含碱性或中性蛋白酶的稳定酶制剂及其制备工艺和应用
技术领域
本发明涉及洗涤产品技术领域，具体涉及一种含碱性或中性蛋白酶的稳定酶制剂及其制备工艺和应用。
背景技术
碱性蛋白酶是非常重要的一类工业用酶，在食品、洗涤、皮革等行业中应用广泛，特别是在洗涤行业中。在日常生活中，衣物洗涤是一个无法避开的问题，虽然随着社会的进步，已经可以利用机器代替人力进行衣物洗涤，但是洗涤过程中的洗涤剂选择仍然是个问题。洗涤剂中的主要成分是表面活性剂，表面活性剂同时具有亲水基和疏水基，在洗涤过程中，多个表面活性剂分子包裹衣物上的污渍，疏水基与污渍结合，而亲水基与水分子结合，从而形成一个胶束团，再经过机械摩擦运动，将胶束团从衣物上除去，达到净洗的效果。但是这个过程中存在一个不足，那就是表面活性剂可以很容易的和小分子物质形成胶束团，但是对于大分子的污渍力有不逮，需要添加更多的表面活性剂，这势必会对环境造成更坏的影响。在洗涤剂中加入蛋白酶后，可以将许多污渍中的大分子成分分解为小分子，利于表面活性剂作用，提高去污力，降低表面活性剂的用量，减少环境污染。
酶作为一种天然的生物制剂，在自然环境中没有污染，而且能够自然降解，对于环境没有污染，与传统的洗涤剂相比，加酶洗涤剂具有巨大的优势，是洗涤行业重要的发展方向。
现在大多数生物酶的来源都是通过真菌(毕赤酵母)或者细菌(枯草芽孢杆菌)的发酵产生的。发酵完成后，由于目标产物是存在于发酵液中的，而发酵液中目标产物的含量相对较低，因此需要对发酵液进行分离提纯，以获取高纯度的目标产物。目前，主要是通过高速离心、分级盐析、分级醇沉等方法实现发酵液的分离纯化，提取目标产物，大致的处理程序如下：
发酵液→高速离心→硫酸铵分级沉淀(分级盐析)→透析脱盐→乙醇分级沉淀(分级醇沉)→离子交换层析。
虽然目前主流的分离纯化方法可以得到高纯度的目标产物，但是由于分离纯化过程不会考虑不同发酵液的差异性，运用同一种方法进行纯化，纯化过程会造成大量的能源损失，也会造成大量的目标产物损失，同时纯化工艺也相对较长，涉及程序太多，纯化效率相对较低，而且纯化过程中会有目标产物的相变过程。
因此寻找一种快速高效低耗的发酵液分离纯化的方法，对推动碱性蛋白酶液体制剂的产业化具有重要意义，这将会极大的提高我国微生物酶制剂的生产技术水平，推动我国酶制剂工业发展，促进洗涤行业的进一步发展。
此外，巯基对于大多数酶来说是非常重要的，这些巯基可能会参与催化、与底物结合、组成变构部位、维持酶的三级或四级结构等，因此，使巯基保持天然状态是使许多酶稳定化的重要条件之一。
发明内容
本发明为解决碱性或中性蛋白酶发酵液精制过程存在的能源损失大、目标产物损失、纯化工艺时间长，涉及程序多，纯化效率低的问题，以及蛋白酶中巯基保护问题，提出一种含碱性和中性蛋白酶的稳定酶制剂及其工艺和应用。
为解决上述技术问题，本发明采用了以下技术方案：
一种含碱性或中性蛋白酶的稳定酶制剂，所述稳定酶制剂是通过如下方法制得；具体为碱性或中性蛋白酶粗发酵液经复合絮凝剂絮凝处理后，经过过滤、抽滤或者板框压滤获得清澈碱性或中性蛋白酶液，再向其中加入复合稳定剂进行超滤或者过离子交换柱精制；精制后的碱性或中性蛋白酶液与复合抗氧化剂和巯基保护剂配制成稳定酶制剂。
进一步地，所述碱性或中性蛋白酶粗发酵液是由杆菌属细菌或酵母发酵生产，其中杆菌属细菌是指淀粉芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌；所述复合絮凝剂为有机/无机聚合物和无机盐的混合物，所述复合絮凝剂所含组分的重量百分比为：5％～98％的有机/无机聚合物絮凝剂、余量为无机盐絮凝剂；所述有机/无机聚合物为丙烯酰胺PAM、聚合氯化铝PAC、聚合硫酸铁SPFS或者聚合氯化铝铁PAFC中的任意一种，无机盐为硫酸钙、氯化钙、硫酸铝、硫酸钠、氯化钠、硫酸镁中的一种或者几种任意比例的混合；所述添加的复合稳定剂为清澈碱性或中性蛋白酶发酵液重量的0.1％～40％；所述复合稳定剂为非还原二糖和多元醇组成的混合物，非还原二糖与多元醇的重量比为1:1～10，其中非还原二糖为蔗糖、海藻糖中的一种或者它们任意比例的混合，多元醇为丙二醇、二丙二醇、丙三醇中的一种或者几种任意比例的混合；所述精制碱性或中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比为：35％～98％的精制碱性蛋白酶液、0.01％～5％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂；所述复合抗氧化剂为维生素A、维生素E、抗坏血酸、硫代硫酸钠中的一种或者几种任意比例的混合；所述巯基保护剂为半胱氨酸、谷胱甘肽、2－巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇中的一种或几种任意比例的混合。
一种含碱性或中性蛋白酶的稳定酶制剂的制备工艺为：利用有机/无机聚合物和无机盐配制而成的复合絮凝剂将碱性或中性蛋白酶粗发酵液进行絮凝处理，经过过滤、抽滤或者板框压滤获得清澈的碱性或中性蛋白酶液，再向其中加入复合稳定剂，经超滤或过离子交换柱精制得到含复合稳定剂的精制碱性或中性蛋白酶液；然后将含有复合稳定剂精制碱性或中性蛋白酶液与复合抗氧化剂和巯基保护剂混合配制成含碱性或中性蛋白酶的稳定酶制剂。
进一步地，所述碱性或中性蛋白酶粗发酵液是由杆菌属细菌或酵母发酵生产，其中杆菌属细菌是指淀粉芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、放线菌、栖土曲霉、枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌。
更进一步地，所述复合絮凝剂与碱性或中性蛋白酶粗发酵液组分的重量百分比为：35％～99.5％的碱性或中性蛋白酶粗发酵液、0.5％～65％的复合絮凝剂。优选的重量百分比为：55％-99％的碱性或中性蛋白酶粗发酵液、1％-45％的复合絮凝剂；更优选的重量百分比为：75％-99％的碱性或中性蛋白酶粗发酵液、1％-25％的复合絮凝剂；更优选的重量百分比为：80％-97％的碱性或中性蛋白酶粗发酵液、3％-20％的复合絮凝剂。
更进一步地，所述复合絮凝剂是由有机/无机聚合物和无机盐配制而成，所述复合絮凝剂所含组分的重量百分比为：5％～98％的有机/无机聚合物絮凝剂、2％～95％的无机盐絮凝剂；所述有机/无机聚合物为聚丙烯酰胺PAM、聚合氯化铝PAC、聚合硫酸铁SPFS或聚合氯化铝铁PAFC中的一种或者几种任意比例的混合；所述无机盐为硫酸钙、氯化钙、硫酸铝、硫酸钠、氯化钠、硫酸镁中的一种或者几种任意比例的混合。
更进一步地，所述加入的复合稳定剂为清澈碱性或中性蛋白酶液重量的0.1％～40％，所述复合稳定剂为非还原二糖和多元醇组成的混合物，其中非还原二糖与多元醇的重量比为1:1～10，所述非还原二糖为蔗糖、海藻糖中的一种或者几种任意比例的混合；所述多元醇为丙二醇、二丙二醇、丙三醇中的一种或者几种任意比例的混合。
更进一步地，所述含有复合稳定剂的精制碱性或中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比为：35％～98％的含有复合稳定剂精制碱性或中性蛋白酶液、0.01％～5％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂，含有复合稳定剂的精制碱性或中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比之和为100％。优选的重量百分比为：55％-98％的含有复合稳定剂精制2709碱性蛋白酶液、0.1％-5％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂；更优选的重量百分比为90％-98％的含有复合稳定剂精制碱性或中性蛋白酶液、1％-3％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂。
更进一步地，所述复合抗氧化剂为维生素A、维生素E、维生素C、抗坏血酸、硫代硫酸钠中的一种或者几种任意比例的混合；所述巯基保护剂为半胱氨酸、谷胱甘肽、2－巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇中的一种或者几种任意比例的混合。
所述含碱性或中性蛋白酶的稳定酶制剂应用于洗涤剂产品中。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的复合絮凝剂，能够将粗发酵液中99％的菌体、95％以上的固体杂质通过絮凝除去，获得很清澈的碱性或中性蛋白酶液，可以将高耗能的离心步骤省去，达到节能的目标，同时经过超滤后，获得精制的碱性蛋白酶液与复合抗氧化剂、巯基保护剂混合后经过处理获得含碱性蛋白酶的稳定性蛋白酶制剂，酶活力能得到长效保存。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种含碱性蛋白酶的稳定酶制剂的制备工艺为：
一种碱性蛋白酶粗发酵液，添加复合絮凝剂后经过滤、抽滤或者板框压滤后获得清澈碱性蛋白酶液，再向其中添加复合稳定剂后，经过过滤、板框压滤获得清澈碱性蛋白酶液，再将清澈碱性蛋白酶液送入超滤机中进行超滤，得到含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液，最后向含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液中添加复合抗氧化剂和巯基保护剂，得到含碱性蛋白酶的稳定酶制剂。
所述碱性蛋白酶粗发酵液由地衣芽孢杆菌2709发酵产生；
所述复合絮凝剂和碱性蛋白酶粗发酵液组分的重量百分比为：99.5％的蛋白酶粗发酵液、0.5％的复合絮凝剂；
所述复合絮凝剂中所含组分的重量百分比为：25％的有机/无机聚合物絮凝剂、75％的无机盐絮凝剂；
所述有机/无机聚合物絮凝剂为聚丙烯酰胺和聚合氯化铝的混合，混合比为1:5；无机盐为硫酸铝；
所述复合稳定剂的重量百分比为碱性蛋白酶液的0.1％，复合稳定剂为海藻糖和丙二醇、丙三醇的混合物，混合比例为1:4:4；
所述含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比为：97％的含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、0.01％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂；含有复合稳定剂的精制碱性或中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比之和为100％。
所述复合抗氧化剂为维生素C和硫代硫酸钠的混合，混合比例为1:1；
所述巯基保护剂为半胱氨酸、谷胱甘肽的混合物，混合比例为1:1。
按以上方法和工艺进行处理并配制蛋白酶制剂，即可获得含碱性蛋白酶的稳定性酶制剂，其应用于洗涤产品中。
碱性蛋白酶采用本实施例的方法处理前后酶活力对比见表1。
实施例2
一种含中性蛋白酶的稳定酶制剂的制备工艺为：
一种中性蛋白酶粗发酵液，添加复合絮凝剂后经过滤、抽滤或者板框压滤后获得清澈碱性蛋白酶液，再向其中添加复合稳定剂后，经过过滤、抽滤获得清澈碱中性蛋白酶液，再将清澈中性蛋白酶液经过离子交换柱精制得到含复合稳定剂的精制中性蛋白酶液，最后向含复合稳定剂的精制中性蛋白酶液中添加复合抗氧化剂和巯基保护剂，得到含中性蛋白酶的稳定酶制剂。
所述中性蛋白酶粗发酵液由淀粉芽孢杆菌发酵产生；
所述复合絮凝剂和中性蛋白酶粗发酵液组分的重量百分比为：80％的蛋白酶粗发酵液、20％的复合絮凝剂；
所述复合絮凝剂中所含组分的重量百分比为：85％的有机/无机聚合物絮凝剂、15％的无机盐絮凝剂；
所述有机/无机聚合物絮凝剂为聚丙烯酰胺和聚合氯化铝的混合，混合比为1:3；无机盐为硫酸钙；
所述复合稳定剂的重量百分比为中性蛋白酶液的0.5％，复合稳定剂为海藻糖和丙二醇、丙三醇的混合物，混合比例为1:3:3；
所述含有复合稳定剂的精制中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比为：90％的含有复合稳定剂的精制中性蛋白酶液、0.1％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂；含有复合稳定剂的精制碱性或中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比之和为100％。
所述复合抗氧化剂为维生素C和硫代硫酸钠的混合，混合比例为1:1；
所述巯基保护剂为半胱氨酸、谷胱甘肽的混合物，混合比例为1:1。
按以上方法和工艺进行处理并配制蛋白酶制剂，即可获得含中性蛋白酶的稳定酶制剂，其用于洗涤产品中。
中性蛋白酶采用本实施的方法处理前后酶活力对比见表1。
实施例3
一种含中性蛋白酶的稳定酶制剂的制备工艺为：
一种中性蛋白酶粗发酵液，添加复合絮凝剂后经过滤、抽滤或者板框压滤后获得清澈碱性蛋白酶液，再向其中添加复合稳定剂后，经过过滤、抽滤获得清澈碱中性蛋白酶液，再将清澈中性蛋白酶液经过离子交换柱精制得到含复合稳定剂的精制中性蛋白酶液，最后向含复合稳定剂的精制中性蛋白酶液中添加复合抗氧化剂和巯基保护剂，得到含中性蛋白酶的稳定酶制剂。
所述中性蛋白酶粗发酵液为栖土曲霉发酵的国产3942中性蛋白酶；
所述复合絮凝剂和中性蛋白酶粗发酵液组分的重量百分比为：97％的蛋白酶粗发酵液、3％的复合絮凝剂；
所述复合絮凝剂中所含组分的重量百分比为：80％的有机/无机聚合物絮凝剂、20％的无机盐絮凝剂；
所述有机/无机聚合物絮凝剂为聚丙烯酰胺和聚合氯化铝的混合，混合比为1:7；无机盐为硫酸铝和硫酸钙的混合，混合比例为1:1；；
所述复合稳定剂的重量百分比为中性蛋白酶液的1％，复合稳定剂为海藻糖、蔗糖和丙二醇、丙三醇的混合物，混合比例为1:1:4:5；
所述含有复合稳定剂的精制中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比为：95％的含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、1％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂；
所述复合抗氧化剂为维生素C和硫代硫酸钠的混合，混合比例为1:1；
所述巯基保护剂为半胱氨酸、谷胱甘肽的混合物，混合比例为1:1。
按以上方法和工艺进行处理并配制蛋白酶制剂，即可获得含中性蛋白酶的稳定酶制剂，其应用于洗涤产品中。
中性蛋白酶采用本实施例的方法处理前后酶活力对比见表1。
实施例4
一种含中性蛋白酶的稳定酶制剂的制备工艺为：
一种中性蛋白酶粗发酵液，添加复合絮凝剂后经过滤、抽滤或者板框压滤后获得清澈碱性蛋白酶液，再向其中添加复合稳定剂后，经过过滤、抽滤获得清澈碱中性蛋白酶液，再将清澈中性蛋白酶液经过离子交换柱精制得到含复合稳定剂的精制中性蛋白酶液，最后向含复合稳定剂的精制中性蛋白酶液中添加复合抗氧化剂和巯基保护剂，得到含中性蛋白酶的稳定酶制剂。
所述中性蛋白酶粗发酵液由栖土曲霉发酵产生；
所述复合絮凝剂和中性蛋白酶粗发酵液组分的重量百分比为：93％的蛋白酶粗发酵液、7％的复合絮凝剂；
所述复合絮凝剂中所含组分的重量百分比为：15％的有机/无机聚合物絮凝剂、85％的无机盐絮凝剂；
所述有机/无机聚合物絮凝剂为聚合氯化铝；无机盐为硫酸铝；
所述复合稳定剂的重量百分比为中性蛋白酶液的10％，复合稳定剂为海藻糖和丙二醇、丙三醇的混合物，混合比例为1:2:4；
所述含有复合稳定剂的精制中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比为：55％的含有复合稳定剂的精制中性蛋白酶液、1％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂；含有复合稳定剂的精制碱性或中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比之和为100％。
所述复合抗氧化剂为维生素C和硫代硫酸钠的混合，混合比例为1:1；
所述巯基保护剂为半胱氨酸。
按以上方法和工艺进行处理并配制蛋白酶制剂，即可获得含中性蛋白酶的稳定酶制剂，其应用于洗涤产品中。
中性蛋白酶采用本实施例的方法处理前后酶活力对比见表1。
实施例5
一种含碱性蛋白酶的稳定酶制剂的制备工艺为：
一种碱性蛋白酶粗发酵液，添加复合絮凝剂后经过滤、抽滤或者板框压滤后获得清澈碱性蛋白酶液，再向其中添加复合稳定剂后，经过过滤、板框压滤获得清澈碱性蛋白酶液，再将清澈碱性蛋白酶液送入超滤机中进行超滤，得到含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液，最后向含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液中添加复合抗氧化剂和巯基保护剂，得到含碱性蛋白酶的稳定酶制剂。
所述碱性蛋白酶粗发酵液由地衣芽孢杆菌2709发酵产生；
所述复合絮凝剂和碱性蛋白酶粗发酵液组分的重量百分比为：99％的蛋白酶粗发酵液、1％的复合絮凝剂；
所述复合絮凝剂中所含组分的重量百分比为：90％的有机/无机聚合物絮凝剂、10％的无机盐絮凝剂；
所述有机/无机聚合物絮凝剂为聚丙烯酰胺、聚合氯化铝、聚合硫酸铁的混合，混合比为1:5:1；无机盐为硫酸铝；
所述复合稳定剂的重量百分比为碱性蛋白酶液的40％，复合稳定剂为蔗糖和丙二醇的混合物，混合比例为1:4；
所述含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比为：35％的含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、5％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂；含有复合稳定剂的精制碱性或中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比之和为100％。
所述复合抗氧化剂为维生素C和硫代硫酸钠的混合，混合比例为1:1；
所述巯基保护剂为半胱氨酸、谷胱甘肽的混合物，混合比例为1:3。
按以上方法和工艺进行处理并配制蛋白酶制剂，即可获得含碱性蛋白酶的稳定酶制剂，其应用于洗涤产品中。
碱性蛋白酶采用本实施例的方法处理前后酶活力对比见表1。
实施例6
一种含碱性蛋白酶的稳定酶制剂的制备工艺为：
一种碱性蛋白酶粗发酵液，添加复合絮凝剂后经过滤、抽滤或者板框压滤后获得清澈碱性蛋白酶液，再向其中添加复合稳定剂后，经过过滤、板框压滤获得清澈碱性蛋白酶液，再将清澈碱性蛋白酶液送入超滤机中进行超滤，得到含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液，最后向含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液中添加复合抗氧化剂和巯基保护剂，得到含碱性蛋白酶的稳定酶制剂。
所述碱性蛋白酶粗发酵液由毕赤酵母发酵产生；
所述复合絮凝剂和碱性蛋白酶粗发酵液组分的重量百分比为：75％的蛋白酶粗发酵液、25％的复合絮凝剂；
所述复合絮凝剂中所含组分的重量百分比为：98％的有机/无机聚合物絮凝剂、2％的无机盐絮凝剂；
所述有机/无机聚合物絮凝剂为聚丙烯酰胺；无机盐为硫酸铝、硫酸钙的混合，混合比例为3:1；
所述复合稳定剂的重量百分比为碱性蛋白酶液的25％，复合稳定剂为海藻糖和丙二醇的混合物，混合比例为1:7；
所述含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比为：98％的含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、3％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂；含有复合稳定剂的精制碱性或中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比之和为100％。
所述复合抗氧化剂为维生素C和硫代硫酸钠的混合，混合比例为1:1；
所述巯基保护剂为半胱氨酸、谷胱甘肽的混合物，混合比例为1:2。
按以上方法和工艺进行处理并配制蛋白酶制剂，即可获得含碱性蛋白酶的稳定酶制剂，其应用于洗涤产品中。
碱性蛋白酶采用本实施例的方法处理前后酶活力对比见表1。
实施例7
一种碱性蛋白酶的稳定性蛋白酶制剂的精制方法，具体方法为：
一种碱性蛋白酶粗发酵液，添加复合絮凝剂后经过滤、抽滤或者板框压滤后获得清澈碱性蛋白酶液，再向其中添加复合稳定剂后，送入超滤机中进行超滤，得到含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液，最后向含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液中添加复合抗氧化剂和巯基保护剂，得到含碱性蛋白酶的稳定酶制剂。
所述碱性蛋白酶粗发酵液由迟缓芽孢杆菌发酵产生；
所述复合絮凝剂和碱性蛋白酶粗发酵液组分的重量百分比为：55％的蛋白酶粗发酵液、45％的复合絮凝剂；
所述复合絮凝剂中所含组分的重量百分比为：60％的有机/无机聚合物絮凝剂、40％的无机盐絮凝剂；
所述有机/无机聚合物絮凝剂为聚丙烯酰胺、聚合氯化铝的混合，混合比为1:5；无机盐为硫酸铝与硫酸钙的混合，混合比例为1:1；
所述复合稳定剂的重量百分比为碱性蛋白酶液的4％，复合稳定剂为海藻糖和丙二醇、丙三醇的混合物，混合比例为1:4:2；
所述含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比为：93％的含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、2％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂；含有复合稳定剂的精制碱性或中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比之和为100％。
所述复合抗氧化剂为维生素C和硫代硫酸钠的混合，混合比例为1:1；
所述巯基保护剂为半胱氨酸、谷胱甘肽的混合物，混合比例为1:5。
按以上方法和工艺进行处理并配制蛋白酶制剂，即可获得含碱性蛋白酶的稳定酶制剂，其应用于洗涤产品中。
碱性蛋白酶采用本实施例的方法处理前后酶活力对比见表1。
实施例8
一种含碱性蛋白酶的稳定酶制剂的制备工艺为：
一种碱性蛋白酶粗发酵液，添加复合絮凝剂后经过滤、抽滤或者板框压滤后获得清澈碱性蛋白酶液，再向其中添加复合稳定剂后，经过过滤、板框压滤获得清澈碱性蛋白酶液，再将清澈碱性蛋白酶液送入超滤机中进行超滤，得到含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液，最后向含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液中添加复合抗氧化剂和巯基保护剂，得到含碱性蛋白酶的稳定酶制剂。
所述碱性蛋白酶粗发酵液由毕赤酵母发酵产生；
所述复合絮凝剂和碱性蛋白酶粗发酵液组分的重量百分比为：95％的蛋白酶粗发酵液、5％的复合絮凝剂；
所述复合絮凝剂中所含组分的重量百分比为：5％的有机/无机聚合物絮凝剂、95％的无机盐絮凝剂；
所述有机/无机聚合物絮凝剂为聚丙烯酰胺、聚合硫酸铁的混合，混合比为1:1；无机盐为硫酸铝、氯化钙、硫酸钙的混合，混合比例为1:1:1；
所述复合稳定剂的重量百分比为碱性蛋白酶液的2％，复合稳定剂为海藻糖和丙二醇的混合物，混合比例为1:3；
所述含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比为：97％的含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、1.5％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂；含有复合稳定剂的精制碱性或中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比之和为100％。
所述复合抗氧化剂为维生素C和硫代硫酸钠的混合，混合比例为1:1；
所述巯基保护剂为半胱氨酸、谷胱甘肽的混合物，混合比例为1:5。
按以上方法和工艺进行处理并配制蛋白酶制剂，即可获得含碱性蛋白酶的稳定酶制剂，其应用于洗涤产品中。
碱性蛋白酶采用本实施例的方法处理前后酶活力对比见表1。
实施例9
一种含碱性蛋白酶的稳定酶制剂的制备工艺为：
一种碱性蛋白酶粗发酵液，添加复合絮凝剂后经过滤、抽滤或者板框压滤后获得清澈碱性蛋白酶液，再向其中添加复合稳定剂后，经过过滤、板框压滤获得清澈碱性蛋白酶液，再将清澈碱性蛋白酶液送入超滤机中进行超滤，得到含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液，最后向含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液中添加复合抗氧化剂和巯基保护剂，得到含碱性蛋白酶的稳定酶制剂。
所述碱性蛋白酶粗发酵液由枯草芽孢杆菌发酵产生；
所述复合絮凝剂和碱性蛋白酶粗发酵液组分的重量百分比为：35％的蛋白酶粗发酵液、65％的复合絮凝剂；
所述复合絮凝剂中所含组分的重量百分比为：50％的有机/无机聚合物絮凝剂、50％的无机盐絮凝剂；
所述有机/无机聚合物絮凝剂为聚丙烯酰胺、聚合氯化铝的混合，混合比为1:3；无机盐为硫酸铝与氯化钙的混合，混合比例为3:1；
所述复合稳定剂的重量百分比为碱性蛋白酶液的3％，复合稳定剂为海藻糖和丙二醇、丙三醇的混合物，混合比例为1:4:5；
所述含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比为：96％的含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、2.5％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂；含有复合稳定剂的精制碱性或中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比之和为100％。
所述复合抗氧化剂为维生素C和硫代硫酸钠的混合，混合比例为1:1；
所述巯基保护剂为谷胱甘肽。
按以上方法和工艺进行处理并配制蛋白酶制剂，即可获得含碱性蛋白酶的稳定酶制剂，其应用于洗涤产品中。
碱性蛋白酶采用本实施的方法处理前后酶活力对比见表1。
实施例10
一种含碱性蛋白酶的稳定酶制剂的制备工艺为：
一种碱性蛋白酶粗发酵液，添加复合絮凝剂后经过滤、抽滤或者板框压滤后获得清澈碱性蛋白酶液，再向其中添加复合稳定剂后，经过过滤、板框压滤获得清澈碱性蛋白酶液，再将清澈碱性蛋白酶液送入超滤机中进行超滤，得到含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液，最后向含复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液中添加复合抗氧化剂和巯基保护剂，得到含碱性蛋白酶的稳定酶制剂。
所述碱性蛋白酶粗发酵液由地衣芽孢杆菌2709发酵产生；
所述复合絮凝剂和碱性蛋白酶粗发酵液组分的重量百分比为：94％的蛋白酶粗发酵液、6％的复合絮凝剂；
所述复合絮凝剂中所含组分的重量百分比为：70％的有机/无机聚合物絮凝剂、30％的无机盐絮凝剂；
所述有机/无机聚合物絮凝剂为聚合氯化铝；无机盐为硫酸铝与硫酸钙的混合，混合比例为4:1；
所述复合稳定剂的重量百分比为碱性蛋白酶液的7％，复合稳定剂为海藻糖和丙三醇的混合物，混合比例为1:1；
所述含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比为：94％的含有复合稳定剂的精制碱性蛋白酶液、0.5％的复合抗氧化剂、余量为巯基保护剂；含有复合稳定剂的精制碱性或中性蛋白酶液、复合抗氧化剂和巯基保护剂的重量百分比之和为100％。
所述复合抗氧化剂为维生素C和硫代硫酸钠的混合，混合比例为1:1；
所述巯基保护剂为半胱氨酸、谷胱甘肽的混合物，混合比例为3:1。
按以上方法和工艺进行处理并配制蛋白酶制剂，获得的含碱性蛋白酶的稳定性蛋白酶制剂用于洗涤产品中。
碱性蛋白酶采用本实施的方法处理前后酶活力对比见表1。
表1为实施例1-10中采用本发明的含2709碱性蛋白酶的稳定性蛋白酶制剂的精制方法制备的酶与未采用该方法的酶活力对比(福林法测定)。
表1：
采用本发明制备的酶与未采用该方法的酶活力对比
上述1-10实施例中的复合抗氧化剂、巯基保护剂、有机/无机聚合物絮凝剂、无机盐、非还原二糖和多元醇不限于所选用的物质，复合抗氧化剂可以随意替换为维生素A、维生素E、维生素C、抗坏血酸、硫代硫酸钠中的一种或者几种任意比例的混合；巯基保护剂为半胱氨酸、谷胱甘肽、2－巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇中的一种或者几种任意比例的混合；有机/无机聚合物絮凝剂为聚丙烯酰胺PAM、聚合氯化铝PAC、聚合硫酸铁SPFS或聚合氯化铝铁PAFC中的一种或者几种任意比例的混合；无机盐为硫酸钙、氯化钙、硫酸铝、硫酸钠、氯化钠、硫酸镁中的一种或者几种任意比例的混合；非还原二糖为蔗糖、海藻糖中的一种或者几种任意比例的混合；多元醇为丙二醇、二丙二醇、丙三醇中的一种或者几种任意比例的混合。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
