一种气道粘液模型的制备方法
技术领域
本发明属于气道粘液模型领域，特别是涉及一种气道粘液模型的制备方法。
背景技术
气道粘液是由气管、支气管杯状细胞及粘膜下腺体分泌的粘性胶状液体，构成气道表面液体层(AirwaySurfaceLiquid,ASL),覆于气道粘膜表面，起润滑、保湿和气道防护作用，气道粘液是一种非均一、粘弹性的胶状液体，95％以上为水分，黏蛋白是维持其粘弹性的主要成分，分子量在300～32,000之间，是决定气道粘液流变学特征的主要物质。
在现有技术公开了一种气道粘液模型的制备方法，专利号为，CN201410328382.0，该粘液模型的化学组分和物理性质与人气道粘液相匹配。所述模型的配方为：二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)+羟乙基纤维素(HEC)+血清蛋(BSA)+戊二醛(GA)+磷酸盐缓冲液(PBS)。制备方法为：(1)按照要求配置磷酸盐缓冲液；(2)将DPPC溶解在步骤(1)制备好的磷酸盐缓冲液中，磁力搅拌2小时；(3)将BSA、HEC加入到搅拌好的溶液中用垂直混合仪混合数天；(4)将GA加入步骤(3)制得溶液中在一定温度范围内进行交联反应，收集交联后的溶液进行冷冻干燥。本发明工艺简单，成本低廉，无毒害，该粘液模型生物、物理、化学性质与人气道粘液模型匹配，在粘液的保护机制、病理分析、药物输送、基因载体治疗方面至关重要，但是在此专利中所得到的气道粘液模型并没有加入定气道粘液流变学特征的主要物质黏蛋白，到时其和真是的气道粘液相差加大，影响模型用于研究的数据的精准性，而且模型的制备方法并不能对模型内部的成分和水分进行长时间保存，使用时间短。
发明内容
本发明的目的在于提供一种气道粘液模型的制备方法，为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：
一种气道粘液模型的制备方法，由以下重量原料的成分组成：
羟乙基纤维素1g-3g；
二棕榈酰磷脂酰胆碱8g-15g；
血清蛋3g-8g；
黏蛋白6g-10g；
苯扎溴铵10ml-12ml；
磷酸盐缓冲液60ml-90ml；所述黏蛋白为气道的分泌性黏蛋白Mucin5AC、Mucin2或Mucin5B。
优选的，包括以下步骤：
(1)模型材料的制备：将二棕榈酰磷脂酰胆碱和16ml-30ml的去离子水放入容器中进行混合，然后进行5min-10min快速搅拌得到粘稠糊液；
(2)磷酸盐缓冲液的制备：取磷酸氢二钠35.9g，加水溶解，并稀释至500ml得到甲液，取磷酸二氢钠2.76g，加水溶解，并稀释至100ml得到乙液，取上述甲液54.5ml-82.5ml与乙液5.5ml-7.5ml进行混合混合摇匀，得到磷酸盐缓冲液；
(3)模型的制备；将上述步骤(2)中得到的磷酸盐缓冲液加入到上述步骤(1)中的粘稠糊液中，进行高效磁力搅拌2-3小时均匀后，放置反应30min得到模型粘液；
(4)消毒处理：将苯扎溴铵加入到上述步骤(3)中得到的模型粘液中进行搅拌后并放置10min，对模型粘液进行消毒处理；
(5)模型赋予特性：将血蛋清和黏蛋白加入到消毒后的模型粘液中，进行6-8小时的搅拌处理，然后将搅拌处理后的粘液放置在恒温条件下使其诱发交联反应；
(6)模型定型：将羟乙基纤维素加入到上述步骤(5)中交联反应后的黏液中，进行混合，然后将混合后的粘液进行冷冻干燥处理，即得到所需的气道粘液模型。
优选的，所述步骤(2)中得到的磷酸盐缓冲液的PH值为7.8。
优选的，所述步骤(5)的恒温温度为5℃，交联反应时长为2天-3天。
优选的，所述步骤(6)中冷冻时间为1-2小时，干燥时间为常温条件下4-6小时。
本发明具有以下有益效果：
本发明中，通过在气道粘液模型的制备中加入羟乙基纤维素、二棕榈酰磷脂酰胆碱、血清蛋、黏蛋白、苯扎溴铵和磷酸盐缓冲液，然后将其共同制备形成，使得制作出的气道粘液模型更加贴合现实中的气道粘液特征，从而更有利于后续对气道粘液的医学研究分析，并且本气道粘液模型在制备过程中，先混合，再通过苯扎溴铵进行消毒处理，处理后再加入主要贴合人体气道粘液的主要成分进行交联反应，并通过羟乙基纤维素对完后的模型进行外表面封存，使得到的气道粘液模型可以锁住内部要素，使用时间长。
附图说明
图1为本发明的制备方法流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：
一种气道粘液模型的制备方法，由以下重量原料的成分组成：
羟乙基纤维素；
二棕榈酰磷脂酰胆碱；
血清蛋；
黏蛋白；
苯扎溴铵；
磷酸盐缓冲液；所述黏蛋白为气道的分泌性黏蛋白Mucin5AC。
包括以下步骤：
(1)模型材料的制备：将二棕榈酰磷脂酰胆碱和16ml-30ml的去离子水放入容器中进行混合，然后进行5min-10min快速搅拌得到粘稠糊液；
(2)磷酸盐缓冲液的制备：取磷酸氢二钠35.9g，加水溶解，并稀释至500ml得到甲液，取磷酸二氢钠2.76g，加水溶解，并稀释至100ml得到乙液，取上述甲液54.5ml-82.5ml与乙液5.5ml-7.5ml进行混合混合摇匀，得到磷酸盐缓冲液，其中磷酸盐缓冲液的PH值为7.8；
(3)模型的制备；将上述步骤(2)中得到的磷酸盐缓冲液加入到上述步骤(1)中的粘稠糊液中，进行高效磁力搅拌2-3小时均匀后，放置反应30min得到模型粘液；
(4)消毒处理：将苯扎溴铵加入到上述步骤(3)中得到的模型粘液中进行搅拌后并放置10min，对模型粘液进行消毒处理；
(5)模型赋予特性：将血蛋清和黏蛋白Mucin5AC加入到消毒后的模型粘液中，进行6-8小时的搅拌处理，然后将搅拌处理后的粘液放置在5℃恒温条件下使其诱发交联反应2天-3天；
(6)模型定型：将羟乙基纤维素加入到上述步骤(5)中交联反应后的黏液中，进行混合，然后将混合后的粘液进行冷冻干燥处理，冷冻时间为1-2小时，干燥时间为常温条件下4-6小时，即得到所需的气道粘液模型。
实施例二
一种气道粘液模型的制备方法，由以下重量原料的成分组成：
羟乙基纤维素；
二棕榈酰磷脂酰胆碱；
血清蛋；
黏蛋白；
苯扎溴铵；
磷酸盐缓冲液；所述黏蛋白为气道的分泌性黏蛋白Mucin2。
包括以下步骤：
(1)模型材料的制备：将二棕榈酰磷脂酰胆碱和16ml-30ml的去离子水放入容器中进行混合，然后进行5min-10min快速搅拌得到粘稠糊液；
(2)磷酸盐缓冲液的制备：取磷酸氢二钠35.9g，加水溶解，并稀释至500ml得到甲液，取磷酸二氢钠2.76g，加水溶解，并稀释至100ml得到乙液，取上述甲液54.5ml-82.5ml与乙液5.5ml-7.5ml进行混合混合摇匀，得到磷酸盐缓冲液，其中磷酸盐缓冲液的PH值为7.8；
(3)模型的制备；将上述步骤(2)中得到的磷酸盐缓冲液加入到上述步骤(1)中的粘稠糊液中，进行高效磁力搅拌2-3小时均匀后，放置反应30min得到模型粘液；
(4)消毒处理：将苯扎溴铵加入到上述步骤(3)中得到的模型粘液中进行搅拌后并放置10min，对模型粘液进行消毒处理；
(5)模型赋予特性：将血蛋清和黏蛋白Mucin2加入到消毒后的模型粘液中，进行6-8小时的搅拌处理，然后将搅拌处理后的粘液放置在5℃恒温条件下使其诱发交联反应2天-3天；
(6)模型定型：将羟乙基纤维素加入到上述步骤(5)中交联反应后的黏液中，进行混合，然后将混合后的粘液进行冷冻干燥处理，冷冻时间为1-2小时，干燥时间为常温条件下4-6小时，即得到所需的气道粘液模型。
实施例三
一种气道粘液模型的制备方法，由以下重量原料的成分组成：
羟乙基纤维素；
二棕榈酰磷脂酰胆碱；
血清蛋；
黏蛋白；
苯扎溴铵；
磷酸盐缓冲液；所述黏蛋白为气道的分泌性黏蛋白Mucin5B。
包括以下步骤：
(1)模型材料的制备：将二棕榈酰磷脂酰胆碱和16ml-30ml的去离子水放入容器中进行混合，然后进行5min-10min快速搅拌得到粘稠糊液；
(2)磷酸盐缓冲液的制备：取磷酸氢二钠35.9g，加水溶解，并稀释至500ml得到甲液，取磷酸二氢钠2.76g，加水溶解，并稀释至100ml得到乙液，取上述甲液54.5ml-82.5ml与乙液5.5ml-7.5ml进行混合混合摇匀，得到磷酸盐缓冲液，其中磷酸盐缓冲液的PH值为7.8；
(3)模型的制备；将上述步骤(2)中得到的磷酸盐缓冲液加入到上述步骤(1)中的粘稠糊液中，进行高效磁力搅拌2-3小时均匀后，放置反应30min得到模型粘液；
(4)消毒处理：将苯扎溴铵加入到上述步骤(3)中得到的模型粘液中进行搅拌后并放置10min，对模型粘液进行消毒处理；
(5)模型赋予特性：将血蛋清和黏蛋白Mucin2加入到消毒后的模型粘液中，进行6-8小时的搅拌处理，然后将搅拌处理后的粘液放置在5℃恒温条件下使其诱发交联反应2天-3天；
(6)模型定型：将羟乙基纤维素加入到上述步骤(5)中交联反应后的黏液中，进行混合，然后将混合后的粘液进行冷冻干燥处理，冷冻时间为1-2小时，干燥时间为常温条件下4-6小时，即得到所需的气道粘液模型。
本发明中，通过在制作气道粘液模型加入人体气道粘液最主要的成分黏蛋白，且黏蛋白可采取气道的分泌性黏蛋白Mucin5AC、Mucin2或Mucin5B三种形式，使得制造出的气道粘液模型更加贴合现实的气道粘液，过在气道粘液模型的纸杯中加入羟乙基纤维素、二棕榈酰磷脂酰胆碱、血清蛋、黏蛋白、苯扎溴铵和磷酸盐缓冲液，然后将其共同制备形成，使得制作出的气道粘液模型更加贴合现实中的气道粘液特征，从而更有利于后续对气道粘液的医学研究分析，并且本气道粘液模型在制备过程中，先混合，再通过苯扎溴铵进行消毒处理，处理后再加入主要贴合人体气道粘液的主要成分进行交联反应，并通过羟乙基纤维素对完后的模型进行外表面封存，使得到的气道粘液模型可以锁住内部要素，使用时间长。该气道粘液模型研究价值高，制作简易方便。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
