酶浆液组合物
技术领域
本发明涉及一种酶浆液组合物，其具有优异的稳定性和降低的生产成本。
背景技术
洗涤剂组合物经常包含酶连同其他组分如表面活性剂。在此类洗涤剂组合物中可以使用各种不同的酶，以帮助清洁基质，如衣物或餐具。酶可包括蛋白酶以分解蛋白质材料、脂肪酶以分解脂肪材料和淀粉酶以分解基于碳水化合物的材料。
在洗涤剂组合物的制备期间，酶通常以液体形式作为溶液或以固体形式作为颗粒添加。颗粒中可包含大量的活性酶，而液体酶产品的浓度(酶活性)受到酶溶解度的限制。同时，液体酶产品需要昂贵的配制品成分才能保持合理的酶稳定性。
发明内容
在第一方面，本发明提供了一种酶浆液组合物，该酶浆液组合物包括
(a)酶颗粒；
(b)钠、钾、镁、锌或铵的水溶性盐；
(c)黄原胶、瓜尔胶、槐豆胶、韦兰胶(welan%20gum)、吉兰糖胶(gellan%20gum)、藻酸盐、卡拉胶或微晶纤维素；和
(d)水。
在一个实施例中，酶颗粒是喷雾干燥的酶或酶晶体。
在另一方面，本发明提供了包含酶颗粒例如酶晶体的肥皂或洗涤剂条。
本发明的其他方面和实施例从说明书和实例是显而易见的。
具体实施方式
本发明的水性酶浆液是具有悬浮在水性稳定溶液中的酶颗粒的产品型式。添加粘度调节剂以保持酶颗粒在浆液(甚至是在长期储存后)中的均匀分布。
酶浆液在添加至洗涤剂制造过程中后会迅速溶解，因此可以使用其而不会影响客户的洗涤剂生产程序。通过添加酶抑制剂甚至可以进一步减少酶浆液在洗涤剂配制品中的溶解时间。
酶浆液的酶的稳定性与传统的液体产品型式相比更优异。此外，活性酶的相对量可以高于传统液体产品型式，因此单位酶活性的生产成本较低。由于酶浆液中的水量通常为约60％w/w-80％w/w，因此配制品成分的成本较低。
酶颗粒
本发明的酶浆液包含酶颗粒。所述酶颗粒可以含有一种或多种酶，如下面所述。不同的酶可以在酶颗粒中混合或分离(例如分层排列)。
酶颗粒是呈固体微粒形式的任何酶形式。可以是酶晶体、酶沉淀、喷雾或冻干酶或任何形式的粒状酶。典型地，酶颗粒的以当量球径(基于体积的平均粒度)度量的粒度低于2mm，优选低于1mm，低于0.5mm，低于0.25mm，或低于0.1mm；并且高于0.05μm，优选高于0.1μm、高于0.5μm、高于1μm、高于5μm或高于10μm。
在一个优选实施例中，酶颗粒的粒度是从0.5μm至100μm。
酶颗粒含有至少1％w/w酶蛋白、优选至少5％w/w酶蛋白、至少10％w/w酶蛋白、至少20％w/w酶蛋白、至少30％w/w酶蛋白、至少40％w/w酶蛋白、至少50％w/w酶蛋白、至少60％w/w酶蛋白、至少70％w/w酶蛋白、至少80％w/w酶蛋白或至少90％w/w酶蛋白。
在一个优选的实施例中，酶颗粒是酶晶体，或酶蛋白呈晶体形式。
可以按如本领域中已知的多种方式(例如，如WO%2091/09943或WO%2094/22903中描述的)进行酶结晶。
酶可以被配制在如本领域已知的酶颗粒中，用于固体酶配制品，例如用于减少粉尘、改进稳定性和或改变酶的释放速率的配制品。酶颗粒还可以被配制在基质中或涂覆有试剂，所述基质或试剂抑制酶颗粒在用于制备水溶性膜的PVOH/膜溶液中溶解。
酶颗粒的表面上的酶分子还可以是交联的，像CLEC(交联酶晶体)或CLEA(交联酶聚集体)。
水溶性盐
将一种或多种水溶性盐添加至(水性)酶浆液组合物中，以避免在储存后酶颗粒溶解在水性浆液中。水溶性盐是钠、钾、镁、锌或铵的盐。优选的盐是硫酸盐、硝酸盐、氯化物、乙酸盐、柠檬酸盐和型式。
在一个实施例中，水溶性盐选自由以下组成的组：硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸锌、硫酸铵、硝酸钠、硝酸钾、硝酸钙、硝酸镁、硝酸锌、硝酸铵、氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、氯化锌、氯化铵、乙酸钠、乙酸钾、乙酸钙、乙酸镁、乙酸锌、乙酸铵、柠檬酸钠、柠檬酸钾、柠檬酸钙、柠檬酸镁、柠檬酸锌、柠檬酸铵、甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙、甲酸镁、甲酸锌和甲酸铵。
将水溶性盐以足以避免酶颗粒储存后溶解的量添加至酶浆液。这容易测量，因为如果酶颗粒溶解，则储存后残余酶活性会降低。
水溶性盐的合适量至少为1％w/w。上限是该盐的溶解极限，例如10％w/w。
粘度调节剂及其他成分
为了避免酶颗粒的沉降，本发明的酶浆液包含粘度调节剂，例如天然聚合物。优选地，该粘度调节剂选自由以下组成的组：藻酸盐、卡拉胶、黄原胶、瓜尔胶、槐豆胶、韦兰胶、吉兰糖胶和微晶纤维素。
将粘度调节剂以足以避免浆液储存后酶颗粒沉降的量添加至酶浆液。根据期望的储存时间(例如，四周)调节需要多少粘度调节剂。如实例2所示，这可以通过将具有不同含量的粘度调节剂的样品孵育期望时间，然后测量沉降曲线来确定。
粘度调节剂的合适量为至少0.1％w/w，例如至少0.25％w/w，取决于粘度调节剂的类型而变化。该上限通过应用中可耐受的粘度水平确定，例如2.5％w/w。
酶浆液还可以包含防腐剂，例如苯氧基乙醇、山梨酸酯或苯甲酸酯，以避免在储存后微生物污染/降解。
水被用作酶浆液中的载液。水的确切量取决于酶浆液中其他组分的量，但是酶浆液包含至少50％w/w的水。在一个实施例中，水的量为至少60％w/w，优选至少70％w/w，更优选至少80％w/w，且最优选至少90％。在一个优选的实施例中，含水量为50％w/w-90％w/w、60％-90％、或70％-90％。
一种或多种酶
本发明的酶浆液中使用的酶颗粒(见上文)包含一种或多种酶，特别是适用于包括在衣物或餐具洗涤剂中的酶(洗涤剂酶)，如蛋白酶(例如枯草杆菌蛋白酶或金属蛋白酶)、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、黄原胶酶、木聚糖酶、DNA酶、过水解酶、氧化还原酶(例如漆酶、过氧化物酶、过氧羟基脂肪酸羟化环氧化酶(peroxygenase)和/或卤代过氧化物酶)。
优选的洗涤剂酶是蛋白酶(例如，枯草杆菌蛋白酶或金属蛋白酶)、脂肪酶、淀粉酶、裂解酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、DNA酶、过水解酶和氧化还原酶(例如，漆酶、过氧化物酶、过氧羟基脂肪酸羟化环氧化酶和/或卤代过氧化物酶)；或其组合。
更优选的洗涤剂酶为蛋白酶(例如枯草杆菌蛋白酶或金属蛋白酶)、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、和甘露聚糖酶；或其组合。
通过添加各自包含一种酶的单独的颗粒，或通过添加包含这些酶中的两种或更多种的组合颗粒，可以将酶颗粒包含在酶浆液中。
蛋白酶
用于在本发明中使用的蛋白酶是丝氨酸蛋白酶，如枯草杆菌蛋白酶、金属蛋白酶和/或胰蛋白酶样蛋白酶。优选地，所述蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶或金属蛋白酶；更优选地，所述蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶。
丝氨酸蛋白酶是催化肽键水解并且在活性位点处存在一个必需丝氨酸残基的酶(White,Handler和Smith,1973“Principles%20of%20Biochemistry[生物化学原理],”第五版,麦格劳-希尔图书公司(McGraw-Hill%20Book%20Company),纽约，第271-272页)。枯草杆菌蛋白酶包括I-S1和I-S2亚组，优选地由其构成，正如Siezen等人,Protein%20Engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737；和Siezen等人,Protein%20Science%206(1997)501-523[蛋白质科学]所定义。由于丝氨酸蛋白酶的活性位点的结构高度保守，根据本发明的枯草杆菌蛋白酶可以在功能上相当于由Siezen等人(同上)提出的指定亚组的枯草杆菌酶(subtilase)。
枯草杆菌蛋白酶可以是动物、植物或微生物来源的，包括化学或基因修饰的突变体(蛋白工程化的变体)，优选为碱性微生物枯草杆菌蛋白酶。枯草杆菌蛋白酶的实例是来源于芽孢杆菌属的那些，例如枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147以及枯草杆菌蛋白酶168(描述于WO89/06279中)以及蛋白酶PD138(WO%2093/18140)。实例描述于WO%2098/020115、WO%2001/44452、WO01/58275、WO%2001/58276、WO%2003/006602以及WO%2004/099401中。
其他有用的蛋白酶的实例是描述于WO%2092/19729、WO%2096/034946、WO%2098/20115、WO98/20116、WO%2099/011768、WO%2001/44452、WO%2003/006602、WO%2004/03186、WO%2004/041979、WO07/006305、WO%2011/036263、WO%2011/036264中的变体，尤其是在以下位置的一个或多个中具有取代的变体：3、4、9、15、27、36、43、57、61、62、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、156、158、160、161、167、170、182、185、188、191、194、195、199、204、205、206、209、212、217、218、224、232、235、236、245、248、252、261、262、274和275(使用BPN’编号)。
蛋白酶可以在对应于WO%202004/067737的SEQ%20ID%20NO:3的171、173、175、179或180的一个或多个位置处包含取代。
更优选的蛋白酶变体可包含一个或多个以下取代：S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、K27R、*36D、N43R、G61E、G61D、N62D、N62E、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G、S99D、S99A、S99AD、S101E、S101D、S101G、S101M、S101N、S101R、S101H、S103A、V104I、V104Y、V104N、S106A、G118V、G118R、H120D、H120N、N123S、S128L、P129Q、S130A、S156D、A158E、G160D、G160P、S161E、Y167A、R170S、Q182E、N185E、S188E、Q191N、A194P、G195E、V199M、N204D、V205I、Y209W、S212G、L217Q、L217D、N218D、N218S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、N261W、N261D、N261E、L262E、L262D、T274A、R275H(使用BPN’编号)。
可商购的蛋白酶的实例包括以下列商标名出售的那些：AlcalaseTM、RelaseTM、RelaseTMUltra、SavinaseTM、SavinaseTM%20Ultra、DuralaseTM、DurazymTM、EverlaseTM、PrimaseTM、PolarzymeTM、KannaseTM、LiquanaseTM、LiquanaseTM%20Ultra、OvozymeTM、CoronaseTM、CoronaseTMUltra、BlazeTM、Blaze%20EvityTM%20100T、Blaze%20EvityTM%20125T、BlazeEvityTM%20150T、NeutraseTM、EsperaseTM、CarnivalTM、Progress%20UnoTM、和Progress%20ExcelTM(诺维信公司(Novozymes%20A/S)；以下列商标名出售的那些：MaxataseTM、MaxacalTM、PuramaxTM、FN2TM、FN3TM、FN4TM、ExcellaseTM、MaxapemTM、Purafect%20OxTM、PurafectOxPTM、EffectenzTM%20P1050、EffectenzTM%20P1060、ExcellenzTM%20P1000、ExcellenzTM%20P1250、EraserTM、PreferenzTM%20P100、Purafect%20PrimeTM、PreferenzTM%20P110、EffectenzTM%20P1000、PurafectTM、EffectenzTM%20P2000、PurafastTM、ProperaseTM、OpticleanTM和OptimaseTM(杰能科公司(Genencor)/丹斯尼克公司(Danisco)/杜邦公司(DuPont))；AxapemTM(吉斯特-布罗卡德斯公司(Gist-Brocases%20N.V.))；BLAP(US%205352604的图29示出的序列)及其变体(汉高公司(Henkel%20AG))；和来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
裂解酶
裂解酶可以是一种果胶裂解酶，衍生自芽孢杆菌属，特别是地衣芽孢杆菌或粘琼脂芽孢杆菌(B.agaradhaerens)，或衍生自这些来源中任一种的变体，例如，正如在US6124127、WO%2099/027083、WO%2099/027084、WO%2002/006442、WO%2002/092741、WO%2003/095638中所述的，可商购的果胶裂解酶是XPectTM；PectawashTM和PectawayTM(诺维信公司)。
甘露聚糖酶
甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型，特别是粘琼脂芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌或特异腐质霉。合适的甘露聚糖酶描述于WO%2099/064619中。可商购的甘露聚糖酶是MannawayTM(诺维信公司(Novozymes%20A/S))和MannastarTM(杜邦公司)。
纤维素酶
合适的纤维素酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳菌属、支顶孢属的纤维素酶，例如披露于US%204,435,307、US%205,648,263、US%205,691,178、US%205,776,757以及WO%2089/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。
尤其合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP%200%20495%20257、EP%200%20531%20372、WO%2096/11262、WO%2096/29397、WO%2098/08940中的纤维素酶。其他实例为纤维素酶变体，如在WO%2094/07998、EP%200%20531%20315、US%205,457,046、US%205,686,593、US%205,763,254、WO%2095/24471、WO%2098/12307以及PCT/DK%2098/00299中所描述的那些。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM、CarezymeTM、Carezyme%20PremiumTM、WhitezymeTM和CellucleanTM(诺维信公司)；ClazinaseTM、RevitalenzTM和Puradax%20HATM(杜邦公司)；BiotouchTMDCL和FCL(AB酶公司)；和KAC-500(B)TM(花王株式会社)。
脂肪酶和角质酶
合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。实例包括来自嗜热真菌属(Thermomyces)的脂肪酶，例如来自如在EP258%20068和EP%20305%20216中所描述的疏棉状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)(之前命名为柔毛腐质霉)；来自腐质霉属的角质酶，例如在WO%2096/13580中所描述的特异腐质霉；假单胞菌属脂肪酶，例如来自产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP%20218%20272)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP%20331%20376)、斯氏假单胞菌(P.stutzeri)(GB1,372,034)、萤光假单胞菌(P.fluorescens)、假单胞菌属菌种菌株SD%20705(WO%2095/06720和WO%2096/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO%2096/12012)；芽孢杆菌属脂肪酶，例如来自枯草芽孢杆菌(Dartois等人,1993,Biochemica%20et%20Biophysica%20Acta[生物化学与生物物理学学报],1131:253-360)、嗜热脂肪芽杆菌(JP%2064/744992)或短小芽孢杆菌(WO%2091/16422)。
其他实例是例如在WO%2092/05249、WO%2094/01541、EP%20407%20225、EP%20260%20105、WO%2095/35381、WO%2096/00292、WO%2095/30744、WO%2094/25578、WO%2095/14783、WO%2095/22615、WO%2097/04079、WO%2097/07202、WO%2000/060063、WO%202007/087508以及WO%202009/109500中所描述的那些脂肪酶变体。
优选的可商购脂肪酶包括LipolaseTM、Lipolase%20UltraTM和LipexTM；LecitaseTM，LipolexTM；LipocleanTM，LipoprimeTM(诺维信公司)。其他可商购的脂肪酶包括Lumafast(杜邦公司)；Lipomax(吉斯特-布罗卡德斯公司/杜邦公司)和来自索尔维公司(Solvay)的芽孢杆菌脂肪酶。
淀粉酶
合适的淀粉酶(α和/或β)包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括，例如从芽孢杆菌属(例如在GB%201,296,839中更详细所描述的地衣芽孢杆菌的特定菌株)获得的α淀粉酶。
合适的淀粉酶的实例包括具有WO%2095/10603中的SEQ%20ID%20NO:2的淀粉酶或其与SEQID%20NO:3具有90％序列同一性的变体。优选的变体描述于WO%2094/02597、WO%2094/18314、WO97/43424中以及WO%2099/019467的SEQ%20ID%20NO:4中，如在一个或多个以下位置中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。
不同的合适的淀粉酶包括具有WO%2002/010355中的SEQ%20ID%20NO:6的淀粉酶或其与SEQ%20ID%20NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ%20ID%20NO:6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。其他合适的淀粉酶是包括WO%202006/066594的SEQ%20ID%20NO:6中所示的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO%202006/066594的SEQ%20ID%20NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列同一性的变体。此杂合α-淀粉酶的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264。包含示于WO%202006/066594的SEQ%20ID%20NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ%20ID%20NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选变体是具有以下取代的那些：
M197T；
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
另外的合适的淀粉酶是具有WO%2099/019467中的SEQ%20ID%20NO:6的淀粉酶或其与SEQID%20NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ%20ID%20NO:6的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些。
可以使用的另外的淀粉酶是具有WO%2096/023873的SEQ%20ID%20NO:1、SEQ%20ID%20NO:3、SEQID%20NO:2或SEQ%20ID%20NO:7的那些或其与SEQ%20ID%20NO:1、SEQ%20ID%20NO:2、SEQ%20ID%20NO:3或SEQ%20IDNO:7具有90％序列同一性的变体。SEQ%20ID%20NO:1、SEQ%20ID%20NO:2、SEQ%20ID%20NO:3或SEQ%20ID%20NO:7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304以及476。更优选的变体是在位置181和182或位置183和184处具有缺失的那些。SEQ%20ID%20NO:1、SEQ%20ID%20NO:2或SEQ%20ID%20NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476中的一个或多个中具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO%2008/153815的SEQ%20ID%20NO:2、WO%2001/66712中的SEQ%20ID%20NO:10的淀粉酶或其与WO%2008/153815的SEQ%20ID%20NO:2具有90％序列同一性或与WO01/66712中的SEQ%20ID%20NO:10具有90％序列同一性的变体。WO%2001/66712中的SEQ%20ID%20NO:10的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和264。
另外的合适的淀粉酶是具有WO%2009/061380的SEQ%20ID%20NO:2的淀粉酶或其与SEQ%20IDNO:2具有90％序列同一性的变体。SEQ%20ID%20NO:2的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端截短和/或取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ%20ID%20NO:2的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183处具有缺失的那些。SEQ%20ID%20NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中所述变体是C-末端截短的，并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
其他合适的淀粉酶是具有WO%2001/66712中的SEQ%20ID%20NO:12的α-淀粉酶或与SEQ%20IDNO:12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO%2001/66712中的SEQ%20IDNO:12中的以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和R458K的变体，以及另外在一个或多个选自下组的位置中具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339，最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。
其他实例是淀粉酶变体，如在WO%202011/098531、WO%202013/001078和WO%202013/001087中描述的那些。
可商购的淀粉酶是StainzymeTM；Stainzyme%20PlusTM；DuramylTM、TermamylTM、Termamyl%20UltraTM；NatalaseTM、FungamylTM和BANTM(诺维信公司)、RapidaseTM和PurastarTM/EffectenzTM、PoweraseTM、AmplifyTM、Amplify%20PrimeTM、PreferenzTM%20S100和PreferenzTMS110(杜邦公司)。
脱氧核糖核酸酶(DNA酶)
合适的脱氧核糖核酸酶(DNA酶)是催化DNA骨架中的磷酸二酯键的水解切割从而降解DNA的任何酶。根据本发明，可获得自细菌的DNA酶是优选的；特别地，可获得自芽孢杆菌属的DNA酶是优选的；特别地，可获得自枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的DNA酶是优选的。此类DNA酶的实例描述于专利申请WO%202011/098579或PCT/EP2013/075922中。
过水解酶
合适的过水解酶能够催化过水解反应，所述反应导致在过氧化物源(例如，过氧化氢)的存在下从羧酸酯(酰)底物产生过酸。虽然许多酶以低水平进行所述反应，过水解酶展现出高的过水解：水解比率(通常大于1)。合适的过水解酶可以是植物、细菌或真菌来源的。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。
有用的过水解酶的实例包括天然存在的分枝杆菌属过水解酶或其变体。一种示例性酶来源于耻垢分枝杆菌。这种酶，其酶特性、其结构及其变体描述于WO%202005/056782、WO2008/063400、US%202008/145353以及US%202007167344中。
氧化酶/过氧化物酶
合适的氧化酶和过氧化物酶(或氧化还原酶)包括各种糖氧化酶、漆酶、过氧化物酶以及卤代过氧化物酶。
合适的过氧化物酶包括由国际生物化学与分子生物学联合会(IUBMB)命名委员会陈述的酶分类EC%201.11.1.7包括的那些过氧化物酶，或来源于其中的展示出过氧化物酶活性的任何片段。
合适的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属，例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP%20179,486)，及其变体，如在WO%2093/24618、WO%2095/10602以及WO%2098/15257中所描述的那些。
用于在本发明中使用的过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，例如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及展示出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯离子形成次氯酸盐。
在一个实施例中，所述卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地，该卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在本发明的优选的方法中，将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯离子来源组合。
已从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous%20hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶，如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如，煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属、弯孢属(例如，疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属、细基格孢属以及葡萄孢属。
还已从细菌，如假单胞菌属(如吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如，金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。
在一个优选实施例中，卤代过氧化物酶可源自弯孢属，特别是疣枝弯孢(Curvulariaverruculosa)或不等弯孢，如描述于WO%2095/27046中的不等弯孢CBS%20102.42；或描述于WO%2097/04102中的疣枝弯孢CBS%20147.63或疣枝弯孢CBS%20444.70；或衍生自如描述于WO%2001/79459中的Drechslerahartlebii，如描述于WO%2001/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiellasalina)、如描述于WO%2001/79461中的Phaeotrichoconiscrotalarie或如描述于WO%2001/79460中的Geniculosporium属物种。
根据本发明的氧化酶特别包括由酶分类EC%201.10.3.2囊括的任何漆酶或来源于其中的展示出漆酶活性的片段、或展示出类似活性的化合物，如儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC%201.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC%201.3.3.5)。
优选的漆酶是微生物来源的酶。该酶可以来源于植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。
来自真菌的合适实例包括可来源于以下的菌株的漆酶：曲霉属，脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌)，柄孢壳菌属，葡萄孢属，金钱菌属(Collybia)，层孔菌属(Fomes)，香菇属，侧耳属，栓菌属(例如，长绒毛栓菌和变色栓菌)，丝核菌属(例如，立枯丝核菌(R.solani))，拟鬼伞属(例如，灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)及C.plicatilis)，小脆柄菇属(Psathyrella)(例如，白黄小脆柄菇(P.condelleana))，斑褶菇属(例如，蝶形斑褶菇(P.papilionaceus))，毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉)，Schytalidium(例如，S.thermophilum)，多孔菌属(例如，P.pinsitus)，射脉菌属(例如，射脉侧菌(P.radiata))(WO%2092/01046)或革盖菌属(例如，毛革盖菌(C.hirsutus))(JP%202238885)。
来自细菌的合适实例包括可来源于芽孢杆菌属的菌株的漆酶。
优选的是源自拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶；特别是源自灰盖拟鬼伞的漆酶，如披露于WO%2097/08325中；或来自嗜热毁丝霉，如披露于WO%2095/33836中。
其他氧化酶的实例包括但不限于氨基酸氧化酶、葡萄糖氧化酶、乳酸盐氧化酶、半乳糖氧化酶、多元醇氧化酶(例如，WO%202008/051491)、以及醛糖氧化酶。氧化酶及其对应的底物可以被用作过氧化氢生成酶系统，由此作为过氧化氢的一个来源。若干种酶，如过氧化物酶、卤代过氧化物酶以及过水解酶需要一个过氧化氢的来源。通过研究EC%201.1.3._、EC1.2.3._、EC%201.4.3._、以及EC%201.5.3._或类似类别(在国际生物化学协会下)，本领域的普通技术人员容易识别氧化酶和底物的此类组合的其他实例。
如上提及的，氨基酸变化可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地为1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一官能(例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The%20Proteins[蛋白质],Academic%20Press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。
可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在所述分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的酶活性进行测试以鉴定对于所述分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性部位还可通过对结构的物理分析来确定，如由下述技术确定：核磁共振、晶体学(crystallography)、电子衍射、或光亲和标记，连同对推定的接触位点(contract%20site)氨基酸进行突变。参见例如,de%20Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；乌拉达维(Wlodaver)等人，1992，欧洲生化学会联合会快报(FEBS%20Lett.)309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法、随后进行一个相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，这些相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO%2095/17413；或WO%2095/22625披露的那些。可以使用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO%2092/06204)，以及区域定向诱变(Derbyshire等人，1986，Gene[基因]46:145；Ner等人，1988，DNA7:127)。
两个氨基酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The%20European%20Molecular%20Biology%20Open%20Software%20Suite[EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件]，Rice等人,2000,Trends%20Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的尼德尔曼-翁施(Needleman-Wunsch)算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。使用尼德尔标记的“最长同一性”的输出(使用非简化(-nobrief)选项获得)作为同一性百分比并且如下计算：(相同的残基x100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
酶稳定剂/抑制剂：
如上所述，一种或多种酶可以使用常规的稳定剂来稳定，例如多元醇(例如甘油)、(单、二或三)丙二醇、糖醇、聚丙二醇和/或聚乙二醇，优选分子量在200-1000范围内的聚乙二醇或聚丙二醇；或通过暂时降低蛋白酶活性起作用的化合物(可逆抑制剂)。
由此，本发明的组合物还可包含蛋白酶抑制剂/稳定剂，所述蛋白酶抑制剂/稳定剂是蛋白酶活性(例如丝氨酸蛋白酶活性)的可逆抑制剂。优选地，蛋白酶抑制剂是(可逆的)枯草杆菌蛋白酶抑制剂。特别地，所述蛋白酶抑制剂可以是肽醛、原硼酸(boric%20acid)或硼酸(boronic%20acid)；或这些中的任一种的衍生物。
该蛋白酶抑制剂对丝氨酸蛋白酶的抑制常数Ki(mol/L)可以从1E-12至1E-03；更优选从1E-11至1E-04；甚至更优选从1E-10至1E-05；甚至更优选从1E-10至1E-06；并且最优选从1E-09至1E-07。
硼酸
所述蛋白酶抑制剂可以是硼酸或其衍生物；优选为苯基硼酸或其衍生物。在本发明的实施例中，所述苯基硼酸衍生物具有以下式：
其中R选自由以下组成的组：氢、羟基、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烯基以及取代的C1-C6烯基。优选地，R是氢、CH3、CH3CH2、或CH3CH2CH2。
在一个优选的实施例中，所述蛋白酶抑制剂(苯基硼酸衍生物)为4-甲酰基-苯基-硼酸(4-FPBA)。
在另一个具体实施例中，该蛋白酶抑制剂选自由以下组成的组：噻吩-2硼酸、噻吩-3硼酸、乙酰胺苯基硼酸、苯并呋喃-2硼酸、萘-1硼酸、萘-2硼酸、2-FPBA、3-FBPA、4-FPBA、1-噻蒽硼酸、4-二苯并呋喃硼酸、5-甲基噻吩-2硼酸、硫茚硼酸(thionaphtheneboronic acid)、呋喃-2硼酸、呋喃-3硼酸、4,4联苯-二硼酸(4,4biphenyl-diborinicacid)、6-羟基-2-萘(6-hydroxy-2-naphtalene)、4-(甲硫基)苯基硼酸、4(三甲基-甲硅烷基)苯基硼酸、3-溴代噻吩硼酸、4-甲基噻吩硼酸、2-萘基硼酸、5-溴噻吩硼酸、5-氯代噻吩硼酸、二甲基噻吩硼酸、2-溴代苯基硼酸、3-氯代苯基硼酸、3-甲氧基-2-噻吩、对-甲基-苯乙基硼酸、2-噻蒽硼酸、二苯并噻吩硼酸、4-羧基苯基硼酸、9-蒽基硼酸、3,5二氯苯基硼酸、二苯基硼酸酐、邻-氯代苯基硼酸、对-氯代苯基硼酸、间-溴代苯基硼酸、对-溴代苯基硼酸、对-氟代苯基硼酸、对-甲苯基硼酸、邻-甲苯基硼酸、辛基硼酸、1,3,5三甲基苯基硼酸、3-氯代-4-氟代苯基硼酸、3-氨基苯基硼酸、3,5-二-(三氟甲基)苯基硼酸、2,4二氯代苯基硼酸、和4-甲氧基苯基硼酸。
合适作为洗涤剂组合物中的蛋白酶抑制剂的另外的硼酸衍生物描述于US 4,963,655、US 5,159,060、WO 95/12655、WO 95/29223、WO 92/19707、WO 94/04653、WO 94/04654、US 5442100、US 5488157以及US 5472628中。
肽醛或酮
蛋白酶稳定剂可具有式：P-(A)y-L-(B)x-B0-R*，其中：
R*是H(氢)、CH3、CX3、CHX2或CH2X。优选地，R*＝H从而使得稳定剂是具有式P-(A)y-L-(B)x-B0-H的肽醛；
X是卤素原子，特别是F(氟)；
B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单个氨基酸残基；
x是1、2或3；
Bx独立地是各自经由其C-末端连接到下一个B或连接到B0上的单个氨基酸残基；
L不存在或独立地是具有式-C(＝O)-、-C(＝O)-C(＝O)-、-C(＝S)-、-C(＝S)-C(＝S)-或-C(＝S)-C(＝O)-的连接基团；
如果L不存在，则A不存在或独立地是经由氨基酸的N-末端连接到L上的单个氨基酸残基；
P选自由以下组成的组：氢，或者如果L不存在，则N-末端保护基团；
y是0、1或2，
R独立地选自下组，该组由以下组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
R’独立地选自下组，该组由以下组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；和
R”是C1-6烷基基团。
x可以是1、2或3并且因此B对应地可以是1、2或3个氨基酸残基。因此，B可以表示B1、B2-B1或B3-B2-B1，其中B3、B2和B1各自表示一个氨基酸残基。y可以是0、1或2，因此A可以不存在，或者是分别具有式A1或A2-A1的1或2个氨基酸残基，其中A2和A1各自代表一个氨基酸残基。
B0可以是经由氨基酸的C-末端连接到H上的、具有L-或D-构型的单个氨基酸残基。B0具有式–NH-CH(R)-C(＝O)-，其中R是C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳基烷基侧链，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、苯基或苄基，并且其中R可以任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代。B0的具体实例是D-或L-形式的精氨酸(Arg)、3,4-二羟基苯丙氨酸、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、甲硫氨酸(Met)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、间酪氨酸、对酪氨酸(Tyr)和缬氨酸(Val)。一个具体实施例是当B0是亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、对酪氨酸以及缬氨酸时。
经由氨基酸的C-末端连接到B0上的B1可以是脂肪族、疏水性和/或中性氨基酸。B1的实例是丙氨酸(Ala)、半胱氨酸(Cys)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)以及缬氨酸(Val)。B1的具体实例是丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸以及缬氨酸。一个具体实施例是当B1是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸时。
如果存在，经由氨基酸的C-末端连接到B1上的B2可以是脂肪族、疏水性、中性和/或极性氨基酸。B2的实例是丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、卷须霉啶(Cpd)、半胱氨酸(Cys)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)以及缬氨酸(Val)。B2的具体实例是丙氨酸、精氨酸、卷须霉啶、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸以及缬氨酸。一个具体实施例是当B2是精氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸时。
经由氨基酸的C-末端连接到B2上的B3(如果存在)可以是大型、脂肪族、芳香族、疏水性和/或中性氨基酸。B3的实例是异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、苯基甘氨酸、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)以及缬氨酸(Val)。B3的具体实例是亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸以及色氨酸。
连接基团L可以不存在，或选自由以下组成的组：-C(＝O)-、-C(＝O)-C(＝O)-、-C(＝S)-、-C(＝S)-C(＝S)-或-C(＝S)-C(＝O)-。本发明的具体实施例是当L不存在或L是羰基基团-C(＝O)-时。
经由氨基酸的N-末端连接到L上的A1(如果存在)可以是脂肪族、芳香族、疏水性、中性和/或极性氨基酸。A1的实例是丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、卷须霉啶(Cpd)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)以及缬氨酸(Val)。A1的具体实例是丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸以及缬氨酸。一个具体实施例是当B2是亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸时。
经由氨基酸的N-末端连接到A1上的A2残基(如果存在)可以是大型、脂肪族、芳香族、疏水性和/或中性氨基酸。A2的实例是精氨酸(Arg)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、苯基甘氨酸、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)以及缬氨酸(Val)。A2的具体实例是苯丙氨酸和酪氨酸。
N-末端保护基团P(如果存在)可以选自甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酰基(Bz)、三氟乙酰基、甲氧基丁二酰基、芳香族和脂肪族氨基甲酸乙酯保护基团，如芴基甲氧基羰基(Fmoc)、甲氧基羰基(Moc)、(氟甲氧基)羰基、苄氧基羰基(Cbz)、叔丁氧基羰基(Boc)以及金刚烷氧基羰基；对甲氧基苄基羰基、苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)、对甲氧基苯基(PMP)、甲氧基乙酰基、甲基氨基羰基、甲基磺酰基、乙基磺酰基、苄基磺酰基、甲基磷酰胺基(MeOP(OH)(＝O))以及苄基磷酰胺基(PhCH2OP(OH)(＝O))。
在具有保护基团的三肽醛(即x＝2，L不存在并且A不存在)的情况下，P优选地是乙酰基、甲氧基羰基、苄氧基羰基、甲基氨基羰基、甲基磺酰基、苄基磺酰基以及苄基磷酰胺基。在具有保护基团的四肽醛(即x＝3，L不存在并且A不存在)的情况下，P优选地是乙酰基、甲氧基羰基、甲基磺酰基、乙基磺酰基以及甲基磷酰胺基。
合适的肽醛描述于WO 94/04651、WO 95/25791、WO 98/13458、WO98/13459、WO 98/13460、WO 98/13461、WO 98/13462、WO 07/141736、WO 07/145963、WO 09/118375、WO 10/055052以及WO 11/036153中。更具体地，肽醛可以是Cbz-Arg-Ala-Tyr-H、Ac-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-CF3、Cbz-Gly-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-CF3、Moc-Val-Ala-Leu-CF3、Cbz-Gly-Ala-Phe-H、Cbz-Gly-Ala-Phe-CF3、Cbz-Gly-Ala-Val-H、Cbz-Gly-Gly-Tyr-H、Cbz-Gly-Gly-Phe-H、Cbz-Arg-Val-Tyr-H、Cbz-Leu-Val-Tyr-H、Ac-Leu-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Tyr-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Leu-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Phe-H、Ac-Phe-Gly-Val-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Met-H、Ac-Trp-Leu-Val-Tyr-H、MeO-CO-Val-Ala-Leu-H、MeNCO-Val-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Phe-H、MeSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeSO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Val-Ala-Leu-H、EtSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、PhCH2SO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Leu-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Phe-Ala-Leu-H或MeO-P(OH)(O)-Leu-Gly-Ala-Leu-H。用于在本发明的液体组合物中使用的一种优选的稳定剂是Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、或其亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧基羰基。
此类肽醛的另外的实例包括α-MAPI、β-MAPI、Phe-C(＝O)-Arg-Val-Tyr-H、Phe-C(＝O)-Gly-Gly-Tyr-H、Phe-C(＝O)-Gly-Ala-Phe-H、Phe-C(＝O)-Gly-Ala-Tyr-H、Phe-C(＝O)-Gly-Ala-L-H、Phe-C(＝O)-Gly-Ala-Nva-H、Phe-C(＝O)-Gly-Ala-Nle-H、Tyr-C(＝O)-Arg-Val-Tyr-H、Tyr-C(＝O)-Gly-Ala-Tyr-H、Phe-C(＝S)-Arg-Val-Phe-H、Phe-C(＝S)-Arg-Val-Tyr-H、Phe-C(＝S)-Gly-Ala-Tyr-H、抗痛素、GE20372A、GE20372B、糜蛋白酶抑素A、糜蛋白酶抑素B以及糜蛋白酶抑素C。
蛋白酶稳定剂可以是上文所描述的肽醛的亚硫酸氢盐加合物，例如，如在WO2013/004636中所描述的。该加合物可以具有式P-(A)y-L-(B)x-N(H)-CHR-CH(OH)-SO3M，其中P、A、y、L、B、x以及R如上文所定义，并且M是H或碱金属，优选Na或K。
亚硫酸氢盐加合物的水溶液可以通过将对应的肽醛与重亚硫酸钠(亚硫酸氢钠，NaHSO3)、亚硫酸氢钾(KHSO3)的水溶液通过已知方法进行反应来制备，例如，如在WO 98/47523；US 6,500,802；US 5,436,229；J.Am.Chem.Soc.[美国化学会志](1978)100,1228；Org.Synth.,Coll.[有机合成文集]卷7:361中所描述的。
特别优选的肽醛蛋白酶稳定剂具有式P-B3-B2-B1-B0-H，或具有式P-B3-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的亚硫酸氢盐加合物，其中
i)H是氢；
ii)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单个氨基酸残基；
iii)B1和B2独立地是单个氨基酸残基；
iv)B3是单个氨基酸残基，或不存在；
v)R独立地选自下组，该组由以下组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
vi)R'独立地选自下组，该组由以下组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
vii)R”是C1-6烷基基团；
viii)P是N末端保护基团，优选甲氧基羰基(Moc)或苄氧基羰基(Cbz)；和
ix)M是H或碱金属、优选Na或K。
在一个甚至更优选实施例中，肽醛蛋白酶稳定剂具有式P-B2-B1-B0-H或具有式P-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的加合物，其中
i)H是氢；
ii)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单个氨基酸残基；
iii)B1和B2独立地是单个氨基酸残基；
iv)R独立地选自下组，该组由以下组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
v)R'独立地选自下组，该组由以下组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
vi)R”是C1-6烷基基团；
vii)P是N末端保护基团、优选甲氧基羰基(Moc)或苄氧基羰基(Cbz)；和
viii)M是H或碱金属、优选Na或K。
B0、B1、B2、B3和P的优选实施例如上所述。
上述肽醛(或亚硫酸氢盐加合物)与所述蛋白酶的摩尔比可以是至少1:1或1.5:1，并且它可以小于1000:1，更优选小于500:1，甚至更优选从100:1至2:1或从20:1至2:1，或最优选的，摩尔比是从10:1至2:1。
甲酸盐(例如，甲酸钠)和甲酸也示出了作为蛋白酶活性抑制剂的良好作用。甲酸盐可以与上述蛋白酶抑制剂协同使用，如在WO 2013/004635中所示。甲酸盐以至少0.1％w/w或0.5％w/w，例如至少1.0％、至少1.2％或至少1.5％的量存在于所述浆液组合物中。所述量典型地低于5％w/w，低于4％或低于3％。
在实施例中，所述蛋白酶为金属蛋白酶而所述抑制剂为金属蛋白酶抑制剂，例如，基于蛋白质水解物的抑制剂(例如，如在WO 2008/134343中所描述的)。
洗涤剂组合物
本发明的酶浆液可以添加至任何形式的任何洗涤剂组合物(如液体洗涤剂，以及皂和洗涤剂条(例如合成洗涤剂条))中并由此形成其一部分。皂和洗涤剂条组合物在下文更详细地描述。
该酶浆液(如上所述)可以按对应于从0.0001％至5％(w/w)活性酶蛋白(AEP)；优选地从0.0005％至5％，更优选地从0.0005％至2％，更优选地从0.0005％至1％，甚至更优选地从0.001％至1％，并且最优选地从0.005％至1％(w/w)活性酶蛋白的量被添加至该液体洗涤剂组合物。
所述液体洗涤剂组合物具有物理形式，它不是固体(或气体)。它可以是可倾流的液体，糊剂，可倾流的凝胶或不可倾流的凝胶。它可以是各向同性的或结构性的，优选各向同性的。它可以是一种配制品，用于在自动洗衣机中洗涤或用于手洗、或用于(自动)餐具洗涤。它还可以是个人护理产品，如洗发水、牙膏、或洗手皂。
该液体洗涤剂组合物典型地含有按重量计至少20％的水并且高达95％的水，例如高达70％的水、高达50％的水、高达40％的水、或高达30％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以包含于水性液体洗涤剂中。水性液体洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。
洗涤剂组分的选择可以包括(用于纺织品护理)有待清洁的纺织品的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制的考虑。尽管根据具体的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，组分可以包含另外的功能性。
另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所述的示例性非限制性组分。
表面活性剂
该洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子型和/或阳离子型和/或非离子型和/或半极性型和/或兼性离子型、或其混合物。在具体实施例中，所述洗涤剂组合物包含一种或多种非离子型表面活性剂和一种或多种阴离子型表面活性剂的混合物。该一种或多种表面活性剂典型地以按重量计从约0.1％至60％(如约1％至约40％、或约3％至约20％、或约3％至约10％)的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择所述一种或多种表面活性剂，并且所述表面活性剂包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何表面活性剂。
当包含在其中时，所述洗涤剂将通常包含按重量计从约1％至约40％(如从约5％至约30％，包括从约5％至约15％、或从约20％至约25％)的阴离子型表面活性剂。阴离子型表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，特别地，直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括磺酸甲酯(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸或皂的二酯和单酯、及其组合。
当包含在其中时，所述洗涤剂将通常包含按重量计从约0.1％至约10％的阳离子型表面活性剂。阳离子型表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、及其组合。
当包含在其中时，所述洗涤剂将通常包含按重量计从约0.2％至约40％(例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、或从约8％至约12％)的非离子型表面活性剂。非离子型表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、连同在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品、及其组合。
当被包括在其中时，所述洗涤剂将通常包含按重量计从约0.1％至约20％的半极性型表面活性剂。半极性型表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)(如烷基二甲基氧化胺)、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)氧化胺、脂肪酸链烷醇酰胺和乙氧基化的脂肪酸链烷醇酰胺及其组合。
当被包括在其中时，所述洗涤剂将通常包含按重量计从约0.1％至约10％的兼性离子型表面活性剂。兼性离子型表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱、烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱、及其组合。
水溶助剂
水溶助剂是如下化合物，所述化合物在水溶液中溶解疏水化合物(或相反地，在非极性环境中溶解极性物质)。典型地，水溶助剂具有亲水和疏水两种特征(所谓的两亲特性，如由表面活性剂已知的)；然而，水溶助剂的分子结构通常不利于自发性自聚集，参见例如由Hodgdon和Kaler(2007),Current Opinion in Colloid&Interface Science[胶体&界面科学新见]12:121-128的综述。水溶助剂并不显示临界浓度，高于所述浓度就会发生如对表面活性剂而言所发现的自聚集以及脂质形成胶束、薄层或其他很好地定义的中间相。相反，许多水溶助剂显示连续类型的聚集过程，在所述过程中聚集物的大小随着浓度增加而增长。然而，许多水溶助剂改变了包含极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。水溶助剂常规地在从药学、个人护理、食品到技术应用的各个产业中应用。水溶助剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过去除水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象，如相分离或高黏度。
所述洗涤剂可以包含按重量计0-5％，如约0.5％至约5％，或约3％至约5％的水溶助剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基硫酸钠及其组合。
助洗剂和共助洗剂
所述洗涤剂组合物可以含有按重量计约0-65％(如约5％至约50％)的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具洗涤洗涤剂中，助洗剂的水平典型地是40％-65％、特别是50％-65％。助洗剂和/或共助洗剂可以具体是形成具有Ca和Mg离子的水溶性复合物的螫合试剂。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括柠檬酸盐、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐如碳酸钠、乙醇胺如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA，也称为亚氨基二乙醇)、三乙醇胺(TEA，也称为2,2’,2”-硝基三乙醇)和羧甲基菊粉(CMI)、及其组合。
所述洗涤剂组合物还可以含有按重量计0-50％(如约5％至约30％)的洗涤剂共助洗剂或其混合物。所述洗涤剂组合物可以单独地包括共助洗剂，或与助洗剂(例如柠檬酸助洗剂)的组合。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂(如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和磷酸盐)、以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二磷酸(HEDP)、乙二胺四-(亚甲基磷酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基磷酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N’-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基磷酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基磷酸)(ATMP)、及其组合和盐。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中。
聚合物
洗涤剂可以含有按重量计0-10％(如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％)的聚合物。可以利用本领域中已知的在洗涤剂中使用的任何聚合物。该聚合物可以作为如上文提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或抑泡特性。一些聚合物可以具有多于一种的上文提到的特性和/或多于一种的下文提到的基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧化物，如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水修饰的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575以及US 5,955,415中。还考虑了以上提到的聚合物的盐。
织物调色剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，如染料或颜料，当配制在洗涤剂组合物中时，当所述织物与洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上，所述洗涤液包含所述洗涤剂组合物，并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时，它们改变表面的色彩。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括色素。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成的组的小分子染料：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物，例如如WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO2005/03276以及EP 1876226(通过引用并入本文)中所描述的。洗涤剂组合物优选包含从0.0001％w/w至0.2％w/w的织物调色剂。合适的调色剂还披露于例如WO 2007/087257和WO2007/087243中。
辅料
还可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐蚀剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂(disintegrant)/崩解试剂(disintegration agent)、染料、酶稳定剂(包括上文提到的酶稳定剂/抑制剂、CMC和/或多元醇如丙二醇)、织物调理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂以及芯吸剂，单独或组合使用。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在技术人员的技术范围内。
分散剂-本发明的洗涤剂组合物还可以含有分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。合适的分散剂例如描述于Powdered Detergents[粉末洗涤剂],Surfactant scienceseries[表面活性剂科学系列],第71卷,马塞尔德克尔公司(Marcel Dekker,Inc.)中。
染料转移抑制剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合物染料转移抑制剂包括但不局限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮和聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％的水平存在。
荧光增白剂-本发明的洗涤剂组合物还将优选地含有另外的组分，这些组分可以给正清洁的物品着色，如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时，该增亮剂优选地以约0.01％至约0.5％的水平存在。在本发明的组合物中可以使用合适用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨基芪-磺酸衍生物型的实例包括以下的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴–嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选的是荧光增白剂是可商购的ParawhiteKX，由印度孟买的派拉蒙矿物与化学品公司(Paramount Minerals andChemicals)供应。合适用于本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-氨烷基香豆素。
合适的荧光增亮剂水平包括从约0.01、从0.05、从约0.1的较低水平或甚至从约0.2％w/w至0.5或甚至0.75％w/w的较高水平。
污垢释放聚合物-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些污垢释放聚合物帮助从织物，如棉或聚酯基织物上除去污垢，特别是从聚酯基织物上除去疏水污垢。污垢释放聚合物可以例如是非离子型或阴离子型对苯二甲酸基的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如PowderedDetergents[粉末洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷,第7章,马塞尔德克尔公司。另一种类型的污垢释放聚合物是包含核心结构和附接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核心结构可以包含聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构，如在WO 2009/087523中详细描述的(通过引用并入本文)。此外，随机接枝共聚物是合适的污垢释放聚合物。合适的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856以及WO2006/113314中(通过引用并入本文)。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，如修饰的纤维素衍生物，如EP 1867808或WO2003/040279中所描述的那些(将二者都通过引用并入本文)。合适的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺以及其混合物。合适的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、兼性离子修饰的纤维素及其混合物。合适的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。
抗再沉积剂：本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸与马来酸的共聚物以及乙氧基化聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下所描述的基于纤维素的聚合物还可以作为抗再沉积剂起作用。
流变改性剂是结构剂或增稠剂，不同于降粘剂。流变改性剂选自由以下组成的组：非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂，它们为组合物的水性液相基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度，例如，如在EP2169040中所示。
其他合适的辅料包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物软化剂、填充剂、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、颜料、抑泡剂、溶剂以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹性剂。
漂白系统
组合漂白剂和酶的液体洗涤剂的实例包括，例如US 5,275,753和WO 99/00478。洗涤剂可以含有0-50％的漂白系统。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何漂白系统。合适的漂白系统组分包括漂白催化剂如MnTACN、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢源如过碳酸钠和过硼酸钠，预成型过酸及其混合物。
皂和洗涤剂条
洗衣皂和洗涤剂条可能包含表面活性剂(例如阴离子型合成表面活性剂)、助洗剂(例如络合剂，例如EDTA和HEDP(1-羟基乙烷1,1-二膦酸))、聚合去污剂、洗涤剂螯合剂、多元醇(如丙三醇)、pH控制化合物、稳定剂、填充剂、染料、着色剂、染料转移抑制剂、烷氧基化聚碳酸酯、抑泡剂、结构剂、粘合剂、浸出剂、漂白活化剂、粘土去除剂、抗再沉积剂、聚合分散剂、增亮剂、织物软化剂、香料和/或本领域中已知的其他化合物。
本发明的洗衣皂条可以在常规的洗衣皂条制造设备中进行加工，该设备例如但不限于：混合器、碾磨机、压条机、挤出机、切割机以及包装机。本发明的皂和洗涤剂条不限于通过任何单一方法制备。
酶颗粒可以以0.00001％w/w至2.0％w/w的量存在于洗衣皂条中。按洗衣皂条的总组合物的重量计，典型量是在从0.0001％到0.4％范围内、优选地在0.001％到0.1％的范围内、最优选地在0.004％到0.08％的范围内。
当酶浆液用于皂或洗涤剂条的制造中时，在制造过程中酶颗粒(例如，酶晶体)不溶解是有利的。与使用溶解的酶制成的皂和洗涤剂条相比，具有这种未溶解的酶颗粒的皂和洗涤剂条在储存后表现出更高的残余酶活性。优选地，皂和洗涤剂条包含酶晶体，如实例5所示。
多元醇
作为洗涤皂条的有用成分的多元醇的特征为水溶性、碳主链的长度介于C2与C6之间以及多个羟基、优选地每分子含有介于2个与6个之间的羟基。
在此有用的多元醇包括但不限于1,2-丁二醇、3-氯-1,2-丙二醇、乙烯二醇、1,2-己二醇、丙三醇(甘油)、甘露糖、丙二醇、山梨醇、蔗糖及其混合物。多元醇水平按最终条组合物的重量计将通常介于0.5％与10％之间、并且优选地介于1％与5％之间、并且更优选地介于1.5％与3％之间。
甘油
在皂制造期间，甘油或者由于商业原因被去除或者它被留在皂中。因此，皂可以被描述为或者高甘油或者低甘油皂。低甘油皂包含从0到2％的甘油，且如果需要更多甘油，那么它可以在皂的制造过程中添加而皂仍然是液体，从而确保在皂细条(soap noodle)上恰当吸收或恰当吸收到皂细条。在一个具体实施例中，洗衣皂条包含从1％到6％的甘油。在本发明的一个更具体实施例中，按总洗衣皂条的重量计，洗衣皂条包含从2％到5％的甘油。在一个最优选实施例中，洗衣皂条包含约4％甘油。
pH控制化合物
已经发现，可能必需降低pH以改进酶的稳定性。pH控制剂可以是能够控制pH的任何合适的化合物。在一个具体实施例中，pH控制剂是一种酸。
在一个具体实施例中，pH控制化合物可以选自下组，该组由以下组成：脂肪酸、乙酸、乌头酸、己二酸、花生酸、花生四烯酸、天冬氨酸、山萮酸、丁酸、癸酸、己酸、蜡酸、柠檬酸、甲酸、反丁烯二酸、谷氨酸、戊二酸、甘油酸、甘油酸-3-磷酸酯、乙醛酸、异柠檬酸、α-酮戊二酸、乳酸、月桂酸、亚油酸、亚麻酸、顺丁烯二酸、苹果酸、丙二酸、肉豆蔻酸、油酸、草酸、草酰乙酸、棕榈酸、棕榈油酸、磷脂酸、磷酸烯醇丙酮酸、庚二酸、丙酸、丙酮酸、硬脂酸、丁二酸、酒石酸以及戊酸。
pH控制剂按最终条组合物的重量计将通常以介于0.01％与8％之间、优选地介于0.1％与6％之间、更优选地介于0.2％与2％之间的水平存在。
水分含量
水分提供洗衣皂条可接受的触感和其他物理特性。可以通过与成分一起包含和/或作为游离水添加至预混物中，向预混物中添加水分。洗衣皂条含有小于最终洗衣皂条的30％w/w的水(水分)含量，或从最终洗衣皂条的10％到30％、优选地从20％到30％的水(水分)含量。
皂
皂包含高级脂肪酸的水溶性盐。该皂可以来自动物和/或植物来源。皂可以通过脂肪和油的直接皂化或通过游离脂肪酸的中和而制成。合适的皂是含有从约8个到约24个碳原子、如从12个到约18个碳原子的高级脂肪酸的钠、钾、铵以及烷基铵盐。在一个具体实施例中，该皂选自来源于椰子油和动物脂的脂肪酸的混合物的钠和钾盐，如钠或钾动物脂和棕榈油。此外，可以按最终条的重量计，以5％-30％的量添加坚果油，如椰子或棕榈仁油。
合成表面活性剂
适用于洗涤皂条的合成阴离子型表面活性剂包括有机硫反应产物的水溶性盐、优选地碱金属、铵以及烷基铵盐，在其分子结构中具有含有从约10个到约20个碳原子的烷基、和磺酸或硫酸酯基。合成表面活性剂的组的实例是烷基硫酸钠和烷基硫酸钾，尤其是通过使高级醇(C8-18碳原子)硫酸化所获得的那些，如通过还原动物脂或椰子油的甘油酯产生的那些；以及烷基苯磺酸钠和烷基苯磺酸钾，其中烷基团含有从约9个到约15个碳原子，呈直链或支链构型。尤其有价值的是线性直链烷基苯磺酸盐(LAS)，其中在烷基中的碳原子的平均数量是从约11到13，缩写为C11-13 LAS。这些表面活性剂的碱金属盐、特别是钠盐是优选的。
在此适用的阴离子型合成洗涤剂的其他实例是烷基甘油基醚磺酸钠(AES)、尤其是那些来源于动物脂和椰子油的高级醇的醚；椰子油脂肪酸单酸甘油脂磺酸钠和椰子油脂肪酸单酸甘油脂硫酸钠；以及每分子含有约1个到约10个单位的环氧乙烷并且其中烷基含有从约10个到约20个碳原子的烷基环氧乙烷醚硫酸酯的钠或钾盐。
另外，合适的阴离子型合成洗涤剂还包括在脂肪酸基团中含有从约6个到约20个碳原子并且在酯基中含有从约1个到约10个碳原子的α-磺化脂肪酸的酯的水溶性盐；在酰基中含有从约2个到约9个碳原子并且在烷部分中含有从9个到约23个碳原子的2-酰氧基烷-1-磺酸的水溶性盐；含有从约12个到约20个碳原子的烯烃和石蜡磺酸酯的水溶性盐；以及在烷基中含有从约1个到约3个碳原子并且在烷部分中含有从约8个到约20个碳原子的β-烷氧基烷磺酸酯的水溶性盐。
优选的阴离子型合成表面活性剂实例是C10-18烷基硫酸盐(AS)、C10-18直链烷基苯磺酸盐(LAS)、C10-14烷基甘油基醚磺酸盐(AES)、及其混合物。
常规洗衣皂条(合成洗涤剂条)中所含成分的实例是：
直链烷基苯磺酸盐、椰油基脂肪醇硫酸盐、苏打灰、碳酸钙、椰油基脂肪醇、TiO2、纤维素酶、二亚乙基三胺(亚甲基膦酸)、椰油基单乙醇酰胺、荧光增白剂、被取代的甲基纤维素、香料、水分。
常规洗衣皂条(组合条)中所含的洗涤剂成分的实例是：
LAS、皂、纤维素酶、蛋白酶、硼砂、硅酸钠、柠檬酸、碳酸钠、丙三醇、丙烯丙三醇、糖(山梨醇)、MgSO4、苏打灰、滑石、水分。
本发明的一些实施例包括：
实施例1.一种酶浆液组合物，该酶浆液组合物包含：
(a)酶颗粒；
(b)钠、钾、镁、锌或铵的水溶性盐；和
(c)黄原胶、瓜尔胶、槐豆胶、韦兰胶、吉兰糖胶、藻酸盐、卡拉胶或微晶纤维素；和
(d)水。
实施例2.根据实施例1所述的酶浆液，该酶浆液包含黄原胶、瓜尔胶、槐豆胶、韦兰胶、吉兰糖胶、藻酸盐、卡拉胶或微晶纤维素，量为0.1％w/w-2.5％w/w。
实施例3.根据实施例1所述的酶浆液，该酶浆液包含黄原胶、瓜尔胶、槐豆胶、韦兰胶、吉兰糖胶、藻酸盐、卡拉胶或微晶纤维素，量为0.25％w/w-2.5％w/w。
实施例4.根据实施例1-3中任一项所述的酶浆液，该酶浆液包含至少1％w/w-10％w/w量的水溶性盐。
实施例5.根据实施例1-4中任一项所述的酶浆液，该酶浆液包含至少1％w/w量的酶颗粒。
实施例6.根据实施例1-4中任一项所述的酶浆液，该酶浆液包含至少5％w/w量的酶颗粒。
实施例7.根据实施例1-6中任一项所述的酶浆液，该酶浆液包含至少1％w/w的活性酶蛋白。
实施例8.根据实施例1-6中任一项所述的酶浆液，该酶浆液包含1％w/w-50％w/w的活性酶蛋白。
实施例9.根据实施例1-6中任一项所述的酶浆液，该酶浆液包含1％w/w-25％w/w的活性酶蛋白。
实施例10.根据实施例1-6中任一项所述的酶浆液，该酶浆液包含至少5％w/w的活性酶蛋白。
实施例11.根据实施例1-6中任一项所述的酶浆液，该酶浆液包含至少5％w/w-50％w/w的活性酶蛋白。
实施例12.根据实施例1-6中任一项所述的酶浆液，该酶浆液包含至少5％w/w-25％w/w的活性酶蛋白。
实施例13.根据实施例1-12中任一项所述的酶浆液，其中所述酶选自蛋白酶(例如枯草杆菌蛋白酶或金属蛋白酶)、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、黄原胶酶、木聚糖酶、DNA酶、过水解酶、氧化还原酶(例如漆酶、过氧化物酶、过氧羟基脂肪酸羟化环氧化酶和/或卤代过氧化物酶)。
实施例14.根据实施例1-12中任一项所述的酶浆液，其中所述酶选自蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、和/或DNA酶。
实施例15.根据实施例1-12中任一项所述的酶浆液，其中所述酶是蛋白酶，例如枯草杆菌蛋白酶。
实施例16.根据实施例1-15中任一项所述的酶浆液，其中所述酶颗粒包含酶晶体。
实施例17.根据实施例1-15中任一项所述的酶浆液，其中所述酶颗粒由酶晶体组成。
实施例18.根据实施例1-15中任一项所述的酶浆液，其中所述酶颗粒包含喷雾干燥的酶。
实施例19.根据实施例1-15中任一项所述的酶浆液，其中所述酶颗粒由喷雾干燥的酶组合物组成。
实施例20.根据实施例1-19中任一项所述的酶浆液，该酶浆液包含多于一种酶。
实施例21.根据实施例1-20中任一项所述的酶浆液，该酶浆液进一步包含多元醇，所述多元醇选自由以下组成的组：甘油、(单、二或三)丙二醇、糖醇、聚丙二醇和/或聚乙二醇，优选分子量在200至800范围内的聚乙二醇或聚丙二醇。
实施例22.根据实施例1-21中任一项所述的酶浆液，其中所述多元醇是甘油。
实施例23.根据实施例1-21中任一项所述的酶浆液，其中所述多元醇是(单、二或三)丙二醇。
实施例24.根据实施例1-21中任一项所述的酶浆液，其中所述多元醇是糖醇，如山梨醇。
实施例25.根据实施例1-21中任一项所述的酶浆液，其中所述多元醇是聚乙二醇，优选分子量在200至800的范围内的聚乙二醇。
实施例26.根据实施例1-21中任一项所述的酶浆液，其中所述多元醇是聚丙二醇，优选分子量在200至800的范围内的聚丙二醇。
实施例27.根据实施例1-26中任一项所述的酶浆液，其中钠的水溶性盐选自由以下组成的组：硫酸钠、硝酸钠、氯化钠、乙酸钠、柠檬酸钠和甲酸钠。
实施例28.根据实施例1-27中任一项所述的酶浆液，其中钾的水溶性盐选自由以下组成的组：硫酸钾、硝酸钾、氯化钾、乙酸钾、柠檬酸钾和甲酸钾。
实施例29.根据实施例1-28中任一项所述的酶浆液，其中钙的水溶性盐选自由以下组成的组：硝酸钙、氯化钙、乙酸钙、柠檬酸钙和甲酸钙。
实施例30.根据实施例1-29中任一项所述的酶浆液，其中镁的水溶性盐选自由以下组成的组：硫酸镁、硝酸镁、氯化镁、乙酸镁、柠檬酸镁和甲酸镁。
实施例31.根据实施例1-30中任一项所述的酶浆液，其中锌的水溶性盐选自由以下组成的组：硫酸锌、硝酸锌、氯化锌、乙酸锌、柠檬酸锌和甲酸锌。
实施例32.根据实施例1-31中任一项所述的酶浆液，其中铵的水溶性盐选自由以下组成的组：硫酸铵、硝酸铵、氯化铵、乙酸铵、柠檬酸铵和甲酸铵。
实施例33.根据实施例1-26中任一项所述的酶浆液，其中所述水溶性盐选自由以下组成的组：硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸锌、硫酸铵。
实施例34.根据实施例1-26中任一项所述的酶浆液，其中所述水溶性盐选自由以下组成的组：硝酸钠、硝酸钾、硝酸钙、硝酸镁、硝酸锌、硝酸铵。
实施例35.根据实施例1-26中任一项所述的酶浆液，其中所述水溶性盐选自由以下组成的组：氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、氯化锌、氯化铵。
实施例36.根据实施例1-26中任一项所述的酶浆液，其中所述水溶性盐选自由以下组成的组：乙酸钠、乙酸钾、乙酸钙、乙酸镁、乙酸锌、乙酸铵。
实施例37.根据实施例1-26中任一项所述的酶浆液，其中所述水溶性盐选自由以下组成的组：柠檬酸钠、柠檬酸钾、柠檬酸钙、柠檬酸镁、柠檬酸锌、柠檬酸铵。
实施例38.根据实施例1-26中任一项所述的酶浆液，其中所述水溶性盐选自由以下组成的组：甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙、甲酸镁、甲酸锌和甲酸铵。
实施例39.根据实施例1-38中任一项所述的酶浆液，该酶浆液进一步包含酶抑制剂。
实施例40.根据实施例39所述的酶浆液，其中所述酶是蛋白酶且所述酶抑制剂是肽醛蛋白酶抑制剂，如Z-GAY-H。
实施例41.根据实施例39所述的酶浆液，其中所述酶是蛋白酶且所述酶抑制剂是硼酸蛋白酶抑制剂，如4-FPBA。
实施例42.根据实施例39或40所述的酶浆液，其中所述酶抑制剂具有式P-(A)y-L-Bx-B0-R*或其亚硫酸氢盐加合物，其中：
a)R*是H(氢)、CH3、CX3、CHX2或CH2X；
b)X是卤素原子；
c)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的单个氨基酸残基；
d)x是1、2或3；
e)Bx(B1、B2、B3)独立地是各自经由其C-末端连接到下一个B或连接到B0上的单个氨基酸残基；
f)L不存在或独立地是具有式-C(＝O)-、-C(＝O)-C(＝O)-、-C(＝S)-、-C(＝S)-C(＝S)-或-C(＝S)-C(＝O)-的连接基团；
g)如果L不存在，则A不存在或独立地是经由氨基酸的N-末端连接到L上的单个氨基酸残基；
h)P选自由以下组成的组：氢，或者如果L不存在，则N-末端保护基团；
i)y是0、1或2；
j)R独立地选自由以下组成的组：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳基烷基；
k)R’独立地选自下组，该组由以下组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；和
l)R”是C1-6烷基。
m)x可以是1、2或3。
实施例43.根据实施例42所述的酶浆液，其中x＝2，L不存在，A不存在，且P是对甲氧基羰基(Moc)或苄氧基羰基(Cbz)。
实施例44.根据实施例39或40所述的酶浆液，其中所述酶抑制剂是具有式P-B3-B2-B1-B0-H的肽醛或具有式P-B3-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的亚硫酸氢盐加合物，其中
a)H是氢；
b)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的单个氨基酸残基；
c)B1和B2独立地是单个氨基酸残基；
d)B3是单个氨基酸残基，或不存在；
d)R独立地选自下组，该组由以下组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳基烷基；
e)R’独立地选自下组，该组由以下组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
f)R”是C1-6烷基基团；
g)P是N-末端保护基团；和
h)M为H或碱金属，优选Na或K。
实施例45.根据实施例39或40所述的酶浆液，其中所述酶抑制剂是具有式P-B2-B1-B0-H的肽醛或具有式P-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的亚硫酸氢盐加合物，其中
a)H是氢；
b)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的单个氨基酸残基；
c)B1和B2独立地是单个氨基酸残基；
d)R独立地选自下组，该组由以下组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳基烷基；
e)R’独立地选自下组，该组由以下组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
f)R”是C1-6烷基基团；
g)P是N-末端保护基团；和
h)M为H或碱金属，优选Na或K。
实施例46.根据实施例39或40所述的酶浆液，其中所述酶抑制剂是具有式P-B2-B1-B0-H的肽醛或具有式P-B2-B1-B0-SO3M的亚硫酸氢盐加合物，其中
a)H是氢；
b)B0是Phe、Tyr或Leu；
c)B1和B2独立地是单个氨基酸残基；
d)P是N-末端保护基团；和
e)M是H或碱金属，优选Na或K。
实施例47.根据实施例42-44中任一项所述的酶浆液，其中B3是亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸。
实施例48.根据实施例47所述的酶浆液，其中B3是亮氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸。
实施例49.根据实施例42-48中任一项所述的酶浆液，其中B0是亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、对酪氨酸或缬氨酸。
实施例50.根据实施例49所述的酶浆液，其中B0是亮氨酸、苯丙氨酸或p-酪氨酸。
实施例51.根据实施例42-50中任一项所述的酶浆液，其中B1是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
实施例52.根据实施例42-51中任一项所述的酶浆液，其中B2是精氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸。
实施例53.根据实施例52所述的酶浆液，其中B2是精氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
实施例54.根据实施例44-53中任一项所述的酶浆液，其中P是对甲氧基羰基(Moc)或苄氧基羰基(Cbz)。
实施例55.根据实施例39或40所述的酶浆液，其中所述酶抑制剂是Cbz-Arg-Ala-Tyr-H、Ac-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-CF3、Cbz-Gly-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-CF3、Moc-Val-Ala-Leu-CF3、Cbz-Gly-Ala-Phe-H、Cbz-Gly-Ala-Phe-CF3、Cbz-Gly-Ala-Val-H、Cbz-Gly-Gly-Tyr-H、Cbz-Gly-Gly-Phe-H、Cbz-Arg-Val-Tyr-H、Cbz-Leu-Val-Tyr-H、Ac-Leu-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Tyr-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Leu-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Phe-H、Ac-Phe-Gly-Val-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Met-H、Ac-Trp-Leu-Val-Tyr-H、MeO-CO-Val-Ala-Leu-H、MeNCO-Val-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Phe-H、MeSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeSO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Val-Ala-Leu-H、EtSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、PhCH2SO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Leu-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Phe-Ala-Leu-H或MeO-P(OH)(O)-Leu-Gly-Ala-Leu-H，或这些中任一种的亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧基羰基并且Moc是甲氧基羰基。
实施例56.根据实施例39或40所述的酶浆液，其中所述酶抑制剂是Cbz-Arg-Ala-Tyr-H、Ac-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-CF3、Cbz-Gly-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-CF3、Moc-Val-Ala-Leu-CF3、Cbz-Gly-Ala-Phe-H、Cbz-Gly-Ala-Phe-CF3、Cbz-Gly-Ala-Val-H、Cbz-Gly-Gly-Tyr-H、Cbz-Gly-Gly-Phe-H、Cbz-Arg-Val-Tyr-H、Cbz-Leu-Val-Tyr-H、MeO-CO-Val-Ala-Leu-H、MeNCO-Val-Ala-Leu-H、MeSO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Val-Ala-Leu-H、PhCH2SO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Leu-Ala-Leu-H或PhCH2O-P(OH)(O)-Phe-Ala-Leu-H，或这些中任一种的亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧基羰基，并且Moc是甲氧基羰基。
实施例57.根据实施例39或40所述的酶浆液，其中所述酶抑制剂是Cbz-Gly-Ala-Tyr-H或Moc-Val-Ala-Leu-H，或其亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧基羰基，并且Moc是甲氧基羰基。
实施例58.一种制备含酶的洗涤剂组合物的方法，该方法包括将酶浆液添加至包含一种或多种洗涤剂成分，例如表面活性剂和/或助洗剂的水性组合物中。
实施例59.根据实施例58所述的方法，其中所述酶浆液是如实施例1-57中任一项所定义的。
实施例60.根据实施例58或59所述的方法，其中搅动所述水性组合物以帮助所述酶浆液的溶解。
实施例61.一种皂或洗涤剂条，该皂或洗涤剂条包含酶颗粒。
实施例62.根据实施例61所述的皂或洗涤剂条，其中所述酶颗粒是酶晶体。
实施例62.根据实施例61或62所述的皂或洗涤剂条，其中所述酶是蛋白酶。
实施例63.一种制备含酶的皂或洗涤剂条的方法，该方法包括将根据实施例1-57中任一项所述的酶浆液添加至皂或洗涤剂条预混组合物中，所述预混组合物由一种或多种洗涤剂成分，例如表面活性剂、皂和/或甘油组成。
实施例64.根据实施例63所述的方法，其中所述酶浆液的酶颗粒在制造过程中不溶解。
实施例65.根据实施例63或64所述的方法，其中所述酶浆液的酶颗粒是酶晶体。
实施例66.根据实施例63-65中任一项所述的方法，其中所述酶是蛋白酶。
进一步通过以下实例来描述本发明，所述实例不应理解为限制本发明的范围。
实例
蛋白酶抑制剂(在实例中也简称为“抑制剂”)：
Cbz-Gly-Ala-NHCH(CH2C6H4pOH)CH(OH)(SO3)Na，其中Cbz是苄氧基羰基(肽醛的亚硫酸氢盐/重亚硫酸盐形式)。
下文实例中使用的蛋白酶1是具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的SavinaseTM。蛋白酶2是具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的另一蛋白酶。‘活性酶蛋白’意指表现催化活性的酶蛋白。
酶浆液的制备过程可分为三个步骤：
1.将除粘度调节剂和酶颗粒以外的所有成分混合在水中，制成预混合物。用锚式搅拌器在室温下搅拌。
2.经10min逐渐添加粘度调节剂，同时以逐渐增加的速度搅拌直至800rpm。用锚式搅拌器在室温下保持搅拌1h。
3.添加酶颗粒浓缩物至混合物中。在室温下用锚式搅拌器将最终混合物在800rpm下搅拌16h后，产品准备就绪。
实例1
黄原胶浓度对晶体酶浆液沉降曲线的影响
用各种浓度的黄原胶制备晶体蛋白酶浆液混合物。表1中列出了每种混合物的配方。
表1.不同黄原胶浓度的混合物的配方
在25℃下储存8周后，观察到蛋白酶颗粒的沉降，并通过计算测试小瓶中透明液体的百分比(上清液长度对全部浆液长度)进行评估(表2)。结果表明，使用约0.125％w/w的黄原胶浓度可以得到低沉降。当使用更高量的黄原胶时，几乎没有沉降发生。
表2.各种浓度黄原胶的晶体savinase浆液的沉降曲线(25℃)
实例2
具有添加剂的液体洗涤剂中酶浆液的快速溶解
为了减少洗涤剂制造中的处理时间，期望使酶浆液在商业液体洗涤剂中实现快速溶解。研究了以蛋白酶抑制剂和/或PEG400作为添加剂的晶体蛋白酶浆液，以评估在商用洗涤剂中完全溶解所需的时间(表3)。
表3.具有或不具有添加剂的晶体蛋白酶浆料的配方。
结果表明，添加DSAA可以显著减少晶体savinase浆液在三种液体洗涤剂中的溶解时间，其中所述液体洗涤剂中的两种在中国市场上可商购(表4)。在所有给定的液体洗涤剂中，将温度提高到50℃可以进一步将溶解时间减少为1h内。还注意到，晶体酶浆液在几天之后无需搅拌即可完全溶解在给定的洗涤剂中(数据未在此处显示)。就溶解速度而言，添加PEG没有改进效果。
表4.晶体蛋白酶浆液在液体洗涤剂中的溶解时间(搅拌)
N.A.：未获得。
洗涤剂1是基于标准配方的中国标准液体洗涤剂基液(standard liquiddetergent base of China)CN20。
洗涤剂2是2015年1月在超市购买的商用液体洗涤剂立白全效(LibyQuanxiao)洗涤剂。
洗涤剂3是2015年1月在超市购买的商用液体洗涤剂蓝月亮深层清洁(Blue MoonDeep Clean)洗涤剂。
实例3
盐对晶体酶浆液的沉降曲线的影响
酶浆液需要水溶性盐，例如钾盐或钠盐，以防止在浆液中储存后酶颗粒溶解。研究了不同类型和浓度的盐，以阐明其对晶体蛋白酶浆液沉降曲线的影响(表5)。
表5.晶体Savinase浆液与盐的混合物的配方。
结果表明，2.5％、5％、10％的乙酸钾和5％的甲酸钠对沉降曲线的影响没有差异。在相同浓度下(基于目测)，甲酸钠对沉降曲线的影响与乙酸钾相同。
实例4
酶浆液本身的稳定性
评估了各种配制品中晶体蛋白酶浆液本身的稳定性。这表明其都非常稳定，并且与商业液体蛋白酶产品相当(表6)。SavinaseEvity16L包含蛋白酶抑制剂，而Savinase16L不包含抑制剂。
表6.各种配制品中晶体蛋白酶浆液本身的稳定性。
N.A.：未获得。
实例5
洗衣皂条
皂条是通过使用以下步骤将溶解的蛋白酶2或晶体蛋白酶2与皂材料混合制成的：
1.将皂粒在台式的1-kg批量大小的模压(plodding)机Sunlab Sampler-U中预压成较小的皂粒；
2.将1kg的皂粒添加到Murenking SM-168S厨房混合器中，然后添加以下物料并在混合器中混合10分钟：
(a)30g甘油和2g蛋白酶2溶液，所述溶液包含0.17％w/w的蛋白酶抑制剂和5％w/w的蛋白酶2(溶解的酶蛋白)；或
(b)2g蛋白酶2晶体浆液，所述溶液包含5％w/w的甲酸钠、0.17％w/w的蛋白酶抑制剂和5％w/w的蛋白酶2(晶体酶蛋白)；
3.打开Sunlab Sampler-U，将步骤2中的混合物添加至料斗中，压成细小的皂粒；重复两次；
4.将Sunlab Sampler-U的筛网更换为高剪切筛网(16目，间隔1.2mm)，然后将皂粒压成薄皂细条；重复两次；
5.将Sampler-U更换回普通筛(直径5mm的孔)，且将皂细条压成皂粒；重复两次；
6.打开加热器以加热并将挤压筒保持在40℃；当就绪，在Sampler-U的头部添加挤压筒，以设置为挤压模式；
7.打开Sampler-U，且在料斗中添加皂粒；必要时调整转速或筒温，以使皂条平稳挤出而不开裂；和
8.将挤出的皂条切成一定长度，使每块皂的重量在50g左右，且将其放入塑料袋中进行储存。
表7.皂条中溶解的和晶体蛋白酶的酶稳定性。
如表7所示，与使用溶解的酶相比，当使用酶晶体时，皂条中的酶稳定性要好得多。
序列表
<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）
<120> 酶浆液组合物
<130> 14521-WO-PCT[2]
<160> 11
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 1
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 1015
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
202530
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
354045
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
505560
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65707580
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
859095
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 2
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> SEQ ID NO: 1的变体
<400> 2
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 1015
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
202530
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser
354045
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
505560
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu
65707580
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
859095
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Leu Ser Thr Trp Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Asp Thr Trp Glu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 3
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Leu
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 3
Leu Gly Ala Tyr
1
<210> 4
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 4
Phe Gly Ala Tyr
1
<210> 5
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Tyr
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 5
Tyr Gly Ala Tyr
1
<210> 6
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Phe; MeO-CO-Phe; MeSO2-Phe; 或EtSO2-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Leu-H
<400> 6
Phe Gly Ala Leu
1
<210> 7
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Phe或MeO-CO-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 7
Phe Gly Ala Phe
1
<210> 8
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 8
Phe Gly Val Tyr
1
<210> 9
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Met-H
<400> 9
Phe Gly Ala Met
1
<210> 10
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Trp
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 10
Trp Leu Val Tyr
1
<210> 11
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> MeO-P(OH)(O)-Leu
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Leu-H
<400> 11
Leu Gly Ala Leu
1
