一种微生物菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于复合微生物菌剂技术领域，具体涉及一种微生物菌剂及其制备方法。
背景技术
农作物的土传病害是世界性重要病害，具有毁灭性，特点是分布广、危害重、寄主范围宽、传播途径多、存活时间久。目前我国防治土传病害主要以化学农药为主，生物农药为辅，而化学农药有高毒、高残留及难降解等不足。由于人们长期大量使用，使得生态平衡遭到破坏、伤及到天敌，耐药性病虫害大量增加等。
随着社会的进步发展，人们关注的重点逐渐转向低毒、低残留、无污染、不伤天敌、难产生抗药性等无公害生物农药。以生物防控为主的综合防控措施因其具有环境友好、病原菌不易产生抗性等优势而日益受到人们重视，并取得了一定效果。但是由于微生物生防菌剂是活体菌，在其开发中也存在许多有待于解决的问题。例如，目前微生物生防菌常常采用单一菌制备，功效单一，影响微生物制备的应用和发展。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的问题，提供一种微生物菌剂及其制备方法和应用，本发明微生物菌剂不仅安全性高、不会产生抗药性，而且长期使用能减少化肥和化学农药带来的环境污染问题；另外，本发明微生物菌剂不仅对多种植物病原真菌都具有抑制生长活性作用，而且与化肥混合使用能提高化肥的利用率，同时改善土壤和作物品质。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供一种微生物菌剂，包括以下质量份的组分：哈茨木霉10～30份、克里布所类芽孢杆菌8～12份、解淀粉芽孢杆菌5～20份和腐熟料50～67份；
所述哈茨木霉的活菌数为1～4×109CFU/g，所述克里布所类芽孢杆菌的活菌数为2～5×109CFU/ml，所述解淀粉芽孢杆菌的活菌数为4～10×1010CFU/g；
所述腐熟料的制备包括：将粪污、菇渣和有机废弃物混合后，经混合发酵菌发酵、灭菌后得到；
所述混合发酵菌包括枯草芽孢杆菌、长枝木霉和灰略红链霉菌。
优选的，所述克里布所类芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo.17248；
所述解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNO.15403。
优选的，所述粪污、菇渣、有机废弃物和混合发酵菌的质量比为35～48:35～48:15～28:2～10；
所述混合发酵菌中枯草芽孢杆菌的活菌数为3～5×109CFU/mL，所述混合发酵菌中长枝木霉的活菌数为1～3×109CFU/mL，所述混合发酵菌中灰略红链霉菌的活菌数为5～15×108CFU/mL。
优选的，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo.10248；
所述长枝木霉的保藏编号为CGMCCNo.10144；
所述灰略红链霉菌的保藏编号为CGMCCNo.10247。
优选的，所述有机废弃物包括秸秆、麦麸、谷糠、中药渣、海藻泥和茶叶渣中的一种或多种。
优选的，所述腐熟料的制备包括以下步骤：
将所述粪污、菇渣和有机废弃物混合后，经混合发酵菌发酵、后熟，得到发酵物料，将所述发酵物料过筛、粉碎、灭菌、烘干，得到腐熟料；
所述发酵的温度为55～65℃，所述发酵的时间为15～20d；所述后熟的时间为15～20d。
本发明提供了上述方案所述的微生物菌剂在防治植物病害中的应用。
本发明提供了上述方案所述的微生物菌剂在促进植物生长中的应用。
优选的，所述植物包括柑橘、火龙果和哈密瓜。
优选的，所述植物病害包括根腐病、枯萎病、蔓枯病和炭疽病。
有益效果：
本发明提供一种微生物菌剂，包括以下质量份的组分：哈茨木霉10～30份、克里布所类芽孢杆菌8～12份、解淀粉芽孢杆菌5～20份和腐熟料50～67份；所述哈茨木霉的活菌数为1～4×109CFU/g，所述克里布所类芽孢杆菌的活菌数为2～5×109CFU/ml，所述哈茨木霉的活菌数为4～10×1010CFU/g；所述腐熟料的制备包括：将粪污、菇渣和有机废弃物混合后，经混合发酵菌发酵、灭菌后得到；所述混合发酵菌包括枯草芽孢杆菌、长枝木霉和灰略红链霉菌。本发明通过枯草芽孢杆菌、长枝木霉和灰略红链霉菌将常见的有机肥和有机废物进行发酵，进而与哈茨木霉、克里布所类芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和腐殖酸土进行复配，不仅安全性高、不会产生抗药性，而且长期使用能减少化肥和化学农药带来的环境污染问题；另外，本发明微生物菌剂不仅对多种植物病原真菌都具有抑制生长活性作用，而且与化肥混合使用能提高化肥的利用率，同时改善土壤和作物品质。
进一步的，本发明提供的微生物菌剂，通过枯草芽孢杆菌、长枝木霉和灰略红链霉菌将常见的有机肥和有机废物进行发酵，不仅解决了传统有机肥在使用过程对作物根的伤害，而且通过发酵产生的大量酶活性物质可以促进作物提高自身的免疫力以及强化自身抵抗力。
进一步的，本发明提供的微生物菌剂，不仅提高了作物的产量，而且对于作物的品质也有明显提高，进而提高了经济效益。
生物保藏说明：
克里布所类芽孢杆菌三炬-021，拉丁名为Paenibacilluskribbensis，于2019年02月20日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.17248。
解淀粉芽孢杆菌三炬-17，拉丁名为Bacillusamyloliquefaciens，于2018年02月27日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.15403。
枯草芽孢杆菌三炬-07，拉丁名为Bacillussubtilis，于2014年12月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.10248。
长枝木霉三炬-08，拉丁名为Trichodermalongibrachiatum，于2014年12月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.10144。
灰略红链霉菌三炬-09，拉丁名为Streptomycesgriseorubens，于2014年12月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMC%20C)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.10247。
具体实施方式
本发明提供一种微生物菌剂，包括以下质量份的组分：哈茨木霉10～30份、克里布所类芽孢杆菌8～12份、解淀粉芽孢杆菌5～20份和腐熟料50～67份；
所述哈茨木霉的活菌数为1～4×109CFU/g，所述克里布所类芽孢杆菌的活菌数为2～5×109CFU/ml，所述解淀粉芽孢杆菌的活菌数为4～10×1010CFU/g；
所述腐熟料的制备包括：将粪污、菇渣和有机废弃物混合后，经混合发酵菌发酵、灭菌后得到；
所述混合发酵菌包括枯草芽孢杆菌、长枝木霉和灰略红链霉菌。
以质量份计，本发明提供的微生物菌剂包括10～30份哈茨木霉，进一步优选为15～25份，最优选为20份。在本发明中，所述哈茨木霉的活菌数为1～4×109CFU/g，进一步优选为2～3.5×109CFU/g，最优选为3×109CFU/g；所述哈茨木霉来源没有特殊要求，采用本领域技术人员所熟知的市售商品即可。
在本发明中，所述哈茨木霉的培养方法优选包括以下步骤：
将哈茨木霉菌种活化，制备成哈茨木霉种液；
将所述哈茨木霉种液接种于发酵罐内进行液体发酵，得到哈茨木霉发酵液；
将哈茨木霉发酵液接种于固体培养基中，铺盘，进行浅盘发酵，得到哈茨木霉。
在本发明中，所述哈茨木霉菌种的活化优选将保藏的哈茨木霉菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，28～35℃培养36～60h进行活化培养。
在本发明中，所述哈茨木霉液体发酵采用本领域常规使用的哈茨木霉液体培养基，所述的液体培养基优选经120～130℃灭菌30～45min后使用。本发明对所述发酵的设备没有特殊的限制，采用本技术领域常规的发酵罐即可。
在本发明中，所述液体发酵的温度优选为28～35℃，更优选的为30～32℃；所述液体发酵的pH值优选为6.8～7.0，更优选的为6.9；罐内压力优选为0.05～0.1MPa，更优选的为0.07～0.08MpPa；所述液体发酵的通气量优选为0.8～1.2V/V·min，更优选的为1V/V·min；所述液体发酵的时间优选为36～48h，更优选的为44h。
在本发明中，所述的固体培养基优选包括以下重量份的组分：麦麸40～50份，谷壳5～10份，玉米粉5～10份，菇渣30～40份。本发明优选在所述固体培养基中加水，使添加哈茨木霉发酵液后的固体培养基含水量为55％～65％，然后铺盘，进行浅盘发酵。
在本发明中，所述的固体发酵的温度优选为28～35℃，更优选的为30～32℃；所述固体发酵的湿度优选为70％～95％，更优选为80％～90％；所述固体发酵的时间优选为48～120h，更优选为60～110h，最优选为108h。
在本发明中，优选将得到固体发酵培养基烘干、粉碎和收孢，得到哈茨木霉。在本发明中，所述烘干的温度优选为50～70℃，更优选为55～60℃；所述烘干含水量优选为15～20％；所述过筛优选采用80目筛。本发明对所述粉碎和收孢没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的粉碎和收孢的技术方案即可。
以所述哈茨木霉的质量份为基准，本发明提供的微生物菌剂包括8～12份克里布所类芽孢杆菌，进一步优选为9～11份，最优选为10份。在本发明中，所述克里布所类芽孢杆菌的活菌数为2～5×109CFU/g，进一步优选为2.3～3×109CFU/g，最优选为2.5×109CFU/g。
在本发明中，优选保藏编号为CGMCCNo.17248的克里布所类芽孢杆菌。
在本发明中，所述克里布所类芽孢杆菌的培养方法优选包括以下步骤：
将克里布所类芽孢杆菌用牛肉膏蛋白胨培养基活化后，挑取单菌落或菌苔接种到装量为摇瓶20％体积的液体察氏培养基中，30℃、200r/min振荡培养36～48h，待菌种生长到镜检无杂菌后，得到克里布所类芽孢杆菌种液；
将克里布所类芽孢杆菌种液接入液体发酵罐进行液体发酵培养，得到克里布所类芽孢杆菌发酵液；
将发酵液通过膜浓缩设备浓缩得到克里布所类芽孢杆菌。
在本发明中，所述液体察式培养基包括以下质量份的组分：蔗糖25～30份、硝酸钠1～2份、磷酸氢二钾0.5～1.5份、硫酸镁0.3～0.6份、氯化钾0.5～1份、硫酸铁0.01份、水1000份。
在本发明中，所述发酵罐中的液体培养基包括以下质量份的组分：蔗糖9000～10000份、硝酸钠450～500份、磷酸氢二钾300～350份、硫酸镁150～200份、氯化钾150～200份、硫酸铁3～5份、消泡剂900～1000份。
在本发明中，所述克里布所类芽孢杆菌在发酵罐中发酵，优选包括：
接种后发酵量按50％计算，培养36～48h，发酵过程中，温度控制在28～30℃，保持通气量，持续搅拌，待克里布所类芽孢杆菌发酵液呈粘稠状态出罐，获得克里布所类芽孢杆菌的菌液。
在本发明中，所述持续搅拌，优选为前24h不搅拌。
在本发明中，所述克里布所类芽孢杆菌在发酵罐中的发酵的温度优选为28～35℃，更优选的为30～32℃；所述液体发酵的pH值优选为6.8～7.0，更优选的为6.9；罐内压力优选为0.05～0.1MPa，更优选的为0.07～0.08MpPa；所述液体发酵的通气量优选为0.8～1.2V/V·min，更优选的为1V/V·min；所述液体发酵的时间优选为36～48h，更优选的为44h。
以所述哈茨木霉的质量份为基准，本发明提供的微生物菌剂包括5～20份解淀粉芽孢杆菌，进一步优选为8～15份，最优选为10份。在本发明中，所述解淀粉芽孢杆菌的活菌数为4～10×1010CFU/g，进一步优选为4.5～7×1010CFU/g，最优选为5×1010CFU/g。
在本发明中，优选保藏编号为CGMCCNO.15403的解淀粉芽孢杆菌。
在本发明中，解淀粉芽孢杆菌的培养方法，优选包括以下步骤：
将解淀粉芽孢杆菌菌种活化，制成解淀粉芽孢杆菌种液；
将所述解淀粉芽孢杆菌种液接种于发酵罐内进行液体发酵，得到解淀粉芽孢杆菌发酵液；
将所述解淀粉芽孢杆菌发酵液进行离心脱水，喷雾干燥，得到解淀粉芽孢杆菌菌粉。
本发明中，所述解淀粉芽孢杆菌菌种的活化优选将解淀粉芽孢杆菌菌种接种于装有察氏培养基的茄型瓶中，28～35℃培养24～36h进行活化培养。
本发明中，所述解淀粉芽孢杆菌的液体发酵采用本领域常规使用的解淀粉芽孢杆菌液体培养基，所述的液体培养基优选经120～130℃灭菌30～45min后使用。本发明对所述发酵的设备没有特殊的限制，采用本技术领域常规的发酵罐即可。
在本发明中，所述解淀粉芽孢杆菌液体发酵的温度优选为28～35℃，更优选的为30～32℃；所述液体发酵的pH值优选为5.8～6.5，更优选的为6.0；罐内压力优选为0.05～0.1MPa，更优选的为0.07～0.08MpPa；所述液体发酵的通气量优选为0.5～0.8V/V·min，更优选的为0.6V/V·min；所述液体发酵的时间优选为36～48h，更优选的为40h。
在本发明中，优选将解淀粉芽孢杆菌发酵液添加发酵液总质量10％～20％的吸附剂，通过蝶式离心机进行离心操作，获取离心沉淀；将所述沉淀物进行喷雾干燥，烘干水分，得到解淀粉芽孢杆菌；
所述蝶式离心机转速为10000r/min，离心时间为10min。
以所述哈茨木霉的质量份为基准，本发明提供的微生物菌剂包括50～67份腐熟料，进一步优选为52～65份，最优选为60份。在本发明中，所述腐熟料的制备包括：将粪污、菇渣和有机废弃物混合后，经混合发酵菌发酵、灭菌后得到；所述混合发酵菌包括枯草芽孢杆菌、长枝木霉三炬和灰略红链霉菌。
在本发明中，优选所述粪污、菇渣、有机废弃物和混合发酵菌的质量比为35～48:35～48:15～28:2～10；进一步优选为40:40:20:3～5。
优选所述混合发酵菌中枯草芽孢杆菌的活菌数为3～5×109CFU/mL，进一步优选为35～45×108CFU/mL，最优选为4×109CFU/mL；优选所述混合发酵菌中长枝木霉的活菌数为1～3×109CFU/mL，进一步优选为15～25×108CFU/mL，最优选为2×109CFU/mL；优选所述混合发酵菌中灰略红链霉菌的活菌数为5～15×108CFU/mL，进一步优选为7～12×108CFU/mL，最优选为1×109CFU/mL。
在本发明中，所述枯草芽孢杆菌优选为保藏编号为CGMCCNo.10248的枯草芽孢杆菌；所述长枝木霉优选为保藏编号为CGMCCNo.10144的长枝木霉；所述灰略红链霉菌优选为保藏编号为CGMCCNo.10247的灰略红链霉菌。
在本发明中，所述有机废弃物优选包括秸秆、麦麸、谷糠、中药渣、海藻泥和茶叶渣中的一种或多种。
在本发明中，所述腐熟料的制备，优选包括以下步骤：将所述粪污、菇渣和有机废弃物混合后，经混合发酵菌发酵、后熟，得到发酵物料，将所述发酵物料过筛、粉碎、灭菌、烘干，得到腐熟料；
所述发酵的温度为55～65℃，所述发酵的时间为15～20d；所述后熟的时间为15～20d。
在本发明中，所述腐熟料的制备，优选还包括以下步骤：发酵的物料起始含水量为55％～65％，料堆高度控制在0.8～1m。
在本发明中，所述过筛、粉碎优选包括先物料通过强磁区，剔除含铁杂物，之后将物料通过1～3mm筛，将未过筛物进行筛选，剔除，通过塑料剔除区，将塑料剔除干净；将剩余的大颗粒物进行碾压至颗粒大小为3～10mm大小过筛网；取两次过筛物混合进行二次粉碎，最后过40～80目筛，得到腐熟料。
本发明通过枯草芽孢杆菌、长枝木霉和灰略红链霉菌将常见的有机肥和有机废物进行发酵，进而与哈茨木霉、克里布所类芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌进行复配，不仅安全性高、不会产生抗药性，而且长期使用能减少化肥和化学农药带来的环境污染问题；另外，本发明微生物菌剂不仅对多种植物病原真菌都具有抑制生长活性作用，而且与化肥混合使用能提高化肥的利用率，同时改善土壤和作物品质。
进一步的，本发明提供的微生物菌剂，通过枯草芽孢杆菌、长枝木霉和灰略红链霉菌将常见的有机肥和有机废物进行发酵，不仅解决了传统有机肥在使用过程对作物根的伤害，而且通过发酵产生的大量酶活性物质可以促进作物提高自身的免疫力以及强化自身抵抗力。
本发明还提供了上述方案所述的微生物菌剂在防治植物病害中的应用。
本发明还提供了上述方案所述的微生物菌剂在促进植物生长中的应用。
在本发明中，所述植物优选包括柑橘、火龙果和哈密瓜。
在本发明中，所述植物病害优选包括根腐病、枯萎病、蔓枯病和炭疽病。
本发明提供的微生物菌剂，不仅提高了作物的抗病能力，而且对于作物的产量和品质也有明显提高，进而提高了经济效益。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的包括一种微生物菌剂及其制备方法和应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
哈茨木霉的培养
(1)将保藏的哈茨木霉菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，28℃培养48h进行活化；
(2)将300L哈茨木霉液体培养基加入到500L的发酵罐内，经121℃蒸汽灭菌30min；
(3)取步骤(1)中的哈茨木霉种液15L接种于步骤(2)中的发酵罐内，在温度为30℃，pH值为6.9，罐内压力为0.08MpPa，通气量为1V/V·min的条件下发酵60h，得到哈茨木霉发酵液；
(4)将麦麸50kg，谷壳10kg，玉米粉10kg，菇渣30kg混合后加水，得到哈茨木霉固体培养基；
(5)将步骤(3)中的哈茨木霉发酵液30L接种于步骤(4)中的固体培养基中，使固体培养基含水量60％，铺盘，在温度为30℃，湿度为80的条件下进行浅盘发酵72h，得到含哈茨木霉的固体培养基。
(6)将步骤(5)得到的含哈茨木霉的固体培养基烘干(温度60℃，含水量20％)、粉碎后过80目筛，得到哈茨木霉。
实施例2
克里布所类芽孢杆菌的培养
(1)取蔗糖30g、硝酸钠1g、磷酸氢二钾1g、硫酸镁0.5g、氯化钾1g、硫酸铁0.01g、水1000mL，制备成液体察式培养基。
(2)将保藏编号为CGMCCNo.17248的克里布所类芽孢杆菌用牛肉膏蛋白胨培养基活化后，挑取单菌落或菌苔接种到装量为摇瓶20％体积的步骤(1)中的液体察氏培养基中，30℃、200r/min振荡培养48h，待菌种生长到镜检无杂菌后，得到克里布所类芽孢杆菌种液；
(3)取蔗糖10kg、硝酸钠500g、磷酸氢二钾350g、硫酸镁200g、氯化钾200g、硫酸铁5g、消泡剂900mL和300L水加入到500L的发酵罐中。
(4)将步骤(2)中的克里布所类芽孢杆菌种液15L接入步骤(3)的液体发酵罐中，在温度30℃，pH值为6.9，罐内压力为0.08MpPa，通气量优选为为1V/V·min的条件下持续搅拌(前24h不搅拌)发酵，待克里布所类芽孢杆菌发酵液呈粘稠状态出罐，获得克里布所类芽孢杆菌的菌液；
(5)将步骤(4)的克里布所类芽孢杆菌的菌液通过膜浓缩设备浓缩至活菌数为2.5×109CFU/g，得到克里布所类芽孢杆菌。
实施例3
解淀粉芽孢杆菌的培养
(1)取蔗糖30g、硝酸钠1g、磷酸氢二钾1g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硫酸铁0.01g、水1000mL，制备成液体察式培养基。
(2)将保藏编号为CGMCCNO.15403的解淀粉芽孢杆菌菌种接种于装有步骤(1)中察氏培养基的茄型瓶中，30℃培养36h进行活化培养，制成解淀粉芽孢杆菌种液；
(3)将300L解淀粉芽孢杆菌液体培养基加入到500L的发酵罐内，经121℃蒸汽灭菌30min；
(3)将步骤(2)中的解淀粉芽孢杆菌种液15L接种于步骤(3)中发酵罐内进行液体发酵，其中液体发酵的温度为30℃，pH值为6.0，罐内压力为0.08MpPa，通气量为0.6V/V·min，发酵的时间为40h；
(4)向步骤(3)的解淀粉芽孢杆菌发酵液添加发酵液总质量20％的菌液吸附剂，通过蝶式离心机进行离心(10000r/min，离心时间为10min)操作，获取离心沉淀；将所述沉淀物进行喷雾干燥，烘干水分，得到解淀粉芽孢杆菌。
实施例4
腐熟料的制备
(1)取粪污40kg、菇渣40kg、秸秆20kg和菌活为40CFU/mL保藏编号为CGMCCNo.10248的枯草芽孢杆菌2L，菌活为20CFU/mL保藏编号为CGMCCNo.10144的长枝木霉1.5L，菌活为10CFU/mL保藏编号为CGMCCNo.10247的灰略红链霉菌1.5L，混合后控制起始含水量为60％，料堆高度控制在0.8m，通过三炬曝氧发酵槽进行通氧发酵(发酵的温度为60℃，发酵的时间为20)，后熟(20)，得到发酵物料，将发酵物料过筛、粉碎、灭菌、烘干，得到腐熟料。
其中，过筛、粉碎包括先物料通过强磁区，剔除含铁杂物，之后将物料通过2mm筛，将未过筛物进行筛选，剔除，通过塑料剔除区，将塑料剔除干净；将剩余的大颗粒物进行碾压至颗粒大小为6mm大小过筛网；取两次过筛物混合进行二次粉碎，最后过60目筛，得到腐熟料。
实施例5
取实施例1制备的哈茨木霉20kg、实施例2制备的克里布所类芽孢杆菌8kg、实施例3制备的解淀粉芽孢杆菌5kg和实施例4制备的腐熟料67kg，混合均匀后得到微生物菌剂。
实施例6
取实施例1制备的哈茨木霉20kg、实施例2制备的克里布所类芽孢杆菌10kg、实施例3制备的解淀粉芽孢杆菌10kg和实施例4制备的腐熟料60kg，混合均匀后得到微生物菌剂。
实施例7
取实施例1制备的哈茨木霉30kg、实施例2制备的克里布所类芽孢杆菌12kg、实施例3制备的解淀粉芽孢杆菌8kg和实施例4制备的腐熟料50kg，混合均匀后得到微生物菌剂。
实施例8
取实施例1制备的哈茨木霉10kg、实施例2制备的克里布所类芽孢杆菌8kg、实施例3制备的解淀粉芽孢杆菌20kg、实施例4制备的腐熟料62kg，混合均匀后得到微生物菌剂。
对比例1
采用实施例6相同的方法制备的微生物菌剂，然后进行灭菌，得到无菌基质。
对比例2
采用实施例7相同的方法制备的微生物菌剂，然后进行灭菌，得到无菌基质。
对比例3
采用实施例8相同的方法制备的微生物菌剂，然后进行灭菌，得到无菌基质。
应用例1
试验柑橘品种为芦柑，种植年限8年，每666.7m2种植55株。
供试土壤：试验地土壤为赤土(赤沙土)，pH5.2、有机质18.9g/kg、全氮0.94g/kg、速效氮85.9mg/kg、速效磷30.6mg/kg、速效钾92.1mg/kg，肥力水平中等。
试验设计：试验设4个处理，3次重复，每个小区5株，小区面积60.6m2，采用随机区组排列，四周设保护行。
处理A实施例6制备的微生物菌剂+常规施肥；
处理B对比例1制备的无菌基质+常规施肥；
处理C常规施肥；
处理D空白对照(不施肥)。
微生物菌剂在柑橘上施用方法：于2019年4月18日穴施，施用量为每株2kg，即每666.7m2用量为110kg。
柑橘常规施肥方法：每666.7m2施复合肥〔N+P5O2+K2O≥45％(18-10-17)〕100.0kg、钙镁磷肥50.0kg、硫酸钾50.0kg、硫酸镁50.0kg。施肥时间与施肥量为：2019年1月21日施基肥，施用干猪粪500kg/666.7m2、钙镁磷肥50.0kg/666.7m2、硫酸镁50.0kg/666.7m2；4月15日施促梢保花肥，6月3日施保果肥，施用量均为每666.7m2施复合肥40.0kg、硫酸钾25.0kg；9月25日施壮果肥，每666.7m2施复合肥20.0kg。柑橘于2019年12月25日采收实测产量，检测柑橘品质。
(1)不同处理对柑橘树体生长情况的影响
田间调查表明，柑橘施微生物菌剂后柑橘树体生长健壮，叶色较绿、叶片较厚有光泽，柑橘根系生长粗壮，促进幼果平衡生长，树体长势旺盛，植株后期根腐病、炭疽病等土传病害明显轻于对照，果实的裂果情况也明显低于对照，具体病情轻重情况为：处理A＞处理B＞处理C＞处理D。
(2)不同处理对柑橘产量影响
试验实收产量(见表1)可算出，处理A(微生物菌剂+常规施肥)产量最高，平均666.7m2产量为1540.2kg，比处理B(无菌基质+常规施肥)每666.7m2产量1411.5kg增加128.7kg，增产9.12％；比处理C(常规施肥)每666.7m2产量1397.2kg增加143.0kg，增产10.23％；比处理D(空白对照)每666.7m2产量926.3kg增加613.9kg，增产66.3％。
表1不同处理对柑橘产量的影响
注：小区面积为60.6平方米。
对试验处理小区产量方差分析，F＝13.892＞F0.01＝8.02，说明处理间产量差异达极显著水平。
表2方差分析表
注：*表示差异达显著水平，**表示差异达极显著水平。
表3多重比较
注：LSD0.05＝6.796kg/小区，LSD0.01＝10.612kg/小区，不同小写字母表示经LSD检验为差异显著，不同大写字母表示经LSD检验为差异极显著。
多重比较结果表明(见表3)：处理A与处理B、C、D产量差异达极显著水平，处理B、C与处理D产量差异达极显著水平，处理B与处理C产量差异不显著。施用微生物菌剂可显著提高柑橘产量，分析原因主要是微生物菌剂能够增强柑橘的光合作用，促进柑橘叶片增厚、浓绿；菌剂中的芽孢杆菌等可活化土壤的生物肥力，改善根系生长环境，促进柑橘对肥料吸收利用及抗病能力的提高。
(3)不同处理对柑橘品质的影响
从柑橘品质分析来看(表4)，处理A比处理B、C、D柑橘品质均有所提高，处理A可溶性总糖含量、可溶性固形物和维生素C含量均有提高的趋势，可滴定酸含量有下降的趋势。处理A比处理B可溶性总糖含量、可溶性固形物和维生素C含量分别提高0.6％、0.4％和1.3mg/100g；可滴定酸含量下降0.11g/100g。分析原因可能是供试肥料中的有益微生物等的作用，通过叶片吸收有益微生物能较好地促进柑橘叶片的生长，有利于果实可溶性总糖含量、可溶性固形物和维生素C含量的积累，从而提高果实品质。
表4不同处理对柑橘品质的影响
(4)不同处理间柑橘的产值及投产比
柑橘按6元/kg、微生物菌剂按3元/kg计算投入产出比。处理A(微生物菌剂+常规施肥)产量比处理C(常规施肥)产量每666.7m2增加143.0kg，增加产值858.0元，扣除每666.7m2微生物菌剂成本330元及施用微生物菌剂工钱120元(每666.7m2)，每666.7m2增收408.0元(见表5)。
处理A(微生物菌剂+常规施肥)比处理C(常规施肥)每666.7m2多投入微生物菌剂330元及施用微生物菌剂工钱120元，增加产值858.0元，投入产出比1∶1.91。
表5不同处理对柑橘产值影响
应用例2：
1、试验作物：金都1号红心火龙果。
供试土壤：酸性潮沙土，母质为冲积物，质地为红壤土，
试验设计：试验设4个处理，3次重复，小区面积36m2，采用随机区组排列，四周设保护行。
处理1实施例7制备的微生物菌剂+常规施肥；
处理2对比例2制备的无菌基质+常规施肥；
处理3常规施肥；
处理4空白对照(不施肥)。
复合微生物菌剂在火龙果上施用方法：于2019年2月18日采用根部弧形施入，然后覆土10～15cm，施用量为每小区12kg。
施肥期间做好田间管理，及时除草，合理灌溉，果品成熟后及时采收，做好数据汇总并检测火龙果品质。
2、结果如下所示
(1)不同处理的生长情况比较
根据田间观察，处理1的小区，叶色、果实、结果率等都优于其它处理，植株后期根腐病、炭疽等土传病害明显轻于对照，果实的裂果情况也明显低于对照，具体病情轻重情况为：处理1＞处理2＞处理3＞处理4。
(2)不同处理的产量比较
从表6中可以看出，各处理的产量均极显著高于对照，其中处理1产量最高，分别比处理3、2及对照增产3933.6kg、1977.9kg及6133.65kg，增产率分别为12.69％、6.0％及21.29％；说明复合微生物菌剂在同等施肥数量的情况下对火龙果具有明显的增产作用，肥效显著。
表6不同处理小区产量
(3)不同处理的果实外观品质比较
试验数据表明(表7)，微生物菌剂处理的果实总重量、果实平均重量分别比对照高出68kg、0.21kg。微生物菌剂在本小区的反映，果实均匀，特别是果实的直径及单果重量明显优于其它处理。
表7不同处理的果实外观品质分析
(4)不同处理的果实营养物质比较
从表8可以看出，处理1果实可溶性固形物、总糖、Vc都相对较高，由此表明，施用微生物菌剂的红心火龙果，其食用价值和营养价值更高。
表8不同处理果实营养物质分析
应用例3：
1、供试作物：哈密瓜，品种为“金蜜六号”。
试验设置4个处理，3次重复，采用随机区组设计，小区面积为8m×1.2m。
处理1实施例8制备的微生物菌剂+常规施肥；
处理2对比例3制备的无菌基质+常规施肥；
处理3常规施肥；
处理4空白对照(不施肥)。
哈密瓜于2019年4月8日定植，定植前施足底肥。定植后于苗期(5月8日)进行复合微生物菌剂处理。
复合微生物菌剂在火龙果上施用方法：于2019年5月08日穴施，施用量为每株2kg。
哈密瓜采收后每小区单独测产，并随机取样测定哈密瓜品质指标：可溶性总糖、有机酸、Vc；同时在哈密瓜的整个生育期观察植株长势及病虫害发生情况。
2、结果如下所示
由表9可知，不同处理的哈密瓜可溶性总糖含量处理1＞处理2＞处理3＞处理4，即微生物菌剂处理的哈密瓜可溶性总糖含量最高，其次是灭活的微生物菌剂处理，所有试验处理的可溶性总糖含量均明显高于对照；哈密瓜有机酸含量处理1、2均为0.07g/100g，处理3、4均为0.09g/100g；Vc含量处理1最高，其次是处理2、3，对照最低；平均单瓜重方面，处理1＞处理2＞处理3＞处理4，但数值相差不大，对照最低。
表9不同处理的哈密瓜品质及产量
可见所有试验处理的哈密瓜可溶性总糖、Vc含量及平均单瓜重均明显高于对照，尤以处理1即微生物菌剂处理的哈密瓜品质和产量均占优势。
根据田间观察，哈密瓜试验区内植株后期根腐病、枯萎病等病害明显轻于对照，果实的裂果情况也明显低于对照，具体病情轻重情况为：处理1＞处理2＞处理3＞处理4。
本试验结果表明，微生物菌剂能提高哈密瓜的品质和产量以及抗病性，促进植株健康生长。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
