一种稳定的有形成分分析聚焦液及其制备方法
技术领域
本发明涉及医疗器械体外诊断技术领域，尤其涉及一种稳定的有形成分分析聚焦液及其制备方法。
背景技术
阴道分泌物，俗称“白带”，是女性生殖系统分泌的液体，主要由阴道粘液、宫颈腺体、前庭大腺、子宫内膜等多种分泌物的混合物组成，其形成与雌激素作用有关。正常情况下，白带的质与量随月经周期而改变。月经干净后，白带量少、色白，呈糊状。在月经中期卵巢即将排卵时，由于宫颈腺体分泌旺盛，白带增多，透明，微黏，蛋清样。排卵2-3天后，白带变混浊，稠黏而量少。行经前后，因盆腔充血，阴道黏膜渗出物增加，白带往往增多。
在医学临床检验中，显微镜检查是最常用的方法，将检验目标放在显微镜下，通过检查目标中的细胞、微生物或者其他的有形成分，为医学的诊断提供重要参考信息。白带中的有形成分包括白细胞、上皮细胞、杆菌和球菌等，白带中的有形成分的数量和状态，可以作为判断女性阴道是否健康的判决条件，而且可以作为临床诊断、治疗阴道炎、以及行人流术、上取宫内节育器等提供依据。众所周知，在白带出现异常时，如果不采取及时的治疗，会对女性产生比较严重的影响。
随着技术的不断革新与发展白带显微检查是当前临床常规化验检查项目之一，白带中的各种生物细胞状况反映了女性阴道的病理变化情况。当前，大多数的医院对白带的检查都是采用显微镜人工目测，同时结合化学试剂来检验，人工目测对检验医生的要求较高，医生的主观判断难免会出现失误。这些年，随着数字图像处理技术的进步，很多领域开始使用数字图像处理，而医学领域也不例外，数字图像处理为医学诊断带来了实质性的改变，从而推动了医学诊断的变革。随着智能识别技术的不断发展，医学诊断中已逐渐开始对白带中的有形成分进行分析识别，尽可能地减少医学显微镜的使用频率，这样不仅可以降低医学检验人员的眼睛疲劳强度，还能加快医生的诊断过程。因此研发一种能够快速检测女性阴道分泌物的仪器及配套试剂的市场需求迫在眉睫。
应市场的需求，个别公司推出GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统，适用机型包含但不限于以上机型，结合配套试剂，从真正意义上实现对白带显微图像中有形成分的准确识别，利用自动识别算法和相关技术，用以代替现在最常用的人工镜检技术。白带中的有形成分包括白细胞、上皮细胞、杆菌和球菌等，根据各个细胞形态特征进行准确的分类(如表1)所述。
表1细胞形态分类
现如今我国大多数的小型医院在白带检测中依然沿用传统的显微镜检测，再进行人工处理。传统的白带检测方法是将样品制成涂片，用显微镜观察涂片上细胞和有型成分的形状、大小等基本特征，并根据结果判断有型成分的清洁度，医务人员根据白带清洁度的判断结果来进行诊断。人工检测由于受到人为因素的影响较大，所以只适合对于小范围的检测。而对于那些工作量较大的检测，检测人员长时间在显微镜下工作容易出现疲劳，从而影响医务人员对病情的判断。同时，医生对细胞图样的分析主观影响较大，医生很容易凭借自身经验来判断病情。故在白带的检测中，引入自动化检测设备来代替人工检测是必要之举，这样不仅能够提高检测准确度，还能提高工作效率，而且定量的客观性可以消除主观因素干扰以保证检验质量。白带自动生物细胞识别系统解决了人工检测白带操作繁杂、环境污染、随意性大等现存问题，使操作自动化、标准化，轨道式进样，使样品随到随检，更重要的是解决了生物安全一大难题，改善了工作环境，对白带的生物细胞医学显微图像自动识别技术的研究具有十分重要的社会价值和现实意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种长效稳定的有形成分分析聚焦液，有效期能够达到8个月，解决了市场上大多数仪器对于有形成分检测前无可靠的成像依据的疏漏和空白。
为了解决上述问题，本发明提供了一种稳定的有形成分分析聚焦液，该聚焦液包括聚焦液基质及红细胞模拟粒子，所述聚焦液基质由以下成分按浓度配比制成：
缓冲液，10mM-20mM；
渗透压调节剂，0.7％-0.9％；
表面活性剂，0.01％-1.0％；
防腐剂，0.01％-2.0％；
螯合剂，0.01％-2.0％；
染色调节剂，0.01％-0.5％。
优选的，所述缓冲液为HEPES、PBS、MOPSO或Tris缓冲液中的一种或几种混合物。
优选的，所述渗透压调节剂为氯化钠和氯化钾混合物，其中氯化钠浓度为0.5％-1.5％。
优选的，所述表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚、曲拉通X-100、BRIJ35、BRIJ98、EMULGEN 24B、司盘60、吐温20、吐温40、泊洛沙姆、辛基酚氧乙烯醚中的一种或几种混合物。
优选的，所述防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、庆大霉素、ProClin300、吡啶硫酮钠、脱氢乙酸钠中的一种或几种混合物。
优选的，所述螯合剂为乙二胺、2,2’-联吡啶、1,10-二氮菲、草根酸、乙二胺四乙酸中的一种或几种混合物。
优选的，所述染色调节剂为腈黄、日落黄、柠檬黄、甲基橙中的一种或几种混合物。
优选的，所述红细胞模拟粒子选自于牛血、羊血、猪血、鸡血、兔子血、狗血中红细胞的一种或几种。
一种稳定的有形成分分析聚焦液的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：依次用天平称取聚焦液基质原材料；
步骤二：在配制容器中加入纯化水，将步骤一中所称取得聚焦液基质原材料依次加入搅拌至完全溶解，完成聚焦液基质的配制并继续搅拌；
步骤三：将步骤二中所得聚焦液基质进行过滤，而后加入红细胞模拟粒子，完成有形成分的配制，并按照产品规格进行分装检验；
步骤四：报检后磁力搅拌器一直处于搅拌状态直至分装完成，制成产品。
优选的，步骤二中所述原材料依次加入搅拌至完全溶解过程中，要求一种原材料完全溶解后加入下一种原材料；得到聚焦液基质后搅拌时间为20-30min，搅拌后调节pH值为7.10±0.15、温度为25±1℃、电导率ρ为15.00±0.50mS/cm、渗透浓度为270±5.0mmol/L；选用0.22-0.38μm的聚乙烯滤膜将步骤三中所述的聚焦液基质进行过滤；所述加入红细胞模拟粒子后聚焦液浓度为2850-3250个/μL。
本发明的有益效果
1、本发明提高了细胞稳定性，有形成分聚焦液中应引入表面活性剂，使细胞均匀分散。表面活性剂，是活跃于表面和界面上，具有极高的降低表、界面张力的能力和效率。表面活性剂具有润湿、分散、乳化、增溶、保湿、渗透和防腐等功能。
2、本发明严格控制基质对细胞渗透压的影响，基质中除填加模拟分泌物的基础组分外，渗透压调节剂和各种离子成分采用正交实验筛选出最佳比例，保证渗透压在合适的范围内且不影响细胞的稳定性。
3、本发明中所使用的染色调节剂主要用于使聚焦液颜色外观更为醒目，易于直观识别细胞的沉降程度，保证产品在使用前，需充分混合程度的判断。
4、本发明采用了有效的替代物，模拟阴道分泌物中红细胞，原材料易得，评价效果稳定且准确，并且可以实现批量生产，全面推广的市场需求。
附图说明
图1为GMD-S600全自动妇科分析系统聚焦界面下有形识别。
具体实施方式
本发明提供了一种稳定的有形成分分析聚焦液，该聚焦液包括聚焦液基质及红细胞模拟粒子，所述聚焦液基质由以下成分按浓度配比制成：
缓冲液，10mM-20mM；
渗透压调节剂，0.7％-0.9％；
表面活性剂，0.01％-1.0％；
防腐剂，0.01％-2.0％；
螯合剂，0.01％-2.0％；
染色调节剂，0.01％-0.5％。
优选的，所述缓冲液为HEPES、PBS、MOPSO或Tris缓冲液中的一种或几种混合物；其中，优选pH值为5.0-9.0，浓度为10mM-20mM的PBS缓冲液；最优选pH为6.0-8.0，浓度为10mM的PBS缓冲液。
优选的，所述渗透压调节剂为氯化钠和氯化钾混合物，其中氯化钠浓度为0.5％-1.5％；其中，优选为氯化钠浓度为0.7％-0.9％，最优选为氯化钠浓度为0.9％。
优选的，所述表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚、曲拉通X-100、BRIJ35、BRIJ98、EMULGEN 24B、司盘60、吐温20、吐温40、泊洛沙姆、辛基酚氧乙烯醚中的一种或几种混合物；其中，优选浓度为0.01％-1.00％曲拉通X-100，最优选为浓度为0.05％曲拉通X-100。
优选的，所述防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、庆大霉素、ProClin300、吡啶硫酮钠、脱氢乙酸钠中的一种或几种混合物；其中，优选浓度为0.01％-2.00％的ProClin300，最优选为浓度为0.03％的ProClin300。
所述螯合剂为乙二胺、2,2’-联吡啶、1,10-二氮菲、草根酸、乙二胺四乙酸中的一种或几种混合物；其中，优选浓度为0.01％-2.00％的乙二胺四乙酸，最优选为浓度为0.05％的乙二胺四乙酸。
优选的，所述染色调节剂为腈黄、日落黄、柠檬黄、甲基橙中的一种或几种混合物；其中，优选浓度为0.01-0.50％日落黄，最优选为浓度为0.075％日落黄。
优选的，所述红细胞模拟粒子选自于牛血、羊血、猪血、鸡血、兔子血、狗血中红细胞的一种或几种；其中，优选猪全血，优选加入量为2850-3250个/μL，最优选加入量为2950-3180个/μL；
一种稳定的有形成分分析聚焦液的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：依次用天平称取聚焦液基质原材料；
步骤二：在配制容器中加入纯化水，将步骤一中所称取得聚焦液基质原材料依次加入搅拌至完全溶解，溶解过程中，要求一种原材料完全溶解后加入下一种原材料，完成聚焦液基质的配制并继续搅拌20-30min，搅拌后调节pH值为7.10±0.15、温度为25±1℃、电导率ρ为15.00±0.50mS/cm、渗透浓度为270±5.0mmol/L；
步骤三：将步骤二中所得聚焦液基质采用0.22-0.38μm的聚乙烯滤膜进行过滤，而后加入红细胞模拟粒子，完成有形成分的配制，并按照产品规格进行分装检验；
步骤四：报检后磁力搅拌器一直处于搅拌状态直至分装完成，制成产品。
实施例1
准备10万级电子天平，检验万级的天平是否矫正合格；若不合格，需要重新校准；按照配方组成依次称量聚焦液基质试剂原材料，后用万级天平进行准确称量；取干净的高密度聚乙烯瓶，加入全批量的纯化水，然后向其中按顺序依次加入缓冲液、渗透压调节剂、表面活性剂、防腐剂、螯合剂和染色调节剂(各成分用量如表2所示)，一种原材料完全溶解后加入下一种原材料，搅拌至完全溶解得到聚焦液基质，继续搅拌20min并使用PH计调节pH值至7.25，使用电导率仪调节电导率ρ至14.5mS/cm、使用渗透压仪调节渗透浓度至265mmol/L，同时使温度保持在24℃左右；选用0.22μm的聚乙烯滤膜将得到的聚焦液基质过滤，而后加入浓度为3000个/μL的红细胞模拟粒子，完成有形成分的配制，并按照产品规格进行分装检验，报检后磁力搅拌器一直处于搅拌状态直至分装完成，制成产品。
表2实施例1配方成分
实施例2
准备10万级电子天平，检验万级的天平是否矫正合格；若不合格，需要重新校准；按照配方组成依次称量聚焦液基质试剂原材料，后用万级天平进行准确称量；取干净的高密度聚乙烯瓶，加入全批量的纯化水，然后向其中按顺序依次加入缓冲液、渗透压调节剂、表面活性剂、防腐剂、螯合剂和染色调节剂(各成分用量如表3所示)，一种原材料完全溶解后加入下一种原材料，搅拌至完全溶解得到聚焦液基质，继续搅拌30min并使用PH计调节pH值至6.95，使用电导率仪调节电导率ρ至15.5mS/cm、使用渗透压仪调节渗透浓度至275mmol/L，同时使温度保持在26℃左右；选用0.38μm的聚乙烯滤膜将得到的聚焦液基质过滤，而后加入浓度为3100个/μL的红细胞模拟粒子，完成有形成分的配制，并按照产品规格进行分装检验，报检后磁力搅拌器一直处于搅拌状态直至分装完成，制成产品。
表3实施例2配方成分
实施例3
准备10万级电子天平，检验万级的天平是否矫正合格；若不合格，需要重新校准；按照配方组成依次称量聚焦液基质试剂原材料，后用万级天平进行准确称量；取干净的高密度聚乙烯瓶，加入全批量的纯化水，然后向其中按顺序依次加入缓冲液、渗透压调节剂、表面活性剂、防腐剂、螯合剂和染色调节剂(各成分用量如表4所示)，一种原材料完全溶解后加入下一种原材料，搅拌至完全溶解得到聚焦液基质，继续搅拌25min并使用PH计调节pH值至7.1，使用电导率仪调节电导率ρ至15mS/cm、使用渗透压仪调节渗透浓度至270mmol/L，同时使温度保持在25℃左右；选用0.3μm的聚乙烯滤膜将得到的聚焦液基质过滤，而后加入浓度为3000个/μL的红细胞模拟粒子，完成有形成分的配制，并按照产品规格进行分装检验，报检后磁力搅拌器一直处于搅拌状态直至分装完成，制成产品。
表4实施例3配方成分
实施例4
准备10万级电子天平，检验万级的天平是否矫正合格；若不合格，需要重新校准；按照配方组成依次称量聚焦液基质试剂原材料，后用万级天平进行准确称量；取干净的高密度聚乙烯瓶，加入全批量的纯化水，然后向其中按顺序依次加入缓冲液、渗透压调节剂、表面活性剂、防腐剂、螯合剂和染色调节剂(各成分用量如表5所示)，一种原材料完全溶解后加入下一种原材料，搅拌至完全溶解得到聚焦液基质，继续搅拌20min并使用PH计调节pH值至7.1，使用电导率仪调节电导率ρ至15mS/cm、使用渗透压仪调节渗透浓度至270mmol/L，同时使温度保持在25℃左右；选用0.25μm的聚乙烯滤膜将得到的聚焦液基质过滤，而后加入浓度为3000个/μL的红细胞模拟粒子，完成有形成分的配制，并按照产品规格进行分装检验，报检后磁力搅拌器一直处于搅拌状态直至分装完成，制成产品。
表5实施例4配方成分
实施例5
准备10万级电子天平，检验万级的天平是否矫正合格；若不合格，需要重新校准；按照配方组成依次称量聚焦液基质试剂原材料，后用万级天平进行准确称量；取干净的高密度聚乙烯瓶，加入全批量的纯化水，然后向其中按顺序依次加入缓冲液、渗透压调节剂、表面活性剂、防腐剂、螯合剂和染色调节剂(各成分用量如表6所示)，一种原材料完全溶解后加入下一种原材料，搅拌至完全溶解得到聚焦液基质，继续搅拌22min并使用PH计调节pH值至7.1，使用电导率仪调节电导率ρ至15mS/cm、使用渗透压仪调节渗透浓度至270mmol/L，同时使温度保持在25℃左右；选用0.35μm的聚乙烯滤膜将得到的聚焦液基质过滤，而后加入浓度为3200个/μL的红细胞模拟粒子，完成有形成分的配制，并按照产品规格进行分装检验，报检后磁力搅拌器一直处于搅拌状态直至分装完成，制成产品。
表6实施例5配方成分
实施例6
准备10万级电子天平，检验万级的天平是否矫正合格；若不合格，需要重新校准；按照配方组成依次称量聚焦液基质试剂原材料，后用万级天平进行准确称量；取干净的高密度聚乙烯瓶，加入全批量的纯化水，然后向其中按顺序依次加入缓冲液、渗透压调节剂、表面活性剂、防腐剂、螯合剂和染色调节剂(各成分用量如表7所示)，一种原材料完全溶解后加入下一种原材料，搅拌至完全溶解得到聚焦液基质，继续搅拌30min并使用PH计调节pH值至7.25，使用电导率仪调节电导率ρ至14.5mS/cm、使用渗透压仪调节渗透浓度至265mmol/L，同时使温度保持在24℃左右；选用0.22μm的聚乙烯滤膜将得到的聚焦液基质过滤，而后加入浓度为3150个/μL的红细胞模拟粒子，完成有形成分的配制，并按照产品规格进行分装检验，报检后磁力搅拌器一直处于搅拌状态直至分装完成，制成产品。
表7实施例6配方成分
实施例7
准备10万级电子天平，检验万级的天平是否矫正合格；若不合格，需要重新校准；按照配方组成依次称量聚焦液基质试剂原材料，后用万级天平进行准确称量；取干净的高密度聚乙烯瓶，加入全批量的纯化水，然后向其中按顺序依次加入缓冲液、渗透压调节剂、表面活性剂、防腐剂、螯合剂和染色调节剂(各成分用量如表3所示)，一种原材料完全溶解后加入下一种原材料，搅拌至完全溶解得到聚焦液基质，继续搅30min并使用PH计调节pH值至6.95，使用电导率仪调节电导率ρ至15.5mS/cm、使用渗透压仪调节渗透浓度至275mmol/L，同时使温度保持在26℃左右；选用0.22μm的聚乙烯滤膜将得到的聚焦液基质过滤，而后加入浓度为3120个/μL的红细胞模拟粒子，完成有形成分的配制，并按照产品规格进行分装检验，报检后磁力搅拌器一直处于搅拌状态直至分装完成，制成产品。
表8实施例7配方成分
实施例8
准备10万级电子天平，检验万级的天平是否矫正合格；若不合格，需要重新校准；按照配方组成依次称量聚焦液基质试剂原材料，后用万级天平进行准确称量；取干净的高密度聚乙烯瓶，加入全批量的纯化水，然后向其中按顺序依次加入缓冲液、渗透压调节剂、表面活性剂、防腐剂、螯合剂和染色调节剂(各成分用量如表4所示)，一种原材料完全溶解后加入下一种原材料，搅拌至完全溶解得到聚焦液基质，继续搅拌25min并使用PH计调节pH值至7.1，使用电导率仪调节电导率ρ至15mS/cm、使用渗透压仪调节渗透浓度至270mmol/L，同时使温度保持在25℃左右；选用0.28μm的聚乙烯滤膜将得到的聚焦液基质过滤，而后加入浓度为3120个/μL的红细胞模拟粒子，完成有形成分的配制，并按照产品规格进行分装检验，报检后磁力搅拌器一直处于搅拌状态直至分装完成，制成产品。
表9实施例8配方成分
实施例9
准备10万级电子天平，检验万级的天平是否矫正合格；若不合格，需要重新校准；按照配方组成依次称量聚焦液基质试剂原材料，后用万级天平进行准确称量；取干净的高密度聚乙烯瓶，加入全批量的纯化水，然后向其中按顺序依次加入缓冲液、渗透压调节剂、表面活性剂、防腐剂、螯合剂和染色调节剂(各成分用量如表4所示)，一种原材料完全溶解后加入下一种原材料，搅拌至完全溶解得到聚焦液基质，继续搅拌30min并使用PH计调节pH值至7.2，使用电导率仪调节电导率ρ至15.3mS/cm、使用渗透压仪调节渗透浓度至272mmol/L，同时使温度保持在25℃左右；0.38μm的聚乙烯滤膜将得到的聚焦液基质过滤，而后加入浓度为3100个/μL的红细胞模拟粒子，完成有形成分的配制，并按照产品规格进行分装检验，报检后磁力搅拌器一直处于搅拌状态直至分装完成，制成产品。
表10实施例9配方成分
实施例10
在按照以上各实施例中配方配制后得到成品，本发明中对实施例1、实施例3、实施例6、实施例9中所得有形成分分析聚焦液，进行性能评估，具体方法如下：
1、外观目测
在实施例1、实施例3、实施例6、实施例9中所得有形成分分析聚焦液每组中随机抽取5瓶有形成分聚焦液，以正常视力检查外观性能指标，应符合要求：聚焦液为微混橙黄色悬浊液。随机抽取5瓶目测外观结果均合格。
2、聚焦测试
实施例1、实施例3、实施例6、实施例9中所得有形成分分析聚焦液每组中取10瓶有形成分聚焦液同时在GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统上进行聚焦测试，每瓶测试一次，测试结果应显示通过状态。测试结果均为合格状态。
(结果如表11-14所示)
表11实施例1中所得成品聚焦测试结果数据
表12实施例3中所得成品聚焦测试结果数据
表13实施例6中所得成品聚焦测试结果数据
表14实施例9中所得成品聚焦测试结果数据
3、效期稳定性
取实施例1、实施例3、实施例6、实施例9中所得有形成分分析聚焦液，在2℃-8℃规定的贮存条件下，取到效期后一个月(9个月)的聚焦液在GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统上连续聚焦10次，测试结果应显示通过状态。测试结果均为合格状态。(结果如表15-19所示)
表15实施例1中聚焦液(9个月)测试值数据
表16实施例3中聚焦液(9个月)测试值数据
表17实施例6中聚焦液(9个月)测试值数据
表18实施例9中聚焦液(9个月)测试值数据
由上述性能评估试验结果可看出评估结果合格，聚焦液性质稳定，细胞形态良好，分散均一，以上实施案例皆可有效聚焦GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统的光学单元，评估结果优秀；以配方实施例1为例，如图1所示，细胞在镜下分散均匀，细胞形态饱满且统一，无细胞之间的黏连情况，利于测试情况下细胞计数功能的准确，可保证评价细胞成像的清晰准确，此系列配方均为细胞形态优、准确度高、稳定性好的设计配方。
综上所述，本发明的有形成分分析聚焦液在2-8℃贮存至少可稳定8个月，且性能不发生改变，本发明适用于GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统，适用机型包含但不限于以上机型，设备上使用，目前市场上无该类产品，自主研发工艺可靠且独创，主要用于配合GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统样本检测前的聚焦功能，从而保证仪器形态学检测系统成像的完整性、准确性及可靠性，使所成图像真实有效、清晰可辨、细胞形态分布合理错落有致，是保证有形成分分析仪检测有形成分精密度的必备试剂，本发明不限于上述的举例，对本领域的普通技术人员来说，可根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
