一种利用自体健康状态时微生物构建以用于菌群移植的菌群库的方法
技术领域
本发明是利用人在健康状态时的自体微生物构建以用于菌群移植的菌群库，将来通过菌群移植来治疗疾病、保健等，涉及微生物学、精准医学领域。
背景技术
科学研究表明，生活在人体中的微生物细胞数量可能达到1014，超过人体细胞数目的10倍以上，其编码的基因数量是人类基因组基因数量的100倍以上。这些微生物群对于人体有着重要的生理作用，它们帮助我们消化食物，产生各种维生素，调整我们的免疫系统，对抗有害微生物，保护我们的皮肤免受感染，甚至影响着人们的体型和情绪，对于人类疾病的治疗意义重大。
人体许多部位都生活着微生物，其中肠道中的微生物数量最多、种群最丰富，大约80％的人体正常微生物都集中在这里，总重量超过一公斤，种类有四五百种。人的皮肤上也生活着许多微生物(肤表微生物)，有细菌也有真菌，人体汗液中的无机离子和有机物是这些微生物惬意的食物。口腔是微生物生存的好地方，唾液给这里的微生物带来丰富的营养和充足的水分，口腔高低不平的表面又为各类微生物提供了栖身之所，因此近百种细菌、真菌和原生动物都能在这里安详地生活。此外，鼻腔、咽腔以及女性生殖道也是一些微生物定居的场所。人体的胃虽然不是微生物的好去处，但这里也生活有少量的耐酸细菌和酵母菌，它们粘附在胃壁上生长。
健康人体内，这些正常微生物的定植和生态平衡对维持人体健康起着非常重要的作用。最近研究发现，人类有超过90％的疾病和肠道菌群失衡有关。粪菌移植是将健康人的粪菌移植到患者胃肠道内，帮助纠正患者失衡的肠道菌群和重建具有正常功能的肠道微生态。目前，粪菌移植对难辨梭状芽孢杆菌感染具有良好疗效已获广泛认同；其对于与菌群失调相关的其他肠道内外疾病的治疗作用也成为研究热点。同时，人体其他部位微生物菌群的失衡也引发了各种相关疾病，未来或许也可以通过菌群移植重建正常的微生态，从而达到减轻或治疗疾病的目的。
然而目前有关菌群移植供体的选择和筛检仍无统一标准，甚至还存在诸多争论，供体的年龄、健康评价、菌群的免疫排斥和安全性(尤其是长期安全性)等影响还需要相关对照研究和长期随访深入探讨。由于菌群移植的特殊性，家庭成员或朋友常被指定为捐赠者，健康的志愿者也是合适的捐赠者。然而，移植他人的微生物一方面可能有未知的安全因素(如未知有害微生物的存在、免疫排斥反应、长期安全性等)，另一方面还存在一定的伦理问题和心理排斥问题，而移植自体健康状态尤其是青春期时候(儿童的粪便受环境因素影响较少，其肠道菌群的变异程度较低，可能也是良好的粪菌来源)的微生物菌群则可以有效避免这些问题。因此，“备份”自体健康状态时尤其是儿童或未成年时期的微生物，未来一旦发生相关疾病需要菌群移植治疗时，就可立即做自体微生物菌群的移植，恢复健康，减轻自己及家人经济负担。
研究还发现，人老是先由肠道有益微生物减少引起的。婴儿自母亲腹中出生后几小时内，通过喂奶和肛门等途径，就有大量的有益微生物在其肠道内定居，在青春期至40岁这个阶段，有益菌类一直占据着绝对优势，40岁以后，有益菌类数量逐渐减少，有害菌类增多，肠道粘膜变薄，其防御机能和免疫机能减弱，结果导致大量有害物质及有害细菌产生的毒素进入血液，损害内脏器官，加速了各脏器的功能退化，使人身体慢慢变老。所以，应用自存的健康状态时尤其是青春期时的肠道微生物菌群，还有可能实现梦寐以求的“保存美丽”“青春永驻”的美好愿望，拥有高品质人生。同时，自体微生物菌群不但可用于本人，还可为其父母及相关亲属(如堂表弟妹，甚至父母)等人的临床应用。并且还可供全国和全世界患者进行相关匹配后，选择作为微生物菌群移植用。自体微生物菌群库的构建可为企业带来巨大收益。
发明内容
本发明是利用人在健康状态时的自体微生物构建以用于菌群移植的菌群库，将来通过菌群移植来治疗疾病、保健等，相比移植他人的微生物，具有心理接受性强、无免疫排斥、无伦理争议等优点。健康人自体微生物菌群库的建立为未来个性化精准医疗、保健等提供基础。
本发明的一种利用自体健康状态时微生物构建以用于菌群移植的菌群库的方法，它是按照以下步骤进行的：
1、储户信息采集及健康状态的确认。储户签订“自体微生物菌群库服务协议书”后，填写身份信息，并询问了解其疾病史(包括是否有腹泻病史和慢性便秘，是否有恶性肿瘤病史，是否有系统性自身免疫性疾病，是否滥用静脉注射药物，是否有吸毒史，是否有高风险性行为，是否有纹身和监禁史等)；之后对其进行体检和心理测评，体检至少应包含以下内容：血清测试(检查是否有已知的传染性疾病，血清做甲型肝炎病毒IgM，乙型肝炎IgM和IgG，乙型肝炎表面抗原，乙型肝炎表面抗体IgM，丙型肝炎病毒IgG抗体，HIV 1型和2型，荧光梅毒密螺旋体抗体吸附试验)；血液测试(检查相关部位是否有炎症，检查血液中白细胞、淋巴细胞、中间细胞数等)；粪便测试(对粪便进行PCR、抗原、镜检和培养测试，检查肠道内是否有难辨梭状芽胞杆菌毒素B、轮状病毒、贾第虫、隐孢子虫、环孢子虫、隐孢子虫等孢子球虫(抗酸染色)、虫卵、寄生虫、志贺产毒素大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、耶尔森鼠疫杆菌、弯曲杆菌、非霍乱弧菌、邻单胞菌、气单胞菌等)。心理测评采用问卷调查的方式，主要检测是否有心理和精神疾病。最后，确定身心健康的储户才建议实行自体微生物菌群的保存，最好应为身心健康的儿童或未成年人，不健康的储户不建议保存。
2、自体相关部位微生物菌群的采集。采集部位包括口腔、鼻腔、女性生殖道、肠道，采集过程在无菌条件下进行，最好是在GMP100的房间内进行。口腔、鼻腔、生殖道的微生物菌群采用无菌棉签取样，肠道微生物采用专用的粪便取样器进行取样，取样后迅速置于已预先灭菌的厌氧还原液中密封保存。
3、微生物菌群多样性分析。对同批次所得的微生物样品，分别取一个样进行高通量测序，了解其微生物的多样性，并保存记录其检测结果。
4、微生物菌群的保存。将上述所得的微生物样品分装好后放入冻存容器中，密封，编号，并登记，之后立即进行程序是降温，然后放入到-196℃液氮罐中长期保存，或将微生物样品制作成胶囊进行冷冻保存，储存环境定期检测。
5、微生物菌群中益生菌的分离保存。从上述所得的微生物样品中分离纯化得到相关益生菌，如双歧杆菌(Bifidobacterium)、乳酸杆菌(Lactobacill)、拟杆梭菌(Bacteroides)、柔嫩梭菌、脆弱拟杆菌、奇异菌(Atopobium)、普氏菌(Prevotella)等，然后再将这些益生菌分别放入到-196℃液氮罐中长期保存，或将微生物样品制作成胶囊进行冷冻保存，储存环境定期检测。
6、建库及库的信息化管理。将样品信息和储户信息匹配后录入计算机数据库，并建立数据库信息检索，按照微生物菌种保藏库标准进行管理。
附图说明
图1为本发明所述的一种利用自体健康状态时微生物构建以用于菌群移植的菌群库的方法流程图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的具体实施方式进行描述，以便更好的理解本发明，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
本实施例中的利用自体健康状态时微生物构建以用于菌群移植的菌群库的方法，分为以下几个步骤进行。
1、储户信息采集及健康状态的确认。储户签订“自体微生物菌群库服务协议书”后，填写身份信息，并询问了解其疾病史(包括是否有腹泻病史和慢性便秘，是否有恶性肿瘤病史，是否有系统性自身免疫性疾病，是否滥用静脉注射药物，是否有吸毒史，是否有高风险性行为，是否有纹身和监禁史等)；之后对其进行体检和心理测评，体检至少应包含以下内容：血清测试(检查是否有已知的传染性疾病，血清做甲型肝炎病毒IgM，乙型肝炎IgM和IgG，乙型肝炎表面抗原，乙型肝炎表面抗体IgM，丙型肝炎病毒IgG抗体，HIV 1型和2型，荧光梅毒密螺旋体抗体吸附试验)；血液测试(检查相关部位是否有炎症，检查血液中白细胞、淋巴细胞、中间细胞数等)；粪便测试(对粪便进行PCR、抗原、镜检和培养测试，检查肠道内是否有难辨梭状芽胞杆菌毒素B、轮状病毒、贾第虫、隐孢子虫、环孢子虫、隐孢子虫等孢子球虫(抗酸染色)、虫卵、寄生虫、志贺产毒素大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、耶尔森鼠疫杆菌、弯曲杆菌、非霍乱弧菌、邻单胞菌、气单胞菌等)。心理测评采用问卷调查的方式，主要检测是否有心理和精神疾病。最后，确定身心健康的储户才建议实行自体微生物菌群的保存，最好应为身心健康的儿童或未成年人，不健康的储户不建议保存。
2、自体相关部位微生物菌群的采集。采集部位包括口腔、鼻腔、女性生殖道、肠道，采集过程在无菌条件下进行，最好是在GMP100的房间内进行。口腔、鼻腔、生殖道的微生物菌群采用无菌棉签取样，肠道微生物采用专用的粪便取样器进行取样，取样后迅速置于已预先灭菌的厌氧还原液中密封保存。
3、微生物菌群多样性分析。对同批次所得的微生物样品，分别取一个样进行高通量测序，了解其微生物的多样性，并保存记录其检测结果。
4、微生物菌群的保存。将上述所得的微生物样品分装好后放入冻存容器中，密封，编号，并登记，之后立即进行程序是降温，然后放入到-196℃液氮罐中长期保存，或将微生物样品制作成胶囊进行冷冻保存，储存环境定期检测。
5、微生物菌群中益生菌的分离保存。从上述所得的微生物样品中分离纯化得到相关益生菌，如双歧杆菌(Bifidobacterium)、乳酸杆菌(Lactobacill)、拟杆梭菌(Bacteroides)、柔嫩梭菌、脆弱拟杆菌、奇异菌(Atopobium)、普氏菌(Prevotella)等，然后再将这些益生菌分别放入到-196℃液氮罐中长期保存或将微生物样品制作成胶囊进行冷冻保存，储存环境定期检测。
6、建库及库的信息化管理。将样品信息和储户信息匹配后录入计算机数据库，并建立数据库信息检索，按照微生物菌种保藏库标准进行管理。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
