一种顺式-阿魏酸戊酯化合物及其制备方法和应用

一种顺式-阿魏酸戊酯化合物及其制备方法和应用

　　技术领域

　　本发明属于食品和天然药物化学领域，涉及一种顺式-阿魏酸戊酯化合物的制备方法及其作为自由基清除剂/抗氧化剂的应用。

　　背景技术

　　自由基，化学上也称为“游离基”，是指化合物的分子在光热等外界条件下，共价键发生均裂而形成的具有不成对电子的原子或基团。一般情况下，生命是离不开自由基活动的。人体里也有自由基，受控的自由基对人体是有益的，它们既可以帮助传递维持生命活力的能量，也可以被用来杀灭细菌和寄生虫，还能参与排除毒素；但当人体中的自由基超过一定的量，便会失去控制，给我们的生命带来伤害。生命体内的自由基是与生俱来的，生命延续至今，说明生命本身具有平衡自由基或清除多余自由基的能力。然而，随着人类文明的飞速发展不断破坏着生态环境，制造着更多的自由基，已经超过了生命所能正常保持平衡的标准，使得人类健康面临着前所未有的严峻挑战。随着对自由基研究的逐步深入，我们越来越清楚地认识到，清除多余自由基的措施有益于某些疾病的预防和治疗，而自由基清除剂的研究对人体健康的意义便显得非常重大。因此，开发和利用高效无毒的天然抗氧化剂----自由基清除剂，已成为当今食品和医药研发领域的重要研究方向；尤其是从可食用资源中寻找开发新的自由基清除剂，具有更大的研究价值和广阔的开发前景。

　　发明内容

　　为了进一步挖掘杏鲍菇的经济和药用价值，本发明提供一种从杏鲍菇中提取的顺式-阿魏酸戊酯化合物，其对DPPH自由基具有显著的清除活性。

　　本发明的另一目的是提供一种上述顺式-阿魏酸戊酯化合物的制备方法。

　　本发明的再一目的是提供一种上述顺式-阿魏酸戊酯化合物作为DPPH自由剂清除剂/抗氧化剂的应用。

　　为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

　　一种顺式-阿魏酸戊酯化合物，其结构式如图1所示。

　　上述一种顺式-阿魏酸戊酯化合物的制备方法，包括以下步骤：

　　杏鲍菇干燥子实体，粉碎后用乙醇浸提，浸提液减压浓缩至无醇味，得到粗浸膏；

　　将步骤所得粗浸膏悬浮于蒸馏水中，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，得乙酸乙酯萃取物；

　　将步骤中所得乙酸乙酯萃取物过D101大孔树脂柱层析，依次用30%、50%、70%、95%比例的乙醇-水洗脱，得四个组分Fr A1~A4；

　　将步骤中所得组分Fr A3过正相硅胶柱层析，用99:1至4:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得八个组分Fr B1~B8；

　　将步骤中所得组分Fr B5过RP-18反相硅胶柱层析，用70%至100%甲醇-水梯度洗脱，得五个组分Fr C1~C5；

　　将步骤中所得组分Fr C3过Agilent SB-C18柱高效液相色谱，用80%的乙腈-水溶液等度洗脱，检测波长为254 nm，收集保留时间为18.2 min的组分，即得上述图1所示的顺式-阿魏酸戊酯化合物。

　　步骤中所述杏鲍菇与乙醇的料液比为1:2~1:4（w/v）。

　　步骤中所述杏鲍菇干燥子实体粉碎至粒度直径小于3 mm。

　　步骤中所述浸提次数为3~4次，每次时间为7~10天。

　　步骤中所述浓缩为原体积的1/50~1/70。

　　步骤中所述粗浸膏与水的体积比为1:1~1:2。

　　步骤中所述乙酸乙酯与水的体积比为1:1~1:1.5。

　　步骤中所述乙酸乙酯萃取次数为3~4次。

　　步骤中，流速3.0 mL/min。

　　一种上述的顺式-阿魏酸戊酯化合物在作为自由剂清除剂和抗氧剂方面的应用。

　　附图说明

　　图1是化合物的结构式；

　　图2是化合物的氢谱（600 MHz）和碳谱（151 MHz）（CD3OD）数据；

　　图3是化合物的高分辨质谱；

　　图4是化合物的氢谱；

　　图5是化合物的碳谱；

　　图6是化合物的二维COSY谱；

　　图7是化合物的二维HSQC谱；

　　图8是化合物的二维HMBC谱。

　　具体实施方式

　　下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。

　　实施例1 一种顺式-阿魏酸戊酯化合物的制备。

　　杏鲍菇干燥子实体，粉碎至粒度直径小于3 mm，用95%的乙醇浸泡提取3次，每次7天。将乙醇提取液合并，减压浓缩得到粗浸膏。粗浸膏悬浮于1.5 L的水中，然后用乙酸乙酯萃取三次，每次1.0 L。合并乙酸乙酯萃取相，减压浓缩得到乙酸乙酯萃取物。

　　将该萃取物进行D101大孔树脂柱层析，用乙醇-水（v/v，30%、50%、70%和95%）洗脱，依次得到4个组分Fr A1~A4。组分Fr A3经正相硅胶柱层析，用99:1至4:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，根据薄层层析分析洗脱液成分，收集得到八个组分Fr B1~B8。组分Fr B5经RP-18反相硅胶柱层析，用70%至100%甲醇-水梯度洗脱，得五个组分Fr C1~C5。Fr C3过AgilentSB-C18柱高效液相色谱，用80%的乙腈-水溶液等度洗脱，检测波长为254 nm，收集保留时间为18.2 min的组分，除去溶剂即得上述图1所示的顺式-阿魏酸戊酯化合物纯品。

　　实施例2 顺式-阿魏酸戊酯化合物的结构鉴定。

　　化合物的结构鉴定：通过分析高分辨质谱（图3）得到准分子离子峰m/z 265.1432（[M ＋ H]＋, 理论值265.1434），结合碳谱（图5）数据确定了其分子式为C15H20O4。氢谱数据（图4）中除了显示顺式-阿魏酰基的信号[δH 7.76 (d, J = 1.9 Hz), 7.10 (dd, J =8.1, 1.9 Hz), 6.90 (d, J = 8.1 Hz); 6.79, 5.82 (both d, J = 12.8 Hz); 5.83(s, OH); 3.93 (s, 3H)]外，还观察到戊氧基的信号[δH 4.12 (t, J = 6.8 Hz, 2H),1.65 (m, 2H), 1.33 (m, 4H) and 0.90 (t, J = 6.8 Hz, 3H)]；进一步分析碳谱，确认了上述基团的存在。两个基团通过酯键连接起来是根据戊氧基H2-1＇到阿魏酰基C-9的HMBC关键信号确定。以上结构鉴定得到了二维核磁数据的最终确认（图6-8）。

　　化合物的氢谱（600 MHz）和碳谱（151 MHz）（CD3OD）数据见图2。

　　实施例3 化合物自由基清除/抗氧化活性的测试。

　　采用DPPH法测定化合物的自由基清除/抗氧化活性：在96孔板中加入100 μL，200μM的DPPH乙醇溶液和100 μL待测样品的乙醇溶液，25 °C孵育30 min，于517 nm 处测定反应溶液的吸光度AS，以100 μL，200 μM的DPPH乙醇溶液和100 μL乙醇溶液的混合液作为阴性对照AC，DPPH 自由基清除率（%）= [(AC- AS)/ AC]×100%。采用抗坏血酸（维生素C）作为阳性对照。

　　实验结果显示，图1所示顺式-阿魏酸戊酯化合物具有清除氧自由基的活性，IC50为25.0 ± 0.7 μM，与阳性对照的活性相当（IC50 25.4 ± 2.9 μM）。