一种具有增强免疫力功能的牡蛎肽虫草菌丝体组合物及其应用
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种具有增强免疫力功能的牡蛎肽虫草菌丝体组合物及其应用。
背景技术
牡蛎是世界第一大养殖贝类，也是我国四大养殖贝类之一。牡蛎含有丰富的营养物质，如蛋白质、糖原、维生素以及锌、硒、铁、铜、碘等微量元素，尤其是含有丰富的牛磺酸，是一种营养价值极高的海产软体类动物。牡蛎肉不仅营养丰富，而且具有独特的生理保健功能和药用价值，《本草纲目》记载牡蛎具有化痰软坚，清热除湿，止心脾气痛，痢下，赤白浊，消疝瘕积块，瘿疾结核的功效；《神农本草经》记载牡蛎具有敛阴、潜阳、止汗、化痰、软坚的功效，牡蛎也被我国卫生部批准第一批列为既是药品又可作为食品的保健品之一。利用牡蛎蛋白酶解制备牡蛎肽是牡蛎高值化利用的重要途径，牡蛎肽完全保留了牡蛎原有的维生素、微量元素和牛磺酸等营养成份，更容易被肌体吸收利用和发挥生物功能。现代医学研究证实，牡蛎肽具有增强免疫力、抗疲劳、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血糖和抑制ACE活性等生理作用。
冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体，为虫草属的药用真菌。冬虫夏草味甘，性温。归肺、肾经。温和滋补，具有补肾益肺、止血化痰的功效，是我国名贵的滋补强壮中药材之一，具有多种生理药理和活性功能，用于肾虚精亏、阳痿遗精、腰膝酸痛、久咳虚喘和劳嗽咳血等症。由于冬虫夏草严格的寄生条件和特殊的地理环境，以及人们对野生虫草的采挖和虫草繁殖环境的破坏，自然产量急剧减少，资源日趋枯竭。大量研究表明：发酵虫草菌丝体和天然冬虫夏草具有相似的化学成分、药理作用和临床疗效，可以作为天然虫草的替代品有效弥补野生虫草资源的不足，成为虫草资源开发的热点。通过检索文献资料和国家市场监督管理总局数据库发现，现有虫草菌丝体保健食品多是发酵虫草菌丝体直接简单粉碎，然后制成胶囊、片剂等产品，由于虫草菌丝体价格较高，服用量大，导致食用成本较高，普通百姓难以接受；二是纯菌粉类产品功能单一，没有经过有效功能复配，难以发挥虫草本身最大功效，造成营养成分浪费，严重限制了虫草菌丝体的高值化开发利用和经济效益。
牡蛎肽作为一种优质的海洋功能蛋白肽，虫草作为一种优质的食药用真菌资源，具有独特的生理功能，在功能食品开发方面有一定的研究应用，但目前牡蛎肽、发酵虫草菌丝体功能食品多为纯粉产品，没有经过科学配伍和协同增效，具有成分相对单一营养不均衡，功效相对较弱，保健作用不显著等问题，严重限制了牡蛎肽和发酵虫草菌丝体功能食品的开发利用。
发明内容
针对现有问题和产品缺陷，本发明提供了一种具有增强免疫力功能的牡蛎肽虫草菌丝体组合物及其应用。采用牡蛎肽和虫草发酵菌丝体为主要原料，黄芪提取物和枸杞提取物为辅助原料，科学配伍，协同增效，组合物既能显著增强机体免疫力，还具有一定的抗病毒和补肾益肺功能。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案予以实现：
一种具有增强免疫力功能的牡蛎肽虫草菌丝体组合物，所述牡蛎肽虫草菌丝体组合物包括以下重量份数的组分：
牡蛎肽：25份-48份；
虫草菌丝体：30份-45份；
黄芪提取物：5份-20份；
枸杞子提取物：2份-10份。
进一步的，所述牡蛎肽为分子量小于1000Da、蛋白含量大于75％的小分子低聚肽。
进一步的，所述牡蛎肽的制备方法为：
(1)将新鲜牡蛎浸泡脱盐，然后洗净、脱壳、去内脏得脱盐牡蛎肉，将脱盐牡蛎肉匀浆得牡蛎浆液；
(2)向牡蛎浆液中加水，然后加入壳聚糖固定化复合蛋白酶酶，保温酶解，离心得到的上清液即为牡蛎酶解液；
(3)将牡蛎酶解液用截留分子量为1000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤出液，将滤出液浓缩得浓缩液；
(4)将浓缩液喷雾干燥得牡蛎肽。
进一步的，所述壳聚糖固定化复合蛋白酶占脱盐牡蛎肉的重量比为0.2-1％，其中，复合蛋白酶占壳聚糖固定化复合蛋白酶的质量比为5-15％。
进一步的，所述复合蛋白酶包括胰酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶，胰酶∶木瓜蛋白酶∶风味蛋白酶的重量比为3～5∶1∶1～2。
进一步的，所述虫草菌丝体通过冬虫夏草液体深层发酵制得，腺苷含量大于0.8‰；所述冬虫夏草为蝙蝠蛾被毛孢或蝙蝠蛾拟青霉。
进一步的，所述牡蛎肽虫草菌丝体组合物中蛋白含量大于30％，腺苷含量大于0.3‰。
进一步的，所述牡蛎肽虫草菌丝体组合物包括以下重量份数的组分：牡蛎肽45份，蝙蝠蛾被毛孢菌丝体40份，黄芪提取物10份，枸杞子提取物5份。
本发明提供了所述的牡蛎肽虫草菌丝体组合物在制备保健品或食品中的应用。
进一步的，所述保健品的剂型为口服液、胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、粉剂或颗粒剂。
进一步的，所述壳聚糖固定化复合蛋白酶为壳聚糖微粒固定化复合蛋白酶或磁性Fe3O4-壳聚糖微粒固定化复合蛋白酶。
进一步的，所述浓缩的方法为减压浓缩或纳滤浓缩。
与现有技术相比，本发明的优点和有益效果是：
(1)本发明以牡蛎肽和虫草菌丝体为主材，黄芪提取物和枸杞子提取物为辅材，科学配伍，协同增效，充分发挥营养活性物质的功效活性。牡蛎肽是通过壳聚糖固定化复合蛋白酶精准高效酶解牡蛎制备的低分子肽，工艺简单高效，副产物少，低分子牡蛎肽蛋白含量高，感官风味优良，且完全保留牡蛎本身含有的维生素、矿物质、牛磺酸等营养功效成分，吸收利用率高，研究表明具有优良的免疫增强功能。虫草发酵菌丝体含有与野生虫草资源相近的虫草多糖、腺苷等活性物质和生理功能，具有良好的免疫增强功能。通过牡蛎肽与虫草菌丝体科学配伍，共同发挥牡蛎蛋白肽、虫草多糖、虫草腺苷(核酸)的免疫增强功能，不同营养物质可以相互促进吸收，提高活性营养物质的吸收利用率，避免营养物质浪费，更好地发挥活性功效，牡蛎虫草菌丝体同时包含蛋白、多糖和核酸三大营养物质，营养均衡，便于不同功能产品开发，适用人群更广泛。
(2)黄芪，始载于《神农本草经》列为上品，味甘，性微温，归肺、脾经，具有免疫调节、保护器官、降糖、抗肿瘤、抗衰老等多种药理作用。黄芪多糖作为黄芪提取物主要活性成分，可以促进免疫细胞分化，调节免疫响应因子、组分及酶活性，调控免疫相关基因转录表达以及促进免疫器官发育，发挥显著的免疫调节作用；黄芪多糖不仅具有显著的增强免疫力功能，而且具有显著的抗病毒作用，相同浓度下黄芪多糖作用的细胞存活率高于阿昔洛韦，黄芪多糖作用于I型单疱疹病毒后，细胞病理学改变与阿昔洛韦相似，其抗病毒作用优于阿昔洛韦。作为具有显著增强免疫抗病毒作用的中药黄芪已被列入《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案》应用于抗击新型冠状病毒肺炎疫情。枸杞作为传统中药，具有补肾生精，养肝明目，补血安神，生津止渴，润肺止咳等功效。枸杞提取物主要是枸杞多糖，具有免疫调节、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂等作用。本发明通过科学配伍牡蛎肽、虫草菌丝体、黄芪提取物、枸杞子提取物等原料，营养功效成分均衡，感官风味优良，活性成分可以相互促进吸收，更好的发挥不同原料的营养功能和活性功效，明显增强产品的免疫增强功能，兼具抗病毒、补肾益肺等功能，而且本发明采用药食同源的原料，兼具功效和安全性，无毒副作用，可以广泛应用于各种保健食品和食品开发。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细的说明。
实施例1：牡蛎肽虫草菌丝体组合物及产品开发
本发明提供的具有增强免疫力功能的牡蛎肽虫草菌丝体组合物中各组分的重量份数为：牡蛎肽25份-48份，虫草菌丝体30份-45份，黄芪提取物5份-20份，枸杞子提取物2份-10份。
牡蛎肽为分子量小于1000Da，蛋白含量大于75％的小分子低聚肽，牡蛎肽的制备方法如下所示：
(1)向100kg新鲜牡蛎中加入200kg清水，浸泡1小时，然后将水放掉；重复用清水浸泡2次得脱盐牡蛎；将脱盐牡蛎脱壳，去内脏得脱盐牡蛎肉，用组织捣碎机将脱盐牡蛎肉匀浆得牡蛎浆液。
(2)向10kg牡蛎浆液中加入20L水混合均匀，调节牡蛎浆液温度为50℃，pH%207.0，搅拌下加入壳聚糖微粒固定化复合蛋白酶50g(壳聚糖微粒固定化复合蛋白酶中含复合蛋白酶5g)，所述复合蛋白酶包括胰酶∶木瓜蛋白酶∶风味蛋白酶，重量比为3.5∶1∶1.5。保温反应5小时，反应结束迅速冷却至室温，10000rpm离心10分钟去除未降解固形物和固定化酶，上清液即为牡蛎酶解液。酶解液水解度为30.5％，可溶性蛋白回收率为74.2％。
(3)将牡蛎酶解液用孔径为0.45μm过滤膜过滤，然后用截留分子量为1000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤出液；将滤出液在50℃减压浓缩至可溶性固形物含量为20％的浓缩液。
(4)将浓缩液喷雾干燥得牡蛎肽。牡蛎肽重均分子量为870Da，蛋白含量82.2％，灰分含量6.5％。
虫草菌丝体中腺苷含量0.8‰，通过虫草菌液体发酵制得。称取不同重量份数的原料搅拌混合均匀，得牡蛎肽虫草菌丝体组合物。制备的牡蛎肽虫草菌丝体组合物中蛋白含量大于30％，腺苷大于0.3‰。
将牡蛎肽虫草菌丝体组合物与适量辅料混合，制备不同剂型的产品。辅料为硬脂酸镁、微晶纤维素、二氧化硅、淀粉、糊精等常用的润滑剂、助流剂、稀释剂等食药用辅料，辅助加工制备不同的产品剂型，产品剂型为口服液、胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、粉剂、颗粒剂中的任意一种，满足不同的市场和客户需要。
不同重量份数的原料配比组成的牡蛎肽虫草菌丝体组合物见表1。
表1牡蛎肽虫草菌丝体组合物
本发明制备的牡蛎肽虫草菌丝体组合物呈黄色到淡黄色粉末，无结块，无杂质，无不良气味。速溶于水，溶于水后无可见杂质和沉淀。蛋白含量＞30％，腺苷含量＞0.3‰，水分含量＜10％。
按照组合物样品1的重量份数称量原料，混合均匀，加入1％的硬脂酸镁，灌装胶囊得牡蛎肽虫草菌丝体胶囊剂。
按照组合物样品2的重量份数称量原料，混合均匀，加入5％的糊精，1％的硬脂酸镁，造粒，得牡蛎肽虫草菌丝体颗粒剂。
按照组合物样品3的重量份数称量原料，混合均匀，加入1％的硬脂酸镁，1.5％的二氧化硅，造粒，压片，得牡蛎肽虫草菌丝体片剂。
按照组合物样品4的重量份数称量原料，混合均匀，加入10％的淀粉，1％的硬脂酸镁，1.5％的二氧化硅，包装得牡蛎肽虫草菌丝体粉剂。
实施例2：牡蛎肽菌丝体组合物增强免疫力功能动物实验
1实验材料及方法
1.1实验材料
牡蛎肽，牡蛎肽虫草菌丝体组合物样品1；
阳性对照药：盐酸左旋咪唑。
1.2实验动物及分组
雌性BALB/C小鼠(SPF级)135只，6～8周龄，体重18～22g，将小鼠随机分为9组，每组15只。
1.3实验方法
135只健康雌性BALB/C小鼠小鼠适应性喂养3天后，随机分为9组：空白对照组(NC)，模型对照组(MC)，阳性对照组(PC)，牡蛎肽低剂量组(S1-L)，牡蛎肽中剂量组(S1-M)，牡蛎肽高剂量组(S1-H)，牡蛎肽虫草菌丝体组合物低剂量组(S2-L)，牡蛎肽虫草菌丝体组合物中剂量组(S2-M)，牡蛎肽虫草菌丝体组合物高剂量组(S2-H)，其中低、中、高剂量组样品浓度分别为0.5g/kg.bw、1.0g/kg.bw、2.0g/kg.bw，阳性对照为1.0g/kg.bw盐酸左旋咪唑，免疫抑制剂为60mg/kg.bw环磷酰胺。分组完成后按照表2给予受试物和免疫抑制剂进行实验，自由饮食、饮水，连续给予受试物28天，禁食12小时，取样测定相关免疫指标。
表2动物实验分组与实施方案
1.4测定指标及结果
1.4.1体重及胸腺指数、脾脏指数测定和结果
实验期间每天对小鼠进行称重，30天后处死小鼠，取出胸腺、脾脏并称重，用下式计算胸腺指数和脾脏指数：胸腺指数＝胸腺重量/体重(mg/g)，脾脏指数＝脾脏重量/体重(mg/g)。采用SPSS 22进行数据处理，结果用平均值±标准差来表示，结果见表3。
表3牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物对小鼠体重、胸腺指数、脾脏指数的影响
由表可见，在对小鼠进行免疫抑制处理后，小鼠的体重明显下降，在后续的实验中，使用牡蛎肽和牡蛎肽虫草菌丝体组合物的小鼠体重均得到恢复，表明牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物能够减轻由CTX引起的小鼠体重减轻。同时检测胸腺指数和脾脏指数以评估牡蛎肽和牡蛎肽组合物对免疫器官的作用，与NC组相比，其他组脾脏指数、胸腺指数均有无显著差异(P＞0.05)，与MC组相比，无论是牡蛎肽样品组，还是牡蛎肽虫草菌丝体组合物样品组均有所增加，表明实验样品可以改善环磷酰胺对小鼠免疫器官损伤，发挥增强免疫力功能。
1.4.2牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物对小鼠细胞免疫功能的影响
小鼠迟发性变态反应测定，血清溶血素水平，抗体产生数，吞噬细胞功能。小鼠脾淋巴细胞转化实验，NK细胞活性测定均采用试剂盒测定。采用SPSS 22进行数据处理，结果用平均值±标准差来表示，结果见表4。
表4牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物对小鼠细胞免疫功能的影响
注：与空白组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，与模型组相比，#P＜0.05，##P＜0.01
根据表4可知，在小鼠迟发型变态反应实验中，S1-M、S1-H、S2-L较NC和MC相比足趾肿胀度具有显著性差异(P＜0.05)，PC、S2-M和S2-H的足趾肿胀度具有极显著差异(P＜0.01)，相同浓度下牡蛎肽虫草菌丝体组合物较牡蛎肽作用效果更加显著。在ConA诱导脾淋巴细胞转化实验中，与NC和MC相比，S1-M组、S1-H组与S2-M组、S2-H组均具有显著性差异(P＜0.05)。以上结果表明，牡蛎肽和牡蛎肽虫草菌丝体组合物均可以促进小鼠细胞免疫功能的作用，且同一浓度下牡蛎肽虫草菌丝体组合物在促进小鼠细胞免疫功能方面作用效果更显著。
牡蛎肽及牡蛎虫草菌丝体肽组合物对小鼠体液免疫功能影响的结果如表5所示。
表5.牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物对小鼠体液免疫功能的影响
注：与空白组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，与模型组相比，#P＜0.05，##P＜0.01
在小鼠抗体产生数实验中，PC、S1-M、S1-H、S2-M和S2-H组较NC组具有极显著性差异(P＜0.01)，S2-L较NC具有显著性差异(P＜0.05)，所有样品组和阳性对照组与MC组比较都有极显著提高(P＜0.01)，且在相同浓度下牡蛎肽虫草菌丝体组合物的效果优于牡蛎肽。在测定小鼠血清溶血素水平实验中，各实验样品组与空白组和模型组相比均有所提高，S2-M组较NC组具有显著性差异(P＜0.05)，S2-H具有极显著性差异(P＜0.01)；与MC组相比，S1-H和S2-L组具有显著性差异(P＜0.05)，S2-M和S2-H组具有极显著性差异(P＜0.01)。以上结果表明，相比于牡蛎肽，牡蛎虫草菌丝体组合物更能激活小鼠机体免疫功能。
1.4.3牡蛎肽及牡蛎肽组合物对小鼠NK细胞活性的影响
牡蛎肽及牡蛎肽组合物对小鼠NK细胞活性的影响结果如表6所示。
表6牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物对小鼠NK细胞活性的影响
注：与空白组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，与模型组相比，#P＜0.05，##P＜0.01
样品S1-H、S2-M、S2-H均能够提高小鼠NK细胞活性，但同一浓度下，牡蛎肽虫草菌丝体组合物较牡蛎肽作用更显著，与NC组和MC组相比具有显著差异(P＜0.05)。
综上可知，与空白对照组相比，牡蛎肽和牡蛎肽虫草菌丝体组合物在促进小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能及NK细胞活性方面均具有活性，且在中高剂量组效果较为明显，对相同剂量组的牡蛎肽和牡蛎肽组合物进行比较分析，发现相同剂量下牡蛎肽组合物激活并促进小鼠免疫活性的能力更为显著。为牡蛎肽虫草菌丝体组合物的保健食品和食品开发提供技术支持。
实施例3：牡蛎肽菌丝体组合物增强免疫力功能细胞实验
1实验材料及方法
1.1实验材料
牡蛎肽溶液，牡蛎肽虫草菌丝体组合物溶液，巨噬细胞RAW264.7，用添加10％胎牛血清(FBS)的Gibco Eagle培养基于37℃，5％CO2培养箱中培养，将细胞培养36～48h达到对数生长期，用于后续实验。
1.2实验分组：
将巨噬细胞RAW264.7分为空白对照组(NC)、阳性对照组(PC)、牡蛎肽低剂量组(S1-L)、牡蛎肽中剂量组(S1-M)、牡蛎肽高剂量组(S1-H)、牡蛎肽虫草菌丝体组合物低剂量组(S2-L)、牡蛎肽虫草菌丝体组合物中剂量组(S2-M)、牡蛎肽虫草菌丝体高剂量组(S2-H)。
空白对照组添加生理盐水，阳性对照组添加2μg/mL的脂多糖(LPS)，牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物低、中、高剂量组添加浓度为50、100、200ug/mL。
1.2.1牡蛎肽及牡蛎肽组合物对RAW264.7巨噬细胞增殖作用及吞噬能力的影响
将RAW 264.7巨噬细胞在96孔板中以5×103个细胞/孔(100μL/孔)的密度培养过夜，然后分别加入100uL浓度为50、100、200ug/mL的样品溶液和2μg/mL的LPS，每组设置10个复孔，37℃下培养24小时。细胞增殖作用测定：将10μLMTT(5mg/mL)添加到每个孔中，并将细胞在37℃下再孵育4h，弃去上清液，用150μL DMSO溶液溶解细胞。使用酶标仪测量溶液在570nm处的吸光值。细胞吞噬作用测定：将100μL的0.1％中性红色溶液添加到每个孔中，在37℃下再孵育1小时。将细胞用PBS洗涤3次，然后将100μL细胞裂解缓冲液(乙醇∶冰醋酸＝1∶1)加入到每个孔中。将细胞培养板在4℃下静置过夜。用酶标仪测量在570nm处的吸光值。
采用MTT法检测牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物对RAW264.7巨噬细胞增殖作用的影响结果如表7所示，采用SPSS 22进行数据处理，结果用平均值±标准差来表示。
表7牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物对巨噬细胞增殖作用及吞噬作用的影响
注：与空白组对比，*P＜0.05，**P＜0.01
研究表明，细胞存活率与牡蛎肽和牡蛎虫草菌丝体组合物浓度均呈负相关，不同牡蛎肽溶液的浓度对巨噬细胞存活率的影响，无统计学意义(P＞0.05)。而牡蛎肽虫草菌丝体组合物在50ug/mL下细胞存活率最高，与空白组相比具有显著性差异(P＜0.01)，200ug/mL的配合物抑制了巨噬细胞的生长，但仍高于空白对照，因此高浓度的配合物不会影响巨噬细胞的增殖活性。
吞噬作用是巨噬细胞对病原体及癌细胞反应特征之一，通过对吞噬细胞的吞噬功能进行测定来反应细胞的免疫功能，本实验采用中性红吞噬实验测定牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物对RAW264.7巨噬细胞吞噬能力的影响，结果如表6所示，研究表明，相对于NC组，200ug/mL的牡蛎肽显著提高了巨噬细胞吞噬荧光微球的能力(P＜0.01)，吞噬能力达到最大，并且其吞噬能力接近于阳性对照组。牡蛎肽虫草菌丝体组合物在200ug/mLL浓度下吞噬指数为43.88±4.11％，较阳性对照组接近，较空白对照组具有极显著性差异(P＜0.01)，且相同浓度下，作用效果比牡蛎肽更加显著。由此说明，牡蛎肽虫草菌丝体组合物更能激活并促进巨噬细胞的吞噬能力，提高细胞的免疫活性。
1.2.2牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物对RAW264.7巨噬细胞免疫因子的影响
将处于对数生长期的RAW264.7巨噬细胞在96孔板中以5×105个细胞/孔(100uL/孔)的密度培养过夜，然后分别加入100uL浓度为50、100、200ug/mL的样品溶液和2ug/mL的LPS处理，于37℃，5％C02培养箱中培养24h后取50uL细胞上清液，与50uL的Griess溶液混合，避光反应10min，用酶标仪测量在540nm处测定吸光强度，计算NO释放量；使用ELISA试剂盒检测TNF-α、IL-6和IL-1β，根据标准曲线计算TNF-α、IL-6和IL-1β的浓度。
牡蛎肽及牡蛎肽组合物对RAW264.7巨噬细胞免疫因子的影响结果见表8，采用SPSS 22进行数据处理，结果用平均值±标准差来表示。
表8牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物对RAW264.7巨噬细胞免疫因子的影响
注：与空白组对比，*P＜0.05，**P＜0.01
NO可以促进巨噬细胞的凋亡和吞噬作用，同时可作为检测巨噬细胞免疫活性的指标。牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物对RAW264.7巨噬细胞释放NO的影响如表8所示，实验结果表明，NO释放量随浓度的升高而增加，牡蛎肽虫草菌丝体组合物样品对巨噬细胞NO释放能力更强，不同牡蛎肽和牡蛎肽虫草菌丝体样品浓度的NO释放量与NC组相比均有显著差异(P＜0.05)，由此可知，牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物均能促进巨噬细胞NO的释放，提高细胞的免疫能力。
牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物对RAW264.7巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6及TNF-α分泌能力的影响如表8所示，研究表明，在用牡蛎肽溶液和牡蛎肽虫草菌丝体组合物溶液处理24h后，100～200ug/mL的牡蛎肽和牡蛎肽虫草菌丝体组合物均能够促进巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α，且牡蛎肽虫草菌丝体组合物作用效果更显著，与空白对照组相比具有显著性差异(P＜0.05)，由此可知，牡蛎肽和牡蛎肽虫草菌丝体组合物能激活并促进巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α，且牡蛎肽组合物较牡蛎肽能更好的激活细胞分泌，提高细胞免疫活性。
通过对细胞进行免疫学研究，牡蛎肽及牡蛎肽虫草菌丝体组合物均可以提高巨噬细胞细胞存活率、细胞吞噬能力、NO释放量和IL-1β、IL-6和TNF-α分泌量，且中高剂量组尤为显著，具有较强的细胞免疫调节活性。对同一剂量下的牡蛎肽和牡蛎肽虫草菌丝体组合物对细胞免疫能力的影响进行比较分析，发现同一剂量下牡蛎肽虫草菌丝体组合物较牡蛎肽在促进细胞产生免疫活性方面更为显著。牡蛎肽虫草菌丝体组合物对细胞免疫功能具有更强的激活促进作用，这为牡蛎肽虫草菌丝体组合物的保健食品和食品开发奠定了基础。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所表述的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
