一种复合酶粉的制备方法，生物酶浸洗粉及其制备方法及应用
【技术领域】
本发明涉及生物酶技术领域，尤其涉及一种复合酶粉的制备方法，生物酶浸洗粉及其制备方法及应用。
【背景技术】
清除农药残留传统主要方法是清洗、削皮、烹饪、储存、臭氧法等等，存在降解率低、普适性弱，局限性大等缺陷，通过厨房洗涤剂、自来水、食用碱、%201％食用盐及厨房洗涤剂加食用碱等浸泡青菜实验发现，厨房洗涤剂对甲胺磷、乐果的去除率为50％～68％，1％食用盐的去除率为69％，自来水浸泡去除率仅为46％。相比而言，酶催化拟除虫菊酯类农药降解能够有效地降解，具有高效专一、安全、成本低等优点，具有较好的发展前景，但是确保农药降解酶在货架期内活性不明显下降及对常用农药有机磷、拟除虫菊酯等有普适性是较大难题。
专利201310657828.X公开了以黑曲霉酶液、酶保护剂(甘氨酸/山梨酸钾/%20甘油)及吸附剂(碳酸钙和白炭黑)组成的果蔬清洗粉，能够有效快速清除有机磷农药残留。专利201710019869.4公开了酯酶est816重组酯酶对拟除虫菊酯农药(包括氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯)有强降解作用，45℃保温24h后保留80％的相对酶活性。专利201611012301.1公开的农药降解酶载体包括钙离子激活剂、海藻糖、非离子表面活性剂和两性离子表面活性剂，使得粉剂酶制剂12个月酶活力不低于60％，使用方便。
当前对农药市场位居前列两大类农药水解酶粉的复配的研究的报道较少，涉及两类酶各以多大比例复配，活性变化及均匀度如何控制等问题，因此研究两类农药降解的复配酶粉，对于如何解决农药降解酶在货架期内活性不明显下降及对常用农药有机磷、拟除虫菊酯等有普适性等问题具有重要的意义。
鉴于此，实有必要提供一种新型的复合酶粉的制备方法，生物酶浸洗粉及其制备方法及应用以克服上述缺陷。
【发明内容】
本发明的目的是提供一种复合酶粉及含复合酶的浸洗粉及其制备方法及应用。合理的比例的复合酶粉能同时清除蔬菜水果上常见有机磷、拟除虫菊酯等农药，含有的特定比例的海藻糖等活性载体确保存放期内活性不明显下降。所述生物酶浸洗粉的配方均匀性好，其他组分对复合酶的相容性好，货架期内稳定性好，对有机磷、拟除虫菊酯的清除普适性强，且能明显呈现清除效果。
为了实现上述目的，本发明提供一种复合酶粉的制备方法，将有机磷水解酶液、菊酯水解酶液混合后加入载体，经制浆、喷雾干燥粉而得到复合酶粉，所述载体为水溶性淀粉、玉米淀粉、海藻糖、碳酸氢钙以及麦芽糊精中的两种或两种以上，其中有机磷水解酶与菊酯水解酶的酶活力的比例为1-5：4-8。
一种生物酶浸洗粉，包括复合酶粉、海藻糖、麦芽糊精、甘露醇、防腐剂、无水氯化物、脂肪醇聚氧乙烯醚、碳酸钙以及氧化钙。
在一个优选实施方式中，所述生物酶浸洗粉包括1-15份复合酶粉、15-45份海藻糖、10-40份麦芽糊精、5-15份甘露醇、0.03-0.1份防腐剂、0.1-0.4份无水氯化物、0.1-0.8份脂肪醇聚氧乙烯醚、5-15份碳酸钙、1-4份氧化钙。
在一个优选实施方式中，包括12份复合酶粉、38份海藻糖、25份麦芽糊精、%2012份甘露醇、0.05份防腐剂、0.4份脂肪醇聚氧乙烯醚、0.2份无水氯化钙、10.35%20份碳酸钙、2份氧化钙。
在一个优选实施方式中，所述防腐剂为尼泊金酯、尼泊金酯盐、山梨酸、山梨酸钾、苯甲酸、苯甲酸钠中一种或几种。
在一个优选实施方式中，所述氯化物为氯化钙以及氯化镁中的一种或两种。
在一个优选实施方式中，所述脂肪醇聚氧乙烯醚为平平加O-25。
一种生物酶浸洗粉的制备方法，包括如下步骤，
按质量份称取氯化钙、氧化钙、碳酸钙及脂肪醇聚氧乙烯醚的粒径为80-100%20目的粉末倒入混合罐中；称取复合酶粉、麦芽糊精、甘露醇、海藻糖、尼泊金酯倒入混合罐中搅拌3-5分钟混合；将剩下的海藻糖倒入混合罐后继续搅拌5-10%20分钟后制得生物酶浸洗粉。
一种生物酶浸洗粉的应用，将占清洗水质量的0.1％-1％生物酶浸洗粉加入水中形成清洗水，将水果、蔬菜、茶叶浸泡清洗水中5-8分钟，清洗水的温度低于%2040℃，以清除水果、蔬菜以及茶叶上的有机磷和拟除虫菊酯，取出冲净。
与现有技术相比，本发明提供的一种复合酶粉的制备方法，生物酶浸洗粉及其制备方法及应用，有益效果在于，生物酶浸洗粉中酶复合比例合理，能同时清除蔬菜水果上常见有机磷、拟除虫菊酯等农药；还含有海藻糖等特定比例的活性载体，确保货架期内酶活性稳定；所述浸洗粉配方经二次混合的均匀性好，其他组分如甘露醇、氯化物也能促进酶的活力及稳定性，氧化钙、碳酸氢钙组合能辅助显示浸洗粉用后5-8分钟水面呈现出一层油膜的清除效果。
【具体实施方式】
为了使本发明的目的、技术方案和有益技术效果更加清晰明白，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本发明，并不是为了限定本发明。
本发明提供一种复合酶粉的制备方法，将有机磷水解酶液、菊酯水解酶液混合后加入载体，经制浆、喷雾干燥粉而得到复合酶粉，所述载体为水溶淀粉、玉米淀粉、海藻糖、碳酸氢钙以及麦芽糊精中的两种或两种以上，其中有机磷水解酶与菊酯水解酶的酶活力的比例为1-5：4-8。
本发明还提供一种生物酶浸洗粉，包括复合酶粉、海藻糖、麦芽糊精、甘露醇、防腐剂、无水氯化物、脂肪醇聚氧乙烯醚、碳酸钙以及氧化钙。
具体的，所述生物酶浸洗粉包括1-15份复合酶粉、15-45份海藻糖、10-40%20份麦芽糊精、5-15份甘露醇、0.03-0.1份防腐剂、0.1-0.4份无水氯化物、0.1-0.8%20份脂肪醇聚氧乙烯醚、5-15份碳酸钙、1-4份氧化钙。
具体的，包括12份复合酶粉、38份海藻糖、25份麦芽糊精、12份甘露醇、%200.05份防腐剂、0.4份脂肪醇聚氧乙烯醚、0.2份无水氯化钙、10.35份碳酸钙、%202份氧化钙。
具体的，所述防腐剂为尼泊金酯、尼泊金酯盐、山梨酸、山梨酸钾、苯甲酸、苯甲酸钠中一种或几种。
具体的，所述氯化物为氯化钙以及氯化镁中的一种或两种。
具体的，所述脂肪醇聚氧乙烯醚为平平加O-25。
本发明还提供一种生物酶浸洗粉的制备方法，包括如下步骤，
按质量份称取氯化钙、氧化钙、碳酸钙及脂肪醇聚氧乙烯醚的粒径为80-100%20目的粉末倒入混合罐中；称取复合酶粉、1/3麦芽糊精、甘露醇、海藻糖、尼泊金酯倒入混合罐中搅拌3-5分钟混合；将剩下的2/3海藻糖倒入混合罐后继续搅拌5-10分钟后制得生物酶浸洗粉。
本发明还提供一种生物酶浸洗粉的应用，将占清洗水质量的0.1％-1％生物酶浸洗粉加入水中形成清洗水，将水果、蔬菜、茶叶浸泡清洗水中5-8分钟，清洗水的温度低于40℃，以清除水果、蔬菜以及茶叶上的有机磷和拟除虫菊酯，取出冲净。
农药水解酶活力以水解酶活力单位表示，定义为1g固体酶粉(或1mL酶液)%20在一定温度和pH条件下，1min内水解底物产生1umol对硝基苯酚所需的酶量为1个酶活力单位，以u/g(或u/mL)表示，温度为25℃。
有机磷水解酶酶活力测定方法，详见专利申请201811121827.2[0129]行%20-[0131]行。
菊酯水解酶酶活力测定方法：
准备两支10mL玻璃试管，各吸取5900μL%20Tris-盐酸缓冲液和75μL棕榈酸对硝基苯酯母液，混匀并在25℃水浴锅水浴3min，再加入120uL稀释样品后即刻开始由0s正计时、混合均匀，以空白样为对照调分光光度计零点，在400nm%20处分别测定作为平行样的两支管中反应液的吸光值，第30s时测值记为A1(用于衡量稀释程度，应控制在0.15-0.25之间)，第60s时测值记为A2。
Tris-盐酸缓冲液为0.05mol/L%20pH值7.6；棕榈酸对硝基苯酯母液为10umol/L。
其中，农药降解酶活力按下式计算：
X＝Vt*A2*N/14.7*Vs*t
%20＝3.455*A2*N
式中：X--液(固)态样品中农药降解酶活力，u/mL(或u/g)，结果取整数；%20Vt---反应总体积(6095μL)；Vs--样品体积(120μL)；1.0---光径(cm)；%20N--稀释倍数；t--1min；14.7--对硝基苯酚400nm摩尔消光系数(cm2/umol)。
复合酶粉对常见农药的清除率测定方法是GB23200.8-2016水果和蔬菜中%20500种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法，含复合酶浸洗粉对常见农药清除率的测定方法参照GB/T24691-2009果蔬清洗剂。
实施例1#复合酶粉：
直接取适量的有机磷水解酶液与菊酯水解酶液混合形成复合液，再添加占复合液质量的20％的水溶性淀粉、海藻糖、碳酸氢钙与混合液混合制浆，其中水溶性淀粉：海藻糖：碳酸氢钙的质量比为7：2：1，取浆进干燥塔于180℃进风温度、80℃出风温度下喷雾干燥得复合酶粉，使得其中有机磷水解酶与菊酯水解酶的酶活力之比为3：5。
实施例2#复合酶粉：
直接取适量的有机磷水解酶液与菊酯水解酶液混合形成复合液，再添加占复合液质量的20％的水溶性淀粉、海藻糖、碳酸氢钙与混合液混合制浆，其中水溶性淀粉：海藻糖：碳酸氢钙的质量比为7：2：1，取浆进干燥塔于180℃进风温度、80℃出风温度下喷雾干燥得复合酶粉，使得其中有机磷水解酶与菊酯水解酶的酶活力之比为1：10。
实施例3#复合酶粉：
直接取适量的有机磷水解酶液与菊酯水解酶液混合形成复合液，再添加占复合液质量的20％的水溶性淀粉、海藻糖、碳酸氢钙与混合液混合制浆，其中水溶性淀粉：海藻糖：碳酸氢钙的质量比为7：2：1，取浆进干燥塔于180℃进风温度、80℃出风温度下喷雾干燥得复合酶粉，使得其中有机磷水解酶与菊酯水解酶的酶活力之比为3：2。
分别测定复合酶粉实施例1#、2#、3#对农药的清除率及其稳定性的数据分别如下表1、2。
表1：酶活力不同复合比例的复合酶粉对常见农药的清除率的测定
表2：酶活力不同复合比例的复合酶粉热稳定性考察
结果分析：通过表1和表2可知，实施例2#对有机磷农药的清除率较低、
实施例3#对菊酯类农药的清除率较低，而实施例1#对菊酯类农药的清除率均大于80％，对有机磷类农药的清除率均大于90％。相比于实施例2#、实施例3#明显弱些的酶活力保留率(40℃下放15天)，实施例1#酶活力保留率达90％以上。也即复合酶粉两酶的酶活力之比有机磷水解酶：菊酯水解酶低于1：8的实施例 2#、高于5：4的实施例3#存在清除农药范围窄、稳定性弱的缺陷。
实施例4#生物酶浸洗粉：
按比例称取0.2份氯化钙、2份氧化钙、10.35份碳酸钙及0.4份平平加O-25 粉碎、取过800目标准筛筛出粉倒入混合罐中；称取3份有机磷水解酶粉、9份菊酯水解酶粉、25份麦芽糊精、12份甘露醇、12份海藻糖、0.05份防腐剂倒入混合罐中搅拌3-5分钟混合；将剩下26份海藻糖倒入混合罐后继续搅拌5-10分钟后制得生物酶浸洗粉、抽样。检测浸洗粉的外观、均匀性、酶活力、稳定性及对农药的清除率。
对实施例4#抽样检测的数据见表3、表4。可见浸洗粉用后效果呈现明显，均匀性好；对常见农药的清除率高，其中有机磷农药清除率均值为96.3％，菊酯农药清除率均值为93.3％，稳定性基本不变。
表3实施例4#抽样检测指标
表4实施例4#(c样)对常见农药清除效果及其稳定性考察
本发明并不仅仅限于说明书和实施方式中所描述，因此对于熟悉领域的人员而言可容易地实现另外的优点和修改，故在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念的精神和范围的情况下，本发明并不限于特定的细节、代表性的设备和这里示出与描述的图示示例。
