一种山楂叶水提物的制备方法
技术领域
本发明涉及中医药领域，具体涉及一种山楂叶水提物的制备方法。
背景技术
山楂叶为蔷薇科植物山里红或山楂的干燥叶。山楂叶味酸、性平，归肝经，具有活血化瘀、理气通脉的功效，临床多用于治疗气滞血瘀、胸闷憋气、心悸健忘、眩晕耳鸣等。其中，山楂叶中的主要成分是黄酮类化合物、有机酸类化合物、皂苷和多糖等，除黄酮易溶于醇外，其他多数成分更易溶于水，因而单纯的采取醇提工艺，失去了许多山楂叶中的药效成分。
发明内容
本发明的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种山楂叶水提物的制备方法。
本发明的技术解决方案如下：
一种山楂叶水提物的制备方法，所述山楂提取物包括黄酮和多糖，包括以下步骤：
步骤一：将山楂叶粉碎，加水，并加入离子液体，得混合料液，往混合料液中鼓气，同时超声/微波协同处理，先将混合料液上的泡沫分离，然后对去除泡沫后的混合料液进行离心分离，取上清液并浓缩，得一次提取液；
步骤二：将步骤一中的一次提取液加入丙醇-硫酸铵双相体系，所述丙醇-硫酸铵双相体系包括丙醇上相和硫酸铵下相，搅拌，使得山楂水提物中的黄酮进入丙醇上相中，使得山楂水提物中的多糖进入硫酸铵下相中，静置后分离两相；
步骤三：分别对含有黄酮的丙醇相和含有多糖的硫酸铵相进行提取，制得黄酮和多糖。
优选地，所述步骤一中，所述离子液体为氨基酸类离子液体或咪唑类离子液体。
优选地，所述步骤一中，超声/微波协同处理具体为，在超声环境下对所述混合料液微波加热60-100s，每10-30s加热一次；
超声功率200-400W，超声温度40-80℃。
优选地，所述步骤一中，鼓气的气流速度为30-200ml/min。
优选地，所述步骤一中，水的添加量为山楂叶质量的7-10倍。
优选地，所述步骤一中，离子液体的添加量为山楂叶质量的0.7-1.5倍。
优选地，所述步骤三中，丙醇相的提取具体为，采用低碳醇溶液萃取，混合摇匀，静置分层，将低碳醇相减压蒸发后得到黄酮，同时回收离子液体和低碳醇溶液。
优选地，所述步骤二中，丙醇-硫酸铵双相体系中丙醇的质量分数为30-60％，硫酸铵的质量分数为10-20％。
优选地，所述步骤二中，搅拌的同时进行震荡。
优选地，所述硫酸铵下相的提取方法为将含有多糖的硫酸铵下相于1-4℃温度下保存1-2天，有硫酸铵结晶析出后，透析，蒸发浓缩，最后真空冷冻干燥，获得多糖。
本发明至少具有以下有益效果之一：
(1)本发明的一种山楂叶水提物的制备方法，采用丙醇-硫酸铵双水相进行分相，由于大分子物质在不同相的溶解性质不一样，使得山楂叶中的黄酮进入丙醇上相，山楂叶中的多糖进入硫酸铵下相中，从而能够及时将山楂叶中的黄酮和多糖进行分离和提纯。
(2)本发明的一种山楂叶水提物的制备方法，在步骤一中加入离子液体，由于离子液体具有酸性，有效抑制了山楂叶中有机酸的溶出，使得后工序中多糖的提纯率得到提高，而且加入的离子液体在一定程度上还促进了黄酮在丙醇相中的溶解，提高了黄酮的提纯率。
(3)本发明的一种山楂叶水提物的制备方法，在步骤一中，首先进行泡沫分离，将水提物中的皂苷类物质物质进行分离收集，使得后工序黄酮和多糖的提纯率得到提高。
具体实施方式
本部分将详细描述本发明的具体实施例。
实施例1
将100g山楂叶粉碎，加水，并加入四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体，得混合料液，水的添加量为山楂叶质量的7倍；四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体的添加量为山楂叶质量的0.7倍；往混合料液中鼓气，气流速度为30ml/min；在超声环境下对所述混合料液微波加热60s，每10s加热一次；超声功率200W，超声温度40℃；先将混合料液上的泡沫分离，然后对去除泡沫后的混合料液进行离心分离，取上清液并浓缩，得一次提取液；
将一次提取液加入丙醇-硫酸铵双相体系，丙醇-硫酸铵双相体系中丙醇的质量分数为30％，硫酸铵的质量分数为10％；
所述丙醇-硫酸铵双相体系包括丙醇上相和硫酸铵下相，搅拌的同时进行震荡；使得山楂水提物中的黄酮进入丙醇上相中，使得山楂水提物中的多糖进入硫酸铵下相中，静置后分离两相；
分别对含有黄酮的丙醇相和含有多糖的硫酸铵相进行提取，制得黄酮和多糖。
丙醇相的提取具体为，采用正丁醇溶液萃取，混合摇匀，静置分层，将正丁醇相减压蒸发后得到黄酮，同时回收离子液体和正丁醇溶液。
硫酸铵下相的提取方法为将含有多糖的硫酸铵下相于1℃温度下保存1天，有硫酸铵结晶析出后，透析，蒸发浓缩，最后真空冷冻干燥，获得多糖。
实施例2
将100g山楂叶粉碎，加水，并加入四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体，得混合料液，水的添加量为山楂叶质量的8倍；四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体的添加量为山楂叶质量的0.9倍；往混合料液中鼓气，气流速度为120ml/min；在超声环境下对所述混合料液微波加热80s，每20s加热一次；超声功率300W，超声温度50℃；先将混合料液上的泡沫分离，然后对去除泡沫后的混合料液进行离心分离，取上清液并浓缩，得一次提取液；
将一次提取液加入丙醇-硫酸铵双相体系，丙醇-硫酸铵双相体系中丙醇的质量分数为40％，硫酸铵的质量分数为15％；
所述丙醇-硫酸铵双相体系包括丙醇上相和硫酸铵下相，搅拌的同时进行震荡；使得山楂水提物中的黄酮进入丙醇上相中，使得山楂水提物中的多糖进入硫酸铵下相中，静置后分离两相；
分别对含有黄酮的丙醇相和含有多糖的硫酸铵相进行提取，制得黄酮和多糖。
丙醇相的提取具体为，采用正丁醇溶液萃取，混合摇匀，静置分层，将正丁醇相减压蒸发后得到黄酮，同时回收离子液体和正丁醇溶液。
硫酸铵下相的提取方法为将含有多糖的硫酸铵下相于2℃温度下保存1天，有硫酸铵结晶析出后，透析，蒸发浓缩，最后真空冷冻干燥，获得多糖。
实施例3
将100g山楂叶粉碎，加水，并加入四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体，得混合料液，水的添加量为山楂叶质量的10倍；四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体的添加量为山楂叶质量的1.5倍；往混合料液中鼓气，气流速度为200ml/min；在超声环境下对所述混合料液微波加热100s，每25s加热一次；超声功率400W，超声温度80℃；先将混合料液上的泡沫分离，然后对去除泡沫后的混合料液进行离心分离，取上清液并浓缩，得一次提取液；
将一次提取液加入丙醇-硫酸铵双相体系，丙醇-硫酸铵双相体系中丙醇的质量分数为60％，硫酸铵的质量分数为20％；
所述丙醇-硫酸铵双相体系包括丙醇上相和硫酸铵下相，搅拌的同时进行震荡；使得山楂水提物中的黄酮进入丙醇上相中，使得山楂水提物中的多糖进入硫酸铵下相中，静置后分离两相；
分别对含有黄酮的丙醇相和含有多糖的硫酸铵相进行提取，制得黄酮和多糖。
丙醇相的提取具体为，采用正丁醇溶液萃取，混合摇匀，静置分层，将正丁醇相减压蒸发后得到黄酮，同时回收离子液体和正丁醇溶液。
硫酸铵下相的提取方法为将含有多糖的硫酸铵下相于4℃温度下保存2天，有硫酸铵结晶析出后，透析，蒸发浓缩，最后真空冷冻干燥，获得多糖。
实施例4
本实施例是在实施例2的基础上作出的变化，具体是氨基酸离子液体为N-己基异喹啉天冬氨酸离子液体。
实施例5
本实施例是在实施例2的基础上作出的变化，具体是离子液体为咪唑类离子液体，具体为1-丁基-3-甲基咪唑谷氨酸离子液体。
对比例1(无离子液体)
将100g山楂叶粉碎，加水，得混合料液，水的添加量为山楂叶质量的8倍；往混合料液中鼓气，气流速度为120ml/min；在超声环境下对所述混合料液微波加热80s，每20s加热一次；超声功率300W，超声温度50℃；先将混合料液上的泡沫分离，然后对去除泡沫后的混合料液进行离心分离，取上清液并浓缩，得一次提取液；
将一次提取液加入丙醇-硫酸铵双相体系，丙醇-硫酸铵双相体系中丙醇的质量分数为40％，硫酸铵的质量分数为15％；
所述丙醇-硫酸铵双相体系包括丙醇上相和硫酸铵下相，搅拌的同时进行震荡；使得山楂水提物中的黄酮进入丙醇上相中，使得山楂水提物中的多糖进入硫酸铵下相中，静置后分离两相；
分别对含有黄酮的丙醇相和含有多糖的硫酸铵相进行提取，制得黄酮和多糖。
丙醇相的提取具体为，采用正丁醇溶液萃取，混合摇匀，静置分层，将正丁醇相减压蒸发后得到黄酮，同时回收离子液体和正丁醇溶液。
硫酸铵下相的提取方法为将含有多糖的硫酸铵下相于2℃温度下保存1天，有硫酸铵结晶析出后，透析，蒸发浓缩，最后真空冷冻干燥，获得多糖。
对比例2(无起泡)
将100g山楂叶粉碎，加水，并加入四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体，得混合料液，水的添加量为山楂叶质量的8倍；氨基酸离子液体的添加量为山楂叶质量的0.9倍；在超声环境下对所述混合料液微波加热80s，每20s加热一次；超声功率300W，超声温度50℃；先将混合料液上的泡沫分离，然后对去除泡沫后的混合料液进行离心分离，取上清液并浓缩，得一次提取液；
将一次提取液加入丙醇-硫酸铵双相体系，丙醇-硫酸铵双相体系中丙醇的质量分数为40％，硫酸铵的质量分数为15％；
所述丙醇-硫酸铵双相体系包括丙醇上相和硫酸铵下相，搅拌的同时进行震荡；使得山楂水提物中的黄酮进入丙醇上相中，使得山楂水提物中的多糖进入硫酸铵下相中，静置后分离两相；
分别对含有黄酮的丙醇相和含有多糖的硫酸铵相进行提取，制得黄酮和多糖。
丙醇相的提取具体为，采用正丁醇溶液萃取，混合摇匀，静置分层，将正丁醇相减压蒸发后得到黄酮，同时回收离子液体和正丁醇溶液。
硫酸铵下相的提取方法为将含有多糖的硫酸铵下相于2℃温度下保存1天，有硫酸铵结晶析出后，透析，蒸发浓缩，最后真空冷冻干燥，获得多糖。
对比例3(无双相体系)
将100g山楂叶粉碎，加水，并加入四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体，得混合料液，水的添加量为山楂叶质量的8倍；四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体的添加量为山楂叶质量的0.9倍；往混合料液中鼓气，气流速度为120ml/min；在超声环境下对所述混合料液微波加热80s，每20s加热一次；超声功率300W，超声温度50℃；先将混合料液上的泡沫分离，然后对去除泡沫后的混合料液进行离心分离，取上清液并浓缩，得一次提取液；
将一次提取液加入60wt％丙醇溶液中进行萃取；采用丙醇溶液萃取，混合摇匀，静置分层，将丙醇相减压蒸发后得到黄酮，同时回收离子液体和丙醇溶液。
对实施例和对比例分别测试其黄酮和多糖收率和含率，收率为黄酮/多糖的质量占山楂叶的质量百分比，含率为最后获取的黄酮/多糖产品中有效成分的质量占比。测试值见下表1：
表1实施例和对比例的多糖和黄酮的测试值
从上表可以看出，实施例中的黄酮的提纯率和多糖的提纯率高于对比例，说明本发明采用的方法，对山楂叶水提物中黄酮和多糖的提纯率高；主要原因可能如下，通过对比例1与实施例的对比可知，实施例中在步骤一中加入了离子液体，由于离子液体具有一定的酸性，根据离子溶解平衡原理，离子液体的加入在一定程度上抑制了山楂叶中有机酸的溶出，减少了硫酸铵中有机酸对多糖提纯的影响；提高了后序多糖的提纯率；通过对比例2和实施例的对比可知，实施例中在步骤一中采用了通气鼓泡的工艺，由于山楂叶中的皂苷类物质在起泡的过程中吸附在泡沫表面，将其优先提取出来，避免了其影响后续多糖的提纯率；另，实施例5的黄酮的提纯率高于实施例2，主要是由于1-丁基-3-甲基咪唑谷氨酸离子液体，不仅仅由于酸性抑制了有机酸的溶出，另一方面咪唑类离子液体能够促进黄酮在有机相中的溶解度，进一步提高黄酮的提纯率。通过对比例3与实施例的对比可知，采用双水相对山楂水提物进行提取，能够有效将多糖和黄酮成分同时进行分离提纯，而对比例3中只采用传统的低醇溶液进行萃取，即只能对黄酮的粗提取，不能将其含有的多糖成分及时分离，由于没有硫酸铵第二相的存在，多糖成分等其他易溶于水的成分在一定情况下选择溶于丙醇溶液的水成分中，因此，一方面导致对比例3的黄酮的提纯率降低(收率和含率较低)，即本发明山楂叶中的黄酮的收率和含率较高，另一方面，对比例3的方法不能对进一步对多糖进行提纯，从而造成多糖成分资源的浪费。
在不出现冲突的前提下，本领域技术人员可以将上述附加技术特征自由组合以及叠加使用。
在本发明的实施例的描述中，需要理解的是，“-”和“～”表示的是两个数值之同的范围，并且该范围包括端点。例如：“A-B”表示大于或等于A，且小于或等于B的范围。“A～B″表示大于或等于A，且小于或等于B的范围。
在本发明的实施例的描述中，本文中术语“和/或”，仅仅是一种描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。另外，本文中字符“/”，一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
以上所述仅为本发明的优先实施方式，只要以基本相同手段实现本发明目的的技术方案都属于本发明的保护范围之内。
