一种肉桂提取液的提取方法与应用
技术领域
本发明涉及植物提取技术领域，尤其涉及一种肉桂提取液的提取方法与应用。
背景技术
我国是肉桂油的生产大国，其中广西和广东生产的肉桂油约占世界产量的80％，此外，越南和印度也出产。我国肉桂资源相当丰富，年出口肉桂油2000吨，但主要是以肉桂油粗品和精选肉桂皮原料出口。肉桂树和肉桂叶的主要提取产品就是肉桂精油，但肉桂精油易挥发，导致其作为产品使用时活性大大下降。
发明内容
本发明提供了一种肉桂提取液的提取方法与应用，解决了现有的肉桂提取物肉桂精油易挥发，导致其使用活性大大下降的问题。
其具体技术方案如下：
本发明提供了一种肉桂提取液的提取方法，包括以下步骤：
将肉桂叶粉与无水乙醇、去离子水混合后浸泡，得到浸泡液，然后对所述浸泡液进行蒸馏，得到肉桂提取液；
所述肉桂叶粉与所述无水乙醇、所述去离子水的质量体积比为1g：(1.8～3.24)ml：(8.2～14.76)ml，优选为1g：(2～3)ml：(10～14)ml，更优选为1g：2.7ml：12.3ml。
上述提取方法中仅用到去离子水和无水乙醇用为提取溶剂，无需用到其它有机溶剂，对环境友好，且得到的提取液安全可靠。
本发明中，肉桂叶粉的粒径优选为1～2cm，更优选为2cm，所述肉桂叶粉来源于干燥的肉桂叶。
本发明中，所将肉桂叶与无水乙醇、去离子水混合后浸泡，得到浸泡液。所述浸泡的时间为15～20min，优选为15min。
得到浸泡液后对所述浸泡液进行蒸馏，获得蒸馏液即为肉桂提取液。所述蒸馏具体为：将所述浸泡液进行加热，优选在电子炉上进行加热；所述加热的温度为300℃，时间为2.5h～3h，优选为3h。
本发明提取得到的肉桂提取液包括肉桂精油和肉桂纯露，两者融合在一起，肉桂提取液呈透明乳状液的形态存在，说明肉桂精油和肉桂纯露充分溶解在无水乙醇中，且稳定性好，从而降低了肉桂精油的挥发性能。肉桂纯露是提取肉桂精油的副产物，本发明肉桂提取液中包含肉桂精油和肉桂纯露两种有效成分，从而增加了肉桂提取物的利用率。
本发明还提供了上述肉桂提取液在抑制酪氨酸酶中的应用。
本发明中，肉桂提取液较肉桂精油对酪氨酸酶的抑制率高。
本发明中，肉桂提取液在酪氨酸酶中的有效抑制浓度为15vol％-25vol％，优选为20vol％。
本发明还提供了一种酪氨酸酶抑制剂，包括上述肉桂提取液。
酪氨酸酶(TYR)催化L-酪氨酸发生羟基化反应生成左旋多巴(L-DOPA)，并进一步催化L-DOPA氧化生成多巴醌(DQ)。多巴醌(DQ)经过分子内除氨基生成无色多巴色素(环多巴)，最后生成黑色素。因此，酪氨酸酶抑制剂能抑制黑色素的生成。
所以，本发明还提供了酪氨酸酶抑制剂在美白产品中的应用。
本发明还提供了一种美白剂，包括上述酪氨酸酶抑制剂。
从以上技术方案可以看出，本发明具有以下优点：
本发明提供了一种肉桂提取液的提取方法，包括以下步骤：
将肉桂叶粉与无水乙醇、去离子水混合后浸泡，得到浸泡液，然后对所述浸泡液进行蒸馏，得到肉桂提取液；肉桂叶粉与无水乙醇、去离子水的质量体积比为1g：(1.8～3.24)ml：(8.2～14.76)ml。
上述提取方法中仅用到去离子水和无水乙醇作为提取溶剂，无需用到其它有机溶剂，对环境友好，且得到的提取液安全可靠。提取得到的肉桂提取液包括肉桂精油和肉桂纯露，两者融合在一起。肉桂提取液呈透明乳状液的形态存在，说明肉桂精油和肉桂纯露充分溶解在无水乙醇中，稳定性好，从而降低了肉桂精油的挥发性，提高了酪氨酸酶的抑制活性。肉桂纯露是提取肉桂精油的副产物，本发明肉桂提取液中包含肉桂精油和肉桂纯露两种有效成分，增加了肉桂提取物的利用率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为本发明实施例1提供的肉桂提取液的GC-MS谱图；
图2为本发明对比例1提供的肉桂提取液的GC-MS谱图；
图3为本发明实施例4提供的无水乙醇不同添加量制备得到的肉桂提取液对酪氨酸酶活性的影响图。
具体实施方式
为使得本发明的发明目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，下面所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而非全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例为肉桂提取液的制备
取100g干肉桂叶碎片，按照1:15的液料比添加溶剂(1230ml去离子水、270ml无水乙醇)，混合所有物料，常温下密封浸泡15分钟；浸泡时间到后，移至电磁炉上加热，加热温度为300℃，采用水蒸气蒸馏法提取3h，得到蒸馏液即为肉桂提取液，用玻璃瓶在常温下密封保存。图1为本实施例肉桂提取液的GC-MS谱图，如图1所示，本实施例肉桂提取液由肉桂精油和肉桂纯露组成。
对比例1
本对比例1为肉桂提取液的制备
本对比例与实施例1的区别仅在于：未加入无水乙醇，去离子水1500ml。图2为本对比例肉桂提取液的GC-MS谱图，如图2所示，本对比例肉桂提取液由肉桂精油和肉桂纯露组成。
实施例2
本实施例为实施例1和对比例1肉桂提取液的稳定性测试
将实施例1肉桂提取液和对比例1肉桂提取液分别作为实验组和对照组进行稳定性测试(包括吸光度值检测和离心测试)。
分别取5ml实验组和对照组肉桂提取液，将两组试剂进行可见光吸光光度计在475nm处检测。实验组的吸光度值为0.185,对照组吸光度值为0.391。且用肉眼即可见实验组肉桂提取液更加澄清。
分别取10ml实验组肉桂提取液和对照组肉桂精油进行旋转离心测试，在离心机行4000r/s的速度下离心旋转10分钟之后，观察两组试验的差异。实验组肉桂提取液依旧澄清，无沉淀产生，对照组肉桂精油试管底部出现少量精油沉淀(肉桂精油的密度高于水)，出现精油与纯露分层的现象。由此可见实施例制备的肉桂提取液的稳定性更好，肉桂精油得以充分溶解在溶剂中。
实施例3
本实施例为实施例1和对比例1肉桂提取液对酪氨酸酶活性的抑制活性测试
本实施例是在体外模拟体内黑色素生成的条件，在酪氨酸酶中加入检肉桂提取液，最后加入左旋多巴，观察黑色素的生成量(与不加肉桂提取液的空白对照组比较)，并通过酶标仪检测吸光度，可以判断实施例1和对比例1肉桂提取液对酪氨酸酶活性的抑制率。实施例1和对比例1下述溶剂配制和实验步骤完全相同。
①溶剂配制：
1)称取5.7055g K2HPO4，溶于蒸馏水中，并用蒸馏水滴定至500ml，充分溶解，再往其中加入KH2PO4，充分搅拌，并用pH计测其pH值，直至pH＝6.8。
2)10.0mmol/L左旋多巴(用pH＝6.8的磷酸盐缓冲液配制、现配现用)：称量0.0986g左旋多巴溶于50ml磷酸盐缓冲液中，充分溶解。
3)200U/mL酪氨酸酶(用pH＝6.8的磷酸盐缓冲液配制、现配现用)：称量0.004g酪氨酸酶溶于50ml磷酸盐缓冲液中，充分溶解；(冰上放置，防止酶失活)。
②实验步骤：
1)先将10.0mmol/L左旋多巴置于96孔板中；
2)再加入实施例1肉桂提取液，在室温下放置5min；
3)混匀后加入200U/mL酪氨酸酶水溶液，立即混匀室温培育25min；
4)酶标仪后测定吸光度OD492。
5)实施例1肉桂提取液对酪氨酸酶的抑制率按下式计算:抑制率(％)＝(OD2-OD1+OD3)/(OD2-OD4)×100％，
步骤5)中：
(A组)OD1是指含有底物(左旋多巴)、酪氨酸酶、实施例1肉桂提取液测活体系的吸光度值；
(B组)OD2是指含有底物(左旋多巴)、酪氨酸酶，但不含实施例1肉桂提取液的测活体系的吸光度值；
(C组)OD3是指含有底物(左旋多巴)、实施例1肉桂提取液，但不含酪氨酸酶的测活体系的吸光度值；
(D组)OD4是指含有底物(左旋多巴)，但不含酪氨酸酶、实施例1肉桂提取液的测活体系的吸光度值。
③分组情况(每个样品都要设A、B、C、D四个组)
④96孔板铺板顺序(每个样品的每个组设置两个复孔)
本发明实施例1肉桂提取液对酪氨酸酶活性抑制率高达67.07％，对比例1肉桂精油对酪氨酸酶活性抑制率为25.60％。
实施例4
本实施例为无水乙醇的添加量对肉桂提取液抑制酪氨酸酶活性的检测
本实施例采用实施例1的制备方法制备肉桂提取液，区别仅在于混合物料后不浸泡，直接进行加热。本实施例做了6组单因素试验，原料采用：100g肉桂叶碎末、去离子水，无水乙醇的添加量分别是0％、10％、15％、18％、20％、25％六组试验。采用实施例3的方法测试肉桂提取液对酪氨酸酶的抑制率。
由图3可知，肉桂提取液对酶活性的抑制能力随着无水乙醇的添加量呈现出逐渐递增的效果，但是在无水乙醇添加量超过18％之后的增速减缓并逐渐趋于平衡。
由此可见，在添加适度的无水乙醇能够提高桂叶中抑酶活有效物质的提取的率，但是无水乙醇添加到一定量之后，桂叶中的有效物质也被提取到饱和状态，此时再添加过量的无水乙醇就不再提高得率，因此选择18％的无水乙醇添加量最适度，可以达到最佳的效果。
以上所述，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
