抑制发炎反应和抗阴道炎的含鼠李糖乳杆菌组合物及应用
技术领域
本申请涉及微生物技术领域，特别涉及一种抑制发炎反应及抗阴道炎的含鼠李糖乳杆菌组合物及应用。
背景技术
女性生殖道菌群对女性健康有重大影响。阴道菌群失衡导致的阴道细菌、真菌或霉菌的感染性疾病是目前影响女性健康的一类主要疾病，其中居于前三位的阴道炎、宫颈炎和盆腔炎均与阴道菌群失衡有关。目前临床上针对细菌性、真菌性或霉菌性阴道感染疾病的治疗手段主要是采用抗生素治疗，抗生素治疗改变了阴道的微生态环境并造成菌群失调，从而导致治疗效果不佳、复发率高等问题，效果欠佳，造成阴道炎患者久治不愈，使患者对阴道炎的治疗失去信心。研究表明，阴道炎的发生和宿主、环境、病因三方面因素有关，其中宿主和微生物菌群的相互作用是阴道炎发生的核心，因此恢复患者的阴道微生态环境对阴道炎的治疗具有重要意义。
益生菌是指宿主摄入足够数量后，通过改变宿主某一部位菌群组成，进而改善体内微生物菌群平衡而对其健康产生积极作用的一类活性微生物的总称。目前缺乏可有效抑制发炎反应及抗阴道炎的益生菌。
发明内容
本申请的目的在于提供一种抑制发炎反应及抗阴道炎的含鼠李糖乳杆菌组合物及应用，以解决缺乏可有效抑制发炎反应及抗阴道炎益生菌的问题。
第一方面，本申请实施例提供一种抑制发炎反应及抗阴道炎的含鼠李糖乳杆菌组合物，包括：鼠李糖乳杆菌Probio-M9(Lactobacillus rhamnosus Probio-M9)，以及，赋形剂或稀释剂；其中，所述鼠李糖乳杆菌Probio-M9保藏于在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.18639；分类命名为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)；保藏时间：2019年10月08日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；该菌株的检测结果为存活。
进一步地，所述组合物包括食品组合物或医药组合物。
进一步地，所述医药组合物的剂型包括固体剂型、液体剂型或外用剂型。
进一步地，所述外用剂型包括乳膏、喷雾剂、凝胶、卫生棉条、卫生巾、散剂或霜剂。
进一步地，所述组合物包括由所述鼠李糖乳杆菌Probio-M9发酵食品原料得到的鼠李糖乳杆菌Probio-M9及代谢产物，以及，赋形剂或稀释剂，其中，发酵后的鼠李糖乳杆菌Probio-M9及代谢产物经过高温灭活处理。
进一步地，所述赋形剂和所述稀释剂的状态至少包括固体、液体和粉末中的一种。
第二方面，本申请提供含鼠李糖乳杆菌组合物在抑制发炎反应中的应用。
第三方面，本申请提供含鼠李糖乳杆菌组合物在抗因微生物菌群失衡引起的阴道炎中的应用。
由以上技术方案可知，本申请实施例提供一种抑制发炎反应及抗阴道炎的含鼠李糖乳杆菌组合物及应用。所述组合物包括鼠李糖乳杆菌Probio-M9，以及，赋形剂或稀释剂。体外实验显示鼠李糖乳杆菌Probio-M9具有耐酸性和胆盐耐受性。本申请可对阴道炎致病菌白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等常见病原菌产生抑制，进而抑制发炎反应及阴道黏膜细胞发炎的症状。本申请可直接接触于患处的益生菌赋形剂或稀释剂的形式存在。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为致病菌活菌数空白对照检测结果；
图2为液体配方与三株致病菌共培养期间活菌数检测结果；
图3为液体配方与三株致病菌共培养期间存活率检测结果；
图4为固体配方与三株致病菌共培养期间活菌数检测结果；
图5为固体配方与三株致病菌共培养期间存活率检测结果。
具体实施方式
本申请实施例提供一种抑制发炎反应及抗阴道炎的含鼠李糖乳杆菌组合物，包括：鼠李糖乳杆菌Probio-M9(Lactobacillus rhamnosus Probio-M9)，以及，赋形剂或稀释剂；其中，所述鼠李糖乳杆菌Probio-M9保藏于在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.18639；分类命名为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)；保藏时间：2019年10月08日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；该菌株的检测结果为存活。
鼠李糖乳杆菌Probio-M9是从中国内蒙古、新疆、湖北、北京等地区100份健康妇女母乳样中分离得到的乳酸菌中筛选出的一株具有潜在益生特性的益生菌。体外耐酸性试验和胆盐耐受性试验表明鼠李糖乳杆菌Probio-M9对胃肠消化液具有良好的耐受性，能够以活的状态进入人体肠道，发挥健康功效。目前，已被广泛地用于治疗腹泻、缓解便秘和提高机体免疫力中。最新研究表明，益生菌及其代谢产物经灭活处理后亦可产生益生作用，且更易于应用和保藏，未来或有更大应用潜力。
赋形剂和稀释剂是生理上可接受的赋形剂和稀释剂。
进一步地，所述组合物包括食品组合物或医药组合物。
进一步地，所述医药组合物的剂型包括固体剂型、液体剂型或外用剂型。
固体剂型包括粉体剂型。固体剂型具有物理化学稳定性好、生产制造成本较低、携带方便等特点，液体剂型具有吸收快、起效迅速、生物利用度较高等特点。
进一步地，所述外用剂型包括乳膏、喷雾剂、凝胶、卫生棉条、卫生巾、散剂或霜剂。本申请可用于抗微生物菌群失衡引起的阴道炎，可用于喷雾、软膏或卫生巾等妇女用品。
进一步地，所述组合物包括由所述鼠李糖乳杆菌Probio-M9发酵食品原料得到的鼠李糖乳杆菌Probio-M9及代谢产物，以及，赋形剂或稀释剂，其中，发酵后的鼠李糖乳杆菌Probio-M9及代谢产物经过高温灭活处理。
进一步地，所述赋形剂和所述稀释剂的状态至少包括固体、液体和粉末中的一种。
本申请提供含鼠李糖乳杆菌组合物在抑制发炎反应中的应用。
本申请提供含鼠李糖乳杆菌组合物在抗因微生物菌群失衡引起的阴道炎中的应用。
本申请中含鼠李糖乳杆菌组合物不含活菌，但具有阴道炎栓剂的耐受性，以作为治疗因微生物菌群失衡引起的阴道炎的用途。
为了证明含鼠李糖乳杆菌组合物可抑制发炎反应及抗阴道炎，做了以下实验：
实验例1鼠李糖乳杆菌Probio-M9未发酵基料与病原菌共培养抑制作用评价
三种病原菌：大肠杆菌(ATCC25922)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)和白色念珠菌(ATCC10231)。依据GB15979附录C配制病原菌菌悬液，具体的取菌株第3～14代的营养培养基新鲜活物，用5mL 0.03moL/L磷酸缓冲液洗下菌苔，使菌悬浮混匀后用磷酸缓冲溶液稀释至所需浓度，然后将被试样样品鼠李糖乳杆菌Probio-M9未发酵产物分别与上述制备的大肠杆菌菌悬液、金黄色葡萄球菌菌悬液和白色念珠菌菌悬液于5mL磷酸缓冲溶液中共培养，其中三种病原菌各取0.1mL，分别作用0h、1h、2h、3h、4h和6h，作活菌菌落计数，对其抑制作用进行评价，以作空白对照，实验设置3个重复。三种致病菌含菌量和所用培养基具体如表1所示。具体培养基成份如表2所示。存活率计算方法如公式所示：
存活率＝所选时间点活菌数/初始活菌数
抑菌能力测试结果显示，未发酵基料对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌三种致病菌在0h到6h均无抑制能力，且在2h后三种致病菌利用培养基营养成分出现不同的成长情况。结果如图1所示。
表1三种致病菌含菌量及所用培养基明细
表2培养基成份配比明细
实验例2鼠李糖乳杆菌Probio-M9发酵基料与病原菌共培养抑制作用评价
配方1：
酵母粉1％，葡萄糖3％，脱脂大豆蛋白粉5％，水91％，鼠李糖乳杆菌Probio-M9接种量5×106CFU/mL，培养条件为35℃，pH3.6时终止。
将上述配方鼠李糖乳杆菌Probio-M9其发酵代谢产物(其发酵上清液已80℃，25min热灭活处理)分别与上述制备的大肠杆菌菌悬液、金黄色葡萄球菌菌悬液和白色念珠菌菌悬液于5mL磷酸缓冲溶液中共培养，在0h、1h、2h、3h、4h和6h，作活菌计数，对其抑制作用进行评价，实验设置3个重复。
鼠李糖乳杆菌Probio-M9发酵基料代谢产物与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌共培养抑菌能力测试结果显示，在3h时对三株病原菌抑制率均达到50％。在4h时，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑制率分别为78.3％和78.1％，白色念珠菌抑制率为50.8％，结果如图2和图3所示。
配方2：
酵母粉3％，葡萄糖6％，麦芽糊精5％，脱脂大豆蛋白粉15％，水71％，Probio-M9接种量5×106CFU/mL，培养条件为35℃，pH3.6时终止。
将上述配方鼠李糖乳杆菌Probio-M9其发酵代谢产物(其发酵上清液已经80℃，25min热灭活处理)分别与上述制备的大肠杆菌菌悬液、金黄色葡萄球菌菌悬液和白色念珠菌菌悬液于5mL磷酸缓冲溶液中共培养，在0h、1h、2h、3h、4h和6h，作菌落计数，对其抑制作用进行评价，实验设置3个重复。
鼠李糖乳杆菌Probio-M9发酵基料代谢产物与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌共培养抑菌能力测试结果显示，3h和4h时对两种病原菌抑制率均高于50％，之后对三种病原菌抑制率均高于80％，结果如图4和图5所示。
综合以上可知：鼠李糖乳杆菌Probio-M9发酵基料代谢产物的两种不同配方，即液体和固体(包含粉体)，共培养3h对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌抑制率均可达到50％，显示出很好的抑制能力。在含鼠李糖乳杆菌Probio-M9的发酵基料代谢产物助力下，阴道微生态环境中的原始菌群乳酸菌可通过抑菌的作用持续抑制病原菌，改善阴道微生态平衡，重新恢复微生物稳态。本申请从根本上保护了微生态环境和致病菌的侵扰，弥补了抗生素治疗阴道微生物感染疗效的不足。
由以上技术方案可知，本申请实施例提供一种抑制发炎反应及抗阴道炎的含鼠李糖乳杆菌组合物及应用。所述组合物包括鼠李糖乳杆菌Probio-M9，以及，赋形剂或稀释剂。体外实验显示鼠李糖乳杆菌Probio-M9具有耐酸性和胆盐耐受性。本申请可对阴道炎致病菌白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等常见病原菌产生抑制，进而抑制发炎反应及阴道黏膜细胞发炎的症状。本申请可直接接触于患处的益生菌赋形剂或稀释剂的形式存在。
本领域技术人员在考虑说明书及实践这里公开的申请后，将容易想到本申请的其它实施方案。本申请旨在涵盖本申请的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本申请的一般性原理并包括本申请未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的，本申请的真正范围和精神由下面的权利要求指出。
应当理解的是，本申请并不局限于上面已经描述并在附图中示出的精确结构，并且可以在不脱离其范围进行各种修改和改变。本申请的范围仅由所附的权利要求来限制。
