一种细胞分析仪、基于阻抗法对白细胞进行分类的方法及计算机可读存储介质
技术领域
本发明涉及细胞分析领域，具体涉及一种细胞分析仪和基于阻抗法对白细胞进行分类的方法。
背景技术
人的白细胞分为五类，淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞，临床医师可根据每种类型的白细胞计数值和百分比，结合病人的临床症状，对病人的病情进行诊断。
狗、猫等哺乳动物的白细胞，形态上与人的白细胞基本一致，也分为淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞这五种类型，类似地，临床医师也可以根据每种类型白细胞计数值和百分比，结合动物的临床症状，对动物的病情进行诊断，给动物的诊断和治疗效果的评估提供依据。
现在市场上销售的测试血液样本的血液细胞分析仪，例如不妨以测试动物的血液样本的血液细胞分析仪为例，大致可以分为三种类型。
类型一，阻抗法实现的三分类血细胞分析仪，将一种溶血剂加入血样中后，再对白细胞进行一次计数，可以对白细胞进行三分类；这种血细胞分析仪一般不能将嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞细胞单独分出来。
类型二，阻抗法实现的四分类血细胞分析仪，将一种溶血剂加入血样中后，再对白细胞进行一次计数，可以对白细胞进行四分类；这种血细胞分析仪虽然可以将嗜酸性粒细胞单独分出来，但准确性不理想。
类型三，流式激光技术实现的白细胞五分类，分类准确度高，但整机成本偏高，不利于在中小宠物医院普及。
发明内容
本申请提供一种细胞分析仪和基于阻抗法对白细胞进行分类的方法，下面具体说明。
根据第一方面，一种实施例提供一种基于阻抗法对白细胞进行分类的方法，包括：
向白细胞计数池加入稀释液和血样；
向所述白细胞计数池加入第一剂量的溶血剂；
对所述白细胞计数池中液体进行混匀；
对白细胞计数池中液体进行测定，得到第一次测定结果，其中所述第一次测定结果包括淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比；
再次向所述白细胞计数池加入第二剂量的同一种溶血剂，或者等待预设时间；
对所述白细胞计数池中液体进行混匀；
对白细胞计数池中液体进行测定，得到第二次测定结果，其中所述第二次测定结果包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值；
根据所述第一次测定结果和所述第二次测定结果，对白细胞至少进行四分类。
一实施例中，所述第二次测定结果还包括嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值。
根据第二方面，一种实施例中提供一种基于阻抗法对白细胞进行分类的方法，包括：
对待分析的样本进行第一次处理，所述第一次处理包括使用溶血剂处理样本；
再对所述样本进行第二次处理，所述第二次处理包括使用溶血剂再次处理样本，使得样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值；
测定第一次处理后的样本以获取白细胞的第一参数集合；
测定第二次处理后的样本以获取白细胞的第二参数集合；
根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的至少四分类参数。
一实施例中，所述第一参数集合包括淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比。
一实施例中，所述第一次处理所使用的溶血剂的剂量，使得样本在第一次测定时仍残留有影响白细胞计数值的红细胞碎片。
一实施例中，所述第二参数集合包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值。
一实施例中，所述第二参数集合还包括嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值。
一实施例中，所述第二次处理所使用的溶血剂的剂量为零，所述第二次处理还包括等待预设时间。
一实施例中，所述第二次处理所等待的预设时间的长度，使得所述第一次处理所使用的溶血剂继续作用于样本，以使得样本中中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的大小不同。
一实施例中，所述第二次处理所等待的预设时间的长度，使得所述第一次处理所使用的溶血剂继续作用于样本，以使得样本中中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的大小不同。
一实施例中，所述测定第一次处理后的样本以获取白细胞的第一参数集合，包括：测定第一次处理后的样本，以得到第一白细胞直方图，对所述第一白细胞直方图进行数据处理以去除红细胞碎片的影响，根据去除红细胞碎片的影响后的第一白细胞直方图，来获取所述淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比。
一实施例中，所述根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的至少四分类参数，包括：
将粒细胞百分比减去嗜酸性粒细胞百分比，得到中性粒细胞百分比；
根据白细胞计数值、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和中性粒细胞百分比，分别计算得到淋巴细胞计数值、单核细胞计数值和中性粒细胞计数值。
一实施例中，所述根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的至少四分类参数，包括：
将粒细胞百分比减去嗜酸性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞百分比，得到中性粒细胞百分比；
根据白细胞计数值、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和中性粒细胞百分比，分别计算得到淋巴细胞计数值、单核细胞计数值和中性粒细胞计数值。
一实施例中，所述第一次处理和第二次处理所使用的溶血剂为同一种溶血剂。
一实施例中，所述方法还包括：取出经第一次处理后的部分样本，并对该部分样本测定以获取红细胞的参数。
根据第三方面，一种实施例提供一种基于阻抗法对白细胞进行分类的方法，包括：
获取以第一剂量的溶血剂处理后的血样中的白细胞的第一参数集合和以第三剂量的溶血剂处理后的所述血样中的白细胞的第二参数集合，其中，所述第一剂量小于所述第三剂量；
根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的至少四分类参数。
一实施例中，通过向所述血样中继续加入所述溶血剂至所述第三剂量，以获得所述白细胞的第二参数集合。
根据第四方面，一种实施例提供一种细胞分析仪，包括：
白细胞计数池，所述白细胞计数池包括一微孔；
采样针组件，用于向所述白细胞计数池排入待分析的样本；
稀释液推送部件，用于向所述白细胞计数池推送稀释液；
溶血剂推送部件，用于向所述白细胞计数池推送溶血剂；
混匀部件，用于对所述白细胞计数池中液体进行混匀；
压力源部件，提供压力以使得白细胞计数池中液体通过所述微孔；
电阻式检测器，用于对通过所述微孔的液体进行测定；
控制器和处理器；其中：
所述控制器用于控制稀释液推送部件和采样针组件分别向所述白细胞计数池推送稀释液和排入血样，和控制溶血剂推送部件向白细胞计数池推送第一剂量的溶血剂，再控制混匀部件对所述白细胞计数池中液体进行混匀，再控制压力源部件提供压力以使得白细胞计数池中液体通过所述微孔，并控制电阻式检测器对通过所述微孔的液体进行第一次测定；
所述控制器接着控制溶血剂推送部件向白细胞计数池推送第二剂量的同一种溶血剂，或者，所述控制器控制等待预设时间；
所述控制器再控制混匀部件对所述白细胞计数池中液体进行混匀，接着控制压力源部件提供压力以使得白细胞计数池中液体通过所述微孔，并控制电阻式检测器对通过所述微孔的液体进行第二次测定；
所述处理器根据所述电阻式检测器第一次测定得到的数据，来获取第一次测定结果；所述处理器根据所述电阻式检测器第二次测定得到的数据，来获取第二次测定结果；其中所述第一次测定结果包括淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比，所述第二次测定结果包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值；
所述处理器根据所述第一次测定结果和所述第二次测定结果，对白细胞至少进行四分类。
一种实施例中，所述第二次测定结果还包括嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值。
根据第五方面，一种实施例提供一种细胞分析仪，包括：
白细胞计数池；
采样针组件，用于向所述白细胞计数池排入待分析的样本；
溶血剂推送部件，用于向所述白细胞计数池推送溶血剂；
电阻式检测器，用于对样本进行测定；
控制器，所述控制器用于控制所述采样针组件向白细胞计数池排入待分析的样本，和控制溶血剂推送部件向白细胞计数池推送溶血剂，以对待分析的样本进行第一次处理，并控制所述电阻式检测器测定第一次处理后的样本；所述控制器接着控制所述溶血剂推送部件向白细胞计数池再次推送溶血剂，以对所述样本进行第二次处理，使得样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值，并控制所述电阻式检测器测定第二次处理后的样本；
处理器，用于根据所述电阻式检测器测定第一次处理后的样本得到的数据来获取白细胞的第一参数集合，和根据所述电阻式检测器测定第二次处理后的样本得到的数据来获取白细胞的第二参数集合，并根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的至少四分类参数。
一种实施例中，所述控制器控制溶血剂推送部件向白细胞计数池推送的第一次处理所使用的溶血剂的剂量，使得样本在被电阻式检测器第一次测定时仍残留有影响白细胞计数值的红细胞碎片存在。
一种实施例中，所述控制器控制溶血剂推送部件向白细胞计数池推送的第二次处理所使用的溶血剂的剂量，使得样本中淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度快于嗜酸性粒细胞缩水速度。
一种实施例中，所述控制器控制溶血剂推送部件向白细胞计数池推送的第二次处理所使用的溶血剂的剂量，使得样本中淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度快于嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞缩水速度。
一种实施例中，所述控制器控制溶血剂推送部件向白细胞计数池推送的第二次处理所使用的溶血剂的剂量为零，并控制等待预设时间，以完成所述第二次处理。
一种实施例中，所述溶血剂推送部件所推送的用于第一次处理和第二次处理的溶血剂为同一种溶血剂。
根据第六方面，一种实施例提供一种细胞分析仪，包括：
制样部件，用于以第一剂量的溶血剂处理血样，以及以第三剂量的溶血剂处理所述血样；
测定部件，用于测量以第一剂量的溶血剂处理后的血样和以第三剂量的溶血剂处理后的血样，以分别得到白细胞的第一参数集合和白细胞的第二参数集合；
处理器，根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的至少四分类参数。
一种实施例中，所述制样部件通过向所述血样中继续加入所述溶血剂至所述第三剂量，以获得所述白细胞的第二参数集合。
根据第七方面，一种实施例提供一种计算机可读存储介质，包括程序，所述程序能够被处理器执行以实现如本文中任一实施例所述的方法。
依据上述实施例的细胞分析仪和基于阻抗法对白细胞进行分类的方法，通过对样本进行两次处理，根据两次测定的结果实现对白细胞较为准确的至少四分类。
附图说明
图1为基于阻抗法实现白细胞分类的一种原理图；
图2为一种实施例的细胞分析仪的结构示意图；
图3为另一种实施例的细胞分析仪的结构示意图；
图4为又一种实施例的细胞分析仪的结构示意图；
图5为一种实施例的基于阻抗法对白细胞进行分类的方法的流程图；
图6为另一种实施例的基于阻抗法对白细胞进行分类的方法的流程图；
图7为又一种实施例的基于阻抗法对白细胞进行分类的方法的流程图；
图8(a)为一个例子中狗的血液样本经过第一次处理测定后得到的白细胞直方图；图8(b)为一个例子中狗的血液样本经过第二次处理测定后得到的白细胞直方图；
图9(a)为一个例子中猫的血液样本经过第一次处理测定后得到的白细胞直方图；图9(b)为一个例子中猫的血液样本经过第二次处理测定后得到的白细胞直方图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。其中不同实施方式中类似元件采用了相关联的类似的元件标号。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本申请能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他元件、材料、方法所替代。在某些情况下，本申请相关的一些操作并没有在说明书中显示或者描述，这是为了避免本申请的核心部分被过多的描述所淹没，而对于本领域技术人员而言，详细描述这些相关操作并不是必要的，他们根据说明书中的描述以及本领域的一般技术知识即可完整了解相关操作。
另外，说明书中所描述的特点、操作或者特征可以以任意适当的方式结合形成各种实施方式。同时，方法描述中的各步骤或者动作也可以按照本领域技术人员所能显而易见的方式进行顺序调换或调整。因此，说明书和附图中的各种顺序只是为了清楚描述某一个实施例，并不意味着是必须的顺序，除非另有说明其中某个顺序是必须遵循的。
本文中为部件所编序号本身，例如“第一”、“第二”等，仅用于区分所描述的对象，不具有任何顺序或技术含义。而本申请所说“连接”、“联接”，如无特别说明，均包括直接和间接连接(联接)。
请参照图1，是基于阻抗法来实现白细胞分类，首先是用溶血剂处理血样，使得血样中的红细胞溶解，降低红细胞对白细胞分类和计数的影响，同时，白细胞中各类细胞的体积大小是不一致的，而白细胞在溶血剂的作用下，各类细胞会进行程度不一致的缩水，这使得各类细胞的体积大小不一致的特性会被进一步放大；然后在负压作用下，将血细胞一个个通过白细胞计数池中的检测小孔，检测小孔的两侧加有恒流源，当细胞通过检测小孔时会产生相应的脉冲，细胞体积越大，则通过检测小孔时电阻增大得越大，从而产生的脉冲越大，即其脉冲的幅度与细胞的体积成正比，脉冲的频度与细胞的数量成正比。
理论上通过上述方法可以将白细胞进行五分类，即分别得到淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞这五类白细胞的比例和数量，但是实际过程中，一般只可以实现白细胞三分类，即淋巴细胞、单核细胞和粒细胞的分类和计数，嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和中性粒细胞无法在粒细胞中被进一步区分出来。在一些方案中，通过对溶血剂的成分结构进行改进，可以实现四分类，即还可以将嗜酸性粒细胞单独分出来，但是准确性还是不甚理想。
本发明通过对样本或者说血样进行两次处理，两次测定，根据两次测定的结果实现对白细胞较为准确的至少四分类。
例如一些实施例中，对样本的同一段血先后两次加入溶血剂，每次加入溶血剂后进行一次测定，得到白细胞的直方图，根据这两次的白细胞的直方图，最终实现白细胞的至少四分类；这两次加入的溶血剂，在一些实施例中可以是同一种溶血剂，在另一些实施例中可以是不同的溶血剂。
再例如一些实施例中，对样本的同一段血先加入溶血剂，然后进行一次测定得到白细胞的直方图，接着再等待预定时间，使得溶血剂继续作用于白细胞，然后再进行一次测定得到白细胞的直方图，根据这两次的白细胞的直方图，最终实现白细胞的至少四分类。
再例如一些实施例中，对样本的两段血分别加入一次溶血剂，然后分别测定这两段血，从而分别得到这段血的白细胞的直方图，根据这两段血的白细胞的直方图，最终实现白细胞的至少四分类；类似地，分别加入这两段血的溶血剂，在一些实施例中，可以是同一种溶血剂，也可以是不同种的溶血剂。
下面对本发明进行具体的说明。
请参照图2，一实施例公开了一种细胞分析仪，包括具有一微孔11的白细胞计数池10、采样针组件20、溶血剂推送部件30、电阻式检测器40、控制器50和处理器60，可以理解地，控制器50和处理器60在一些例子中是可以被集成在具有处理和控制的部件中，在一些例子中也可以是单独的两个部件。采样针组件20用于向白细胞计数池10排入待分析的样本。溶血剂推送部件30用于向白细胞计数池10推送溶血剂。电阻式检测器40用于对样本进行测定，电阻式检测器40测定的原理就是基于上述的阻抗法原理，即测定通过白细胞计数池10的微孔11的细胞，并产生相应的脉冲，将这些数据输出给处理器60。
一实施例中控制器50控制采样针组件20向白细胞计数池10排入待分析的样本，和控制溶血剂推送部件30向白细胞计数池推送溶血剂，以对待分析的样本进行第一次处理，并控制电阻式检测器40测定第一次处理后的样本。一实施例中控制器50接着控制溶血剂推送部件30向白细胞计数池10再次推送溶血剂，以对样本进行第二次处理，并控制电阻式检测器40测定第二次处理后的样本。
具体地，对样本的两次处理，可以是第一次使用一定剂量的溶血剂处理样本，以及第二次又使用一定剂量的溶血剂处理样本，这两次使用的溶血剂可以是同一种溶血剂，也可以是不同种溶血剂。对样本的两次处理，也可以是第一次使用一定剂量的溶血剂处理样本，第二次使用剂量为零的溶血剂处理样本，即不使用溶血剂处理样本，而是等待一段时间，使得第一次使用的溶血剂继续作用于样本。下面对这两种情况分别进行说明。
第一种情况为两次使用溶血剂处理样本，并两次测定出图分类和计数，下面具体说明。
一个例子中，第一次处理所使用的溶血剂以及其剂量，作用是溶解样本中的红细胞，并使得白细胞分成3个群，淋巴细胞群、单核细胞群和粒细胞群。一实施例中控制器50控制溶血剂推送部件30向白细胞计数池10推送的第一次处理所使用的溶血剂的剂量，使得样本在被电阻式检测器40第一次测定时仍残留有影响白细胞计数值的红细胞碎片存在，这样使得白细胞分成的3个细胞群之间的区别会明显。处理器60根据电阻式检测器40测定第一次处理后的样本得到的数据来获取白细胞的第一参数集合，一实施例中第一参数集合包括淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比。具体地，处理器60根据电阻式检测器40测定第一次处理后的样本得到的数据可以得到一白细胞直方图——例如第一白细胞直方图，基于该白细胞直方图来获取淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比。
一个例子中，第二次处理所使用的溶血剂以及其剂量，第一个作用是使得样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值，这样红细胞碎片就不会影响白细胞的计数，第二个作用是使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从粒细胞群中区分出嗜酸性粒细胞群——这时候实际区分出来的嗜酸性粒细胞群是包含有嗜碱性粒细胞群，但是由于嗜碱性粒细胞的数量相对嗜酸性粒细胞很少，因此可以近似认为这时候区分出来的细胞群即为嗜酸性粒细胞群。一实施例中，控制器控50制溶血剂推送部件30向白细胞计数池10推送的第二次处理所使用的溶血剂的剂量，使得样本中淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度快于嗜酸性粒细胞缩水速度，以及使得样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值——即样本在经过第一次的溶血剂以及该次第二次的溶血剂处理后，在第二次测定时，样本中已经没有影响白细胞计数值的红细胞碎片存在，即样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值。处理器60根据电阻式检测器40测定第二次处理后的样本得到的数据来获取白细胞的第二参数集合，一实施例中第二参数集合包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值。具体地，处理器60根据电阻式检测器40测定第二次处理后的样本得到的数据可以得到一白细胞直方图——例如第二白细胞直方图，基于该白细胞直方图来获取白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值。处理器60根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的四分类参数，即对白细胞进行四分类和计数。具体地，将第二参数集合中的白细胞计数值作为四分类参数中的白细胞计数值；将第一参数集合中的淋巴细胞百分比作为四分类参数中的淋巴细胞百分比，并通过第一参数集合中的淋巴细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到淋巴细胞计数值，作为四分类参数中的淋巴细胞计数值；将第一参数集合中的单核细胞百分比作为四分类参数中的单核细胞百分比，并通过第一参数集合中的单核细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到单核细胞计数值，作为四分类参数中的单核细胞计数值；将第一参数集合中的粒细胞百分比减去第二参数集合中的嗜酸性粒细胞百分比得到中性粒细胞百分比，并作为四分类参数中的中性粒细胞百分比，以及通过中性粒细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到中性粒细胞计数值，并作为四分类参数中的中性粒细胞计数值；将第二参数集合中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值作为四分类参数中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值；这样就完成了对白细胞的四分类和计数。
可以采用任意适合的方法进行第一白细胞直方图的三分类，例如，如图8(a)所示，首先，根据所述第一白细胞直方图中两个峰值点A和B之间的波谷点C确定第一类型的白细胞和第二类型的白细胞之间的第一分界线1，其中，所述第一类型的白细胞体积小于所述第二类型的白细胞的体积，第一白细胞直方图中体积小于第一分界线1的体积的区域则为第一类型的白细胞(例如如图8(a)所示的淋巴细胞(LYM))。
可以先确定第一白细胞直方图中两个峰值点A和B，而可以通过任意适合的方法确定波谷点C，例如，波谷点C为峰值点A和峰值点B之间的最小纵坐标值对应的最小值点。
接着，继续如图8(a)所示，根据所述第一分界线1确定所述第二类型的白细胞(例如单核细胞(MON))和第三类型的白细胞(例如粒细胞(NEU))之间的第二分界线2，其中，所述第二分界线2和所述第一分界线1间隔第一预定体积，且所述第二分界线2对应的体积大于所述第一分界线1对应的体积；
该第一预定体积可以根据先验经验进行合理设定，例如在特定的反应条件、反应温度、试剂(包括溶血剂和稀释剂)用量下，经过多次检测获得在该些特定条件下，特别是特定的溶血剂使用量下波谷点与实际第二分界线2之间间隔的体积，从而确定第一预定体积，其中，不同的反应条件、反应温度、试剂(包括溶血剂和稀释剂)用量波谷点的位置以及第一预定体积值也会有所不同，具体可以根据实际情况进行合理调整。
可以采用任意适合的方法进行第二白细胞直方图分类，例如，如图8(b)中自所述第二白细胞直方图最大体积Vmax(例如，Vmax＝250fL)处开始沿体积减小的方向寻找所述第二白细胞直方图的曲线上斜率第一次大于第二阈值斜率K的第二临界点D；
其中，最大体积Vmax可以是指白细胞直方图中白细胞的结束位置。第二白细胞直方图的曲线自最大体积Vmax开始沿体积减小方向的预定段内的曲线上的点的斜率小于或等于0，故第二阈值斜率K的值设置为小于零，具体地第二阈值斜率K的值可以根据实际情况进行设定。
接着，基于所述第二临界点D确定所述第三类型的白细胞和第四类型的白细胞之间的第三分界线3，该第三分界线3为经过该第二临界点D并垂直于第二白细胞直方图的横坐标轴的直线，从而实现白细胞的四分类，第三分界线3和Vmax之间的区域为第四类型的白细胞(例如嗜酸性粒细胞(EOS)——虽然实际上第三分界线3和Vmax之间的区域为嗜酸性粒细胞(EOS)和嗜碱性粒细胞(BASO)，但是嗜碱性粒细胞(BASO)的数量相对嗜酸性粒细胞(EOS)来说很少，因此这部分区域的细胞可以近似认为都为嗜酸性粒细胞(EOS))，然后将第一直方图得到的例如粒细胞(NEU)减去由第二直方图得到的例如嗜酸性粒细胞(EOS))，就得到中性粒细胞NEU)。
可以采用任意适合的方法进行第二白细胞直方图分类，例如根据所述第三分界线3确定所述第四类型的白细胞和第五类型的白细胞之间的第四分界线4，其中，所述第四分界线4与所述第三分界线3间隔第二预定体积Sbaso，且所述第四分界线4对应的体积大于所述第三分界线3对应的体积，则第四类型的白细胞为第二白细胞直方图上位于第三分界线3和第四分界线4之间的区域，所述第五类型的白细胞(例如嗜碱性粒细胞(BASO))为所述第二白细胞直方图上体积大于所述第四分界线4对应体积的区域，也即第四分界线4和最大体积之间的区域。
一个例子中，第二次处理所使用的溶血剂以及其剂量，第一个作用是使得样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值，这样红细胞碎片就不会影响白细胞的计数，第二个作用是使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从粒细胞中又分别区分出嗜酸性粒细胞群和嗜碱性粒细胞群。一实施例中，控制器控50制溶血剂推送部件30向白细胞计数池10推送的第二次处理所使用的溶血剂的剂量，使得样本中淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度快于嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的缩水速度，以及使得样本中没有影响白细胞计数值的红细胞碎片存在——即样本在经过第一次的溶血剂以及该次第二次的溶血剂处理后，在第二次测定时，样本中已经没有影响白细胞计数值的红细胞碎片存在，即样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值。处理器60根据电阻式检测器40测定第二次处理后的样本得到的数据来获取白细胞的第二参数集合，一实施例中第二参数集合包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞计数值、嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值。具体地，处理器60根据电阻式检测器40测定第二次处理后的样本得到的数据可以得到一白细胞直方图——例如第二白细胞直方图，基于该白细胞直方图来获取白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞计数值、嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值。处理器60根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的五分类参数，即对白细胞进行五分类和计数。具体地，将第二参数集合中的白细胞计数值作为五分类参数中的白细胞计数值；将第一参数集合中的淋巴细胞百分比作为五分类参数中的淋巴细胞百分比，并通过第一参数集合中的淋巴细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到淋巴细胞计数值，作为五分类参数中的淋巴细胞计数值；将第一参数集合中的单核细胞百分比作为五分类参数中的单核细胞百分比，并通过第一参数集合中的单核细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到单核细胞计数值，作为五分类参数中的单核细胞计数值；将第一参数集合中的粒细胞百分比减去第二参数集合中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞百分比，得到中性粒细胞百分比，并作为五分类参数中的中性粒细胞百分比，以及通过中性粒细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到中性粒细胞计数值，并作为五分类参数中的中性粒细胞计数值；将第二参数集合中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值作为五分类参数中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值；将第二参数集合中的嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值作为五分类参数中的嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值；这样就完成了对白细胞的五分类和计数。
一些实施例子，处理器60根据电阻式检测器40测定第一次处理后的样本得到的数据来获取白细胞的第一参数集合，可以包括：测定第一次处理后的样本，以得到第一白细胞直方图，对所述第一白细胞直方图进行数据处理以去除红细胞碎片的影响，根据去除红细胞碎片的影响后的第一白细胞直方图，来获取所述淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比。具体地，处理器60从第一白细胞直方图中可以得到白细胞计数值，从第二白细胞直方图中也可以得到白细胞计数值，再计算第一白细胞直方图的白细胞计数值与第二白细胞直方图的白细胞计数值的比值；当所述比值小于一预设值时，则直接从第一白细胞直方图中得到淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比，当所述比值大于或等于所述预设值时，根据所述比值在第一白细胞直方图上确定红细胞碎片与白细胞间第一界标位置，得到去掉红细胞碎片影响后的第一白细胞直方图，并根据去除红细胞碎片的影响后的第一白细胞直方图，来获取所述淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比。一实施例中，红细胞碎片与白细胞间第一界标位置满足以下关系：所述第一白细胞直方图总面积与所述第一界标右边直方图区域的面积之比等于所述比值。一实施例中，所述预设值大致为1.02。
在第一种情况中，两次加入溶血剂，使得两次改变了细胞所处环境的渗透压，使得细胞进行相应地收缩，第一次处理后进行测定出图，实现白细胞三分类，获得淋巴细胞、单核细胞和粒细胞的百分比，第二次处理后进行测定出图，又将粒细胞进一步区分；最终根据这两次测定的出图，实现较准确的白细胞的四分类和计数，或者五分类和计数。
第二种情况为一次使用溶血剂处理样本并测定，然后再等待预设时间，使得溶血剂继续作用样本，再测定；下面具体说明。
第二种情况中对样本的第一次处理与第一种情况中对样本的第一次处理类似，在此不再赘述。
第二种情况中对样本的第二次处理则与第一种情况中对样本的第二次处理不同。
一个例子中，控制器50控制溶血剂推送部件30向白细胞计数池10推送的第二次处理所使用的溶血剂的剂量为零，并控制等待预设时间，以完成所述第二次处理；即第二种情况中对样本的第二次处理并向白细胞计数池10中推送溶血剂，而是等待预设时间，使得第一次处理所使用的溶血剂继续作用于样本，淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从粒细胞群中区分出嗜酸性粒细胞群——这时候实际区分出来的嗜酸性粒细胞群是包含有嗜碱性粒细胞群，但是由于嗜碱性粒细胞的数量相对嗜酸性粒细胞很少，因此可以近似认为这时候区分出来的细胞群即为嗜酸性粒细胞群；其中预设时间的长度使得第一次处理所使用的溶血剂足够继续作用于样本，达到样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值的效果，这样红细胞碎片就不会影响白细胞的计数。然后控制器50控制电阻式检测器40测定第二次处理后的样本，处理器60根据电阻式检测器40测定第二次处理后的样本得到的数据来获取白细胞的第二参数集合，一实施例中第二参数集合包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值。具体地，处理器60根据电阻式检测器40测定第二次处理后的样本得到的数据可以得到一白细胞直方图——例如第二白细胞直方图，基于该白细胞直方图来获取白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值。处理器60根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的四分类参数，即对白细胞进行四分类和计数。具体地，将第二参数集合中的白细胞计数值作为四分类参数中的白细胞计数值；将第一参数集合中的淋巴细胞百分比作为四分类参数中的淋巴细胞百分比，并通过第一参数集合中的淋巴细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到淋巴细胞计数值，作为四分类参数中的淋巴细胞计数值；将第一参数集合中的单核细胞百分比作为四分类参数中的单核细胞百分比，并通过第一参数集合中的单核细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到单核细胞计数值，作为四分类参数中的单核细胞计数值；将第一参数集合中的粒细胞百分比减去第二参数集合中的嗜酸性粒细胞百分比得到中性粒细胞百分比，并作为四分类参数中的中性粒细胞百分比，以及通过中性粒细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到中性粒细胞计数值，并作为四分类参数中的中性粒细胞计数值；将第二参数集合中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值作为四分类参数中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值；这样就完成了对白细胞的四分类和计数。
一个例子中，控制器50控制溶血剂推送部件30向白细胞计数池10推送的第二次处理所使用的溶血剂的剂量为零，并控制等待预设时间，以完成所述第二次处理；即第二种情况中对样本的第二次处理并向白细胞计数池10中推送溶血剂，而是等待预设时间，使得第一次处理所使用的溶血剂继续作用于样本，淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从中性粒细胞群中分别区分出嗜酸性粒细胞群和嗜碱性粒细胞；其中预设时间的长度使得第一次处理所使用的溶血剂足够继续作用于样本，达到样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值的效果，这样红细胞碎片就不会影响白细胞的计数。然后控制器50控制电阻式检测器40测定第二次处理后的样本，处理器60根据电阻式检测器40测定第二次处理后的样本得到的数据来获取白细胞的第二参数集合，一实施例中第二参数集合包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞计数值、嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值。具体地，处理器60根据电阻式检测器40测定第二次处理后的样本得到的数据可以得到一白细胞直方图——例如第二白细胞直方图，基于该白细胞直方图来获取白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞计数值、嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值。处理器60根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的五分类参数，即对白细胞进行五分类和计数。具体地，将第二参数集合中的白细胞计数值作为五分类参数中的白细胞计数值；将第一参数集合中的淋巴细胞百分比作为五分类参数中的淋巴细胞百分比，并通过第一参数集合中的淋巴细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到淋巴细胞计数值，作为五分类参数中的淋巴细胞计数值；将第一参数集合中的单核细胞百分比作为五分类参数中的单核细胞百分比，并通过第一参数集合中的单核细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到单核细胞计数值，作为五分类参数中的单核细胞计数值；将第一参数集合中的粒细胞百分比减去第二参数集合中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞百分比，得到中性粒细胞百分比，并作为五分类参数中的中性粒细胞百分比，以及通过中性粒细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到中性粒细胞计数值，并作为五分类参数中的中性粒细胞计数值；将第二参数集合中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值作为五分类参数中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值；将第二参数集合中的嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值作为五分类参数中的嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值；这样就完成了对白细胞的五分类和计数。
在第二种情况中，首先加入溶血剂，改变了细胞所处环境的渗透压，使得细胞进行相应地收缩，该次处理后进行测定出图，实现白细胞三分类，获得淋巴细胞、单核细胞和粒细胞的百分比；然后接着等待预设时间，一方面使得溶血剂继续作用相应时间，使得样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值，不影响白细胞的计数，另一方面，在相同渗透压下，白细胞中不同种类的收缩速率不一样，因此可以设置一个相应的预设时间的长度，然后进行第二次测定出图，从而将粒细胞进一步区分；最终根据这两次测定的出图，实现较准确的白细胞的四分类和计数，或者五分类和计数。
上面对本发明的细胞分析仪做了一些基本的介绍和说明，请参照图3，在一些例子中细胞分析仪还可以包括诸如稀释液推送部件70、混匀部件80和压力源部件90等，其中稀释液推送部件70用于向白细胞计数池10推送稀释液，混匀部件80用于对白细胞计数池10中液体进行混匀，压力源部件90提供压力以使得白细胞计数池10中液体通过微孔11。
因此，一实施例中，控制器50用于控制稀释液推送部件70和采样针组件20分别向白细胞计数池10推送稀释液和排入血样，和控制溶血剂推送部件30向白细胞计数池10推送第一剂量的溶血剂，再控制混匀部件80对白细胞计数池10中液体进行混匀，再控制压力源部件90提供压力以使得白细胞计数池10中液体通过微孔11，并控制电阻式检测器40对通过微孔11的液体进行第一次测定，其中第一剂量的溶血剂使得样本在被电阻式检测器40第一次测定时仍残留有影响白细胞计数值的红细胞碎片存在，这样使得白细胞分成的3个细胞群之间的区别会明显。控制器50接着控制溶血剂推送部件30向白细胞计数池10推送第二剂量的同一种溶血剂，或者，控制器50控制等待预设时间；控制器再控制混匀部件80对白细胞计数池10中液体进行混匀，接着控制压力源部件90提供压力以使得白细胞计数池10中液体通过微孔11，并控制电阻式检测器40对通过微孔11的液体进行第二次测定。其中第二剂量的溶血剂第一个作用是使得样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值，这样红细胞碎片就不会影响白细胞的计数，第二个作用是使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从中性粒细胞群中区分出嗜酸性粒细胞群；或者，第二个作用是使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从中性粒细胞中又分别区分出嗜酸性粒细胞群和嗜碱性粒细胞群。其中所等待预设时间，使得第一次处理所使用的溶血剂继续作用于样本，达到样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值的效果，这样红细胞碎片就不会影响白细胞的计数，另外还使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从中性粒细胞群中区分出嗜酸性粒细胞群，或者还使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从中性粒细胞群中分别区分出嗜酸性粒细胞群和嗜碱性粒细胞。
处理器60则根据电阻式检测器40第一次测定得到的数据，来获取第一次测定结果，第一次测定结果包括淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比；处理器60根据电阻式检测器40第二次测定得到的数据，来获取第二次测定结果，第二次测定结果包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值，在一些实施例中，第二次测定结果还包括嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值。处理器60根据第一次测定结果和第二次测定结果，对白细胞至少进行四分类，例如对白细胞进行四分类，或者对白细胞进行五分类。
请参照图4，一实施例中的细胞分析仪可以包括制样部件91、测定部件92和处理器93，下面具体说明。
制样部件91用于以第一剂量的溶血剂处理血样，以及以第三剂量的溶血剂处理所述血样。在一些例子中，制样部件91是对同一段血样进行处理，首先使用第一剂量的溶血剂处理血样，接着通过向所述血样中继续加入所述溶血剂至所述第三剂量——例如向所述血样中继续加入第二剂量的溶血剂，其中第一剂量加第二剂量等于第三剂量，从而实现以第三剂量的溶血剂处理所述血样；在一些例子中，抽样部件91也可以是对血样的两段分血进行处理，对第一段分血使用第一剂量的溶血剂处理血样，对第二段分血使用第三剂量的溶血剂处理血样。
在一些例子中，制样部件91可以包括上述的白细胞计数池10、采样针组件20、溶血剂推送部件30、稀释液推送部件70和混匀部件80等。
测定部件92用于测量以第一剂量的溶血剂处理后的血样和以第三剂量的溶血剂处理后的血样，以分别得到白细胞的第一参数集合和白细胞的第二参数集合。一实施例中，第一参数集合包括淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比，第二参数集合则包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值，或者，第二参数集合还可以包括嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值。
在一些例子中，测定部件92可以包括上述的电阻式检测器40和压力源部件90等。
处理器93根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的至少四分类参数。一些例子中，处理器93可以包括上述的处理器60等。
请参照图5，一实施例中还公开了一种基于阻抗法对白细胞进行分类的方法，可以包括步骤100到步骤140，下面具说明。
步骤100：对待分析的样本进行第一次处理，所述第一次处理包括使用溶血剂处理样本。一实施例中，第一次处理所使用的溶血剂的剂量，使得样本在第一次测定时仍残留有影响白细胞计数值的红细胞碎片。在一些实施例子，还可以取出经第一次处理后的部分样本，并对该部分样本测定以获取红细胞的参数。
步骤110：测定第一次处理后的样本以获取白细胞的第一参数集合。一实施例中第一参数集合包括淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比。例如步骤110测定第一次处理后的样本可以得到一白细胞直方图——例如第一白细胞直方图，基于该白细胞直方图来获取淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比。
一实施例中步骤110测定第一次处理后的样本以获取白细胞的第一参数集合，包括：测定第一次处理后的样本，以得到第一白细胞直方图，对所述第一白细胞直方图进行数据处理以去除红细胞碎片的影响，根据去除红细胞碎片的影响后的第一白细胞直方图，来获取所述淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比。具体地，可以从第一白细胞直方图中可以得到白细胞计数值，再从下述的第二白细胞直方图中也可以得到白细胞计数值，再计算第一白细胞直方图的白细胞计数值与第二白细胞直方图的白细胞计数值的比值；当所述比值小于一预设值时，则直接从第一白细胞直方图中得到淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比，当所述比值大于或等于所述预设值时，根据所述比值在第一白细胞直方图上确定红细胞碎片与白细胞间第一界标位置，得到去掉红细胞碎片影响后的第一白细胞直方图，并根据去除红细胞碎片的影响后的第一白细胞直方图，来获取所述淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比。一实施例中，红细胞碎片与白细胞间第一界标位置满足以下关系：所述第一白细胞直方图总面积与所述第一界标右边直方图区域的面积之比等于所述比值。一实施例中，所述预设值大致为1.02。
步骤120：对所述样本进行第二次处理，所述第二次处理包括使用溶血剂再次处理样本，使得样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值。
一种情况中，第二次处理时使用了一定剂量的溶血剂，使得最终样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值，这样红细胞碎片就不会影响白细胞的计数，另一个作用是使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从中性粒细胞群中区分出嗜酸性粒细胞群，完成白细胞的四分类和计数，或者，使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从中性粒细胞中又分别区分出嗜酸性粒细胞群和嗜碱性粒细胞群，完成白细胞的五分类和计数。在这种情况下，第一次处理和第二次处理所使用的溶血剂可以为同一种溶血剂，也可以为不同种溶血剂。
一种情况中，第二次处理所使用的溶血剂的剂量为零，所述第二次处理还包括等待预设时间。第二次处理所等待的预设时间的长度，使得所述第一次处理所使用的溶血剂继续作用于样本，以使得样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值，并且使得样本中中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的大小不同，这样就可以从中性粒细胞群中区分出嗜酸性粒细胞群，完成白细胞的四分类和计数；或者，第二次处理所等待的预设时间的长度，使得所述第一次处理所使用的溶血剂继续作用于样本，以使得样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值，并且使得样本中中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的大小不同，这样就可以从中性粒细胞群中区分出嗜酸性粒细胞群和嗜碱性粒细胞群，完成白细胞的五分类和计数。
步骤130：测定第二次处理后的样本以获取白细胞的第二参数集合。例如步骤130测定第二次处理后的样本可以得到一白细胞直方图——例如第二白细胞直方图，基于该白细胞直方图来获取第二参数集合。一实施例中，第二参数集合包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值。另一实施例中第二参数集合包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞计数值、嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值。
步骤140：根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的至少四分类参数。
当第二参数集合包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值时，根据白细胞的第一参数集合和第二参数集合，可以对白细胞完成四分类和计数。一实施例中，步骤140将粒细胞百分比减去嗜酸性粒细胞百分比，得到中性粒细胞百分比；根据白细胞计数值、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和中性粒细胞百分比，分别计算得到淋巴细胞计数值、单核细胞计数值和中性粒细胞计数值。具体地，将第二参数集合中的白细胞计数值作为四分类参数中的白细胞计数值；将第一参数集合中的淋巴细胞百分比作为四分类参数中的淋巴细胞百分比，并通过第一参数集合中的淋巴细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到淋巴细胞计数值，作为四分类参数中的淋巴细胞计数值；将第一参数集合中的单核细胞百分比作为四分类参数中的单核细胞百分比，并通过第一参数集合中的单核细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到单核细胞计数值，作为四分类参数中的单核细胞计数值；将第一参数集合中的粒细胞百分比减去第二参数集合中的嗜酸性粒细胞百分比得到中性粒细胞百分比，并作为四分类参数中的中性粒细胞百分比，以及通过中性粒细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到中性粒细胞计数值，并作为四分类参数中的中性粒细胞计数值；将第二参数集合中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值作为四分类参数中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值；这样就完成了对白细胞的四分类和计数。
当第二参数集合包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞计数值、嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值，可以对白细胞完成五分类和计数。一实施例中，步骤140将粒细胞百分比减去嗜酸性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞百分比，得到中性粒细胞百分比；根据白细胞计数值、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和中性粒细胞百分比，分别计算得到淋巴细胞计数值、单核细胞计数值和中性粒细胞计数值。具体地，将第二参数集合中的白细胞计数值作为五分类参数中的白细胞计数值；将第一参数集合中的淋巴细胞百分比作为五分类参数中的淋巴细胞百分比，并通过第一参数集合中的淋巴细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到淋巴细胞计数值，作为五分类参数中的淋巴细胞计数值；将第一参数集合中的单核细胞百分比作为五分类参数中的单核细胞百分比，并通过第一参数集合中的单核细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到单核细胞计数值，作为五分类参数中的单核细胞计数值；将第一参数集合中的粒细胞百分比减去第二参数集合中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞百分比，得到中性粒细胞百分比，并作为五分类参数中的中性粒细胞百分比，以及通过中性粒细胞百分比和第二参数集合中的白细胞计数值得到中性粒细胞计数值，并作为五分类参数中的中性粒细胞计数值；将第二参数集合中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值作为五分类参数中的嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值；将第二参数集合中的嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值作为五分类参数中的嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值；这样就完成了对白细胞的五分类和计数。
上面对本发明的基于阻抗法对白细胞进行分类的方法做了一些基本的介绍和说明，在一些例子中基于阻抗法对白细胞进行分类的方法还可以包括诸如向白细胞计数池加入稀释液，混匀白细胞计数池中液体等步骤。例如请参照图6，一实施例中的基于阻抗法对白细胞进行分类的方法，可以包括步骤200到步骤270，下面具体说明。
步骤200：向白细胞计数池加入稀释液和血样。
步骤210：向所述白细胞计数池加入第一剂量的溶血剂。一实施例中，第一剂量的溶血剂使得样本在下述步骤230进行第一次测定时仍残留有影响白细胞计数值的红细胞碎片存在。
步骤220：对所述白细胞计数池中液体进行混匀。
步骤230：对白细胞计数池中液体进行测定，得到第一次测定结果，其中所述第一次测定结果包括淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比。
步骤240：再次向所述白细胞计数池加入第二剂量的同一种溶血剂，或者等待预设时间。
一实施例中，第二剂量的溶血剂第一个作用是使得样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值，这样红细胞碎片就不会影响白细胞的计数，第二个作用是使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从中性粒细胞群中区分出嗜酸性粒细胞群；或者，第二个作用是使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从中性粒细胞中又分别区分出嗜酸性粒细胞群和嗜碱性粒细胞群。
一实施例中，所等待预设时间，使得第一次处理所使用的溶血剂继续作用于样本，达到样本中的红细胞碎片数量小于预设阈值的效果，这样红细胞碎片就不会影响白细胞的计数，另外还使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从中性粒细胞群中区分出嗜酸性粒细胞群，或者还使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，而嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞缩水速度较相对较慢，这样就可以从中性粒细胞群中分别区分出嗜酸性粒细胞群和嗜碱性粒细胞。
步骤250：对所述白细胞计数池中液体进行混匀。
步骤260：对白细胞计数池中液体进行测定，得到第二次测定结果，其中所述第二次测定结果包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值。在一些实施例中，第二次测定结果还包括嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值。
步骤270：根据所述第一次测定结果和所述第二次测定结果，对白细胞至少进行四分类，例如对白细胞进行四分类，或者对白细胞进行五分类。
请参照图7，一实施例中基于阻抗法对白细胞进行分类的方法可以包括步骤300到步骤310。
步骤300：获取以第一剂量的溶血剂处理后的血样中的白细胞的第一参数集合和以第三剂量的溶血剂处理后的所述血样中的白细胞的第二参数集合，其中，所述第一剂量小于所述第三剂量。一实施例中，第一参数集合包括淋巴细胞百分比、单核细胞百分比和粒细胞百分比，第二参数集合则包括白细胞计数值、嗜酸性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞计数值，或者，第二参数集合还可以包括嗜碱性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞计数值。
在一些例子中，步骤300获取的是对同一段血样进行处理后的测定参数，首先使用第一剂量的溶血剂处理血样，接着通过向所述血样中继续加入所述溶血剂至所述第三剂量——例如向所述血样中继续加入第二剂量的溶血剂，其中第一剂量加第二剂量等于第三剂量，从而实现以第三剂量的溶血剂处理所述血样；在一些例子中，步骤300获取的也可以是对血样的两段分血进行处理后的测定参数，对第一段分血使用第一剂量的溶血剂处理血样，对第二段分血使用第三剂量的溶血剂处理血样。
步骤310：根据所述白细胞的第一参数集合和第二参数集合，得到白细胞的至少四分类参数。
本发明所涉及的样本或血样，为动物的血液样本，例如猫或狗等。下面以具体的几个实例进行说明。
狗的白细胞分类和计数的一个例子。
首先，向白细胞计数池加入1400uL稀释液底液。
接着，向白细胞计数池中加入9uL血样，同时加入700uL稀释液，冲洗采样针。
接着，通过白细胞计数池下端打气泡，对白细胞计数池内的液体进行混匀。
接着，可以吸出白细胞计数池中混匀后的20uL样本，用于红细胞通道的计数。
接着，向白细胞计数池中加入0.23mL溶血剂。
接着，通过白细胞计数池下端打气泡，对白细胞计数池内的液体进行混匀。溶血剂的作用是溶解红细胞，同时白细胞在溶血剂作用下，分成三个群，淋巴细胞群、单核细胞群、粒细胞群(包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)，白细胞计数池内的液体在负压作用下，通过白细胞计数池的微孔。因此，对白细胞通道的信号进行第一次测定，得出如图8(a)所示的白细胞直方图，可以获取到淋巴细胞分类值(淋巴细胞百分比)、单核细胞分类值(单核细胞百分比)、粒细胞分类值(粒细胞百分比)。
接着，向白细胞计数池中再次加入0.26mL溶血剂。
接着，通过白细胞计数池下端打气泡，对白细胞计数池内的液体进行混匀。
第二次加入溶血剂的作用是使淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞缩水速度相对较慢，嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞在白细胞直方图的最右端，白细胞计数池内的液体在负压作用下，通过白细胞计数池的微孔，从而对白细胞通道的信号进行第二次测定，得出如图8(b)所示的白细胞直方图，从而可以获取白细胞计数、嗜酸细胞百分比、嗜酸细胞计数值、嗜碱细胞百分比和嗜碱细胞计数值。
最后再根据两次出图的结果进行其他参数的计算，如下：
淋巴细胞计数值＝白细胞计数值*淋巴细胞百分比；
单核细胞计数值＝白细胞计数值*单核细胞百分比；
中性粒细胞百分比＝粒细胞百分百-嗜酸细胞百分比-嗜碱细胞百分比；
中性粒细胞计数值＝白细胞计数值*中性粒细胞百分比；
通过第一次和第二次出图计数，最终可以得到白细胞通道的很多个测试结果，例如白细胞计数值、淋巴细胞计数值、单核细胞计数值、中性粒细胞计数值、嗜酸细胞计数值、嗜碱细胞计数值、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、中性粒细胞百分比、嗜酸细胞百分比和嗜碱细胞百分比等。
狗的白细胞分类和计数的又一个例子。
首先，向白细胞计数池加入1400uL稀释液底液。
接着，向白细胞计数池中加入9uL血样，同时加入700uL稀释液，冲洗采样针。
接着，通过白细胞计数池下端打气泡，对白细胞计数池内的液体进行混匀。
接着，可以吸出白细胞计数池中混匀后的20uL样本，用于红细胞通道的计数。
接着，向白细胞计数池中加入0.27mL溶血剂。
接着，通过白细胞计数池下端打气泡，对白细胞计数池内的液体进行混匀。溶血剂的作用是溶解红细胞，同时白细胞在溶血剂作用下，分成三个群，淋巴细胞群、单核细胞群、粒细胞群(包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)，白细胞计数池内的液体在负压作用下，通过白细胞计数池的微孔。因此，对白细胞通道的信号进行第一次测定，得出如图8(a)所示的白细胞直方图，可以获取到淋巴细胞分类值(淋巴细胞百分比)、单核细胞分类值(单核细胞百分比)、粒细胞分类值(粒细胞百分比)。
接着，等待12秒，使溶血剂进一步作用于白细胞和红细胞。
接着，通过白细胞计数池下端打气泡，对白细胞计数池内的液体进行混匀。
等待12秒的作用一是使溶血剂进一步作用于红细胞，使得样本中不存在影响白细胞计数的红细胞碎片，二是使溶血剂进一步作用于白细胞，使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞缩水速度相对较慢，嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞在白细胞直方图的最右端，白细胞计数池内的液体在负压作用下，通过白细胞计数池的微孔，从而对白细胞通道的信号进行第二次测定，得出如图8(b)所示的白细胞直方图，从而可以获取白细胞计数、嗜酸细胞百分比、嗜酸细胞计数值、嗜碱细胞百分比和嗜碱细胞计数值。
最后再根据两次出图的结果进行其他参数的计算，计算过程与上面狗的例子中的计算类似，在此不再赘述。
猫的白细胞分类和计数的一个例子。
首先，向白细胞计数池加入1400uL稀释液底液。
接着，向白细胞计数池中加入9uL血样，同时加入700uL稀释液，冲洗采样针。
接着，通过白细胞计数池下端打气泡，对白细胞计数池内的液体进行混匀。
接着，可以吸出白细胞计数池中混匀后的20uL样本，用于红细胞通道的计数。
接着，向白细胞计数池中加入0.26mL溶血剂。
接着，通过白细胞计数池下端打气泡，对白细胞计数池内的液体进行混匀。溶血剂的作用是溶解红细胞，同时白细胞在溶血剂作用下，分成三个群，淋巴细胞群、单核细胞群、粒细胞群(包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)，白细胞计数池内的液体在负压作用下，通过白细胞计数池的微孔。因此，对白细胞通道的信号进行第一次测定，得出如图9(a)所示的白细胞直方图，可以获取到淋巴细胞分类值(淋巴细胞百分比)、单核细胞分类值(单核细胞百分比)、粒细胞分类值(粒细胞百分比)。
接着，向白细胞计数池中再次加入0.23mL溶血剂。
接着，通过白细胞计数池下端打气泡，对白细胞计数池内的液体进行混匀。
第二次加入溶血剂的作用是使淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞缩水速度相对较慢，嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞在白细胞直方图的最右端，白细胞计数池内的液体在负压作用下，通过白细胞计数池的微孔，从而对白细胞通道的信号进行第二次测定，得出如图9(a)所示的白细胞直方图，从而可以获取白细胞计数、嗜酸细胞百分比、嗜酸细胞计数值、嗜碱细胞百分比和嗜碱细胞计数值。
最后再根据两次出图的结果进行其他参数的计算，计算过程与上面狗的例子中的计算类似，在此不再赘述。
猫的白细胞分类和计数的又一个例子。
首先，向白细胞计数池加入1400uL稀释液底液。
接着，向白细胞计数池中加入9uL血样，同时加入700uL稀释液，冲洗采样针。
接着，通过白细胞计数池下端打气泡，对白细胞计数池内的液体进行混匀。
接着，可以吸出白细胞计数池中混匀后的20uL样本，用于红细胞通道的计数。
接着，向白细胞计数池中加入0.26mL溶血剂。
接着，通过白细胞计数池下端打气泡，对白细胞计数池内的液体进行混匀。溶血剂的作用是溶解红细胞，同时白细胞在溶血剂作用下，分成三个群，淋巴细胞群、单核细胞群、粒细胞群(包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)，白细胞计数池内的液体在负压作用下，通过白细胞计数池的微孔。因此，对白细胞通道的信号进行第一次测定，得出如图9(a)所示的白细胞直方图，可以获取到淋巴细胞分类值(淋巴细胞百分比)、单核细胞分类值(单核细胞百分比)、粒细胞分类值(粒细胞百分比)。
接着，等待12秒，使溶血剂进一步作用于白细胞和红细胞。
接着，通过白细胞计数池下端打气泡，对白细胞计数池内的液体进行混匀。
等待12秒的作用一是使溶血剂进一步作用于红细胞，使得样本中不存在影响白细胞计数的红细胞碎片，二是使溶血剂进一步作用于白细胞，使得淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞缩水速度加快，嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞缩水速度相对较慢，嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞在白细胞直方图的最右端，白细胞计数池内的液体在负压作用下，通过白细胞计数池的微孔，从而对白细胞通道的信号进行第二次测定，得出如图9(b)所示的白细胞直方图，从而可以获取白细胞计数、嗜酸细胞百分比、嗜酸细胞计数值、嗜碱细胞百分比和嗜碱细胞计数值。
最后再根据两次出图的结果进行其他参数的计算，计算过程与上面狗的例子中的计算类似，在此不再赘述。
本领域技术人员可以理解，上述实施方式中各种方法的全部或部分功能可以通过硬件的方式实现，也可以通过计算机程序的方式实现。当上述实施方式中全部或部分功能通过计算机程序的方式实现时，该程序可以存储于一计算机可读存储介质中，存储介质可以包括：只读存储器、随机存储器、磁盘、光盘、硬盘等，通过计算机执行该程序以实现上述功能。例如，将程序存储在设备的存储器中，当通过处理器执行存储器中程序，即可实现上述全部或部分功能。另外，当上述实施方式中全部或部分功能通过计算机程序的方式实现时，该程序也可以存储在服务器、另一计算机、磁盘、光盘、闪存盘或移动硬盘等存储介质中，通过下载或复制保存到本地设备的存储器中，或对本地设备的系统进行版本更新，当通过处理器执行存储器中的程序时，即可实现上述实施方式中全部或部分功能。
以上应用了具体个例对本发明进行阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。对于本发明所属技术领域的技术人员，依据本发明的思想，还可以做出若干简单推演、变形或替换。
