一种复方菌草鹿角灵芝保健茶颗粒
技术领域
本发明属于保健饮品制备领域，具体涉及一种复方菌草鹿角灵芝保健茶颗粒及其制备方法。
背景技术
目前市场上灵芝、紫苏等只能泡茶或泡酒，食用不便，功效单一。紫苏含有珍贵的a-亚麻酸，它是构成细胞膜和生物酶的基础物质，并可在体内转化为DHA、DPA、EPA 等，是人体健康与长寿之母。人类一但缺乏a- 亚麻酸，会引起高血脂、高血压、高血糖、脑血栓及动脉硬化、痴呆、记忆力减退、风湿病，糖尿病等一系列疾病，特别是对脑组织的生长发育产生不良影响。临床医学证实，只要每天补充适量的a- 亚麻酸，不仅能防治50多种疾病，还可以让人变年轻，延缓衰老。灵芝是一种中药材，具有降血脂、抗疲劳、保肝等功效，对中老年保健具有积极作用。而菌草鹿角灵芝比一般灵芝的有效成分高3%，比普通灵芝的安全性高，具有提高免疫力、改善失眠、辅助治疗风湿性关节炎等保健作用。硒的缺乏可使动物产生各种疾病，如肌坏死、心肌变性心脏萎缩、水肿、贫血融血、生殖机能衰退等，每天补充200ug 硒，在一定程度上可以预防肿瘤的发生。
发明内容
本发明的目的在于提供一种复方菌草鹿角灵芝保健茶颗粒及其制备方法。本发明通过将富硒茶与菌草鹿角灵芝、紫苏相互配合，发挥协同保健作用，适合缺硒人群以及中老年人饮用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种复方菌草鹿角灵芝保健茶颗粒，其主要原料按重量份数计：紫苏50~100份、富硒茶500-1000份、菌草鹿角灵芝1500-3500份。
制备方法包括以下步骤：
（1）称取紫苏、富硒茶和菌草鹿角灵芝，粉碎，过80目筛；加20倍水，浸泡6 h，80℃超声4h，过滤，药渣再加20倍水，80℃超声4 h，合并滤液，60℃真空浓缩，真空冷冻干燥，得干浸膏粉；
（2）将干浸膏粉和甘露醇按质量比为1:3混合，过80目筛4次；滴加浓度为45%的乙醇溶液，制软材，65目筛制粒，60℃烘干30 min，整粒，得保健茶颗粒。
本发明的显著优点在于：
（1）本发明进一步完善了制备速溶颗粒的工艺参数，提高了药物的有效利用率，使其能够发挥更大功效；
（2）本发明制得的颗粒茶清苦回甜，醇香；并且各原料相辅相成，具有强身健体、抗肿瘤，辅助降血脂、抗疲劳等功效，为一种绿色安全的保健茶饮；
（3）本发明的制备方法简单，成本低、适于工业化大规模生产。
附图说明
图1是白细胞介素-10的含量变化；
图2是干扰素 γ细胞因子的含量变化；
图3是白细胞介素-2的含量变化；
图4是小鼠接种后体重变化；
图5是小鼠接种后肿瘤体积变化。
具体实施方式
为进一步公开而不是限制本发明，以下结合实例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
称取紫苏50 g、富硒茶500g和菌草鹿角灵芝1506 g，粉碎，过80目筛；加20倍水，浸泡6h，80℃超声4 h，过滤，药渣再加20倍水，80℃超声4 h，合并滤液，60℃真空浓缩，真空冷冻干燥，得干浸膏粉；将干浸膏粉和甘露醇按质量比为1:3混合，过80目筛4次；滴加浓度为45%的乙醇溶液，制软材，65目筛制粒，60℃烘干30 min，整粒，得保健茶颗粒。
实施例2
称取紫苏70 g、富硒茶700 g和菌草鹿角灵芝2103 g，粉碎，过80目筛；加20倍水，浸泡6h，80℃超声4 h，过滤，药渣再加20倍水，80℃超声4 h，合并滤液，60℃真空浓缩，真空冷冻干燥，得干浸膏粉；将干浸膏粉和甘露醇按质量比为1:3混合，过80目筛4次；滴加浓度为45%的乙醇溶液，制软材，65目筛制粒，60℃烘干30 min，整粒，得保健茶颗粒。
实施例3
称取紫苏100 g、富硒茶1000 g和菌草鹿角灵芝3100 g，粉碎，过80目筛；加20倍水，浸泡6 h，80℃超声4 h，过滤，药渣再加20倍水，80℃超声4 h，合并滤液，60℃真空浓缩，真空冷冻干燥，得干浸膏粉；将干浸膏粉和甘露醇按质量比为1:3混合，过80目筛4次；滴加浓度为45%的乙醇溶液，制软材，65目筛制粒，60℃烘干30 min，整粒，得保健茶颗粒。
实施例4
复方菌草鹿角灵芝茶对小鼠细胞免疫功能的影响
将雌性Balb/c小鼠50只随机分为低剂量组、中剂量组、高剂量组、空白对照组和阳性对照组共5组，每组10只。低剂量为灵芝保健茶颗粒1.64 g/kg，中剂量为灵芝保健茶颗粒3.28g/kg，高剂量为灵芝保健茶颗粒6.56 g/kg每日灌胃给药1次，空白对照组每日灌胃0.3ml的生理盐水1次，阳性对照组灌胃左旋咪唑，剂量为10mg/kg，给药28d。末次给药后，禁食不禁水 24 h，小鼠摘眼球取血，血样静置1h后，离心，3000 r/min离心5min 取上清。按 ELISA试剂盒说明书操作，检测血清中白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-10（IL-10）、干扰素 γ（INF-γ）细胞因子的含量。
从图1中可以看出，阳性和低剂量组IL-10含量与非给药组相比有极显著性升高；中剂量组与非给药组相比有一定的升高，但是没有显著性差异；高剂量组与非给药组相比有一定的降低，但没有显著性差异。IL-10主要由Th2细胞分泌，主要介导体液免疫反应，说明阳性对照组和低剂量组可能刺激了Th2细胞的表达。由图2可得，低剂量、中剂量、高剂量和阳性对照IFN-γ含量与空白对照组相比都有升高，其中低剂量、高剂量和阳性对照有极显著性差异，中剂量组有显著性差异。其中高剂量和阳性对照组对IFN-γ含量影响较大。IFN-γ主要由Th1细胞分泌，高水平IFN-γ的产生是由于寄主应对细胞内的病原体产生了有效的防御。给药后低剂量、中剂量、高剂量和阳性对照组IFN-γ含量与空白对照组相比都有升高，说明药物增强了宿主抵抗病原体的能力。由图3可得，低剂量、高剂量和阳性对照IL-2含量与空白对照组相比都有极显著性差异，中剂量组有显著差异。其中高剂量增加IL-2含量的效果最好，但中剂量组与非给药组相比IL-2含量降低了。IL-2是由Th1产生的免疫调节因子，能活化T细胞，促进细胞因子产生，促进B细胞增殖和分泌抗体，活化巨噬细胞。这说明药物能促进Th1细胞的活性。
实施例5
复方菌草鹿角灵芝茶对小鼠体液免疫功能的影响
将雌性Balb/c小鼠50只随机分为低剂量组、中剂量组、高剂量组、空白对照组和阳性对照组共5组，每组10只。低剂量为灵芝保健茶颗粒1.64 g/kg，中剂量为灵芝保健茶颗粒3.28g/kg，高剂量为灵芝保健茶颗粒6.56 g/kg，将实施例1制备的复方菌草鹿角灵芝茶配置成溶液对小鼠每日灌胃给药1次，对空白对照组小鼠每日灌胃0.3ml的生理盐水1次，对阳性对照组小鼠每天灌胃0.3ml左旋咪唑，剂量为10mg/kg，给药28d。
取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次2000r/min离心10min，计数细胞，每只鼠经腹腔或静脉注射SRBC 5×107个，每只鼠腹腔注射0.2ml。
将SRBC免疫4~5天后的小鼠颈椎脱臼处死，用75%乙醇浸泡小鼠3min，沿腹腔中线剪开小鼠腹腔，取出脾脏置于培养皿中，将表面包膜及脂肪组织剥离干净，放在盛有无菌PBS的培养皿中，用两块无菌的磨砂载玻片碾压脾脏，用PBS清洗载玻片，将细胞液通过200目的网筛。洗涤脾细胞2次，每次1000r/min离心10min。计数，并将细胞浓度调整为5×106个/ml，制成脾细胞悬液，测定脾空斑形成数。
称取1g琼脂糖加双蒸水至100ml配制表层培养基备用，将表层培养基加热溶解后，放45℃水浴保温，与等量pH7.2~7.4，2倍浓度的Hanks液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50μl 10%SRBC（V/V，用SA液配制），20μl脾细胞悬液，迅速混匀，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，制备平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1~1.5h，然后用SA缓冲液稀释的补体1∶8加到培养基上层，继续温育1~1.5h后，计数溶血空斑数。
表1 复方菌草鹿角灵芝茶对小鼠溶血空斑的影响
与空白做对比，**表示P<0.01，*表示P<0.05
低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组小鼠空斑细胞数与空白组相比均有降低，其中高剂量组有极显著差异。
实施例6
复方菌草鹿角灵芝茶对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响
（1）动物预处理：将雌性Balb/c小鼠50只随机分为低剂量组、中剂量组、高剂量组、空白对照组和阳性对照组共5组，每组10只。低剂量为灵芝保健茶颗粒1.64 g/kg，中剂量为灵芝保健茶颗粒3.28 g/kg，高剂量为灵芝保健茶颗粒6.56 g/kg，每日灌胃给药1次，空白对照组每日灌胃0.3ml的生理盐水1次，阳性对照组灌胃左旋咪唑，剂量为10mg/kg，给药28d。
（2）鸡红细胞悬液制备：
取鸡血置于有玻璃珠的锥形瓶中，朝一个方向充分摇动，以脱纤维。用生理盐水洗涤2~3次，离心，2000r/min，10min，去上清，用生理盐水配成1%V/V的鸡红细胞悬液。
（3）吞噬功能测定
a.停药前三天向每只小鼠腹腔注射5%淀粉肉汤溶液1ml，每天1次，连续3d。停药次日，每鼠腹腔注射1%鸡红细胞悬液1ml，间隔30min，颈椎脱臼处死动物将其仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板1min，吸出腹腔洗液1ml。
b.将回收的腹腔洗液注入干净的离心管中，1200r/min离心10min，弃上清液后加入PBS缓冲液冲洗细胞2次。所得细胞沉淀用预冷RPMI1640培养液洗涤，将沉淀细胞再加入预冷RPMI1640培养液重悬细胞，计数，调整浓度至2×106个/ml。将细胞接种于96孔板中，100μl每孔，每个样品3个复孔，置于37℃、5%CO2培养箱中培养，使巨噬细胞贴壁，孵育3h，轻摇培养板，弃培养上清液，用37℃预温的RPMI1640培养液轻轻冲洗培养孔1~2次，充分弃去非黏附的淋巴细胞和其他细胞，获得贴壁细胞即为单层的巨噬细胞。
按下式计算吞噬百分率和吞噬指数：
吞噬百分率（%）=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数／计数的巨噬细胞数×100%
吞噬指数=吞噬的鸡红细胞总数／计数的巨噬细胞。
表2 复方菌草鹿角灵芝茶对小鼠巨噬细胞吞噬能力的影响
与空白做对比，**表示P<0.01，*表示P<0.05
通过对吞噬率分析可知，低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组小鼠的吞噬率与空白组相比均有升高。其中低剂量组与空白组相比有显著差异，阳性对照组与空白组相比有极显著差异。
实施例7
复方菌草鹿角灵芝茶对小鼠抗肿瘤功能的影响
（1）动物模型建立及处理
取40只ICR小鼠，准备好浓度为1.0×107/mL 的S180小鼠肉瘤细胞悬液。ICR小鼠右前肢腋部用酒精作表面消毒，然后将0.2mlS180小鼠肉瘤细胞注入右前肢腋部皮下。隔日将接种后的小鼠随机分为4组，即模型组（生理盐水）、 高（642.81mg/kg）、中（428.54mg/kg）、低（214.27mg/kg）3个剂量组，接种一周后，接种处长出 80~90 mm3大小的肿瘤时说明造模成功，根据小鼠体重开始灌胃给药，每日一次，连续10天。给药后每日记录肿瘤大小及ICR小鼠体重。
（2）肿瘤抑制率、脾指数、胸腺指数的测定
10天后，各组处死ICR小鼠，处死前8小时，小鼠不能接触食物。通过颈椎脱臼处死小鼠，剥离肿瘤，胸腺和脾，分别称重，计算复方菌草鹿角灵芝茶对小鼠S180肿瘤的抑制率，小鼠的脾脏指数和胸腺指数。计算脾脏指数和胸腺指数根据以下公式：脾脏指数=脾重（mg）/死亡时的体重（g）；胸腺指数=胸腺重量（mg）/死亡时的体重（g）。
（3）生存期实验
将ICR小鼠右前肢腋部用酒精作表面消毒，无菌条件下，取接种7天的S180小鼠肿瘤细胞悬液，用台盼蓝染色后计数，用PBS稀释将细胞浓度调至1×107/ml，将0.2ml小鼠腹水瘤细胞注入右前肢腋部。接种次日，将小鼠随机分为4组，每组10只，雌雄各半。复方菌草鹿角灵芝分别按高剂量642.81mg/kg、中剂量428.54mg/kg、低剂量214.27mg/kg，每日灌胃给药1次，模型组每日灌胃0.3ml的生理盐水１次，，给药18天后停药观察，观察和记录小鼠死亡时间，记录生存天数，按公式计算各组生命延长率：
生命延长率=(治疗组平均生存天数-对照组组平均生存天数)/对照组平均生存天数)×100%。
表3 复方菌草鹿角灵芝茶对小鼠肿瘤组脾指数和胸腺指数的影响
与空白做对比，**表示P<0.01，*表示P<0.05
表4 复方菌草鹿角灵芝茶对肿瘤组小鼠肿瘤的影响
与空白做对比，**表示P<0.01，*表示P<0.05
小鼠接种S180肉瘤细胞后给药，低剂量组、中剂量组和高剂量组脾指数与空白组相比均有降低，但都没有显著性差异；低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组胸腺指数与空白组相比均有升高，其中中剂量组有显著性升高。低剂量组、中剂量组和高剂量组与空白组比较都有一定的抑制肿瘤作用，其中低剂量组和中剂量组与空白对照组相比均具有显著性差异，其体重增加而肿瘤质量降低，但低剂量组和中剂量组之间没有显著性差异。高剂量组与空白组相比体重增加了，但同时肿瘤质量也增长了。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
