粘度降低的制剂
发明领域tt
本发明涉及治疗性蛋白的制剂领域。更具体地，本发明涉及粘度降低的tt制剂以及制备其的方法。tt
发明背景tt
许多包含蛋白的药品需要高治疗剂量以实现有效的患者响应。由于治疗tt性蛋白(包括单克隆抗体)体积大以及易于蛋白分解，为了达到血流中的治疗浓tt度，需要将其经静脉内或皮下注射给药。在这两种给药途径中，皮下注射对tt患者更为便利，因为可在家给予靶向皮下给药途径的药品。存在多种在预填tt充注射器中的已经重新或作为产品线延伸而开发的单克隆抗体药品，用于皮tt下给药途径。通常，由于皮下空间对给药剂量的体积限制，通过预填充注射tt器单次推注给药(bolus administration)的方式可给药不超过1mL药品溶液。然tt而，给药总体积和持续时间由给药溶液中单克隆抗体的浓度控制。为在更小tt体积内实现输注或推注给药更高剂量，需要溶液中高浓度的单克隆抗体。tt
多种浓度范围超过100mg/mL的单克隆抗体以及大多数浓度为更高的tt200mg/mL的单克隆抗体具有相对高粘度，导致处置单克隆抗体药品溶液的问tt题。诸如用于浓缩抗体至高水平的切向流动过滤以及无菌过滤的制备工艺是tt困难的并导致高粘度溶液的产量损失。当必须达到超过约20牛的力以使用预tt填充注射器递送药品的皮下剂量时，还可出现患者或医疗专业人员药品处理tt和注射能力的问题。显然需要降低粘度的制剂方法，且在制剂开发期间使用tt降低粘度的赋形剂是一可行的方法。tt
发明内容tt
本发明涉及一种降低包含醋酸盐和治疗性蛋白的制剂的粘度的方法。tt
在一项实施方案中，该方法包括(a)提供包含醋酸盐的制剂；以及(b)将甘tt氨酸和/或精氨酸添加至该制剂中至约1.0%w/v的浓度，其中具有甘氨酸和/tt或精氨酸的制剂的粘度比不具有甘氨酸和/或精氨酸的相同制剂的粘度小。在tttttt一项实施方案中，具有甘氨酸和/或精氨酸的制剂的粘度比不具有甘氨酸和/tt或精氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约15%、至少约tt20%、至少约25%或至少约30%。在一项实施方案中，具有甘氨酸和/或精氨tt酸的制剂的粘度小于约25cP或小于约20cP。tt
在另一项实施方案中，该方法包括(a)提供包含醋酸盐的制剂；以及(b)将tt甲硫氨酸添加至该制剂中至约0.04%w/v的浓度，其中具有甲硫氨酸的制剂tt的粘度比不具有甲硫氨酸的相同制剂的粘度小。在一项实施方案中，具有甲tt硫氨酸的制剂的粘度比不具有甲硫氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约tt10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%或至少约30%。在一项实施方tt案中，具有甲硫氨酸的制剂的粘度小于约25cP或小于约20cP。tt
在另一项实施方案中，该方法包括(a)提供包含醋酸盐的制剂；以及(b)将tt苯丙氨酸添加至该制剂中至约0.8%w/v的浓度，其中具有苯丙氨酸的制剂的tt粘度比不具有苯丙氨酸的相同制剂的粘度小。在一项实施方案中，具有苯丙tt氨酸的制剂的粘度比不具有苯丙氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约tt10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约40%或tt至少约50%。在一项实施方案中，具有苯丙氨酸的制剂的粘度小于约20cPtt或小于约15cP。tt
在另一项实施方案中，该方法包括(a)提供包含醋酸盐的制剂；以及(b)将tt色氨酸添加至该制剂中至约0.2%w/v的浓度，其中具有色氨酸的制剂的粘度tt比不具有色氨酸的相同制剂的粘度小。在一项实施方案中，具有色氨酸的制tt剂的粘度比不具有色氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约tt15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约40%或至少约50%。tt在一项实施方案中，具有色氨酸的制剂的粘度小于约20cP或小于约15cP。tt
在另一项实施方案中，该方法包括(a)提供包含醋酸盐的制剂；以及(b)将tt脯氨酸添加至该制剂中至约4.0%w/v的浓度，其中具有脯氨酸的制剂的粘度tt比不具有脯氨酸的相同制剂的粘度小。在一项实施方案中，具有脯氨酸的制tt剂的粘度比不具有脯氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约tt15%、至少约20%、至少约25%或至少约30%。在一项实施方案中，具有脯tt氨酸的制剂的粘度小于约25cP或小于约20cP。tt
本发明还涉及通过本发明任一方法制备的稳定制剂。tt
本发明还涉及包含容器的制品，该容器包含本发明制剂。tt
附图简述tt
图1.醋酸盐缓冲液：在低浓度的直链氨基酸(0.5%w/v甘氨酸，0.5%w/vtt精氨酸，0.01%w/v甲硫氨酸)，抗IL5mAb样品的粘度高于不含氨基酸的样tt品的粘度；但在高浓度的直链氨基酸(1.0%w/v甘氨酸，1%w/v精氨酸以及tt0.04%甲硫氨酸)，该样品的粘度低于不含氨基酸的样品的粘度。tt
图2.醋酸盐缓冲液：苯丙氨酸、色氨酸和脯氨酸降低了抗IL5mAb制剂tt的粘度而酪氨酸增加了抗IL5mAb制剂的粘度。tt
图3.醋酸盐缓冲液：所有测试的氨基酸降低了抗ELR mAb制剂的粘度。tt脯氨酸实现了最大的粘度降低，然后是色氨酸、苯丙氨酸和甘氨酸。tt
发明详述tt
应当理解，本发明不限于具体的方法、试剂、化合物、组合物或生物系tt统，其当然可以变化。还应当理解，本文所用的术语仅为描述具体的实施方tt案，而不是为了限制。如本说明书及所附权利要求书中使用的，除非内容明tt确另有所指，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括所指事物的复数形式。tt因此，例如，提及“多肽”包括两种或多种多肽的组合等。tt
当涉及可测量值如量、持续时间等时，本文所用的“约”是指涵盖从特tt定数值的±20%或±10%的变体(包括±5%、±1%和±0.1%)，这样的变体适tt于施行所公开的方法。tt
除非另有所指，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属tt领域的技术人员通常所理解的相同的含义。尽管任何与本文所述的方法和材tt料相似或相当的方法和材料可用于本发明测试的实践中，但优选的材料和方tt法如本文所述。在描述和请求本发明中，将用到以下术语。tt
本发明涉及一种降低包含醋酸盐和治疗性蛋白的制剂的粘度的方法。tt
在本发明的示例性实施方案中，所生产的液体多肽组合物表现出理想的tt特性，如理想的粘度和表面张力特性。tt
术语“表面张力”是指表面下的分子对表面/空气界面的分子施加的吸引tt力，是由于液体的高分子浓度相对气体的低分子浓度而引起。具有低表面张tt力值的液体，如非极性液体，比水更容易流动。通常，表面张力值以牛/米或tt达因/厘米表示。tt
本文涉及的“动态表面张力”是指表面/空气界面和对表面/表面界面的动tt态界面张力。有多种可选的方法测量动态表面张力，例如，捕泡表面张力计tt(captive bubble surface tensionometry)或搏动气泡表面张力计(pulsating bubble ttsurface tensionometry)。tt
术语“粘度”指的是流体在规定温度表现的对流动的内部阻力；是切应力tt与剪切速率之比。如果1达因/平方厘米的力导致两个面积为1平方厘米且相tt距1厘米的平行液体表面以1cm/s的速度相对运动，则液体具有1泊的粘度。tt1泊=100厘泊。tt
当涉及表观粘度，应当理解粘度值取决于进行测量的条件，如所采用的tt温度、剪切速率和切应力。表观粘度定义为切应力与应用的剪切速率之比。tt有多种可选的方法测量表观粘度。例如，粘度可通过合适的锥和板、平行板tt或其它类型的粘度计或流变仪测试。tt
在一些实施方案中，粘度降低的制剂具有小于约50cP、小于约45cP、tt小于约40cP、小于约35cP、小于约30cP、小于约25cP、小于约20cP或tt小于约15cP的粘度。tt
本文替换使用的“多肽”、“肽”和“蛋白”是指氨基酸残基的聚合物。多肽tt可以是天然(组织衍生的)起源的、重组的或由原核或真核细胞制品天然表达tt的，或者是经由合成方法化学生产的。该术语适用于氨基酸聚合物(其中一个tt或多个氨基酸残基为相应的天然存在的氨基酸的人工化学模拟物)，也适用于tt天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。氨基酸模拟物是指tt具有与氨基酸的一般的化学结构不同的结构，但作用的方式与天然存在的氨tt基酸类似的化学化合物。科学和专利文献充分地描述了非天然残基。一些示tt例性的用作天然氨基酸残基模拟物的非天然组合物和指导如下所述。芳香族tt氨基酸的模拟物可通过由以下替代而生成：例如D-或L-萘基丙氨酸tt(naphylalanine)；D-或L-苯基甘氨酸；D-或L-2噻吩基丙氨酸(thieneylalanine)；ttD-或L-1,-2,3-,或4-芘基丙氨酸(pyreneylalanine)；D-或L-3噻吩基丙氨酸tt(thieneylalanine)；D-或L-(2-吡啶基)-丙氨酸；D-或L-(3-吡啶基)-丙氨酸；D-tt或L-(2-吡嗪基)-丙氨酸；D-或L-(4-异丙基)-苯基甘氨酸；D-(三氟甲基)-苯基tt甘氨酸；D-(三氟甲基)-苯丙氨酸；D-对-氟-苯丙氨酸；D-或L-对-联苯基苯丙tt氨酸；K-或L-对-甲氧基-联苯基苯丙氨酸；D-或L-2-吲哚(烷基)丙氨酸；和ttD-或L-烷基丙氨酸，其中烷基可以为取代或未取代的甲基、乙基、丙基、己tttttt基、丁基、戊基、异丙基、异丁基、sec-isotyl、异戊基，或非酸性氨基酸。tt非天然氨基酸的芳香族环包括，例如噻唑基、噻吩基(thiophenyl)、吡唑基、tt苯并咪唑基、萘基、呋喃基、吡咯基，和吡啶基芳香族环。tt
本文所用的“肽”包括作为本文具体举例说明的那些肽的保守变体的肽。tt本文所用的“保守变体”表示使用另一生物学上相似的残基替代氨基酸残基。tt保守变体的实例包括但不限于，一个疏水性残基如异亮氨酸、缬氨酸、亮氨tt酸、丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸、正tt亮氨酸或甲硫氨酸取代另一个疏水残基，或一个极性残基取代另一个极性残tt基，如精氨酸取代赖氨酸、谷氨酸取代天冬氨酸或谷氨酰胺取代天冬酰胺等。tt可互相取代的中性亲水性氨基酸包括天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸和苏氨酸。tt“保守变体”还包括使用取代的氨基酸代替未取代的母体氨基酸，条件是取代tt的多肽的抗体也与未取代的多肽起免疫反应。这样的保守取代在本发明的肽tt的种类的定义之内。本文所用的“阳离子的”是指在pH7.4时具有净正电荷的tt任何肽。肽的生物活性可通过本领域技术人员已知的和本文所述的标准方法tt测定。tt
当关于蛋白使用“重组”时，表示该蛋白已通过引入异源核酸或蛋白或者tt改变天然核酸或蛋白进行修饰。tt
本文所用的“治疗性蛋白”指的是(例如)研究者或临床医生所寻找的、可向tt哺乳动物给药以引出组织、系统、动物或人类的生物学或医学应答的任何蛋tt白和/或多肽。治疗性蛋白可引出多于一种生物学或医学应答。而术语“治疗tt有效量”是指与未接受该量的相应的受试者相比，导致(但不限于)疾病、病症tt或副作用痊愈、预防或减轻，或者疾病或病症进展速率降低的任何量。该术tt语在其范围内还包括有效增强正常生理功能的量以及在患者中有效地引起增tt强或有助于第二种药物的治疗作用的生理功能的量。tt
本文所鉴定的所有“氨基酸”残基为天然的L-构型。与标准多肽命名一致，tt氨基酸残基的缩写如下表所示。tt
表1.氨基酸缩写。tt
应当注意所有的氨基酸残基序列在本文通过从左至右的方向为从氨基端tt至羧基端的常规方向的式子表示。tt
在另一项实施方案中，该多肽为抗原结合多肽。在一项实施方案中，该tt抗原结合多肽选自可溶性受体、抗体、抗体片段、免疫球蛋白单一可变域、ttFab、F(ab’)2、Fv、二硫键(disulphide)连接的Fv、scFv、闭合构象的多特异性tt抗体、二硫键连接的scFv或双特异抗体。tt
本文所用的术语“抗原结合多肽”指的是能够结合至抗原的抗体、抗体片tt段和其它蛋白构造。tt
术语Fv、Fc、Fd、Fab，或F(ab)2使用其标准含义(参见，例如Harlowtt等人,Antibodies A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,(1988))。tt
“嵌合抗体”指的是一种基因工程抗体，其含有来自供体抗体的天然存在tt的可变区(轻链和重链)以及来自受体抗体的轻链和重链恒定区。tt
“人源化抗体”指的是一种基因工程抗体，其CDR源自非人供体免疫球蛋tt白，而该分子的剩余的源自免疫球蛋白的部分来自一种(或多种)人免疫球蛋tt白。此外，可改变框架支持残基(framework support residues)以保持结合亲和tt力(参见，例如Queen等人,Proc.Natl.Acad Sci USA,86:10029-10032(1989),ttHodgson等人,Bio/Technology,9:421(1991))。合适的人受体抗体可以通过与tt供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源而选自常规数据库，例如ttttttKABAT.RTM.数据库、Los Alamos数据库和Swiss Protein数据库。特征在于tt与供体抗体的框架区的同源(在氨基酸基础上)的人抗体可能适于为供体CDRtt的插入提供重链恒定区和/或重链可变框架区。能够提供轻链恒定或可变框架tt区的合适的受体抗体可以类似的方式选择。应当注意，受体抗体的重链和轻tt链不要求源自同一受体抗体。现有技术描述了生产这样的人源化抗体的若干tt种方法--见例如EP-A-0239400和EP-A-054951。tt
术语“供体抗体”指的是一种抗体(单克隆和/或重组的)，其将其可变区、ttCDR或其它功能片段或其类似物的氨基酸序列贡献给第一免疫球蛋白配偶tt体，从而提供改变的免疫球蛋白编码区并生成表达的改变的抗体，该抗体具tt有抗原特异性和该供体抗体的中和活性特征。tt
术语“受体抗体”指的是与该供体抗体异源的抗体(单克隆和/或重组的)，tt其将编码其重链和/或轻链框架区和/或其重链和/或轻链恒定区的全部(或任何tt部分，但在一些实施方案中全部)氨基酸序列贡献给第一免疫球蛋白配偶体。tt在一些实施方案中，人抗体为受体抗体。tt
“CDR”定义为抗体的互补决定区的氨基酸序列，其为免疫球蛋白重链和tt轻链的高变区。参见，例如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological ttInterest,4th Ed.,U.S.Department of Health and Human Services,National ttInstitutes of Health(1987)。在免疫球蛋白的可变部分有三个重链和三个轻链ttCDR(或CDR区)。因此，本文所用的“CDR”指的是所有三个重链CDR或所tt有三个轻链CDR(或如果适宜，所有的重链和所有的轻链CDR二者)。抗体tt的结构和蛋白折叠可能意味着其它残基被认为是抗原结合区的部分，且这可tt被技术人员理解。参见，例如Chothia等人,(1989)Conformations of ttimmunoglobulin hypervariable regions;Nature342,p877-883。tt
本文所用的术语“域”指的是一种折叠的蛋白结构，其具有独立于该蛋白tt其它部分的三级结构。通常，域是蛋白离散功能特性形成的原因，且在很多tt情况中，域可以被添加、除去或转移至其它蛋白而不会失去该蛋白剩余部分tt和/或域的功能。“抗体单一可变域”是折叠的多肽域，其包含抗体可变域的序tt列特征。因此，它包括完全的抗体可变域和修饰的可变域，例如，其中一个tt或多个环被以下所代替：不是抗体可变域特征的序列，或已被平截的抗体可tt变域或者包含N-端或C-端延伸的抗体可变域，以及保留至少全长域的结合活tt性和特异性的可变域的折叠的片段。tt
短语“免疫球蛋白单一可变域”指的是不依赖不同的V区或域而特异结合tt抗原或表位的抗体可变域(VH,VHH,VL)。免疫球蛋白单一可变域可与其它不同tt的可变区或可变域以一种形式(例如同型多体或异型多体)存在，其中其它区或tt域不是该单一免疫球蛋白可变域抗原结合所必需的(例如，其中该免疫球蛋白tt单一可变域结合抗原不依赖于另外的可变域)。本文所用的术语“域抗体”或tt“dAb”与能够结合至抗原的“免疫球蛋白单一可变域”是相同的。免疫球蛋白单tt一可变域可以是人抗体可变域，但也包括来自其它物种如啮齿动物(例如，ttWO00/29004所公开的)、铰口鲨和骆驼科的VHH dAb(纳米体)的单一抗体可tt变域。骆驼科VHH是来自包括普通骆驼、美洲驼、羊驼、单峰骆驼和原驼物tt种的免疫球蛋白单一可变域多肽，其产生天然缺乏轻链的重链抗体。这样的ttVHH域可根据本领域可用的标准技术人源化，而且根据本发明这样的域仍被tt认为是“域抗体”。本文所用的"VH包括骆驼科VHH域。NARV是另一种类型的tt免疫球蛋白单一可变域，其在包括铰口鲨的软骨鱼中被鉴定。这些域也被称tt为新型抗原受体可变区(通常简写成V(NAR)或NARV)。更多详情参见Mol.ttImmunol.44,656-665(2006)和US20050043519A。tt
术语“表位结合域”指的是不依赖于不同的V区或域特异地结合抗原或表tt位的域，这可以是域抗体(dAb)，例如人、骆驼科或鲨鱼免疫球蛋白单一可变tt域。tt
如本文所用，术语“抗原结合位点”指的是能够特异地结合至抗原的蛋白tt上的位点，这可以是单一域，例如表位结合域，或者它可以是可在标准抗体tt上找到的成对的VH/VL域。在本发明的一些方面中，单链Fv(ScFv)域可提供tt抗原结合位点。tt
本文所用的术语“mAbdAb”和“dAbmAb”指的是本发明的抗原结合蛋白。tt这两个术语可替换使用，并具有本文所用的相同含义。tt
在一项实施方案中，该方法包括(a)提供包含醋酸盐的制剂；以及(b)将一tt种或多种氨基酸添加至该制剂中，其中具有氨基酸的制剂的粘度比不具有相tt同氨基酸的相同制剂的粘度小。在一些实施方案中，该氨基酸是直链氨基酸。tt在其它实施方案中，该氨基酸包含环状部分。在一项实施方案中，该氨基酸tt是色氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、亮tt氨酸、苏氨酸、缬氨酸、脯氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、精tt氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸。tt
在一项实施方案中，该方法包括(a)提供包含醋酸盐的制剂；以及(b)将甘tt氨酸和/或精氨酸添加至该制剂中至约1.0%w/v的浓度，其中具有甘氨酸和/tt或精氨酸的制剂的粘度比不具有甘氨酸和/或精氨酸的相同制剂的粘度小。在tt一项实施方案中，具有甘氨酸和/或精氨酸的制剂的粘度比不具有甘氨酸和/tt或精氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约15%、至少约tt20%、至少约25%或至少约30%。在一项实施方案中，具有甘氨酸和/或精氨tt酸的制剂的粘度小于约25cP或小于约20cP。tt
在另一项实施方案中，该方法包括(a)提供包含醋酸盐的制剂；以及(b)将tt甲硫氨酸添加至该制剂中至约0.04%w/v的浓度，其中具有甲硫氨酸的制剂tt的粘度比不具有甲硫氨酸的相同制剂的粘度小。在一项实施方案中，具有甲tt硫氨酸的制剂的粘度比不具有甲硫氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约tt10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%或至少约30%。在一项实施方tt案中，具有甲硫氨酸的制剂的粘度小于约25cP或小于约20cP。tt
在另一项实施方案中，该方法包括(a)提供包含醋酸盐的制剂；以及(b)将tt苯丙氨酸添加至该制剂中至约0.8%w/v的浓度，其中具有苯丙氨酸的制剂的tt粘度比不具有苯丙氨酸的相同制剂的粘度小。在一项实施方案中，具有苯丙tt氨酸的制剂的粘度比不具有苯丙氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约tt10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约40%或tt至少约50%。在一项实施方案中，具有苯丙氨酸的制剂的粘度小于约20cPtt或小于约15cP。tt
在另一项实施方案中，该方法包括(a)提供包含醋酸盐的制剂；以及(b)将tt色氨酸添加至该制剂中至约0.2%w/v的浓度，其中具有色氨酸的制剂的粘度tt比不具有色氨酸的相同制剂的粘度小。在一项实施方案中，具有色氨酸的制tt剂的粘度比不具有色氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约tt15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约40%或至少约50%。tt在一项实施方案中，具有色氨酸的制剂的粘度小于约20cP或小于约15cP。tt
在另一项实施方案中，该方法包括(a)提供包含醋酸盐的制剂；以及(b)将tt脯氨酸添加至该制剂中至约4.0%w/v的浓度，其中具有脯氨酸的制剂的粘度tt比不具有脯氨酸的相同制剂的粘度小。在一项实施方案中，具有脯氨酸的制tt剂的粘度比不具有脯氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约tt15%、至少约20%、至少约25%或至少约30%。在一项实施方案中，具有脯tttttt氨酸的制剂的粘度小于约25cP或小于约20cP。tt
在另一项实施方案中，该方法进一步包括测定蛋白制剂的稳定性。tt
在另一项实施方案中，该制剂进一步包含附加赋形剂。“赋形剂”包括但tt不限于，稳定剂，例如，人血清白蛋白(hsa)、牛血清白蛋白(bsa)、α-酪蛋白、tt球蛋白、α-乳白蛋白、LDH、溶菌酶、肌红蛋白、卵白蛋白、核糖核酸酶A；tt缓冲剂，例如，柠檬酸、HEPES、组氨酸、乙酸钾、柠檬酸钾、磷酸二氢钾tt(KH2PO4)、乙酸钠、碳酸氢钠、柠檬酸钠、磷酸二氢钠(NaH2PO4)、Tris碱和ttTris-HCl；氨基酸/代谢产物，例如甘氨酸、丙氨酸(α-丙氨酸、β-丙氨酸)、精tt氨酸、甜菜碱、亮氨酸、赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸、4-tt羟基脯氨酸、肌氨酸、γ-氨基丁酸(GABA)、冠瘿氨基酸(opines)(丙氨亚氨基tt酸(alanopine)、章鱼碱、N-羟甲基-L-丙氨酸(strombine))，和三甲基胺N-氧化tt物(TMAO)；表面活性剂，例如聚山梨酯20和聚山梨酯80，以及泊洛沙姆407；tt脂质分子，例如磷脂酰胆碱、乙醇胺和乙酰基色氨酸酯(acethyltryptophanate)；tt聚合物，例如聚乙二醇(PEG)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)10、24、40；低分子量tt赋形剂，例如阿拉伯糖、纤维二糖、乙二醇、果糖、岩藻糖、半乳糖、甘油/tt丙三醇、葡萄糖、肌醇、乳糖、甘露醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露糖、蜜二tt糖、2-甲基-2,4-戊二醇、辛酮糖、丙二醇、棉子糖、核糖、山梨糖醇、蔗糖、tt海藻糖、木糖醇和木糖；和高分子量赋形剂，例如纤维素、β-环糊精、右旋tt糖酐(10kd)、右旋糖酐(40kd)、右旋糖酐(70kd)、聚蔗糖、明胶、羟丙基甲tt基纤维素、羟乙基淀粉、麦芽糊精、甲基纤维素、PEG(6kd)、聚葡萄糖、聚tt乙烯吡咯烷酮(PVP)k15(10kd)、PVP(40kd)、PVP k30(40kd)、PVP k90(1000ttkd)、葡聚糖凝胶G200和淀粉；抗氧化剂，例如，抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、tt硫代甘油、巯基乙酸、硫代山梨糖醇和谷胱甘肽；还原剂，例如盐酸半胱氨tt酸、二硫苏糖醇和其它硫醇或噻吩(thiophene)；螯合剂，例如EDTA、EGTA、tt谷氨酸和天冬氨酸；无机盐/金属，例如Ca2+、Ni2+、Mg2+、Mn2+、Na2SO4、tt(NH4)2SO4、Na2HPO4/NaH2PO4、K2HPO4/KH2PO4、MgSO4和NaF；有机盐，tt例如乙酸钠、聚乙烯钠、辛酸钠(Na caprylate或Na octanoate)、丙酸盐tt(proprionate)、乳酸盐、琥珀酸盐和柠檬酸盐；有机溶剂，例如乙腈、二甲基tt亚砜(DMSO)和乙醇。tt
在一项实施方案中，该制剂进一步包含蔗糖。在一项实施方案中，该制tt剂包含浓度约150至约300mM的蔗糖。在一项实施方案中，该制剂包含浓tttttt度约200至约250mM的蔗糖。在一项实施方案中，该制剂包含浓度约234mMtt的蔗糖。tt
在一项实施方案中，该制剂配制为pH约4.5至约7.5。在一项实施方案tt中，该制剂配制为pH约5.5。在一项实施方案中，该制剂包含约25mM至约tt75mM醋酸盐。在一项实施方案中，该制剂包含约55mM醋酸盐。tt
在另一项实施方案中，该制剂进一步包含聚山梨酯-80。在另一项实施方tt案中，该制剂进一步包含聚山梨酯-80。在一项实施方案中，该制剂进一步包tt含浓度至多0.05%w/v的聚山梨酯-80。tt
在另一项实施方案中，该治疗性蛋白是抗原结合多肽。在一项实施方案tt中，该抗原结合多肽是抗体。在一项实施方案中，该抗原结合多肽是免疫球tt蛋白单一可变域。在一项实施方案中，该抗原结合多肽结合至白介素5(IL5)。tt在一项实施方案中，该抗原结合多肽是抗IL5抗体。在一项实施方案中，该tt抗IL5抗体包括包含SEQ ID NO:1的重链以及包含SEQ ID NO:2的轻链。在tt一项实施方案中，该抗原结合多肽结合至ELR。在一项实施方案中，该抗原tt结合多肽是抗ELR抗体。在一项实施方案中，该抗ELR抗体包括包含SEQ ID ttNO:3的重链以及包含SEQ ID NO:4的轻链。tt
在另一项实施方案中，该治疗性蛋白的存在浓度为至少约150mg/ml、至tt少约175mg/ml、至少约200mg/ml、至少约225mg/ml、至少约250mg/ml、tt至少约275mg/ml或至少约300mg/ml。在另一项实施方案中，该治疗性蛋白tt的存在浓度为至少约150mg/ml至约300mg/ml。在一项实施方案中，该治tt疗性蛋白的存在浓度为约200mg/ml。tt
在一项实施方案中，冻干或喷雾干燥该制剂，然后在测定粘度前重构。tt在一些实施方案中，冻干或喷雾干燥粘度降低的制剂并之后用分散剂重构。tt在一项实施方案中，该分散剂为无菌水或“注射用水”(WFI)。该液体多肽可进tt一步用等渗盐水或其它赋形剂稀释以在给药前产生所需的浓度。在一项实施tt方案中，该制剂是重构制剂。在另一项实施方案中，该制剂是液体药物制剂。tt
用于降低粘度的试剂可在配制方法的任意阶段加入。例如，在醋酸盐、tt治疗性蛋白或任意赋形剂之前、之后或与其同时。tt
本发明制剂可以以任何适当给药途径给药，包括全身用药。全身用药包tt括口服给药、肠胃外给药、经皮给药、直肠给药，以及吸入给药。肠胃外给tt药是指除肠内、经皮或吸入外的给药途径，且通常通过注射或输注。肠胃外tttttt给药包括静脉内、肌肉内和皮下注射或输注。吸入是指给药入患者肺中，无tt论是经口或经鼻道吸入。tt
本发明还涉及通过本发明任意方法制备的稳定制剂。tt
在一项实施方案中，该制剂包含醋酸盐、治疗性蛋白和一种或多种氨基tt酸，其中具有氨基酸的制剂的粘度比不具有相同氨基酸的相同制剂的粘度小。tt在一些实施方案中，该氨基酸是直链氨基酸。在其它实施方案中，该氨基酸tt包含环状部分。在一项实施方案中，该氨基酸是色氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、tt甲硫氨酸、丙氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、脯氨酸、tt赖氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、半胱tt氨酸。tt
在一项实施方案中，该制剂包含醋酸盐、治疗性蛋白和甘氨酸和/或精氨tt酸。在一项实施方案中，甘氨酸和/或精氨酸的浓度为约1.0%w/v，其中具有tt甘氨酸和/或精氨酸的制剂的粘度比不具有甘氨酸和/或精氨酸的相同制剂的tt粘度小。在一项实施方案中，具有甘氨酸和/或精氨酸的制剂的粘度比不具有tt甘氨酸和/或精氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约15%、tt至少约20%、至少约25%或至少约30%。在一项实施方案中，具有甘氨酸和tt/或精氨酸的制剂的粘度小于约25cP或小于约20cP。tt
在一项实施方案中，该制剂包含醋酸盐、治疗性蛋白和甲硫氨酸。在一tt项实施方案中，甲硫氨酸的浓度为约0.04%w/v，其中具有甲硫氨酸的制剂的tt粘度比不具有甲硫氨酸的相同制剂的粘度小。在一项实施方案中，具有甲硫tt氨酸的制剂的粘度比不具有甲硫氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约tt10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%或至少约30%。在一项实施方tt案中，具有甲硫氨酸的制剂的粘度小于约25cP或小于约20cP。tt
在一项实施方案中，该制剂包含醋酸盐、治疗性蛋白和苯丙氨酸。在一tt项实施方案中，苯丙氨酸的浓度为约0.6%w/v至约1.0%w/v，其中具有苯丙tt氨酸的制剂的粘度比不具有苯丙氨酸的相同制剂的粘度小。在一项实施方案tt中，具有苯丙氨酸的制剂的粘度比不具有苯丙氨酸的制剂的粘度降低至少约tt5%、至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、tt至少约40%或至少约50%。在一项实施方案中，具有苯丙氨酸的制剂的粘度tt小于约20cP或小于约15cP。tt
在一项实施方案中，该制剂包含醋酸盐、治疗性蛋白和色氨酸。在一项tttttt实施方案中，色氨酸的浓度为约0.1%w/v至约0.3%w/v，其中具有色氨酸的tt制剂的粘度比不具有色氨酸的相同制剂的粘度小。在一项实施方案中，色氨tt酸的浓度为约0.2%w/v。在一项实施方案中，具有色氨酸的制剂的粘度比不tt具有色氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约15%、至少tt约20%、至少约25%、至少约30%、至少约40%或至少约50%。在一项实施tt方案中，具有色氨酸的制剂的粘度小于约20cP或小于约15cP。tt
在一项实施方案中，该制剂包含醋酸盐、治疗性蛋白和脯氨酸。在一项tt实施方案中，脯氨酸的浓度为约4.0%w/v，其中具有脯氨酸的制剂的粘度比tt不具有脯氨酸的相同制剂的粘度小。在一项实施方案中，具有脯氨酸的制剂tt的粘度比不具有脯氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约tt15%、至少约20%、至少约25%或至少约30%。在一项实施方案中，具有脯tt氨酸的制剂的粘度小于约25cP或小于约20cP。tt
在一项实施方案中，该制剂进一步包含蔗糖。在一项实施方案中，该制tt剂包含浓度约150至约300mM的蔗糖。在一项实施方案中，该制剂包含浓tt度约200至约250mM的蔗糖。在一项实施方案中，该制剂包含浓度约234mMtt的蔗糖。tt
在一项实施方案中，该制剂配制为pH约4.5至约7.5。在一项实施方案tt中，该制剂配制为pH约5.5。在一项实施方案中，该制剂包含约25mM至约tt75mM醋酸盐。在一项实施方案中，该制剂包含约55mM醋酸盐。tt
在另一项实施方案中，该制剂进一步包含聚山梨酯-80。在另一项实施方tt案中，该制剂进一步包含聚山梨酯-80。在一项实施方案中，该制剂进一步包tt含浓度至多0.05%w/v的聚山梨酯-80。tt
本发明还涉及包含容器的制品，该容器包含本发明的制剂。在一项实施tt方案中，该制品进一步包含用于给药该制剂的说明书。tt
实施例tt
甘氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸和脯氨酸获自Sigma-Aldrich。精氨tt酸获自MP-Biomedicals且甲硫氨酸获自JT Baker。所有氨基酸为实验室级。tt抗IL5mAb储备溶液(220mg/mL)为自制且用234mM蔗糖的醋酸盐缓冲液tt(pH5.5)配制。tt
调节抗IL5mAb溶液的浓度至200mg/mL以用于下述粘度测量。对于甘tttttt氨酸、精氨酸、甲硫氨酸和酪氨酸，在醋酸盐缓冲液中制备储备溶液(表2)tt并将其加入各缓冲液的220mg/mL抗IL5mAb储备溶液中(表3)。tt
对于色氨酸和苯丙氨酸，将氨基酸直接溶入抗IL5mAb溶液中以获得表tt3中的目标氨基酸浓度。由于它们的低水溶性，通过制备储备溶液可能无法tt获得该浓度。tt
表2：氨基酸储备溶液的浓度。tt
表3：为获得具有所述氨基酸浓度的200mg/mL抗IL5mAb的氨基酸的tt稀释方案。tt
样品稀释后，采用Brookfield LVDVUUltra III C/P流变仪在25℃测量样tt品的粘度。所用轴为CP-40且各次测量装载500μL样品。由所获不随转矩%tt增加而改变的粘度值计算平均粘度值。tt
