一种Miltenberger血型系列表型红细胞的制备方法
技术领域
本发明涉及红细胞制品制备技术领域，具体为一种Miltenberger血型系列表型红细胞的制备方法。
背景技术
Miltenberger血型系统抗体阳性频率仅次于Rh血型系统，能致溶血性输血反应(hemolytic transfusion reaction，HTR)和新生儿溶血病(haemolytic diseaseofthenewborn，HDN)，是有临床意义的不规则抗体。反复输血患者血清不规则抗体筛查与鉴定发现，抗-Mur占所有不规则抗体的30.85％。抗-Mur可以导致急性和迟发性HTR及严重的HDN，国内外均已有案例报道。由此可见，在临床输血前筛查Miltenberger血型相关抗体对于患者生命安全意义重大。
不规则抗体检测对保障输血相容性和预防溶血性输血反应的发生具有重要意义，而不规则抗体筛选细胞和谱细胞可完成对常见有临床意义的血型抗原对应的不规则抗体的筛查和鉴定。国内目前市场上的筛选细胞试剂均不包含Miltenberger血型阳性红细胞，存在漏检Miltenberger血型相关抗体，进而导致溶血性输血反应和无效输血的可能。基于此，本发明设计了一种Miltenberger血型系列表型红细胞的制备方法，以解决上述问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种Miltenberger血型系列表型红细胞的制备方法，以解决上述背景技术中提出的国内尚无商品化Miltenberger血型系列表型红细胞，不能检测患者血清中的Miltenberger血型相关抗体，存在着该血型抗体漏检和输血引发溶血性输血反应的风险的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种Miltenberger血型系列表型红细胞的制备方法，其特征在于：
第一步：采用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)对Miltenberger血型进行检测，并对Miltenberger血型阳性样本行基因测序验证；
第二步：采用血清学方法对Miltenberger血型阳性样本进行ABO血型检测，并对Miltenberger血型阳性O型红细胞上常见有临床意义的Rh、Kidd、MNS、Duffy、Lewis和P系统抗原进行检测；
第三步：采用基因分型方法检测Miltenberger血型阳性O型红细胞上剂量效应抗原C、c、E、e、M、N、S、s、Fya、Fyb、Jka和Jkb，得到红细胞表面抗原格局，用红细胞试剂保存液制备成Miltenberger血型系列表型红细胞；
第四步：对制备的Miltenberger血型系列表型红细胞进行抗原性、亲和力、特异性及稳定性等性能鉴定；
第五步：用制备的Miltenberger血型系列表型红细胞与现有不规则抗体筛选细胞试剂平行检测住院输血患者血清，并用谱细胞鉴定抗体特异性，评价细胞的诊断性能，得到最终产品。
作为本发明的进一步方案，Miltenberger血型阳性O型红细胞上Rh、Kidd、MNS、Duffy、Lewis和P系统抗原采用血清学方法检测。
作为本发明的进一步方案，Miltenberger血型阳性O型红细胞上剂量效应抗原C、c、E、e、M、N、S、s、Fya、Fyb、Jka和Jkb采用基因分型方法检测。
作为本发明的进一步方案，对Miltenberger血型系列表型红细胞进行细胞性能鉴定和诊断性能评价。
本发明的有益效果是：
1、本发明对Miltenberger血型阳性样本进行基因测序验证，并对经测序验证的Miltenberger血型阳性O型红细胞上的其他常见有临床意义的抗原行血清学检测，对剂量效应抗原行基因检测，得到红细胞表面抗原格局，制备成Miltenberger血型系列表型红细胞，可完成对Miltenberger血型相关抗体的检测；
2、本发明填补了国内无Miltenberger血型系列表型红细胞的空白，可配合现有筛选细胞，对包含Miltenberger血型相关抗体在内的不规则抗体进行检测，有效规避溶血性输血反应和无效输血，为安全输血提供保障。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的制备方法流程示意图；
图2为本发明制备方法中Miltenberger血型PCR-SSP方法检测2种阳性电泳结果；
图3为本发明制备方法中Miltenberger血型PCR-SSP方法检测2种阴性电泳结果；
图4为本发明制备方法中Miltenberger血型阳性样本基因测序验证结果；
图5为本发明制备方法中Miltenberger血型阳性样本ABO血型检测结果；
图6为本发明制备方法中Miltenberger血型阳性O型红细胞Rh血型抗原血型卡法检测结果；
图7为本发明制备方法中Miltenberger血型阳性O型红细胞抗原盐水试管法结果；
图8为本发明制备方法中Miltenberger血型阳性O型红细胞抗原抗人球蛋白微柱凝胶卡法结果；
图9为本发明制备方法中Miltenberger血型阳性O型红细胞CcEe抗原PCR-SSP分型结果；
图10为本发明制备方法中Miltenberger血型阳性O型红细胞Duffy系统抗原基因测序分析结果；
图11为本发明制备方法中Miltenberger血型阳性O型红细胞Kidd系统抗原基因测序分析结果；
图12和图13为本发明制备方法中Miltenberger血型阳性O型红细胞MNS系统基因测序分析结果；
图14为本发明制备方法中Miltenberger血型阳性O型红细胞抗原格局表；
图15为本发明制备方法中Miltenberger血型抗体阳性筛检结果；
图16为本发明制备方法中谱细胞盐水试管法验证结果；
图17为本发明制备方法中谱细胞抗人球蛋白微柱凝胶卡法验证结果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种Miltenberger血型系列表型红细胞试剂的制备方法，其特征在于：
第一步：采用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)对Miltenberger血型进行检测，并对Miltenberger血型阳性样本行DNA测序验证；
第二步：采用血清学方法对Miltenberger血型阳性样本进行ABO血型检测，并对Miltenberger血型阳性O型红细胞上常见有临床意义的Rh、Kidd、MNS、Duffy、Lewis和P系统抗原进行检测；
第三步：采用基因分型方法检测Miltenberger血型阳性O型红细胞上剂量效应抗原C、c、E、e、M、N、S、s、Fya、Fyb、Jka和Jkb，得到红细胞表面抗原格局，用红细胞试剂保存液制备成Miltenberger血型系列表型红细胞；
第四步：对制备的Miltenberger血型系列表型红细胞进行抗原性、亲和力、特异性及稳定性等性能鉴定；
第五步：用制备的Miltenberger血型系列表型红细胞与现有不规则抗体筛选细胞试剂平行检测住院输血患者血清，并用谱细胞鉴定抗体特异性，评价细胞的诊断性能，得到最终产品。
具体的，Miltenberger血型阳性O型红细胞上常见有临床意义抗原采用血清学方法检测。
具体的，Miltenberger血型阳性O型红细胞上剂量效应抗原采用基因分型方法检测。
具体的，使用谱细胞对Miltenberger血型系列表型红细胞与现有筛选细胞检测出的不规则抗体阳性标本进行验证。
本发明采用PCR-SSP方法检测Miltenberger血型，对Miltenberger血型阳性样本进行DNA测序验证，并对经测序验证的Miltenberger血型阳性O型红细胞上其他常见有临床意义抗原行血清学检测，对剂量效应抗原行基因分型检测，得到红细胞抗原格局，制备成Miltenberger血型系列表型红细胞，可以完成对包含Miltenberger血型相关抗体在内的常见有临床意义不规则抗体的检测。
填补了国内无Miltenberger血型系列表型红细胞的空白，配合现有筛选细胞，对Miltenberger血型相关抗体进行检测，有效规避溶血性输血反应和无效输血，为安全输血提供保障。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
