一种从紫色粉葛中提取含硒抗氧化活性成分的方法
技术领域
本发明涉及植物提取技术领域，具体涉及一种从紫色粉葛中提取含硒抗氧化活性成分的方法。
背景技术
紫色粉葛是豆科葛属植物。粉葛主要成分是淀粉，此外还含有约12％的黄酮类化合物，包括大豆甙、大豆甙元和葛根素等10余种，并含有胡萝卜甙、氨基酸和香豆素类等；还有蛋白质、氨基酸、糖和人体必需的钙、铁、铜和硒等矿物质，是老少皆宜的名贵滋补品，有“千年人参”之美誉。尤其是紫色粉葛中含有的的微量元素硒，是四大抗氧化剂之一，也是人体必需的微量元素，其可以增强自由基的清除能力，提高体内的抗氧化能力，提高免疫力，降血脂，抗肿瘤，预防老年性疾病等多重功效，中国营养学会推荐每日硒摄入量为50-250mg。鉴于紫色粉葛中含有丰富的微量元素硒，因此，人们通过食用紫色粉葛就可以满足每日硒的摄入量。但紫色粉葛中含硒量因种植区域和种植环境等客观条件的影响而不同，食用量没有统一的参考标准，因此需要对紫色粉葛中含硒量进行提取，测定，以便为紫色粉葛的食用量作出指导。
申请号CN201910700446.8，公开了一种提取富硒菊花中含硒抗氧化活成分的方法，但其是针对富硒菊花而设计的。发明人采用该方法提取紫色粉葛中的含硒抗氧化活性成分时，提取率较低。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
本发明的目的在于提供一种由紫色粉葛提取含硒抗氧化活性成分的方法，该方法针对紫色粉葛设计，可以提高紫色粉葛中硒蛋白的提取率，为紫色粉葛的食用量作出指导，进而提高紫色粉葛的利用价值。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种从紫色粉葛中提取含硒抗氧化活性成分的方法，包括以下步骤：
(1)取紫色粉葛的葛根，除杂，切片，烘干，粉碎，得到紫色粉葛粉末；
(2)于紫色粉葛粉末中加入NaOH，室温下磁力搅拌，离心，取上清液；
(3)于上清液中加HCl调整pH，然后加入(NH4)2SO4，冰箱中静置8-10h，离心，收集沉淀；
(4)于沉淀中加NaOH溶液使其溶解，转入透析袋中；
(5)将透析袋置于缓冲液中，一并置于冰箱中透析18-20h，最后真空冷冻干燥即可。
作为优选，步骤(1)中紫色粉葛粉末能全部通过60-80目筛。
作为优选，步骤(2)中NaOH的浓度为0.15mol/L，紫色粉葛粉末与NaOH的料液比为1：6-12；离心的转速为3000-3500r/min，离心时间为20-30min。
作为优选，步骤(3)中pH调整至4.0-5.0；(NH4)2SO4的饱和度达到50-65％；冰箱的温度为3℃；离心的转速为3500-4000r/min，离心时间为15-20min。
作为优选，步骤(4)中NaOH的浓度为0.18mol/L。
作为优选，步骤(5)中缓冲液为Tris-HCl缓冲液，缓冲液的pH值为7.5；冰箱的温度为5℃；真空冷冻干燥的温度为-35--40℃。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明先将紫色粉葛处理成紫色粉葛粉末，然后加入NaOH，磁力搅拌，离心，取上清液；接着调整上清液的pH值，加入(NH4)2SO4浸提，并收集沉淀；再接着利用NaOH将沉淀溶解，装入透析袋，并将透析袋置于缓冲液中透析，最后将透析所得产物真空冷冻干燥即可。整个提取过程操作简单，且针对紫色粉葛而设计，可以提高紫色粉葛中含硒抗氧化活性成分的提取率。以此，可以为紫色粉葛的食用量作出指导，进而提高紫色粉葛的利用价值。
具体实施方式
下面对本发明专利的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域所属的技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在以下实施例中透析袋的压平宽度为25mm，截留分子量为8KD。
实施例1
一种从紫色粉葛中提取含硒抗氧化活性成分的方法，包括以下步骤：
(1)取紫色粉葛的葛根，除杂，切片，烘干，粉碎，得到紫色粉葛粉末；该紫色粉葛粉末能全部通过80目筛；称取紫色粉葛粉末的质量；
(2)于紫色粉葛粉末中加入浓度为0.15mol/L NaOH，室温下磁力搅拌，3500r/min转速的条件下离心30min，取上清液；
(3)于上清液中加HCl调整pH至5.0，然后加入(NH4)2SO4使饱和度达到65％，在温度为3℃的冰箱中静置10h，4000r/min的转速下离心20min，收集沉淀；
(4)于沉淀中加浓度为0.18mol/L NaOH溶液使其溶解，转入透析袋中；
(5)将透析袋置于pH为7.5的Tris-HCl缓冲液中，一并置于温度为5℃的冰箱中透析20h，最后真空冷冻干燥，称取干燥的质量，即提取的硒蛋白质量。
在本实施例中，步骤(2)中紫色粉葛粉末与NaOH的料液比为1：12；步骤(5)中真空冷冻干燥的温度为-40℃。
实施例2
一种从紫色粉葛中提取含硒抗氧化活性成分的方法，包括以下步骤：
(1)取紫色粉葛的葛根，除杂，切片，烘干，粉碎，得到紫色粉葛粉末；该紫色粉葛粉末能全部通过70目筛；称取紫色粉葛粉末的质量；
(2)于紫色粉葛粉末中加入浓度为0.15mol/L NaOH，室温下磁力搅拌，3250r/min转速的条件下离心25min，取上清液；
(3)于上清液中加HCl调整pH至4.5，然后加入(NH4)2SO4使饱和度达到57.5％，在温度为3℃的冰箱中静置9h，3750r/min的转速下离心17.5min，收集沉淀；
(4)于沉淀中加浓度为0.18mol/L NaOH溶液使其溶解，转入透析袋中；
(5)将透析袋置于pH为7.5的Tris-HCl缓冲液中，一并置于温度为5℃的冰箱中透析19h，最后真空冷冻干燥，称取干燥的质量，即提取的硒蛋白质量。
在本实施例中，步骤(2)中紫色粉葛粉末与NaOH的料液比为1：9；步骤(5)中真空冷冻干燥的温度为-37.5℃。
实施例3
一种从紫色粉葛中提取含硒抗氧化活性成分的方法，包括以下步骤：
(1)取紫色粉葛的葛根，除杂，切片，烘干，粉碎，得到紫色粉葛粉末；该紫色粉葛粉末能全部通过60目筛；称取紫色粉葛粉末的质量；
(2)于紫色粉葛粉末中加入浓度为0.15mol/L NaOH，室温下磁力搅拌，3000r/min转速的条件下离心20min，取上清液；
(3)于上清液中加HCl调整pH至4.0，然后加入(NH4)2SO4使饱和度达到50％，在温度为3℃的冰箱中静置8h，3500r/min的转速下离心15min，收集沉淀；
(4)于沉淀中加浓度为0.18mol/L NaOH溶液使其溶解，转入透析袋中；
(5)将透析袋置于pH为7.5的Tris-HCl缓冲液中，一并置于温度为5℃的冰箱中透析18h，最后真空冷冻干燥即可，称取干燥的质量，即提取的硒蛋白质量。
在本实施例中，步骤(2)中紫色粉葛粉末与NaOH的料液比为1：6；步骤(5)中真空冷冻干燥的温度为-35℃。
对比例1
采用申请号CN201910700446.8公开提取方法，并采用其公开的最优的提取工艺参数。
提取率测定
采用氢化物院子荧光光谱法，按照GB/T 5009.93-2010中的方法测定实施例1-3中硒蛋白提取率和硒提取率，测量结果见下表1。
硒蛋白提取率(％)＝(提取的硒蛋白质量÷紫色粉葛粉末的质量)×100；
硒提取率(％)＝(提取的硒蛋白中硒含量÷紫色粉葛粉末中硒含量)×100；
表1本发明硒蛋白提取率和硒提取率
从表1可以看出，利用本发明的提取方法对紫色粉葛中硒蛋白进行提取时，硒蛋白提取率最高达到了4.36％，而硒提取率也达到了42.17％，明显高于对比例。
因此，本发明的提取方法可以提高紫色粉葛中硒蛋白的提取率，为紫色粉葛的食用量作出指导，进而提高紫色粉葛的利用价值。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
