48h唾液乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、粪肠球菌活菌数分别为：3.3×109、3.2×109、3.9×109、3.6×109，如表1所示;b.抑菌效果见图1-图4中的MRS曲线。
表1各实施例48h乳酸菌活菌数(CFU/ml)
唾液乳杆菌植物乳杆菌鼠李糖乳杆菌粪肠球菌实施例14.10×1094.5×1094.7×1094.3×109实施例24.35×1094.7×1094.5×1094.3×109实施例34.2×1094.8×1094.9×1094.4×109实施例43.6×1093.5×1094.2×1094.0×109对照例13.3×1093.2×1093.9×1093.6×109
由表1中可以看出，本发明的实施例1-3配方在测试中，48h活菌数均高于采用对照例1的MRS培养基培养。
实施例4中，当使用胰蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母提取物5.0g替代玉米粉和豆粕，并且不添加抗环血酸下，与MRS培养基进行比较，只更改碳源，氮源不做任何调整，看其结果是否有所改变。测试结果实施例4的活菌数相比实施例1-3有所下降，但略好于采用对照例1中采用MRS培养基培养;
从图1-图4可以看出本发明实施例1-4的抑菌效果均接近甚至高于对照例1中MRS培养基培养的抑菌效果。
综上，在相同培养条件下，以玉米粉和豆粕为氮源，以果糖和糖蜜为碳源，不仅可以降低生产成本，还可以保持或提高多种乳酸菌的生长性能，以及保持或增加对副溶血弧菌的抑菌效果。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
