一种减菌化前处理结合真空包装保鲜河豚鱼的方法
技术领域
本发明涉及一种河豚鱼的保鲜方法，尤其是一种减菌化前处理结合真空包装保鲜河豚鱼的方法。
背景技术
河豚鱼是我国沿海地区的传统美食，广泛分布于东海、黄海、渤海和长江流域，为“长江三鲜”之一鱼种。河豚鱼不仅味道鲜美，而且营养丰富，含有8中必需氨基酸和10种非必需氨基酸，必需氨基酸与非必需氨基酸的比值（WTEAA/WTNEAA）为68.34%，高于FAO/WHO的理想模式，是优质的蛋白来源，同时含有较高含量的钾、钙、锌等矿物质元素，而脂肪含量相对较低，深受人们喜爱。然而，新鲜的河豚鱼在外源微生物和内源酶的作用下极易腐败变质，导致商业价值迅速下降，所以探索一种有效的保鲜方式对于河豚鱼产业具有重要意义。目前水产品常用的保鲜技术有低温贮藏、减菌化处理、真空包装、气调包装、生物保鲜剂等，其中减菌化前处理技术中的微酸性电解水（Weakly Acidic Electrolyzed Water, WAEW）是常用的一种杀菌剂，其有效成分次氯酸分子不仅可以破坏多种细菌细胞壁，而且能与胞内蛋白质发生氧化作用或破坏其磷酸脱氢酶的活性，使糖代谢失调而致死细胞，同时具有贮藏稳定性好、作用条件温和等优势。真空包装保鲜（Vacuum Packaging, VP）技术通过去除产品包装内的空气而形成低氧贮藏环境，可有效抑制微生物生长繁殖和产品氧化，从而延长产品的货架期，该技术方便快捷、绿色环保，已被广泛应用于水产品保鲜领域。
专利申请号为201810855767.0 的发明专利“一种罗非鱼鱼片保鲜方法”（申请日：2018.07.31）向WAEW中添加护色剂后制成保鲜冰对罗非鱼片进行冰藏，该发明能够有效的抑制微生物繁殖和肌红蛋白的氧化，保持鱼片原有色泽，但碎冰块的摩擦作用易导致鱼片的机械损伤从而加速了肌肉组织的破坏，同时单一的WAEW处理无法满足消费者对于罗非鱼货架期的需求。
专利申请号为201210086607.7 的发明专利“一种用电解水保鲜单冻虾仁的方法”（申请日：2012.03.29）通过电解氯化钠溶液制得WAEW，经浸泡处理的虾仁样品中微生物安全问题得到了有效控制，保证了产品的质量安全，但电解氯化钠溶液过程产生的难溶于水的氢气存在极大安全隐患，同时电解过程产生的氯气溶于水会形成具有氧化作用的次氯酸钠等物质，虽然具有一定的杀菌作用，但长期接触氧化类物质更易加速虾仁的腐败速率。
专利申请号为201610228406.4 的发明专利“一种利用弱酸性电解水保鲜鲣鱼的方法”（申请日：2016.04.13）中的WAEW由去离子水、氯化钠、氯化铁、硫酸铜、直链淀粉、丙三醇、导电剂和抗氧化剂等成分制得，该发明可有效杀灭金黄色葡萄球菌等有害细菌并抑制腐败微生物的生长，同时不产生易燃易爆的氢气，但添加试剂种类较多，无法保证其残留对人体健康无任何影响，
WAEW是食品添加剂范围内的一种有效杀菌剂，传统是由氯化钠溶液电解而得，电解过程产生的氢气易燃易爆会产生安全隐患，所以本发明选用稀盐酸作为电解溶液。真空包装是水产行业一种广泛运用并且效果显著的保鲜方式，所以本发明将两种保鲜方式结合运用到河豚鱼的保鲜过程，既可达到协同增效的保鲜效果，又可迎合消费者追求绿色健康产品的理念。
发明内容
本发明的目的是提供一种减菌化前处理结合真空包装的河豚鱼保鲜技术，通过WAEW减菌化处理后进行真空包装并于4℃贮藏，证明该技术可以有效抑制样品中微生物的生长繁殖，维持挥发性盐基氮（TVB-N）、鲜度值（K）、三甲胺（TMA）、硫代巴比妥酸值（TBA）处于相对较低水平，并减缓肌原纤维蛋白溶出量和硬度值的下降，显著延长了河豚鱼的货架期。
本发明“一种减菌化前处理结合真空包装保鲜河豚鱼的方法”包括选购鱼样、制备微酸性电解水、处理鱼样、减菌化处理、包装入袋、真空包装、冰箱冷藏，其特征操作步骤如下：
（1）选购鱼样：选购大小均一、色泽光亮、状态鲜活、体重为300±10 g的河豚鱼，由泡沫箱增氧运至实验室；
（2）制备微酸性电解水：先配置一份浓度为2.70~3.30%的稀盐酸溶液，开启微酸性电解水实验机，设置电压范围5.20~5.30 V，电流范围2.90~3.00 A，流速范围0.97~1.03 ml/min， 打开“进样泵”和“电解槽”开关，制备出参数pH值为6.21~6.56、氧化还原电位（Oxidative Redox Potential，ORP）ORP为843.3~907.6 mv、有效氯含量（AvailableChlorine Concentration，ACC）ACC为27.21~38.16 ppm的WAEW，先让WAEW制备15~25 min，待稳定后用避光容器接取足量的WAEW备用；
（3）处理鱼样：用锋利的剪刀将河豚鱼腹部迅速剖开放血；鱼鳃剪断后将鱼鳃和内脏一同剔除，再用剪刀修剪残余内脏；沿河豚鱼上腹部剖线处将鱼皮撕下；用剪刀去除河豚鱼的眼睛；将河豚鱼脊柱内残留血液挤出；用冰水清洗干净河豚鱼；
（4）减菌化处理：将宰杀并清洗干净的2~14份河豚鱼放入质量比为1：3~1：6的WAEW中浸泡8~15 min进行减菌化处理；
（5）包装入袋：将减菌化处理的河豚鱼分别装入规格为28 cm×28 cm的高阻性聚偏氯乙烯包装袋中；
（6）真空包装：启动袋式气调锁鲜包装机，启动真空泵，选择“真空包装”模式，设置抽真空时间15~20 s，热封口温度130~170 ℃，对真空包装组（VP）和微酸性电解水结合真空包装组（WAEW +VP）两组样品进行真空包装，将盛有河豚鱼的包装袋袋口置于气体置换及热封口处，点击“抽真空”按钮抽进行抽真空，袋口热封后完成抽真空过程；
（7）冰箱冷藏：将处理好的四组河豚鱼样品迅速移入4.0± 0.1 ℃的冰箱中进行贮藏。本发明选用的真空包装袋为高阻性聚偏氯乙烯包装袋，所有样品贮藏于4± 0.1 ℃条件下。
优选的方案为：所使用的微酸性电解水是由浓度为3.06 %的稀盐酸溶液制得。
优选的方案为：所设置的微酸性电解水实验机参数如下：电压5.28 V，电流3.02A，流速范围1.00 ml/min。
优选的方案为：所制备的微酸性电解水参数如下：pH值为6.39、氧化还原电位（Oxidative Redox Potential，ORP）ORP为878.3 mv、有效氯含量（Available ChlorineConcentration，ACC）ACC为37.65 ppm。
优选的方案为：鱼样处理方法如下：用锋利的剪刀将河豚鱼腹部迅速剖开放血；鱼鳃剪断后将鱼鳃和内脏一同剔除，再用剪刀修剪残余内脏；沿河豚鱼上腹部剖线处将鱼皮撕下；用剪刀去除河豚鱼的眼睛；将河豚鱼脊柱内残留血液挤出；用冰水清洗干净河豚鱼；
优选的方案为：减菌化处理时将河豚鱼放入质量比为1：4的WAEW中浸泡10 min。
优选的方案为：减菌化处理的河豚鱼包装规格为28 cm×28 cm的高阻性聚偏氯乙烯包装袋。
优选的方案为：所使用的真空包装机为袋式气调锁鲜包装机，真空包装参数如下：抽真空时间15 s，热封口温度150 ℃。
本发明通过制备的WAEW对河豚鱼进行减菌化处理后能够降低样品的微生物数量，使处理组样品在贮藏过程中的微生物总量处于相对较低水平，同时真空包装使样品隔绝氧气，进一步抑制了好氧微生物的生长繁殖，二者的协同作用有效延缓了河豚鱼的蛋白质降解和脂肪氧化等品质劣变反应，延长了河豚鱼的货架期，同时该复合技术安全环保、生产成本相对较低，是一种极具商业价值的河豚鱼冷藏保鲜手段。
附图说明
图1为不同pH的微酸性电解水对新鲜河豚鱼菌落总数的影响。
图2为微酸性电解水结合真空包装的河豚鱼菌落总数（TVC）的变化。
图3为微酸性电解水结合真空包装的河豚鱼挥发性盐基氮含量（TVB-N）的变化。
图4为微酸性电解水结合真空包装的河豚鱼鲜度值（K value）的变化。
图5为微酸性电解水结合真空包装的河豚鱼硫代巴比妥酸值（TBA value）的变化。
图6为微酸性电解水结合真空包装的河豚鱼的三甲胺（TMA）变化。
图7为微酸性电解水结合真空包装的河豚鱼肌原纤维蛋白溶出量的变化。
图8 为微酸性电解水结合真空包装的河豚鱼硬度的变化。
具体实施方式
为更详细阐述本发明的操作流程与创作特征，便于使用者更好的理解与运用，下面结合具体实施方式做进一步详细说明。
实施例1：一种减菌化前处理结合真空包装保鲜河豚鱼的方法包括以下步骤：
（1）选购鱼样：选购大小均一、色泽光亮、状态鲜活、体重为300±10 g的河豚鱼，由泡沫箱增氧运至实验室；
（2）制备微酸性电解水：配置一份浓度为2.78 %的稀盐酸溶液，开启微酸性电解水实验机，设置电压5.25 V，电流2.96 A，流速范围0.98 ml/min，打开“进样泵”和“电解槽”开关，制备出参数pH值为6.21、氧化还原电位（Oxidative Redox Potential，ORP）ORP为852.4mv、有效氯含量（Available Chlorine Concentration，ACC）ACC为28.33 ppm的WAEW，先让WAEW制备18 min，待稳定后用避光容器接取足量的WAEW备用；
（3）处理鱼样：用锋利的剪刀将河豚鱼腹部迅速剖开放血；鱼鳃剪断后将鱼鳃和内脏一同剔除，再用剪刀修剪残余内脏；沿河豚鱼上腹部剖线处将鱼皮撕下；用剪刀去除河豚鱼的眼睛；将河豚鱼脊柱内残留血液挤出；用冰水清洗干净河豚鱼；
（4）减菌化处理：将宰杀并清洗干净的2份河豚鱼放入体积比为1：3的WAEW中浸泡8 min进行减菌化处理；
（5）取样检测：将处理好的2 份河豚鱼进行菌落总数检测，首先取鱼样5.00 g，放入45mL灭菌生理盐水中混匀，做成1：10的均匀稀释液；再用1 ml无菌移液抢吸取1：10稀释液1ml沿壁注入盛有9 ml无菌生理盐水的试管中进行10倍梯度稀释，制成1:100的样品稀释液并混匀，按照此操作并根据实际情况进行10倍系列稀释；选取3个适宜稀释浓度，吸取1 mL菌液于灭菌的培养皿内，每个梯度做2个平行，同时分别吸取1 mL灭菌生理盐水于两个灭菌培养皿中敞口放置于超净台内做空白对照；向培养皿中倾注15 mL~20 mL冷却至45 ℃的平板计数琼脂培养基并转动平皿使其混合均匀；待琼脂凝固后，将平板倒置于30±1℃生化培养箱培养72±3 h，采用平板计数法测定菌落总数并以灭菌的生理盐水为空白作对照试验；
（6）平板计数：选取菌落总数为30~300的平皿进行计数。
实施例2：一种减菌化前处理结合真空包装保鲜河豚鱼的方法包括以下步骤：
（1）选购鱼样：选购大小均一、色泽光亮、状态鲜活、体重为300±10 g的河豚鱼，由泡沫箱增氧运至实验室；
（2）制备微酸性电解水：配置一份浓度为2.92 %的稀盐酸溶液，开启微酸性电解水实验机，设置电压5.27 V，电流2.98 A，流速范围0.99 ml/min，打开“进样泵”和“电解槽”开关，制备出参数pH值为6.32、氧化还原电位（Oxidative Redox Potential，ORP）ORP为861.1mv、有效氯含量（Available Chlorine Concentration，ACC）ACC为30.27 ppm的WAEW，先让WAEW制备19 min，待稳定后用避光容器接取足量的WAEW备用；
（3）处理鱼样：用锋利的剪刀将河豚鱼腹部迅速剖开放血；鱼鳃剪断后将鱼鳃和内脏一同剔除，再用剪刀修剪残余内脏；沿河豚鱼上腹部剖线处将鱼皮撕下；用剪刀去除河豚鱼的眼睛；将河豚鱼脊柱内残留血液挤出；用冰水清洗干净河豚鱼；
（4）减菌化处理：将宰杀并清洗干净的2份河豚鱼放入体积比为1：4的WAEW中浸泡8 min进行减菌化处理；
（5）取样检测：将处理好的2 份河豚鱼进行菌落总数检测，首先取鱼样5.00 g，置于45mL灭菌生理盐水中混匀，做成1：10的均匀稀释液；再用1 ml无菌移液抢吸取1：10稀释液1ml沿壁注入盛有9 ml无菌生理盐水的试管中进行10倍梯度稀释，制成1:100的样品稀释液并混匀，按照此操作并根据实际情况进行10倍系列稀释；选取3个适宜稀释浓度，吸取1 mL菌液于灭菌的培养皿内，每个梯度做2个平行，同时分别吸取1 mL灭菌生理盐水于两个灭菌培养皿中敞口放置于超净台内做空白对照；向培养皿中倾注15 mL~20 mL冷却至45 ℃的平板计数琼脂培养基并转动平皿使其混合均匀；待琼脂凝固后，将平板倒置于30±1℃生化培养箱培养72±3 h，采用平板计数法测定菌落总数并以灭菌的生理盐水为空白作对照试验；
（6）平板计数：选取菌落总数为30~300的平皿进行计数。
实施例3：一种减菌化前处理结合真空包装保鲜河豚鱼的方法包括以下步骤：
（1）选购鱼样：选购大小均一、色泽光亮、状态鲜活、体重为300±10 g的河豚鱼，由泡沫箱增氧运至实验室；
（2）制备微酸性电解水：配置一份浓度为3.06 %的稀盐酸溶液，开启微酸性电解水实验机，设置电压5.28 V，电流3.02 A，流速范围1.00 ml/min，打开“进样泵”和“电解槽”开关，制备出参数pH值为6.39、氧化还原电位（Oxidative Redox Potential，ORP）ORP为878.3mv、有效氯含量（Available Chlorine Concentration，ACC）ACC为37.65 ppm的WAEW，先让WAEW制备20 min，待稳定后用避光容器接取足量的WAEW备用；
（3）处理鱼样：用锋利的剪刀将河豚鱼腹部迅速剖开放血；鱼鳃剪断后将鱼鳃和内脏一同剔除，再用剪刀修剪残余内脏；沿河豚鱼上腹部剖线处将鱼皮撕下；用剪刀去除河豚鱼的眼睛；将河豚鱼脊柱内残留血液挤出；用冰水清洗干净河豚鱼；
（4）减菌化处理：将宰杀并清洗干净的2份河豚鱼放入体积比为1：4的WAEW中浸泡8 min进行减菌化处理；
（5）取样检测：将处理好的2份河豚鱼进行菌落总数检测，首先取鱼样5.00 g，置于45mL灭菌生理盐水中混匀，做成1：10的均匀稀释液；再用1ml无菌移液抢吸取1：10稀释液1 ml沿壁注入盛有9 ml无菌生理盐水的试管中进行10倍梯度稀释，制成1:100的样品稀释液并混匀，按照此操作并根据实际情况进行10倍系列稀释；选取3个适宜稀释浓度，吸取1 mL菌液于灭菌的培养皿内，每个梯度做2个平行，同时分别吸取1 mL灭菌生理盐水于两个灭菌培养皿中敞口放置于超净台内做空白对照；向培养皿中倾注15 mL~20 mL冷却至45 ℃的平板计数琼脂培养基并转动平皿使其混合均匀；待琼脂凝固后，将平板倒置于30±1℃生化培养箱培养72±3 h，采用平板计数法测定菌落总数并以灭菌的生理盐水为空白作对照试验；
（6）平板计数：选取菌落总数为30~300的平皿进行计数。
实施例4
一种减菌化前处理结合真空包装保鲜河豚鱼的方法包括以下步骤：
（1）选购鱼样：选购大小均一、色泽光亮、状态鲜活、体重为300±10 g的河豚鱼，由泡沫箱增氧运至实验室；
（2）处理鱼样：用锋利的剪刀将河豚鱼腹部迅速剖开放血；鱼鳃剪断后将鱼鳃和内脏一同剔除，再用剪刀修剪残余内脏；沿河豚鱼上腹部剖线处将鱼皮撕下；用剪刀去除河豚鱼的眼睛；将河豚鱼脊柱内残留血液挤出；用冰水清洗干净河豚鱼；
（3）包装入袋：将处理好的河豚鱼随机分成空气（AP）和真空包装组（VP）两组，分别装入规格为28 cm×28 cm的高阻性聚偏氯乙烯包装袋中；
（4）真空包装：启动袋式气调锁鲜包装机，启动真空泵，选择“真空包装”模式，设置抽真空时间15 s，热封口温度150 ℃，对真空包装组（VP）河豚鱼进行真空包装，将盛有河豚鱼的真空包装袋袋口置于气体置换及热封口处，点击“抽真空”按钮抽进行抽真空，袋口热封后完成抽真空过程；
（5）冰箱冷藏：将处理好的河豚鱼样品迅速移入4.0± 0.1 ℃的冰箱中进行贮藏；
（6）取样检测：分别于0，3，6，9，12，15，18 d进行取样检测，预留的2 份河豚鱼进行0 d检测，0 d之后每次随机取样两条河豚鱼作为平行组进行检测，探究真空包装对河豚鱼保鲜效果的影响。
实施例5
一种减菌化前处理结合真空包装保鲜河豚鱼的方法包括以下步骤：
（1）选购鱼样：选购大小均一、色泽光亮、状态鲜活、体重为300±10 g的河豚鱼，由泡沫箱增氧运至实验室；
（2）制备微酸性电解水：配置一份浓度为3.06 %的稀盐酸溶液，开启微酸性电解水实验机，设置电压5.28 V，电流3.02 A，流速范围1.00 ml/min，打开“进样泵”和“电解槽”开关，制备出参数pH值为6.39、氧化还原电位（Oxidative Redox Potential，ORP）ORP为878.3mv、有效氯含量（Available Chlorine Concentration，ACC）ACC为37.65 ppm的WAEW，先让WAEW制备20 min，待稳定后用避光容器接取足量的WAEW备用；
（3）处理鱼样：用锋利的剪刀将河豚鱼腹部迅速剖开放血；鱼鳃剪断后将鱼鳃和内脏一同剔除，再用剪刀修剪残余内脏；沿河豚鱼上腹部剖线处将鱼皮撕下；用剪刀去除河豚鱼的眼睛；将河豚鱼脊柱内残留血液挤出；用冰水清洗干净河豚鱼；
（4）减菌化处理：将宰杀并清洗干净的12份河豚鱼放入体积比为1：4的WAEW中浸泡10min进行减菌化处理；
（5）包装入袋：将减菌化处理的12份河豚鱼分别装入规格为28 cm×28 cm的高阻性聚偏氯乙烯包装袋中；
（6）真空包装：启动袋式气调锁鲜包装机，启动真空泵，选择“真空包装”模式，设置抽真空时间15 s，热封口温度150 ℃，对真空包装组（VP）和微酸性电解水结合真空包装组（WAEW+VP）两组河豚鱼进行真空包装，将盛有河豚鱼的真空包装袋袋口置于气体置换及热封口处，点击“抽真空”按钮抽进行抽真空，袋口热封后完成抽真空过程；
（7）冰箱冷藏：将处理好的四组河豚鱼样品迅速移入4.0± 0.1 ℃的冰箱中进行贮藏；
（8）取样检测：分别于0，3，6，9，12，15，18 d进行取样检测，预留的2 份河豚鱼进行0 d检测，0 d之后每次随机取样两份河豚鱼作为平行组进行检测，探究微酸性电解水结合真空包装对河豚鱼保鲜效果的影响。
将处理后的河豚鱼做如下性能测试：
取样检测：分别于0，3，6，9，12，15，18 d进行取样检测，预留的2 份河豚鱼进行0 d检测，0 d之后每次随机取样两份河豚鱼作为平行组进行检测，通过指标测定探究不同组别河豚鱼的保鲜效果。
指标测定：
（1）菌落总数（TVC）：准确称取鱼样5.00 g，放入45 mL灭菌生理盐水中混匀，做成1：10的均匀稀释液；再用1 ml无菌移液抢吸取1：10稀释液1 ml沿壁注入盛有9 ml无菌生理盐水的试管中进行10倍梯度稀释，制成1:100的样品稀释液并混匀，按照此操作并根据实际情况进行10倍系列稀释；选取3个适宜稀释浓度，吸取1 mL菌液于灭菌的培养皿内，每个梯度做2个平行，同时分别吸取1 mL灭菌生理盐水于两个灭菌培养皿中敞口放置于超净台内做空白对照；向培养皿中倾注15 mL~20 mL冷却至45 ℃的平板计数琼脂培养基并转动平皿使其混合均匀；待琼脂凝固后，将平板倒置于30±1℃生化培养箱培养72±3 h，采用平板计数法测定菌落总数并以灭菌的生理盐水为空白作对照试验；培养后选取菌落总数为30~300的平皿进行计数。
（2）挥发性盐基氮含量（TVB-N）：根据GB 5009.228-2016《食品安全国家标准 食品中挥发性盐基氮的测定》及半微量凯氏定氮原理进行测定。准确称取5.00 g的河豚鱼样装于消化管中，加入2勺MgO粉末，利用设定好程序的凯氏定氮仪测定河豚鱼样TVB-N值，做3次平行实验，取平均值。
（3）鲜度值（K value）：准确称取5.00 g鱼样于离心管内，加入10 mL 4℃体积分数为10%的高氯酸后均质，再于4℃，8000 r/min条件下离心15 min，取上清液；向沉淀物中加入10 mL 4℃体积分数为5%的高氯酸均质，于4℃，8000 r/min条件下离心10 min，重复2次；最后合并上清液，加入15 mL超纯水，用10 mol/L和1 mol/L的KOH溶液以及5%和10%高氯酸溶液调节上清液pH至6.5，静置30 min后取上清液于50 mL容量瓶中，用超纯水定容至50mL，摇匀；最后用0.22 μm的膜过滤，滤液贮藏在液相进样瓶中并进行高效液相分析。每个样品做3个平行样，取平均值。高效液相分析条件：色谱柱VP-CDSC18（46 mm ×150 mm），采用pH=6.7的0.05 mol/L磷酸缓冲液平衡洗脱，样品进样量为10 uL，流速1mL/min，柱温30 ℃，检测波长254 nm，按公式计算K值，其中WHxR、WHx、WATP、WADP、WAMP和WIMP分别为次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤、腺苷三磷酸、腺苷二磷酸、腺苷酸和肌苷酸的质量分数：
（4）硫代巴比妥酸值（TBA）：准确称取鱼样5.00 g匀浆，加入25 mL的20% 三氯乙酸，静置1 h，于0℃、8000r/min离心10 min，过滤，将滤液转移至50 mL容量瓶，定容。移取5 mL上述溶液于烧杯中，加入5 mL的0.02 mol/L的硫代巴比妥酸溶液，振荡混匀后于沸水浴中反应20 min，取出并冷却至室温。以蒸馏水作为对照于532 nm处读取吸光度值。TBA值表示如下：
（5）三甲胺（TMA）：准确称取鱼样2.00 g均质，以8000 r/min离心 10 min；取5 ml上清液于试管中，加1 ml甲醛（10%）溶液，10 ml无水甲苯和3 ml 25%氢氧化钾溶液后反复振摇，并于30℃加热5 min；弃去水层，取7~9 ml甲苯层至盛有0.5 g 无水Na2SO4的试管中振摇使之脱水，再取5 mL反应后的甲苯层移液至另一个含有5 mL 0.02%苦味酸溶液的试管中后，使用分光光度计在410 nm 处测吸光度A1。空白实验用7.5%TCA按照同样步骤进行，测的吸光值A0。通过TMA的标准曲线（纯度 > 98%）计算TMA值，并表示为mg/100 g样品，测吸光值保持30℃。
（6）肌原纤维蛋白溶出量：首先提取肌原纤维蛋白，准确称取2.00 g鱼肉于50 mL离心管中，加入20 mL缓冲液A（20 mmol/L Tris-maleate，pH 7. 0，0.05 mol/L KCl）均质，经冷冻离心（4 ℃，10000 × g）15min后弃上清液，重复洗涤两次后向沉淀中加入20 mL的缓冲液B（20 mmol/L Tris-maleate，pH 7. 0，0. 6 mol/L KCl）均质后于4℃条件下提取1h，10000 r/min冷冻离心15 min，上清液即为肌原纤维蛋白溶液，采用双缩脲测定肌原纤维蛋白溶出量浓度。（7）硬度值：切取15 mm×15 mm×15 mm的鱼块，选择TPA模式下进行测定，设定参数为：测量前探头下降速度：2.00 mm/s；测试速度：1.00 mm/s；测量后探头回程速度：5.00 mm/s；压缩比：40%；触发力：5.0 g；探头类型p/5；数据采集速率为200.00 points/s，每组样品做3次平行实验，取平均值。
贮藏18 d后本发明及各对照组各指标值如下表所示，其中本发明为电解水处理结合真空包装组（WAEW+VP）；对照组为①空气包装组（AP）②真空包装组（VP）③电解水处理结合空气包装组（WAEW+AP）：
经过以上对比检测，用本发明的保鲜方法处理的河豚鱼各项指标均优于对照组，显著延长了河豚鱼的货架期，保鲜效果较好。
本发明实验结果表明WAEW减菌化前处理结合真空包装可有效维持河豚鱼的良好贮藏品质，货架期由空气包装的7 d延长至11 d，且该技术方法操作简单，安全环保，是一种高效易行的河豚鱼保鲜技术。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
