检测APLN蛋白表达的试剂在制备用于低级别胶质瘤预后评估的试剂盒中的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测APLN蛋白表达的试剂在制备用于低级别胶质瘤预后评估的试剂盒中的应用。
背景技术
神经胶质细胞分为星形胶质细胞、室管膜细胞和少突神经胶质细胞。神经胶质瘤简称胶质瘤，也称为胶质细胞瘤，是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤，约占所有颅内原发肿瘤的50％。胶质瘤是成人最常见的原发性恶性脑肿瘤，5年生存率为20％-30％。根据2007年世界卫生组织(WHO)描述的组织学标准，胶质瘤分为4级，从最低级的I级至最高级的IV级。低级别胶质瘤(Low-grade glioma缩写LGG，I-II级)被认为是大脑中最常见的浸润性肿瘤，其中Ⅰ级和Ⅱ级属于低级别胶质瘤。胶质母细胞瘤(glioblastoma，缩写GBM，Ⅳ级)是胶质瘤中最具侵袭性的亚型。
低级别胶质瘤大多见于成年人，多数为Ⅱ级胶质瘤，主要包括星形细胞瘤、少突胶质瘤和少突星形细胞瘤。虽然低级别胶质瘤生长相对缓慢，但有去分化和转化为高级别胶质瘤的倾向，同时呈侵袭性生长，术后常容易复发且级别升高，临床上存在较高的致残率和病死率。此外，一些低级别胶质瘤位于脑内重要功能区，手术风险大，术后易出现或者加重神经功能损害。
因此，亟待一种用于低级别胶质瘤预后评估的试剂盒，用来指导临床实现个体化治疗，避免过度治疗和治疗不足。
发明内容
本发明的目的是针对现有不足，提供一种检测APLN蛋白表达的试剂在制备用于低级别胶质瘤预后评估的试剂盒中的应用。
优选的，所述检测APLN蛋白表达的试剂为APLN一抗。
所述试剂盒包括APLN一抗，孵二抗和DAB显色液。
本发明产生的有益效果是：本发明中发现APLN高表达与低级别胶质瘤患者的预后总生存期(OS)和无复发生存期(RFS)呈负相关，APLN表达高明确指示较短的生存期，即较差的预后，提示APLN可以用作低级别胶质瘤预后评估的生物标志物；同时发现APLN高表达与低级别胶质瘤患者的预后无进展生存期(PFS)呈负相关，APLN表达高明确指示较短的生存期，即较差的预后，提示APLN可以用作低级别胶质瘤预后评估的生物标志物。本发明的检测APLN蛋白表达的试剂用于低级别胶质瘤预后评估的试剂盒中，通过测试APLN在低级别胶质瘤患者的表达水平，可以辅助低级别胶质瘤诊断、治疗或预后的评估。
附图说明
图1为OSlgg分析APLN的表达与患者预后生存期的关系；
图2为免疫组化学分析APLN在低级别胶质瘤的表达结果。
具体实施方式
实施例1
APLN在低级别胶质瘤患者脑组织的表达
一、收集41例胶质瘤患者肿瘤组织标本
所有患者均经过病理结果证实，胶质瘤患者的肿瘤组织经4％多聚甲醛固定，在4℃条件下保存，制作组织芯片。
先经脱蜡、水化，具体地，将组织芯片在60℃恒温培养箱放置20min，然后置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min，依次放入无水乙醇浸泡10min，无水乙醇再次浸泡10min，95％酒精浸泡10min，90％酒精浸泡10min，85％酒精浸泡10min，75％酒精浸泡10min。抗原修复，具体地，加入抗原修复液柠檬酸盐枸橼酸盐，中火加热10min。
二、免疫组织化学染色
PBS洗片，5min/次，洗3次；用5％牛血清白蛋白封闭10min，将其甩去，滴加APLN一抗(anti-apelin-36，1:150稀释，Phoenix Biotech有限公司，中国北京)，4℃冰箱过夜；孵二抗 (1:200，辣根过氧化物酶(HRP)标记，赛维尔生物科技有限公司，中国武汉)，滴加DAB显色液，7-8min，镜下观察，自来水终止染色。梯度脱水：75％乙醇10s→85％乙醇10s→90％乙醇10s→95％乙醇10s→无水乙醇Ⅰ10s→无水乙醇Ⅱ10s→二甲苯Ⅰ5min→二甲苯Ⅱ5min；封片。
三、染色评估
免疫组化学染色结果由两名对患者临床病理参数不知情的病理学家独立评估。评分主要依据肿瘤细胞染色强度和百分比，确定APLN阳性。APLN染色强度从0到3分：0-阴性，1-弱，2-中等，3-强烈。阳性染色率从0到4分：1分(0-25％)，2分(26％-50％)，3分(51％-75％)， 4分(76％-100％)。总得分由比例和强度得分相乘得出。
本实施例中胶质瘤患者肿瘤组织标本中APLN的表达评估结果如表1所示。
表1
图1为OSlgg分析APLN的表达与患者预后生存期的关系，从图1可以看出，与APLN低表达的低级别胶质瘤患者相比，APLN高表达患者具有明显较短的预后总生存期(OS，p＝1E-4；HR:2.0645；95％CI:1.4256-2.9897)、无复发生存期(RFS，p＝5.80E-3；HR:1.6931；95％CI: 1.165-2.4605)、无进展生存期(PFS，p＝9.50E-3；HR:1.6897；95％CI:1.137-2.511)，即APLN高表达明显指示较差预后。
图2为免疫组化学分析APLN在低级别胶质瘤的表达结果，从图2可以看出，APLN 在II级低级别胶质瘤的表达水平高于I级。
通过上述分析可知，本发明的检测APLN蛋白表达的试剂用于低级别胶质瘤预后评估的试剂盒中，通过测试APLN在低级别胶质瘤患者的表达水平，可以辅助低级别胶质瘤诊断、治疗或预后的评估。
