一种或多种酶在防止、抑制或减少表面上微生物生长中的用途
序列表的引用
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技术领域
本发明涉及一种或多种酶在防止、抑制或减少表面上微生物生长中的新颖用途，其中所述微生物在使用所述酶后在所述表面上的TTC可检测时间增加至少20％。本发明还涉及一种防止、抑制或减少这种表面上微生物生长的方法，该方法是通过用酶处理表面至在处理后微生物在所述表面上具有TTC可检测时间增加至少20％的程度。本发明还涉及证明酶在表面上的微生物生长抑制的方法。
背景技术
在家庭住户清洁领域，干燥器通常用于干燥衣服和厨房表面(如盘子)。然而，机器干燥器不是非常环境友好，并且在一些地区(如亚洲)较不可用。当机器干燥无法进行时，通常采用风干这种表面。但是在空气干燥过程中湿度可能引起问题。具体来说，它不仅需要更长的时间来干燥，而且还会引起卫生问题。
在潮湿环境中，如频繁降水的地方，例如具有规律季风季节的地方或全年温暖并且潮湿的区域，微生物像真菌和细菌在如纺织品和厨房用具之类的表面上快速生长。即使在经由如洗衣的常规清洁过程处理表面之后，微生物生长也是一个问题。在这些区域中，由于洗涤的表面本身的湿度和在空气干燥过程中在潮湿空气中的延长的暴露，在洗涤之后表面上微生物生长的问题可能尤其显著。表面上微生物的生长可以被看作是表面上的深色斑点，并且微生物生长可能进一步引起不希望的和令人不愉快的恶臭。
常规地将许多酶掺入洗涤剂组合物中以获得清洁益处。此外，已报道一些酶(包括但不限于淀粉酶)可用于防止、去除或减少表面上的生物膜，参见WO 2008112459 A2(诺维信公司(Novozymes，A/S))，WO 2006/031554(诺维信公司)。除此之外，已报道酶如氧化酶或过氧化物酶可用于抑制洗衣中的微生物以及聚阳离子聚合物在洗涤液中的作用。US 6,287,585 B1，诺维信公司。
然而，没有披露关于酶在防止微生物生长中的用途，该微生物生长在家用表面上引起上述斑点和恶臭问题，特别是在潮湿环境中。因此，本发明的目的是提供这种用途。
发明内容
本发明涉及一种或多种酶在防止、抑制或减少表面上微生物生长中的新颖用途，其中所述微生物在使用所述酶后在所述表面上的TTC可检测时间增加至少20％。
本发明的另一个方面涉及防止、抑制或减少表面上微生物生长的方法，与未用所述酶处理的表面上的那些微生物相比，通过用酶处理表面持续一段预定的时间段，至在酶处理后微生物在所述表面上具有TTC可检测时间增加至少20％的程度。
本发明的另一个方面涉及证明酶或酶组合在表面上的微生物生长抑制或深度清洁益处的方法，该方法包括以下步骤：
a.提供两个表面A和A'，
b.将包含微生物生长指示物的污垢施加到每个表面A和A'上，
c.用不包含酶的洗涤剂组合物洗涤A，并用包含一种或多种酶的所述洗涤剂组合物洗涤A'，
d.准备接种微生物并且将其施加到表面A和A'上，
e.在合适的条件下孵育A和A'以允许微生物生长一段预定的时间段，
f.比较A和A'上微生物的生长。
附图说明
图1涉及两种不同处理的小块布样上的近平滑假丝酵母(Candida Parapsilosis)的PrestoBlue荧光单位检测。
序列表综述
SEQ ID NO:1是蛋白酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:2是蛋白酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:3是蛋白酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:4是蛋白酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:5是蛋白酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:6是蛋白酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:7是蛋白酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:8是蛋白酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:9是淀粉酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:10是淀粉酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:11是淀粉酶的氨基酸序列(WO 2000/060060的SEQ ID NO2)
SEQ ID NO:12是淀粉酶的氨基酸序列(WO 96/023873的SEQ ID NO 2)
SEQ ID NO:13是淀粉酶的氨基酸序列(WO 2008/112459的SEQ ID NO3)
SEQ ID NO:14是枯草杆菌酶的氨基酸序列(WO 2004/067737的SEQ ID NO:1)
SEQ ID NO:15是纤维素酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:16是纤维素酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:17是纤维素酶的氨基酸序列
SEQ ID NO:18是纤维素酶的氨基酸序列
定义
TTC可检测时间：该术语确定当表面上的微生物在原位变得可鉴定的时间，如氯化三苯基四氮唑(TTC)的颜色变化所示。TTC是还原-氧化反应指示物，可用于区分代谢活性和非活性组织/生物体。TTC的颜色是白色的，并且当它被活生物体中的多种脱氢酶经酶促还原成水不溶性TPF(1,3,5-三苯基甲
孢子形成时间：该术语确定当表面上的微生物，特别是真菌通过显微镜观察在原位变得可鉴定的时间。除了上述TTC可检测时间测定之外，这是用于监测表面上微生物生长的另外的工具。孢子形成时间测定方法在孢子具有可掩盖TTC颜色变化的颜色的情况下是优选的。本文后面的段落，特别是测定部分中的“真菌孢子形成时间测定(Fungi SporeFormation Time Assay)”部分，披露了该过程的细节。
孢子密度评分：该术语确定真菌的生长，如由在所述表面上生长的真菌的孢子和/或菌丝体引起的家庭表面上的可见标记所表示的。在0至7的范围内，0表示表面上没有真菌生长，并且7表示表面上的真菌过度生长。对于不同的真菌，孢子的颜色可以不同，但相同的0-7范围可以应用于不同的真菌生长和孢子密度测量。可以训练一组受过训练的小组成员来理解范围，并根据预设程序对每个表面的孢子密度进行评分。
洗涤剂组合物：术语“洗涤剂组合物”是指用于从有待清洁的纺织品(如纺织品)去除不希望的化合物的组合物。该洗涤剂组合物可以用于例如清洁纺织品，用于家用清洁和工业清洁二者。这些术语涵盖选择用于希望的具体类型的洗涤剂组合物和产品的形式(例如，液体、凝胶、粉末、颗粒、糊状、或喷雾组合物)的任何材料/化合物，并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂；织物清新剂；织物柔软剂；以及纺织品和衣物预去污剂/预处理)。除了包含本发明的DNA酶之外，该洗涤剂配制品还可以含有一种或多种另外的酶(如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶、或其任何混合物)，成分如表面活性剂、助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂以及增溶剂。
δ反射值(ΔRem)：本文将术语“δ反射”或“δ反射值”定义为在某一波长处的反射比或反射测量值的结果，该波长典型地是460nm。用一种具有类似颜色的布样，优选一种来自重复洗涤的布样作为背景测量该布样。在洗涤之前，测量代表每种布样类型的布样。δ反射是洗涤的布样的反射值减去未洗涤的布样的反射值。
测量洗涤性能的一种方式是Δ酶性能值(ΔRem酶值)：本文将术语“Δ酶反射值”定义为在460nm处的反射比或反射测量值的结果。用一种具有类似颜色的布样，优选一种来自重复洗涤的布样作为背景测量该布样。在洗涤之前，测量代表每种布样类型的布样。Δ酶反射是在存在酶的洗涤剂中洗涤的小块布样的反射值减去在不存在酶的洗涤剂中洗涤的类似小块布样的反射值。
餐具洗涤是指所有形式的洗涤餐具，例如通过手洗或自动餐具洗涤。洗涤餐具包括但不限于清洁所有形式的餐具，如盘子、杯子、玻璃杯、碗、所有形式的刀叉餐具(如匙、刀、叉)和上菜用具以及陶瓷、塑料(如三聚氰胺)、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯。
餐具洗涤组合物：术语“餐具洗涤组合物”是指旨在用于清洁盘子、餐桌用具、罐、锅、用餐工具的组合物和用于清洁厨房中硬表面区域的所有形式的组合物。本发明不限于任何特定类型的餐具洗涤组合物或任何特定的洗涤剂。
酶洗涤益处：本文中将术语“酶洗涤益处”定义为将酶添加到洗涤剂中与不具有该酶的相同洗涤剂相比的有利效果。可以由酶提供的重要洗涤益处是污渍去除伴随在洗涤和/或清洁之后无可见污垢或可见污垢非常少、防止或减少在洗涤过程中所释放的污垢再沉积(又称作抗再沉积的效果)、完全或部分地恢复纺织品的白度(又称作白化的效果)，该纺织品最初是白色的，但是在反复使用和洗涤后获得淡灰或淡黄色外观。不直接与催化污渍去除或防止污垢再沉积相关的纺织品护理益处对于酶洗涤益处而言也是重要的。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一织物转移至另一织物或同一织物的另一部分(也被称作染料转移抑制或抗返染的效果)，从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球或绒毛(也被称作抗起球的效果)，改善织物柔软性，织物的颜色澄清以及去除陷在织物或服装的纤维中的微粒状污垢。酶漂白是另一种酶洗涤益处，其中通常将催化活性用于催化漂白组分(如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。
硬表面清洁：本文将术语“硬表面清洁”定义为清洁硬表面，其中硬表面可以包括地板、桌子、墙壁、屋顶等，连同硬物体的表面，如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤)。餐具洗涤包括但不限于，清洁盘子、杯子、玻璃杯、碗、用餐工具(如匙、刀、叉)、上菜用具、陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯。
洗衣涉及家庭洗衣和工业洗衣，并且意指一种用含有洗涤剂组合物的溶液处理纺织品和/或织物的过程。洗衣过程可以例如使用例如家用或工业洗涤机器进行或可以手动进行。
过氧化物酶/氧化酶：根据本发明的过氧化物酶是由酶分类EC 1.11.1.7囊括的由国际生物化学和分子生物学联盟命名委员会(IUBMB)规定的酶，或来源于其中的展示出过氧化物酶活性的任何片段。
蛋白酶在本文中定义为水解肽键的酶。它包括属于EC 3.4酶组的任何酶(包括其13个亚类中的每一个)。EC编号参考加利福尼亚州(California)的圣迭戈(San Diego)的NC-IUBMB，学术出版社[Academic Press]的1992年酶命名法，分别包括出版于以下中的增刊1-5：Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]1223:1-5(1994)；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]232:1-6(1995)；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]237:1-5(1996)；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]250:1-6(1997)；和Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]264:610-650(1999)。洗涤剂工业如衣物和餐具洗涤中最广泛使用的蛋白酶是丝氨酸蛋白酶或丝氨酸肽酶，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸肽酶是以下蛋白酶的亚组，这些蛋白酶特征在于在活性位点具有丝氨酸，该丝氨酸与底物形成共价加合物。另外，枯草杆菌酶(以及丝氨酸蛋白酶)的特征为除了丝氨酸以外，还具有两个活性位点氨基酸残基，即组氨酸残基和天冬氨酸残基。枯草杆菌酶是指根据斯Siezen等人,1991,Protein Engng.[蛋白质工程]4:719-737和Siezen等人,1997,Protein Science[蛋白质科学]6:501-523的丝氨酸蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以划分为6个亚部，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶(Thermitase)家族、蛋白酶K家族、羊毛硫抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。术语“蛋白酶活性”意指蛋白水解活性(EC3.4)。可用于洗涤剂的蛋白酶主要是内肽酶(EC 3.4.21)。存在若干种蛋白酶活性类型：三种主要活性类型是：胰蛋白酶样，其中在P1处的Arg或Lys之后存在酰胺底物的裂解，胰凝乳蛋白酶样，其中在P1处的一个疏水性氨基酸之后发生裂解，和弹性蛋白酶样，其中在P1处的Ala之后发生裂解。
序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The EuropeanMolecular Biology Open Software Suite[EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件]，Rice等人，2000，Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的尼德尔曼-翁施(Needleman-Wunsch)算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。使用尼德尔标记的“最长同一性”的输出(使用非简化(-nobrief)选项获得)作为同一性百分比并且如下计算：(同一的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)。出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EM-BOSS:The European Molecular BiologyOpen Software Suite[EM-BOSS：欧洲分子生物学开放软件套件]，Rice等人，2000，同上)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德尔曼-翁施算法(Needleman和Wunsch，1970，同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)取代矩阵。使用尼德尔标记的“最长同一性”的输出(使用非简化(-nobrief)选项获得)作为同一性百分比并且如下计算：
(同一的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
残留污渍：该术语意指清洁后未从家庭表面完全去除的污渍。可能存在不同水平的残留污渍，并且就表面清洁度而言，它们可以从最佳至最差排列，其中1是最好的。评级：1＝完全去除，2＝非常好(可接受)，3＝非常好(边界线)，4＝差(不可接受)，5＝没有去除(与原始相同)。在某些情况下，可以制作视觉符号以指定残留污渍的等级。这里，在本发明的文本中，残留污渍包括排在从2至5的污渍。在本发明的上下文中的污渍可以来自各种来源，包括但不限于淀粉污渍、蛋白质污渍、直链淀粉污渍、基于脂质的污渍；食物污渍；饮料污渍、环境污渍、工作场所污渍等。
纺织品：术语“纺织品”意指任何纺织品材料，该任何纺织品材料包括纱线、纱线中间体、纤维、非机织材料、天然材料、合成材料、以及任何其他纺织品材料，由这些材料制成的织物和由织物制成的产品(例如，服装和其他制品)。该纺织品或织物可以处于针织品、机织物、牛仔布、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布的形式。该纺织品可以是基于纤维素的，如天然纤维素制品，包括棉、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维，或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括粘胶纤维/人造丝、乙酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。纺织品或织物也可以不基于纤维素，如天然聚酰胺，包括羊毛、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝，或合成聚合物如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯和氨纶/弹性纤维(spandex/elastane)、或其共混物以及基于纤维素和不基于纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶纤维与一种或多种伴随材料的共混物，该伴随材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)和/或含纤维素的纤维(例如人造丝/粘胶纤维、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、乙酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是常规的可洗涤衣物，例如染污的家用衣物。当使用术语织物或衣服时，旨在还包括广义术语纺织品。在本发明的上下文中，术语“纺织品”可与织物和布料互换使用。
变体意指具有酶活性的多肽，但其与亲本酶或参考酶相比，在一个或多个(例如，若干个)位置处包含改变(即，取代、插入和/或缺失)。取代意指用不同的氨基酸替代占用某一位置的氨基酸；缺失意指去除占用某一位置的氨基酸；并且插入意指邻近于并且紧跟着占据一个位置的氨基酸之后添加一个或多个(例如，若干个)氨基酸(例如，1、2、3、4或5个氨基酸)。
洗涤液：本文将术语“洗涤液”定义为任选地包括酶的水和洗涤剂组分的溶液或混合物。
恶臭：关于术语“恶臭”意指不希望的气味。恶臭的实例包括具有令人不愉快的气味的化合物，该化合物可以是通过微生物产生的。这些微生物可以来自人体或动物体，洗涤机器的内部空间，或来自环境的其余部分。这种令人不愉快的气味化合物的一些实例是己醛(草味)，3-辛酮(霉味和发霉)，2,3-丁二酮(石龙子味)，苯腈(像杏仁的气味)，苯(像汽油的气味)或甲苯(刺激性，像苯的气味)。
具体实施方式
本发明涉及酶用于防止、抑制或减少表面上微生物的生长的用途，例如，纺织品。风干的纺织品暴露于各种微生物，这些微生物可以在纺织品上茁壮生长和定殖。微生物生长和表面可以被看作是深色污渍和/或如发霉、潮湿或令人不愉快的气味的恶臭。
在一方面，本发明涉及一种或多种酶在防止、抑制或减少表面上微生物生长中的用途，其中在所述表面上使用所述酶后，所述微生物的TTC可检测时间增加至少20％。延长的TTC可检测时间显示在这样的表面上使用酶可以防止、抑制或减少微生物的生长。
在一方面，该TTC可检测时间增加至少30％。
在一方面，该TTC可检测时间增加至少40％。
在一方面，该TTC可检测时间增加至少50％。
在一方面，该TTC可检测时间增加至少70％。
在一方面，该TTC可检测时间增加至少80％。
在一方面，该TTC可检测时间增加至少100％。
当微生物是真菌时，在表面上使用酶用于防止微生物生长的效果可以作为孢子形成时间的增加被测量。在一方面，该微生物是真菌，并且在所述表面上使用所述酶之后，与用酶处理的表面上的孢子形成时间相比，真菌孢子形成时间增加至少20％。在这些表面上使用酶后延长的孢子形成时间也显示微生物的生长被阻止、抑制或减少。
在一方面，该TTC可检测时间增加至少30％。
在一方面，该孢子形成时间增加至少40％。
在一方面，该孢子形成时间增加至少50％。
在一方面，该孢子形成时间增加至少70％。
在一方面，该孢子形成时间增加至少80％。
在一方面，该孢子形成时间增加至少100％。
当微生物是真菌时，在表面上使用酶用于防止微生物生长的效果可以作为孢子密度的降低被测量。一个方面涉及一种或多种酶用于防止表面上微生物生长的用途，其中该微生物是真菌，并且其中当与未用酶处理的表面的孢子密度相比，孢子密度按从0至7的密度标度计降低至少为1。
在另一方面，该孢子密度评分的降低至少为2。
在另一方面，该孢子密度评分的降低至少为3。
在另一方面，该孢子密度评分的降低至少为4。
在另一方面，该孢子密度评分的降低至少为5。
在另一方面，该孢子密度评分的降低至少为6。
残留的污渍通常为微生物提供营养以使其在表面上存活并且茁壮生长。不受理论束缚，据信酶通过去除或减少表面上的残留污渍而部分起作用。
本发明的一个方面涉及一种或多种酶用于防止表面上微生物生长的用途，其中所述微生物生长在所述表面的残留污渍区域上。
在一方面，本发明进一步涉及一种或多种酶在抑制或减少由纺织品表面上的微生物引起的恶臭中的用途。
在一方面，本发明进一步涉及一种或多种酶在防止或减少微生物附着到纺织品表面上的用途。已知某些纤维素酶为被清洗的纺织品提供颜色护理和白度改善益处。但尚不知纤维素酶是否可用于防止或减少微生物。不受理论束缚，据信绒球和受损纤维更易于转化为无定形，纤维素酶去除织物表面上形成的绒球和受损纤维，并且一些纤维素酶在水解无定形纤维素方面非常有效，并且由此纤维的这些区域被酶法去除。去除这些绒球和受损纤维可能有助于防止或减少可附着在其上的微生物，除了其他未知因素之外。
通过使用本发明中的酶靶向的微生物可以是在热和潮湿的环境中倾向于在家庭表面上相对快速繁殖的那些微生物。它可以是真菌或细菌。在一方面，该微生物是选自下组的真菌或细菌，该组由以下组成：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肺炎克雷白氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia coli)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、滕黄微球菌(Micrococcusluteus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、栖水菌(Enhydrobacteraerosaccus)、杰氏棒杆菌(Corynebacterium jeikeium)、痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)、泡囊短波单胞菌(Brevundimonas vesicularis)、灰链丝菌(Streptomyces griseus)、土味链霉菌(Streptomyces odorifer)、暗色砖样外瓶霉(Exophiala phaeomuriformis)、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)、交链格孢菌(Alternaria alternate)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、烟曲霉(Aspergillusfumigatus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、出芽短梗霉菌(Aureobasidium pullulans)、球毛壳菌(Chaetomium globosum)、球孢枝孢菌(Cladosporium sphaerospermum)、绿粘帚霉(Gliocladium virens)、毛霉菌(Mucor plumbeus)、产黄青霉(Penicilliumchrysogenum)、普通青霉(Penicillium commune)、皮落青霉(Penicillium crustosum)、产红青霉(Penicillium rubens)、变异青霉(Penicillium varians)、纸葡萄穗霉菌(Stachybotrys chartarum)、绿色木霉(Trichoderma viride)、红色毛癣菌(Trichophytonrubrum)、近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、粘质红酵母(Rhodotorulamucilaginosa)、汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)、季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)、白色念珠菌(Candida albicans)、及其组合。
在一方面，该微生物是真菌，并且优选地黑曲霉。
在一方面，该微生物是细菌，并且优选大肠杆菌或恶臭假单胞菌。
可用于本发明的酶可选自下组，该组由以下组成：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、及其组合。
在一方面，该酶是淀粉酶或蛋白酶。
在一方面，该酶不是氧化酶或过氧化物酶。
在一方面，该酶是淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶或其组合。
在一方面，本发明进一步涉及一种或多种酶在防止或减少微生物附着到纺织品表面上的用途。
本发明的酶
可以将可用于本发明的酶以对应于以下的量添加至洗涤剂组合物中：每升的洗涤液0.001-200mg的蛋白质，如0.005-100mg的蛋白质，优选地0.01-50mg的蛋白质，更优选地0.05-20mg的蛋白质，甚至更优选地0.1-10mg的蛋白质。
可用于本发明的一种或多种酶可以使用常规的稳定剂稳定，这些稳定剂例如为多元醇(如丙二醇或甘油)、糖或糖醇、乳酸、硼酸、或硼酸衍生物(例如，芳族硼酸酯、或苯基硼酸衍生物(如4-甲酰苯基硼酸))，并且该组合物可以如(例如)WO 92/19709和WO 92/19708中所述进行配制。
蛋白酶
适合的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选的是微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。它可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如M4家族的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，如来自M5、M7或M8家族的那些。
术语“枯草杆菌酶”是指根据Siezen等人，Protein Engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和Siezen等人，Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是通过在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸来表征的蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。
枯草杆菌酶的实例是源自芽孢杆菌属的那些，如描述于US 7262042和WO 09/021867中的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌；和描述于WO 89/06279中的枯草杆菌蛋白酶lentus、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 92/175177、WO 01/016285、WO02/026024和WO02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属蛋白酶(描述于WO 89/06270、WO 94/25583和WO 05/040372中)，以及来源于纤维单胞菌(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。
另外优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如描述于例如WO95/23221中)、及其变体(描述于WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中)。
金属蛋白酶的实例是如描述于WO07/044993(杰能科国际有限公司(GenencorInt.))中的中性金属蛋白酶，如来源于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的那些。适合的可商购蛋白酶包括以下列商标名出售的那些：
在一方面，可用于本发明的该蛋白酶选自下组，该组由以下组成：
a)具有SEQ ID NO:1-8、14中任一个的氨基酸序列的多肽；
b)与SEQ ID NO:1-8中任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的多肽；
及其组合。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:1或2、3、4、5、6、7、8或14具有至少60％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8或14具有至少65％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8或14具有至少70％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8或14具有至少75％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8或14具有至少80％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8或14具有至少85％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8或14具有至少90％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8或14具有至少95％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8或14具有至少96％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8或14具有至少97％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8或14具有至少98％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8或14具有至少99％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是选自下组的肽，该组由以下组成：
i)蛋白酶，该蛋白酶包含与SEQ ID NO 1或SEQ ID NO 2中示出的蛋白酶相比在以下一个或多个位置的取代：3、4、9、15、24、27、42、55、59、60、66、74、85、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、126、127、128、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、189、193、198、199、200、203、206、211、212、216、218、226、229、230、239、246、255、256、268和269，其中该位置对应于SEQ ID NO 1中示出的蛋白酶的位置，或
ii)蛋白酶亲本的一种或多种蛋白酶变体，其中该蛋白酶变体包含一种或多种选自下组的突变，该组由以下组成：S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、S24G、S24R、K27R、N42R、S55P、G59E、G59D、N60D、N60E、V66A、N74D、N85S、N85R、G96S、G96A、S97G、S97D、S97A、S97SD、S99E、S99D、S99G、S99M、S99N、S99R、S99H、S101A、V102I、V102Y、V102N、S104A、G116V、G116R、H118D、H118N、N120S、S126L、P127Q、S128A、S154D、A156E、G157D、G157P、S158E、Y161A、R164S、Q176E、N179E、S182E、Q185N、A188P、G189E、V193M、N198D、V199I、Y203W、S206G、L211Q、L211D、N212D、N212S、M216S、A226V、K229L、Q230H、Q239R、N246K、N255W、N255D、N255E、L256E、L256D、T268A和R269H，其中该位置对应于SEQ ID NO 1中示出的蛋白酶的位置，其中该蛋白酶亲本选自SEQ ID NO 1中示出的蛋白酶和SEQ ID NO 2中示出的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolichenifaciens)蛋白酶(BPN')，并且其中该蛋白酶变体与SEQ IDNO 1具有至少80％序列同一性或与SEQ ID NO 2具有80％序列同一性，
iii)蛋白酶，该蛋白酶包含与SEQ ID NO 48中示出的蛋白酶相比在对应于SEQ IDNO:14的位置171、173、175、179或180的一个或多个位置的取代，其中该蛋白酶变体与SEQID NO 14具有至少75％但小于100％的序列同一性，
iv)蛋白酶，该蛋白酶包含SEQ ID NO 1或2中示出的氨基酸序列，或蛋白酶，该蛋白酶与包含SEQ ID NO 1的氨基酸1-269的多肽或包含SEQ ID NO 2的氨基酸1-275的多肽具有至少80％序列同一性，
v)一种或多种选自下组的以下蛋白酶变体：
SEQ ID NO 1，具有改变T22R+S99G+S101A+V102I+A226V+Q239R，
SEQ ID NO 2，具有改变S24G+S53G+S78N+S101N+G128A+Y217Q，
SEQ ID NO 2，具有改变S24G+S53G+S78N+S101N+G128S+Y217Q，
SEQ ID NO 1，具有改变S9E+N42R+N74D+V199I+Q200L+Y203W+S253D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有S9E+N42R+N74D+H118V+Q176E+A188P+V199I+Q200L Y203W+S250D+S253D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有S9E+N42R+N74D+Q176E+A188P+V199I+Q200L+Y203W S250D+S253D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有S3V+N74D+H118V+Q176E+N179E+S182E+V199I+Q200L Y203W+S210V+S250D+S253D+N255W+L256E
SEQ ID NO 1，具有改变T22A+N60D+S99G+S101A+V102I+N114L+G157D+S182D+T207A+A226V+Q239R+N242D+E265F，
SEQ ID NO 1，具有改变S9E+N42R+N74D+H118V+Q176E+A188P+V199I+Q200L+Y203W+S250D+S253D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有改变S9E+N42R+N74D+Q176E+A188P+V199I+Q200L+Y203W+S250D+S253D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有改变S9E+N42R+N74D+H118V+Q176E+A188P+V199I+Q200L+Y203W+S250D+N255W+L256E+*269aH+*269bH，
SEQ ID NO 1，具有改变S3V+N74D+H118V+Q176E+N179E+S182E+V199I+Q200L+Y203W+S210V+S250D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有改变S9E+N74D+G113W+G157P+Q176E+V199I+Q200L+Y203W+S250D+T254E+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有改变S3V+S9R+N74D+H118V+Q176E+N179E+S182E+V199I+Q200L+Y203W+S212V+S250D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有改变S99E，和
SEQ ID NO 2，具有改变L217D，
及其组合。
淀粉酶：
可以与可用于本发明的酶起一使用的适合的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以具有细菌或真菌来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。
淀粉酶可以包括例如从芽孢杆菌属(Bacillus)，例如地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获得的α-淀粉酶。
合适的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:3具有90％序列同一性的变体。优选的变体描述于WO94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，如在一个或多个以下位置中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408以及444。
不同的合适的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。
其他合适的淀粉酶是包括示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列同一性的变体。此杂合α-淀粉酶的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209以及Q264。包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下取代的那些：
M197T；
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
另外的合适的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216以及K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些。
可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304、以及476，使用WO 96/023873的SEQ ID 2用于编号。更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位置(如181和182、182和183、或位置183和184)中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476中的一个或多个中具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO01/66712中的SEQID NO:10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列同一性或与WO 01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％序列同一性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211以及264。
另外的合适的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:2具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:2的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端截短和/或取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444以及G475。SEQ ID NO:2的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183处具有缺失的那些。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是在以下位置具有取代的那些：
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C-末端截短的，并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
另外的适合的淀粉酶是具有WO13184577中的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQ IDNO:1具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1的优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：K176、R178、G179、T180、G181、E187、N192、M199、I203、S241、R458、T459、D460、G476和G477。SEQ ID NO:1的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些：K176L、E187P、N192FYH、M199L、I203YF、S241QADN、R458N、T459S、D460T、G476K、以及G477K，和/或在位置R178和/或S179或T180和/或G181中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是在以下位置具有取代的那些：
E187P+I203Y+G476K
E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K
其中这些变体任选地进一步包含在位置241处的取代和/或在位置178和/或位置179处的缺失。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 10104675中的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQID NO:1具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1的优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：N21、D97、V128、K177、R179、S180、I181、G182、M200、L204、E242、G477和G478。SEQ ID NO:1的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些：N21D、D97N、V128I、K177L、M200L、L204YF、E242QA、G477K、以及G478K，和/或在位置R179和/或S180或I181和/或G182中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是在以下位置具有取代的那些：
N21D+D97N+V128I
其中这些变体任选地进一步包含在位置200处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
其他合适的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12中的以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和R458K的变体，以及另外在一个或多个选自下组的位置处具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345以及A339，最优选的是另外在所有这些位置处具有取代的变体。
其他的实例是淀粉酶变体，如在WO 2011/098531、WO 2013/001078、和WO 2013/001087中所描述的那些。
可商购的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、Stainzyme TM、StainzymePlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X、Amplify
在一方面，该淀粉酶选自下组，该组由以下组成：
i)变体，该变体在以下位置包含一个或多个取代：9、26、30、33、82、37、106、118、128、133、149、150、160、178、182、186、193、195、202、203、214、231、256、257、258、269、270、272、283、295、296、298、299、303、304、305、311、314、315、318、319、320、323、339、345、361、378、383、419、421、437、441、444、445、446、447、450、458、461、471、482、484，其中该位置对应于SEQ ID NO 11的位置；
ii)变体，该变体展现出与SEQ ID NO 12至少90％同一性、在位置183和184处具有缺失，
iii)变体，该变体展现出与SEQ ID NO 13至少95％同一性、包含在以下一个或多个位置处的突变：M202、M208、S255、R172和/或M261，
iv)多肽，该多肽包含SEQ ID NO:9或10中示出的氨基酸序列，
v)多肽，该多肽与SEQ ID NO:9或10具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性，
及其组合。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:9或10具有至少60％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:9或10具有至少65％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:9或10具有至少70％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:9或10具有至少75％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:9或10具有至少80％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:9或10具有至少85％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:9或10具有至少90％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:9或10具有至少95％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:9或10具有至少96％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:9或10具有至少97％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:9或10具有至少98％序列同一性的肽。
在一方面，该蛋白酶是与SEQ ID NO:9或10具有至少99％序列同一性的肽。
纤维素酶-具有纤维素酶活性的多肽
术语“纤维素酶”表示水解纤维素的酶。在本发明的优选的实施例中，该纤维素酶是内切葡聚糖酶。本文中术语“纤维素酶活性”定义为催化β-1,4-葡聚糖(纤维素)中1,4-β-D-糖苷键的水解的酶。出于本发明的目的，纤维素酶活性使用AZCL-HE-纤维素(来自麦格酶公司(Megazyme))作为反应底物来确定，如测定IV中示出的。合适的纤维素酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳菌属、支顶孢属的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。
尤其合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例是如描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及WO 99/001544中的那些纤维素酶变体。
其他纤维素酶是具有以下序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶，该序列与WO2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％同一性，或家族44木葡聚糖酶，该木葡聚糖酶具有以下序列，该序列与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60％同一性。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM、和CarezymeTM(诺维信公司)、CarezymePremiumTM(诺维信公司)、CellucleanTM(诺维信公司)、Celluclean ClassicTM(诺维信公司)、CellusoftTM(诺维信公司)、WhitezymeTM(诺维信公司)、ClazinaseTM、和Puradax HATM(杰能科国际有限公司(Genencor International Inc.))、和KAC-500(B)TM(花王株式会社(Kao Corporation))、RevitalenzTM1000、RevitalenzTM2000、RevitalenzTM3000(杜邦公司)。
在本发明的一方面，涉及一种或多种酶在防止或减少微生物附着到纺织品表面上的用途，其中该酶是纤维素酶。
在本发明的一方面，涉及一种或多种酶在抑制或减少由纺织品表面上的微生物引起的恶臭中的用途，其中该酶是纤维素酶。
在本发明的一方面，可用于本发明的该纤维素酶包含具有纤维素酶活性的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在本发明的一方面，该清洁组合物包含具有纤维素酶活性的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:15至少70％、更优选地至少75％、更优选地至少80％、更优选地至少85％、更优选地至少90％、更优选地至少95％、更优选地至少96％、甚至更优选地至少97％、最优选地至少98％、或甚至最优选地至少99％同一性的氨基酸序列。
在本发明的一方面，可用于本发明的该淀粉酶包含具有纤维素酶活性的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在本发明的一方面，该清洁组合物可以包含具有纤维素酶活性的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:16至少70％、更优选地至少75％、更优选地至少80％、更优选地至少85％、更优选地至少90％、更优选地至少95％、更优选地至少96％、甚至更优选地至少97％、最优选地至少98％、或甚至最优选地至少99％同一性的氨基酸序列。
在本发明的一方面，可用于本发明的该淀粉酶包含具有纤维素酶活性的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在本发明的一方面，该清洁组合物包含具有纤维素酶活性的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:17至少70％、更优选地至少75％、更优选地至少80％、更优选地至少85％、更优选地至少90％、更优选地至少95％、更优选地至少96％、甚至更优选地至少97％、最优选地至少98％、或甚至最优选地至少99％同一性的氨基酸序列。
在本发明的一方面，可用于本发明的该淀粉酶包含具有纤维素酶活性的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在本发明的一方面，该清洁组合物包含具有纤维素酶活性的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:18至少70％、更优选地至少75％、更优选地至少80％、更优选地至少85％、更优选地至少90％、更优选地至少95％、更优选地至少96％、甚至更优选地至少97％、最优选地至少98％、或甚至最优选地至少99％同一性的氨基酸序列。
洗涤剂组合物
在一方面，本发明涉及一种或多种包含在洗涤剂组合物中的酶在防止、抑制或减少表面上微生物生长中的用途，其中在使用所述酶后，在所述表面上的所述微生物的TTC可检测时间增加至少20％、至少30％、至少50％、至少70％、至少80％、或至少100％。
包含可用于本发明的酶的洗涤剂组合物可包含一种或多种另外的清洁组合物组分。另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所述的示例性非限制性组分。
对于纺织品护理，组分的选择可以包括以下考虑：有待清洁的纺织品的类型、污物的类型和/或程度、进行清洁时的温度以及洗涤剂产品的配制。尽管根据具体的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，组分可以包含另外的功能性。
在一方面，本发明涉及包含在ADW(自动餐具洗涤)组合物中的一种或多种酶与一种或多种另外的ADW组合物组分组合的用途。另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所述的示例性非限制性组分。
在一方面，本发明涉及基本上不包含杀生物剂的洗涤剂组合物。据信，通过至少部分地用酶替代杀生物剂从而减少对杀生物剂的需要，可以至少部分地防止杀生物剂对环境带来的较小伤害。
在一方面，本发明涉及一种或多种酶在防止、抑制或减少表面上微生物生长中的用途，其中所述微生物生长在所述表面的残留污渍区域上。不受理论束缚，据信残留污渍可以作为微生物生长所依赖的营养物，如碳源和氮源。
在一方面，本发明涉及一种或多种酶在防止、抑制或减少表面上微生物生长中的用途，其中该表面可以是硬表面或软表面，如织物/纺织品表面。
在一方面，该表面是由天然纤维、合成纤维或其混合物制成的纺织品。
在一方面，该表面由棉、聚酯或其共混物制成。
在一方面，该表面是多孔表面，如海绵。
在一方面，该表面是硬表面，如厨房台面，案板等。
表面活性剂
该洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子型和/或阳离子型和/或非离子型和/或半极性型和/或兼性离子型、或其混合物。在具体方面中，该洗涤剂组合物包含一种或多种非离子型表面活性剂和一种或多种阴离子型表面活性剂的混合物。该一种或多种表面活性剂典型地以按重量计从约0.1％至60％(如约1％至约40％、或约3％至约20％、或约3％至约10％)的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择该一种或多种表面活性剂，并且该一种或多种表面活性剂可以包括本领域中已知的任何常规表面活性剂。
当包括在其中时，该洗涤剂通常将会含有按重量计约1％至约40％的阴离子表面活性剂，如约5％至约30％，包括从约5％至约15％，或从约15％至约20％，或从约20％至约25％的阴离子型表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，具体地，直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸盐(皂)、及其组合。
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常包含按重量计从约1％至约40％的阳离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、酯季铵及其组合。
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.2％至约40％的非离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、以及可以商品名SPAN和TWEEN获得的产品、及其组合。
当包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.5％至约50％、优选地从约1％至约25％的半极性表面活性剂。半极化表面活性剂的非限制性实例包括胺氧化物(AO)，如烷基二甲胺氧化物、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲胺氧化物和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)胺氧化物，及其组合。
当包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.5％至约50％、优选地从约1％至约25％的兼性离子型表面活性剂。两性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱，如烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱、及其组合。
水溶助剂
洗涤剂可以包含按重量计0-10％，例如按重量计0-5％，例如约0.5％至约5％、或约3％至约5％的水溶助剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠及其组合。
助洗剂和共助洗剂
该洗涤剂组合物可以包含按重量计约0-65％，如约5％至约50％的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具洗涤洗涤剂中，助洗剂的水平典型地是40％-65％、特别是50％-65％。助洗剂和/或共助洗剂可以具体是形成具有Ca和Mg的水溶性络合物的螫合剂。可以利用本领域已知的用于在衣物/ADW/硬表面清洁洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐如碳酸钠、可溶性硅酸盐如偏硅酸钠、层状硅酸盐(如，来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA，也称为2,2’-亚氨基二乙-1-醇)、三乙醇胺(TEA，也称为2,2’,2”-次氮基三乙-1-醇)、以及(羧甲基)菊粉(CMI)、及其组合。
该洗涤剂组合物还可以包含按重量计0-50％，如约5％至约30％的洗涤剂共助洗剂。洗涤剂组合物可以包括单独的共助洗剂、或与助洗剂如沸石助洗剂组合的共助洗剂。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂(如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和磷酸盐)、以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二丁二酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N”-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)及其组合和盐。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中。
漂白系统
该洗涤剂组合物可以包含按重量计0-30％，如约1％至约20％的漂白系统。可以利用包含本领域已知的用于在清洁洗涤剂中使用的组分的任何漂白系统。适合的漂白系统组分包括过氧化氢源；过酸源；和漂白催化剂或增效剂。
·过氧化氢源
合适的过氧化氢源是无机过酸盐，包括碱金属盐如过碳酸钠和过硼酸钠(通常是一水合物或四水合物)，以及过氧化氢-尿素(1/1)。
·过酸源
过酸可以是(a)直接作为预形成过酸掺入，或(b)从过氧化氢和漂白活化剂(过水解)在洗涤液中原位形成，或(c)从过氧化氢和过氧化氢酶和后者适合的底物(例如酯)在洗涤液中原位形成。
a)适合的预形成过酸包括但不限于过氧羧酸(如过氧苯甲酸)及其环取代的衍生物、过氧-α-萘甲酸、过氧邻苯二甲酸、过氧月桂酸、过氧硬脂酸、ε-邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸[邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸(PAP)]、和邻-羧基苯甲酰氨基过氧己酸；脂族和芳族二过氧二羧酸，如二过氧十二烷二酸、二过氧壬二酸、二过氧癸二酸、二过氧巴西基酸、2-癸基二过氧丁二酸、以及二过氧邻苯二甲酸、-间苯二甲酸和-对苯二甲酸；过亚氨酸；过氧单硫酸；过氧二硫酸；过氧磷酸；过氧硅酸；以及所述化合物的混合物。应理解的是，在一些情况下，所提到的过酸可能最好是作为适合的盐的添加，如碱金属盐(例如
b)适合的漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺、腈类或酸酐类别的那些，以及适用时，其盐。适合的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸钠(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸钠、4-(癸酰基氧基)苯甲酸(DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸钠(NOBS)、和/或披露于WO 98/17767中的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP 624154中并且在该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋精)具有它们是环境友好的优点。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋精在存储时在产品中具有良好的水解地稳定性，并且是有效的漂白活化剂。最后，ATC是多功能的，因为在过水解反应中释放的柠檬酸盐可以作为助洗剂起作用。
·漂白催化剂和增效剂
该漂白系统还可以包括漂白催化剂或增效剂。可以用于本发明组合物中的漂白催化剂的一些非限制性实例包括草酸锰、乙酸锰、锰胶原、钴-胺催化剂和锰三氮杂环壬烷(MnTACN)催化剂；特别优选锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me3-TACN)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me4-TACN)的络合物，具体地是Me3-TACN，如双核锰络合物[(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2、和[2,2',2”-次氮基三(乙烷-1,2-二基氮烷基亚基-κN-甲基亚基)三酚并-κ3O]锰(III)。这些漂白催化剂还可以是其他金属化合物，如铁或钴络合物。
在其中过酸的来源包括在内的一些实施例中，可以使用具有下式之一的有机漂白催化剂或漂白增效剂：
(i)
(ii)
(iii)及其混合物；其中每个R1独立地是含有从9至24个碳的支链烷基或含有从11至24个碳的直链烷基，优选地每个R1独立地是含有从9至18个碳的支链烷基或含有从11至18个碳的直链烷基，更优选地每个R1独立地选自下组，该组由以下组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。
其他示例性漂白体系描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259、EP 1867708(维生素K)以及WO 2007/087242中。适合的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌或酞菁铝。
聚合物
洗涤剂可以含有按重量计0-10％(如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％)的聚合物。可以利用本领域中已知的在洗涤剂中使用的任何聚合物。该聚合物可以作为如上文提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或抑泡特性。一些聚合物可以具有多于一种的上文提到的特性和/或多于一种的下文提到的基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧酸酯(如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物)、疏水修饰的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO2006/130575中。还考虑了以上提到的聚合物的盐。
织物调色剂
这些洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，如当配制在洗涤剂组合物中时，可以在织物与包含所述洗涤剂组合物的洗涤液接触时沉积在所述织物上并且因此通过可见光吸收/反射来改变所述织物色彩的染料或色素。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时，它们改变表面的色彩。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括色素。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料，该组由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物，例如于WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO 2005/03276和EP1876226中所描述的(将其通过引用而特此结合)。洗涤剂组合物优选地包含从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包含从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。适合的调色剂还披露于例如WO2007/087257和WO 2007/087243中。
酶
洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可以包含一种或多种另外的酶，如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶，例如漆酶、和/或过氧化物酶。
一般而言，一种或多种所选酶的特性应与选定的洗涤剂相容(即，最适pH，与其他酶和非酶成分的相容性，等)，并且该一种或多种酶应以有效量存在。
纤维素酶
合适的纤维素酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳菌属、支顶孢属的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。
特别合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例是如描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及WO 99/001544中的那些纤维素酶变体。
其他纤维素酶是具有以下序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶，该序列与WO2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％同一性，或家族44木葡聚糖酶，该木葡聚糖酶具有以下序列，该序列与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60％同一性。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM、和CarezymeTM(诺维信公司)、CarezymePremiumTM(诺维信公司)、CellucleanTM(诺维信公司)、Celluclean ClassicTM(诺维信公司)、CellusoftTM(诺维信公司)、WhitezymeTM(诺维信公司)、ClazinaseTM、和Puradax HATM(杰能科国际有限公司)、和KAC-500(B)TM(花王株式会社)。
适合的纤维素酶包括细菌或真菌来源的完整纤维素酶或单组分内切葡聚糖酶。包括化学或基因修饰的突变体。该纤维素酶可以，例如，是通常就称为内切葡聚糖酶的单-组分的内切-1,4-β-葡聚糖酶的单-组分或混合物。适合的纤维素酶包括真菌纤维素酶，该真菌纤维素酶来自特异腐质霉(US4,435,307)或来自木霉属，例如里氏木霉或绿色木霉。纤维素酶的实例在EP 0 495 257进行了描述。其他适合的纤维素酶来自梭孢壳菌属，例如如在WO 96/29397中描述的土生梭孢壳霉或如在WO 91/17244中描述的尖孢镰孢，或者来自如在WO 02/099091和JP 2000210081中所描述的芽孢杆菌属。其他实例是如描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307中的那些纤维素酶变体可商购的纤维素酶包括
甘露聚糖酶
合适的甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或基因修饰的突变体。甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型，特别是粘琼脂芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌或特异腐质霉。合适的甘露聚糖酶描述于WO 1999/064619中。可商购的甘露聚糖酶是Mannaway(诺维信公司)。
脂肪酶和角质酶：
合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热真菌属的脂肪酶，例如如描述于EP 258068和EP305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉)；来自腐质霉属的角质酶，例如特异腐质霉(WO 96/13580)；来自假单胞菌属的菌株的脂肪酶(这些中的一些现在改名为伯克霍尔氏菌属)，例如产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218272)、洋葱假单胞菌(EP331376)、假单胞菌属菌株SD705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)；GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO 10/065455)；来自稻瘟病菌的角质酶(WO 10/107560)；来自门多萨假单胞菌的角质酶(US 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599)；以及来自灰色链霉菌(WO11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)的脂肪酶(WO 12/137147)。
其他实例是脂肪酶变体，如描述于EP 407225、WO 92/05249、WO94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508以及WO 09/109500中的那些。
优选的商业化脂肪酶产品包括LipolaseTM、LipexTM；LipolexTM和LipocleanTM(诺维信公司)，Lumafast(来自杰能科公司(Genencor))以及Lipomax(来自吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocades))。
还其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。
合适的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属，例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP 179,486)，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602以及WO 98/15257中所描述的那些。
根据本发明的过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及展示出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯离子形成次氯酸盐。
在一个方面，本发明的卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地，该卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在本发明的优选的方法中，将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯离子来源组合。
已从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶，如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(如，煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属、弯孢属(例如，疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属、细基格孢属以及葡萄孢属。
还已从细菌，如假单胞菌属(如吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如，金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。
在优选的方面，该卤代过氧化物酶源自弯孢属物种(Curvularia sp.)，特别是疣枝弯孢(Curvularia verruculosa)或不等弯孢(Curvularia inaequalis)，如描述于WO95/27046中的不等弯孢CBS 102.42或来自描述于WO97/04102中的疣枝弯孢CBS 147.63或疣枝弯孢CBS 444.70；或来自描述于WO 01/79459中的Drechslera hartlebii、如描述于WO01/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiella salina)、如描述于WO 01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie、或如描述于WO 01/79460中的棉丝菌属物种(Geniculosporium sp.)。
根据本发明的氧化酶特别包括由酶分类EC 1.10.3.2囊括的任何漆酶或来源于其中的展示出漆酶活性的片段、或展示出类似活性的化合物，如儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。
优选的漆酶是微生物来源的酶。该酶可以来源于植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。
来自真菌的合适实例包括可来源于以下的菌株的漆酶：曲霉属，脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌)，柄孢壳菌属，葡萄孢属，金钱菌属(Collybia)，层孔菌属(Fomes)，香菇属，侧耳属，栓菌属(例如，长绒毛栓菌和变色栓菌)，丝核菌属(例如，立枯丝核菌(R.solani))，拟鬼伞属(例如，灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)及C.plicatilis)，小脆柄菇属(Psathyrella)(例如，白黄小脆柄菇(P.condelleana))，斑褶菇属(例如，蝶形斑褶菇(P.papilionaceus))，毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉)，Schytalidium(例如，S.thermophilum)，多孔菌属(例如，P.pinsitus)，射脉菌属(例如，射脉侧菌(P.radiata))(WO 92/01046)或革盖菌属(例如，毛革盖菌(C.hirsutus))(JP 2238885)。
来自细菌的合适实例包括可来源于芽孢杆菌属的菌株的漆酶。
优选的是源自拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶；特别是源自灰盖拟鬼伞的漆酶，如披露于WO 97/08325中；或来自嗜热毁丝霉，如披露于WO 95/33836中。
可以通过添加含有一种或多种酶的单独添加剂、或通过添加含有所有这些酶的组合添加剂而将一种或多种洗涤剂酶包含于洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂，即单独的或组合的添加剂，可以配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂配制品是颗粒，特别是无粉尘颗粒；液体，特别是稳定化液体；或浆液。
无粉尘颗粒例如可以如在US 4,106,991和4,661,452中所披露地产生并且可以任选地通过本领域已知的方法包衣。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚乙二醇(PEG)；具有从16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化的壬基酚；其中的醇包含从12至20个碳原子并且其中存在15至80个环氧乙烷单元的乙氧基化的脂肪醇；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法来制备。
微生物
该洗涤剂添加剂以及洗涤剂组合物还可以包含一种或多种微生物，如一种或多种真菌、酵母、或细菌。
在一个方面，该一种或多种微生物是脱水(例如通过冻干)的细菌或酵母，如乳酸杆菌(Lactobacillus)菌株。
在另一个方面，微生物是一种或多种微生物孢子(与营养细胞相对)，如细菌孢子；或真菌孢子、分生孢子、菌丝。优选地，该一种或多种孢子是芽孢杆菌内生孢子；甚至更优选地，该一种或多种孢子是枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、或巨大芽孢杆菌的内生孢子。
微生物可以按与酶相同的方式包含在洗涤剂组合物或添加剂中(见上文)。
辅料
还可以利用本领域中已知的用于在衣物/ADW/硬表面清洁洗涤剂中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐蚀剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂(disintegrant)/崩解试剂(disintegration agent)、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC和/或多元醇如丙二醇)、织物调理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂以及芯吸剂，单独或组合使用。可以利用本领域中已知的用于在衣物/ADW/硬表面清洁洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在技术人员的技术范围内。
分散剂
可用于本发明的洗涤剂组合物还可以含有分散剂。具体地，粉末洗涤剂可以包含分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。合适的分散剂例如描述于Powdered Detergents[粉末洗涤剂]，Surfactant science series[表面活性剂科学系列]，第71卷，MarcelDekker,Inc[马塞尔德克尔公司]中。
染料转移抑制剂
可用于本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合物染料转移抑制剂包括但不局限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮和聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％的水平存在。
荧光增白剂
可用于本发明的洗涤剂组合物将优选地还包含另外的组分，这些组分可以给正在清洁的物品着色，如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时，该增亮剂优选地以约0.01％至约0.5％的水平存在。在本发明的组合物中可以使用适合用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨基芪-磺酸衍生物型的实例包括以下的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴-嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选的是荧光增白剂是可商购的Parawhite KX，由印度孟买的派拉蒙矿物与化学品公司(Paramount Minerals andChemicals)供应。适合用于本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-氨烷基香豆素。
合适的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt％、从0.05wt％、从约0.1wt％或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5wt％或甚至0.75wt％的较高水平。
污垢释放聚合物
可用于本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些聚合物帮助从织物(如棉和基于聚酯的织物)去除污垢，特别是从基于聚酯的织物去除疏水性污垢。污垢释放聚合物可以例如是非离子型或阴离子型对苯二甲酸基的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如Powdered Detergents[粉末洗涤剂]，Surfactant science series[表面活性剂科学系列]，第71卷，第7章，马塞尔德克尔公司。另一种类型的污垢释放聚合物是包含核心结构和附接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核心结构可以包含聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构，如在WO 2009/087523中详细描述的(通过引用并入本文)。此外，随机接枝共聚物是合适的污垢释放聚合物。合适的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856以及WO2006/113314中(通过引用并入本文)。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，如修饰的纤维素衍生物，如EP 1867808或WO 2003/040279中所描述的那些(将二者都通过引用并入本文)。合适的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺以及其混合物。合适的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、兼性离子修饰的纤维素及其混合物。合适的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。
抗再沉积剂
可用于本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下所描述的基于纤维素的聚合物还可以作为抗再沉积剂起作用。
流变改性剂
可用于本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂，不同于降粘剂。流变改性剂选自下组，该组由以下各项组成：非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂，它们为液体洗涤剂组合物的水性液相基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度，例如，如在EP 2169040中所示。
其他合适的辅料包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物软化剂、填充剂、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、颜料、抑泡剂、溶剂以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹性剂。
洗涤剂产品的配制品
可用于本发明的洗涤剂组合物可以处于任何常规形式，例如条，均匀的片剂，具有两层或更多层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，膏，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。
袋可以被配置为单一室或多室。它可以具有适合用于容持该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成，它包含了一个内部体积。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是聚合物材料，优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，其包含可水解降解并且水可溶的聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考号M8630下，如由美国印第安纳州的MonoSol有限责任公司销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包含固体洗衣清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。可用于液体组分的室在构成上可以与包含固体的室不同：US 2009/0011970A1。
可以由水可溶袋中的或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分彼此物理分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
非单位给药的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且高达95％的水，如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以包含从0-30％的有机溶剂。
液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
共颗粒中酶的配制品
可用于本发明的用于防止家庭表面上微生物生长的酶可以被配制为颗粒，例如，配制为结合一种或多种酶的共颗粒。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度，不同酶的物理隔离。用于生产针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于IP.com披露内容IPCOM000200739D中。
通过使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于WO 2013/188331中，其涉及包含以下项的洗涤剂组合物：(a)多酶共颗粒；(b)少于10wt沸石(无水的基础上)；和(c)少于10wt磷酸盐(无水的基础上)，其中所述酶共颗粒包含从10wt％至98wt％的水分汇组分(sink component)，并且该组合物另外还包含从20wt％至80wt％的洗涤剂水分汇组分。WO2013/188331还涉及处理和/或清洁表面(优选地织物表面)的方法，该方法包括以下步骤：(i)使所述表面在含水洗涤液中与如在本文要求保护的并且描述的洗涤剂组合物接触，(ii)漂洗和/或干燥该表面。
该多酶共颗粒可以包含本发明的酶和(a)一种或多种选自下组的酶，该组由以下组成：首次洗涤脂肪酶、清洁纤维素酶、木葡聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、脂加氧酶、漆酶及其混合物；和(b)一种或多种选自下组的酶，该组由以下组成：半纤维素酶、蛋白酶、护理纤维素酶、纤维二糖脱氢酶、木聚糖酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质酶、普鲁兰酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、地衣聚糖酶、葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、玻璃酸酶、软骨素酶、淀粉酶、及其混合物。
方法和用途
在本发明的另一个方面，涉及防止、抑制或减少表面上微生物生长的方法，通过用本发明的酶部分的前述段落和方面中定义的酶处理表面至在处理后在所述表面上微生物TTC可检测时间增加至少20％的程度。
在一方面，涉及上述方法，其中该微生物是真菌，并且通过可用于本发明的酶处理表面后，所述表面上的真菌具有至少20％的孢子形成时间的增加。
在一方面，涉及上述方法，其中该微生物是真菌，并且通过可用于本发明的酶处理表面后，真菌在所述表面上的孢子密度评分在从0至7的范围内降低至少1。
在本发明的另一个方面，涉及一种证明本发明的酶的部分名称中的前述段落中定义的酶在表面上的微生物生长抑制或深度清洁益处的方法，该方法包括以下步骤：
a.提供两个表面A和A'，
b.将包含微生物生长指示物的污垢施加到每个表面A和A'上，
c.用不包含酶的洗涤剂组合物洗涤A，并用包含一种或多种酶的所述洗涤剂组合物洗涤A'，
d.准备接种微生物并且将其施加到表面A和A'上，
e.在合适的条件下孵育A和A'以允许微生物生长一段预定的时间段，
f.比较A和A'上微生物的生长。
在此提到的表面可以是任何家庭表面，可以是硬表面或软表面，如织物/纺织品表面。在一方面，该表面是由天然纤维、合成纤维或其混合物制成的纺织品。在一方面，该表面由棉、聚酯或其共混物制成。
在一方面，涉及前述方面中提到的方法，其中该微生物生长指示物选自下组，该组由以下组成：氯化三苯基四氮唑(TTC)、INT(2-(4-碘代苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基-2H-四唑)、MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四氮唑)、XTT(2,3-双-(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-2H-四唑-5-甲酰苯胺)、MTS(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑)、WST(水溶性四氮唑盐)和CCK-8(细胞计数试剂盒-8)、类胡萝卜素、荧光素、荧光蛋白/产生荧光的微生物、ATP、X-Gal、MUG、及其组合。在一方面，该微生物生长指示物是氯化三苯基四氮唑(TTC)。
在一方面，涉及前述方面中提到的方法，其中先前方面中描述的步骤a.中提供的该表面A和A'由基本相同的材料制成。
商业洗涤剂组合物和纺织品预处理组合物
以下提到的洗涤剂组合物可以掺入适用于本发明的用途和方法的酶。
液体洗涤剂：标准A
液体洗涤剂：标准N
液体洗涤剂：标准O
粉末洗涤剂：标准X
液体洗涤剂：标准SEA
Biotex黑(液体)
5％-15％的阴离子型表面活性剂、<5％非离子型表面活性剂、香料、酶、DMDM和乙内酰脲。
碧浪灵敏性白色与彩色(White&Color)的组合物、液体洗涤剂组合物
水、醇乙氧基硫酸盐、醇乙氧基化物、氨基氧化物、柠檬酸、C12-18拔顶棕榈仁脂肪酸、蛋白酶、糖苷酶、淀粉酶、乙醇、1,2丙二醇、甲酸钠、氯化钙、氢氧化钠、有机硅乳液、跨硫酸EHDQ(该成分以递减次序列出)。
标准洗涤剂A组合物(液体)
成分：12％LAS、11％AEO Biosoft N25-7(NI)、7％AEOS(SLES)、6％MPG(丙二醇)、3％乙醇、3％TEA、2.75％可可皂、2.75％大豆皂、2％甘油、2％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、0.2％DTMPA和0.2％PCA(所有的百分数都是w/w)。
宝莹生物片剂
碳酸钠、碳酸钠过氧化物、碳酸氢钠、沸石、水、硅酸钠、月桂基硫酸钠、纤维素、TAED、十二烷基苯磺酸钠、半纤维素、木质素、月桂基葡糖苷、丙烯酸钠/MA共聚物、膨润土、氯化钠、香精、羟乙磷酸四钠、硫酸钠、聚丙烯酸钠、二甲硅油、苯胺基吗啉代三嗪基氨基芪磺酸二钠盐、十二烷基苯磺酸、三甲基硅氧基硅酸盐、碳酸钙、纤维素、PEG-75、二氧化钛、糊精、蛋白酶、所修饰的玉米淀粉、蔗糖、CI 12490、聚芳基磺酸钠、硫代硫酸钠、淀粉酶、高岭土。
碧浪Actilif的组合物(粉末)
成分：5％-15％阴离子型表面活性剂、基于氧的漂白剂、<5％非离子型表面活性剂、磷酸盐、聚羧酸盐、沸石、光学增亮剂、酶、香料、丁苯基甲基丙醛、香豆素、己基肉桂醛。
本发明还可通过以下段落描述：
1.一种或多种酶在防止、抑制或减少表面上微生物生长中的用途，其中在使用所述酶后，在所述表面上的所述微生物的TTC可检测时间增加至少20％、至少30％、至少50％、至少70％、至少80％、或至少100％。
2.根据段落1所述的用途，其中所述微生物是真菌，并且所述真菌与未用酶处理的表面上的真菌相比，孢子形成时间增加至少20％，和/或孢子密度评分按从0至7的孢子密度标度计降低至少1。
3.根据段落1或2所述的用途，用于抑制或减少纺织品表面上微生物引起的恶臭。
4.根据段落1或2所述的用途，用于防止或减少微生物附着到纺织品表面。
5.根据段落1-4中任一项所述的用途，其中所述微生物是选自下组的真菌或细菌，该组由以下组成：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肺炎克雷白氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia coli)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、滕黄微球菌(Micrococcusluteus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、栖水菌(Enhydrobacteraerosaccus)、杰氏棒杆菌(Corynebacterium jeikeium)、痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)、泡囊短波单胞菌(Brevundimonas vesicularis)、灰链丝菌(Streptomyces griseus)、土味链霉菌(Streptomyces odorifer)、暗色砖样外瓶霉(Exophiala phaeomuriformis)、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)、交链格孢菌(Alternaria alternate)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、烟曲霉(Aspergillusfumigatus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、出芽短梗霉菌(Aureobasidium pullulans)、球毛壳菌(Chaetomium globosum)、球孢枝孢菌(Cladosporium sphaerospermum)、绿粘帚霉(Gliocladium virens)、毛霉菌(Mucor plumbeus)、产黄青霉(Penicilliumchrysogenum)、普通青霉(Penicillium commune)、皮落青霉(Penicillium crustosum)、产红青霉(Penicillium rubens)、变异青霉(Penicillium varians)、桔青霉(Penicilliumcitrinum)、纸葡萄穗霉菌(Stachybotrys chartarum)、绿色木霉(Trichoderma viride)、红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)、近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、粘质红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)、季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)、白色念珠菌(Candida albicans)、及其组合。
6.根据段落1-5中任一项所述的用途，其中所述微生物生长在所述表面的残留污渍区域上。
7.根据段落1-6中任一项所述的用途，其中所述一种或多种酶选自下组，该组由以下组成：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、及其组合。
8.根据段落1-7中任一项所述的用途，其中所述酶是淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶或其组合。
9.根据段落3或4所述的用途，其中所述酶是纤维素酶。
10.根据以上段落中任一项所述的用途，其中所述蛋白酶选自下组，该组由以下组成：
i)蛋白酶，所述蛋白酶包含与SEQ ID NO 1或SEQ ID NO 2中示出的蛋白酶相比在以下一个或多个位置的取代：3、4、9、15、24、27、42、55、59、60、66、74、85、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、126、127、128、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、189、193、198、199、200、203、206、211、212、216、218、226、229、230、239、246、255、256、268和269，其中所述位置对应于SEQ ID NO 1中示出的蛋白酶的位置，或
ii)蛋白酶亲本的一种或多种蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体包含一种或多种选自下组的突变，该组由以下组成：S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、S24G、S24R、K27R、N42R、S55P、G59E、G59D、N60D、N60E、V66A、N74D、N85S、N85R、G96S、G96A、S97G、S97D、S97A、S97SD、S99E、S99D、S99G、S99M、S99N、S99R、S99H、S101A、V102I、V102Y、V102N、S104A、G116V、G116R、H118D、H118N、N120S、S126L、P127Q、S128A、S154D、A156E、G157D、G157P、S158E、Y161A、R164S、Q176E、N179E、S182E、Q185N、A188P、G189E、V193M、N198D、V199I、Y203W、S206G、L211Q、L211D、N212D、N212S、M216S、A226V、K229L、Q230H、Q239R、N246K、N255W、N255D、N255E、L256E、L256D、T268A和R269H，其中所述位置对应于SEQ ID NO 1中示出的蛋白酶的位置，其中所述蛋白酶亲本选自SEQ ID NO 1中示出的蛋白酶和SEQ ID NO 2中示出的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolichenifaciens)蛋白酶(BPN')，并且其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO 1具有至少80％序列同一性或与SEQ ID NO 2具有80％序列同一性，
iii)蛋白酶，所述蛋白酶包含与SEQ ID NO 14中示出的蛋白酶相比在对应于SEQID NO:14的位置171、173、175、179或180的一个或多个位置的取代，其中所述蛋白酶变体与SEQ ID NO 14具有至少75％但小于100％的序列同一性，
iv)蛋白酶，所述蛋白酶包含SEQ ID NO 1或2中示出的氨基酸序列，或蛋白酶，所述蛋白酶与包含SEQ ID NO 1的氨基酸1-269的多肽或包含SEQ ID NO 2的氨基酸1-275的多肽具有至少80％序列同一性，
v)一种或多种选自下组的以下蛋白酶变体：
SEQ ID NO 1，具有改变T22R+S99G+S101A+V102I+A226V+Q239R，
SEQ ID NO 2，具有改变S24G+S53G+S78N+S101N+G128A+Y217Q，
SEQ ID NO 2，具有改变S24G+S53G+S78N+S101N+G128S+Y217Q，
SEQ ID NO 1，具有改变S9E+N42R+N74D+V199I+Q200L+Y203W+S253D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有S9E+N42R+N74D+H118V+Q176E+A188P+V199I+Q200L Y203W+S250D+S253D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有S9E+N42R+N74D+Q176E+A188P+V199I+Q200L+Y203W S250D+S253D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有S3V+N74D+H118V+Q176E+N179E+S182E+V199I+Q200L Y203W+S210V+S250D+S253D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有改变T22A+N60D+S99G+S101A+V102I+N114L+G157D+S182D+T207A+A226V+Q239R+N242D+E265F，
SEQ ID NO 1，具有改变S9E+N42R+N74D+H118V+Q176E+A188P+V199I+Q200L+Y203W+S250D+S253D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有改变S9E+N42R+N74D+Q176E+A188P+V199I+Q200L+Y203W+S250D+S253D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有改变S9E+N42R+N74D+H118V+Q176E+A188P+V199I+Q200L+Y203W+S250D+N255W+L256E+*269aH+*269bH，
SEQ ID NO 1，具有改变S3V+N74D+H118V+Q176E+N179E+S182E+V199I+Q200L+Y203W+S210V+S250D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有改变S9E+N74D+G113W+G157P+Q176E+V199I+Q200L+Y203W+S250D+T254E+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有改变S3V+S9R+N74D+H118V+Q176E+N179E+S182E+V199I+Q200L+Y203W+S212V+S250D+N255W+L256E，
SEQ ID NO 1，具有改变S99E，和
SEQ ID NO 2，具有改变L217D，
及其组合。
11.根据以上段落中任一项所述的用途，其中所述淀粉酶选自下组，该组由以下组成：
i)变体，所述变体在以下位置包含一个或多个取代：9、26、30、33、82、37、106、118、128、133、149、150、160、178、182、186、193、195、202、203、214、231、256、257、258、269、270、272、283、295、296、298、299、303、304、305、311、314、315、318、319、320、323、339、345、361、378、383、419、421、437、441、444、445、446、447、450、458、461、471、482、484，其中所述位置对应于SEQ ID NO 11的位置；
ii)变体，所述变体展现出与SEQ ID NO 12至少90％同一性、在位置183和184处具有缺失，
iii)变体，所述变体展现出与SEQ ID NO 13至少95％同一性、包含在以下一个或多个位置处的突变：M202、M208、S255、R172和/或M261，
iv)多肽，所述多肽包含SEQ ID NO:9或10中示出的氨基酸序列，
v)多肽，所述多肽与SEQ ID NO:9或10具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性，
及其组合。
12.根据以上段落中任一项所述的用途，其中所述纤维素酶选自下组，该组由以下组成：
a.多肽，所述多肽与SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、及其组合中示出的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性。
13.根据以上段落中任一项所述的用途，其中所述表面是由天然纤维如棉、合成纤维如聚酯、或其混合物制成的纺织品。
14.根据以上段落中任一项所述的用途，其中将所述一种或多种酶掺入基本上不包含杀生物剂的洗涤剂组合物中。
15.根据以上段落中任一项所述的用途，其中将所述一种或多种酶掺入粉末洗涤剂或液体洗涤剂中。
16.一种防止、抑制或减少表面上微生物生长的方法，所述方法包括以下步骤：
a.用根据段落10-12中任一项所定义的酶处理所述表面至在所述处理后至少一种微生物在所述表面上的TTC可检测时间增加至少20％的程度。
17.一种证明根据段落10-12所定义的酶或酶组合在表面上的微生物生长抑制或深度清洁益处的方法，所述方法包括以下步骤：
a.提供两个表面A和A'，
b.将包含微生物生长指示物的污垢施加到每个表面A和A'上，
c.用不包含酶的洗涤剂组合物洗涤A，并用包含一种或多种酶的所述洗涤剂组合物洗涤A'，
d.准备接种微生物并且将其施加到表面A和A'上，
e.在合适的条件下孵育A和A'以允许微生物生长一段预定的时间段，
f.比较A和A'上微生物的生长。
18.根据段落17所述的方法，其中所述微生物生长指示物是氯化三苯基四氮唑(TTC)。
19.根据段落16或17所述的方法，其中根据段落14所述的步骤a.中提供的所述表面A和A'由基本相同的材料制成。
测定
洗涤测定
Terg-O-to-meter(TOM)洗涤测定
Tergo-To-Meter(TOM)是中等规模标准洗涤系统，它可以应用于同时测试16种不同洗涤条件。TOM基本上是大型的具有多达16个开放金属烧杯淹没至其中的温度受控的水浴。每个烧杯构成一个小的顶部加载型洗涤机器并且在实验期间，它们中的每一者将含有特定洗涤剂/酶体系的溶液并且对弄脏的和未弄脏的织物测试其性能。通过旋转搅拌臂获得机械应力，该旋转搅拌臂搅拌在每个烧杯内的液体。因为TOM杯子不含盖子，所以能够在TOM实验期间收回样品并且在洗涤期间在线分析信息。
TOM标准洗涤系统主要用于在US或LA/AP洗涤条件下进行洗涤剂和酶的中等规模测试。在TOM实验中，因素(如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率)可以变化。因此，TOM提供了在小规模实验(如AMSA和微型洗涤)与在顶部加载型洗涤机中的更费时的全规模实验之间的联系。
设备：水浴具有16个钢制烧杯并且每个烧杯具有1个旋转臂，每个烧杯的容量是500mL至1200mL的洗涤剂溶液。温度范围从3.5℃至60℃。水浴必须用去离子水充满。转速可以设定到高达40至200rpm/min。
设定Terg-O-Tometer中的温度并且启动在水浴中旋转。等待温度调整(公差是+/-0.5℃)。所有烧杯，搅拌臂和过滤器应在餐具洗涤器中清洁，并且没有先前测试材料的痕迹。
在一个桶中制备具有所希望的量的洗涤剂和水硬度的洗涤溶液。在磁力搅拌期间允许洗涤剂溶解10min，并且在搅拌10min后测量洗涤剂溶液的pH。洗涤溶液应该在制备之后30至60min之内使用。
向TOM烧杯中添加1000ml洗涤溶液。将洗涤溶液以120rpm搅拌并且让其旋转直至温度正确。将小块布样撒到烧杯和压载加载物中，并且然后任选地将一种或多种酶添加至烧杯中。当小块布样和压载物添加到烧杯中时开始时间测量。将小块布样洗涤20分钟，此后，停止搅拌。随后，将洗涤加载物从TOM烧杯转移到容器，并且用冷自来水冲洗。将固体小块布样从压载加载物中分离。在流动的水下，将污垢小块布样转移到含冷自来水的5L烧杯，持续5分钟。针对即将到来的灭活，分开存放压载加载物。用手轻轻压出小块布样中的水，并且置于铺有纸的托盘上。将另一张纸置于小块布样的顶部。在经受分析之前，允许小块布样干燥过夜，例如，如本文描述的使用Color Eye测量颜色强度。
全规模洗涤(FSW)测定
FSW，即在科学设计的条件下测试洗涤机中的产品性能，是一种家庭护理应用测定，该测定在筛选流程结束时处于最大规模并且具有最大的消费者相关性。FSW系统可根据不同的区域机器在US或LA，AP和EU洗涤条件下使用。将测试小块布样和压载物与洗涤剂和酶一起添加至每次洗涤中。
设备：AP洗涤机-松下(Panasonic)XQB65-Q680U自动洗涤机。这些机器中使用的水都是去离子水。正常洗涤程序是用于混合衣服的默认程序，并且在本文使用。也可以使用其他合适的洗涤机。
酶：酶可以在例如摩尔浓度、蛋白质量、或基于活性的基础上添加。
压载物：干净的白色布料(没有光学增白剂)由棉、聚酯或棉/聚酯组成。该压载物的构成是基于重量的棉/聚酯比为65/35的不同物品的混合物。每次洗涤中的压载物重量、干燥度和物品组成必须相同。每次洗涤后，在85℃/15min的工业洗涤器中或在90℃的没有洗涤剂的洗涤(EU机器)中，将该压载物灭活。标准AP压载组合物的实例，在65/35(1.5kg±50g)下的co/pe比率：1件T恤(100％棉)+5件短袖衬衫(55％棉/45％聚酯)+2件枕套(35％棉/65％聚酯，110x 75cm)+3件茶巾(100％棉)。压载重量用衬衫、短袖调整到正确的压载。
测试小块布样：测试小块布样，即技术和天然污渍，是商业的或NZ生产的。试验中的所有洗涤必须使用相同的批次。可以使用不同的小块布样尺寸。小块布样通过订书机附接到茶巾上；将相同的小块布样类型(污渍)置于不同的毛巾上或毛巾上的不同位置上。每个小块布样都单独标记以进行鉴定并指示正面。重要的是要将小块布样保持在黑暗中并始终限制曝光，因为许多污渍对光敏感。纺织品的总重量包括压载物和测试的小块布样的重量。
水硬度：天然水含有不同水平的金属离子(主要是Ca2+和Mg2+)，取决于地理区域。被认为构成水硬度的金属离子是沉淀脂肪酸皂的金属离子(主要是Ca2+和Mg2+，但不是例如Na+)。天然水还含有不同水平的碳酸氢盐，HCO3-，平均摩尔数是基于摩尔的Ca2+和Mg2+总和的1.5倍，并且可能含有许多其他阴离子，包括Cl-和SO42-。HCO3-的存在对于水的缓冲能力是重要的并且影响通过添加洗涤剂制备的洗涤溶液的pH。通过将CaCl2、MgCl2和NaHCO3添加至Milli-Q水或去离子水中来制备人造硬水。
洗涤条件：标准AP洗涤条件如下所述
可能应用其他洗涤条件。用于正常重垢洗涤的各个区域的洗涤条件在下表例示。
*°dH：通过添加CaCl2*2H2O、MgCl2*6H2O和NaHCO3至milli-Q水中来调整。
注意(这是估计而非绝对，不同区域和不同机器都有特殊条件)
洗涤程序
a.准备压载物和测试小块布样(订到茶巾上)。
b.选择用于洗涤的参数：程序和水位。请注意，使用自动注水时，已知的水位不是真正的水位。对于32L程序，实际取水量为33L。应调整酶和洗涤剂的添加量以反映这种水位。
c.编程并开始自动水表系统。
d.按开始/暂停按钮开始水充盈，并且在取水期间调整水温。在此期间自动登记用水消耗。
e.根据水消耗添加Ca/Mg
a.按按钮搅拌水。
b.停下来并且检查水硬度。
f.将洗涤剂和粉末NaHCO3添加至机器中-短混合(10秒)。
g.添加酶溶液或颗粒-短混合(10秒)。
h.将压载物和小块布样添加至洗涤机中。
i.快速重新启动洗涤机，选择洗涤程序和水位，通过按开始/暂停按钮开始洗涤。如果浸泡，搅拌30s，然后保持浸泡时间。如果检测到低水位，机器将在主要洗涤期间自动注水(0.2-1L)。
j.在洗涤8或10min后测量pH。
k.洗涤机默认漂洗2次。用具有相同硬度的水漂洗。如果检测到过度发泡，机器将自动添加1次漂洗。在此期间自动登记用水消耗。
l.洗涤完成后，将该测试小块布样从茶巾中取出并置于托盘上进行干燥-确保小块布样在完全黑暗中干燥，因为许多污渍对光敏感。将小块布样干燥过夜，并且在测量前必须完全干燥。
迷你Launder-O-Meter(迷你LOM)标准洗涤系统
迷你LOM是Launder-O-Meter(LOM)的修饰的迷你洗涤系统，其是中等规模标准洗涤系统，它可以应用于同时测试多达32种不同洗涤条件。迷你LOM模型洗涤系统主要用于洗涤卫生实验。迷你LOM是一个旋转器，包括免费的50ml x 16(通常为6-32)管式旋转配件，每个管内容量为10至20mL的洗涤剂溶液。水浴必须用灭菌的去离子水充满。每个管都将含有特定洗涤剂/酶系统的溶液以及其性能经过测试的污染和未污染的织物。通过旋转轴水平或垂直混合它们以实现机械应力。它可以在从4℃至55℃的环境温度下使用，并且该旋转范围是从10至70rpm。在迷你LOM实验中，可以改变如微生物装载和织物片之类的因素。洗涤后应弃去管子。
在1L烧杯中制备具有所希望的量的洗涤剂和水硬度的洗涤溶液。在磁力搅拌期间允许洗涤剂溶解10min，并且在搅拌10min后测量洗涤剂溶液的pH。洗涤溶液应该在制备之后30至60min之内使用。
将20ml洗涤溶液添加至灭菌的迷你LOM管中。以20rpm搅动洗涤溶液。将小块布样撒入烧杯和微生物培养液加载物中。以上所有操作均应在净化工作台上进行。当将小块布样和微生物培养液添加至烧杯中并且将迷你LOM机器移动到具有目标温度的室时，开始时间测量。将小块布样洗涤60分钟，此后，停止搅拌。洗涤后，将小块布样从管中转移到具有400ml灭菌水的烧杯中并漂洗10min。然后根据减少附接测定处理小块布样。
污渍配方
染污的小块布样的制备：
将干净的小块布样(6×6cm)放在25mL圆底烧瓶的圆柱形底部(底部直径为约3.8mm)，并用一只手固定小块布样。用移液管将准备好的污垢加载在小块布样中心，并且然后用手指将污渍溶液均匀分布在小块布样表面上。使用以下提及的来自荷兰的测试材料BV中心(Center For Testmaterials BV)的三种不同类型的小块布样。
污物的评估
将洗涤性能表示为Δ反射值(ΔRem)。洗涤并漂洗之后，将小块布样摊开铺平并且允许在室温下风干过夜。在洗涤的次日评估所有洗涤。使用具有非常小孔径的MacbethColor Eye 7000反射分光光度计进行小块布样的光反射评估。在入射光中没有紫外光(UV)的情况下进行测量并且提取460nm处的反射率。在未洗涤的和洗涤的小块布样上进行测量。将有待测量的测试小块布样置于相同类型和颜色的另一个小块布样之上(成对小块布样)。每个烧杯中仅有每一种的一个小块布样，以此方式使用来自复制洗涤的小块布样。通过从洗涤的小块布样的反射值中减去未洗涤的小块布样的反射值计算单个小块布样的反射值。将每个染污的小块布样组的总洗涤性能计算为单个ΔRem的总和。
通过取得来自用酶洗涤的小块布样的测量值并且与来自未用酶洗涤的小块布样的测量值相减来计算针对每种污渍的酶效果。将全部酶性能计算为单个ΔRem酶的总和。
TTC测定(原位检测微生物生长)
氯化三苯基四氮唑(TTC)是还原-氧化反应指示物，并且可用于区分代谢活性和非活性组织/生物体。它颜色是白色的，并且当TTC在活细胞中经酶促还原成水不溶性TPF(1,3,5-三苯基甲
方案I
具有TTC样微生物生长指示功能的其他微生物生长指示物可用于本研究。它们可包括氧化还原指示物、活细胞染料、有色代谢物和代谢物检测测定。氧化还原指示物包括所有氧化还原测定，如INT(2-(4-碘代苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基-2H-四唑)、MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四氮唑)、XTT(2,3-双-(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-2H-四唑-5-甲酰苯胺)、MTS(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑)、WST(水溶性四氮唑盐)和CCK-8(细胞计数试剂盒-8)。活细胞染料可包括吖啶橙，钙黄绿素-AM和赫斯特(Hoechst)。应包括所有有色代谢物测定/微生物，如所有类胡萝卜素、荧光素，荧光蛋白/产生荧光的微生物。代谢物检测测定包括所有代谢物和酶检测测定，如ATP检测测定，使用X-Gal或MUG以检测β-半乳糖苷酶。
材料：
a.TTC溶液。
b.将0.1g 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)(西格玛公司(Sigma)，cas：298-96-4)溶解在2mL灭菌的Mili-Q水中，作为1000×储备溶液(50mg/mL)。
c.培养基
·营养琼脂培养基：在1升蒸馏水中，5g蛋白胨、30g牛肉提取物、5g NaCl、15g琼脂，调节pH至7.0-7.2。该培养基用于培养恶臭假单胞菌
·马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：将200g切片的未削皮的马铃薯在1升蒸馏水中煮沸30min。通过粗滤布过滤，保留流出物，即马铃薯浸出液(或使用商业脱水形式)。与20g右旋糖混合并添加水稀释至1L。将其分配至烧瓶，并且向每个烧瓶中添加15g/L琼脂，然后在121℃下高压灭菌15min。然后将20-25ml部分分配至灭菌的15×100mm培养皿中。该培养基用于培养真菌。
d.PBS缓冲液(0.01M，pH 7.4)，在121℃灭菌15min，并在4℃下储备。
程序：
1.微生物/TTC溶液的制备
a)在每种相应的固体培养基上孵育细菌或真菌直至形成菌落或看到孢子。
b)将单个菌落接种到液体培养基中并且根据微生物的规格在每个微生物的最佳生长温度下孵育过夜直至OD600达到约0.6-0.8)，然后以0.1％-0.5％的体积比率将一部分培养液加入新鲜液体培养基中，在28℃-37℃孵育约8-12小时，然后收集培养物沉淀并重悬于灭菌的PBS缓冲液中两次，并且制备OD600约为0.10-0.13的溶液。
c)将TTC溶液(50mg/ml)添加至来自步骤2的微生物溶液中，使TTC浓度达到50mg/L，充分混合并立即使用。
2.染污的小块布样的制备
a)在洗涤测定部分中描述的洗涤程序之后完成洗涤步骤的小块布样用水漂洗7-10min，将小块布样放在板上。通过浸没在75％乙醇中对板进行灭菌，并且在使用前用UV光辐照0.5-1hr。
b)通过使用移液管在每个小块布样上均匀注射300μL细菌或真菌孢子溶液
c)将如此制备的小块布样在34℃，90％-98％RH的灭菌培养室中孵育，不管施加到小块布样上的微生物是细菌还是真菌。
3.TTC原位检测小块布样上的微生物生长。
将小块布样以6小时的间隔从培养箱中取出，并且可以在扫描仪上进行评估。首先，在预定的设置下用扫描仪(例如，Epson Expression 10000XL)扫描小块布样(例如，可以使用Silverfast的软件并且设置为以200dpi和48→24位彩色扫描)并且然后分析扫描的小块布样的图像。可以使用用于RGB读取的彩色矢量程序的软件，并且选择直径为污渍直径的1.2倍的圆圈区域用于颜色分析目的。小块布样上的颜色强度根据以下等式计算。然后将测试的小块布样的强度与类似染污并洗涤(但没有用于在本发明中的酶)小块布样的强度进行比较，如果强度的变化是减少4，则将时间记录为TTC可检测时间。
当表面是小块布样以外的类型时，基本上与上述相同的程序将应用于TTC测定目的，除了需要调节洗涤条件以适合特定的表面洗涤目的。
真菌孢子/菌丝体形成时间测定(主要用于真菌生长的原位检测)
程序：
上面在TTC测定部分中描述的上述步骤适用于此，唯一的区别在于没有TTC(如步骤1c)中那样添加至培养溶液中，并且接种的微生物是真菌而不是细菌。
在步骤2c)之后，以12hr的间隔取出小块布样用于显微镜检测以检查孢子形成。可以使用林匹斯公司(Olympus)SZX16显微镜，并且可以使用10倍放大率通过在显微镜下随机选择3个视野中任何可见的分生孢子。根据不同种类的真菌，它们的孢子/菌丝体可能显示黑色、绿色或红色等颜色。可以通过研究真菌的规格来预定颜色。
一旦孢子(分生孢子，孢子囊或其他类型的孢子)或菌丝体在10倍立体显微镜下筛选检测，然后进行50倍的更高放大率检测以确认分生孢子头的大小，如果分生孢子头的直径为不小于20μm(对于黑曲霉)或菌丝体的直径不小于2μm，然后记录真菌孢子形成时间的时间。
孢子密度评分测定
孢子密度评分用于确定真菌的生长，如由在所述表面上生长的真菌的孢子/分生孢子引起的家庭表面上的可见标记所表示的。
取出上述TTC测定部分中的小块布样用于测量培养7天后的孢子密度评分。
设定0至7的范围用于测量孢子密度值，其中0表示表面上没有真菌生长，并且7表示表面上的真菌过度生长。对于不同的真菌，孢子的颜色可以不同，但相同的0-7范围可以应用于不同的真菌生长和孢子密度测量。首先训练一组小组成员以了解范围和相应的孢子密度值，并且然后通过比较测试的每个表面(小块布样)与范围来评分孢子密度。
实例中使用的黑曲霉的筛选
使用丝状真菌黑曲霉(诺维信内部菌株编号57825)。该菌株于2014年在中国辽宁省的发霉玉米中分离。将其分离并在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养基中于25℃培养3天。作为替代方案，在实例中，其他可商购的黑曲霉可与该菌株互换使用。
实例
以下实施例进一步描述和证明了本发明范围内的方面。给出的实施例仅用于说明的目的，并且不应被解释为对本发明的限制，因为在不脱离本发明的精神和范围的情况下，其许多变化均是可能的。
实例1防止真菌在用酶手动餐具洗涤(HDW)洗涤剂处理的案板上的污垢上生长
材料
1.HDW污垢配方：
35％马铃薯淀粉(食品级，华欧公司，中国)+2％半脱脂牛奶(欧德堡(Oldenburger)，德国)+2％蛋黄(来自新鲜鸡蛋)+1.3％酱油(李锦记公司，中国)
2.真菌-黑曲霉
使用丝状真菌黑曲霉(诺维信内部菌株编号57825)。该菌株于2014年在中国辽宁省的发霉玉米中分离。将其分离并在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养基中于25℃培养3天。据信，在实例中，其他可商购的黑曲霉可与该菌株互换使用。
3.案板
来自超市的木案板(泰兴，银杏木)
4.洗涤剂：SEA标准洗涤剂，洗涤液0.75g/L
5.酶：蛋白酶(SEQ ID NO:3)，淀粉酶(SEQ ID NO:9)
6.分组：
程序：
1.制备污垢溶液的程序
将5％马铃薯淀粉在自来水中在85℃下糊化5min，形成热糊状物，并且然后添加2％半脱脂牛奶和2％蛋黄，并且进一步添加1.3％酱油至制出均一的溶液。
2.真菌孢子的制备
将黑曲霉在培养皿(PDA或察氏(czapek's)培养基)上在30℃的培养箱中孵育3天。通过用灭菌的PBS缓冲液(0.01nM，pH 7.4)冲洗平板收集孢子；将如此制备的孢子溶液剧烈涡旋5min；然后稀释孢子溶液，使最终OD600达到0.10-0.13之间。
3.酶处理案板以及真菌生长比较
将0.5g根据本实例中的上述步骤1的新制成的污垢溶液分别施用在各板上，并且然后将板在25℃下干燥2小时。
然后，每组添加其相应的洗涤溶液，如上面示出的分组表中所列出的。然后将板静置10min。之后，在流动的自来水下用5次擦洗对板进行海绵擦洗。
在OD＝0.124的浓度下，将根据上述测定部分的TTC测定部分中描述的程序制备的1ml的黑曲霉孢子溶液分别通过使用移液管接种到每个板上。然后将案板在34℃，90％-98％RH下孵育，其中在孵育板之前将培养箱用UV灭菌。
每12小时观察真菌的生长。通过遵循在测定部分中的真菌孢子形成测定部分中描述的程序，记录当通过肉眼鉴定可见的黑色孢子囊/孢子的时间。
结果：
1.孢子形成时间
表1.在案板小块布样上黑曲霉的可见的分生孢子形成的时间
从表1中可以看出，所有来自经过酶处理的测试组1-3的案板比空白组和被染污的阴性对照组具有更长的孢子形成时间，并且该空白组和阴性对照组分别仅用水或用本身不包含这种蛋白酶和淀粉酶的液体洗涤剂洗涤。具体地，测试组的孢子形成时间至少为1.5倍，即与阴性对照组相比增加至少50％。
该结果清楚地表明在水或液体洗涤剂中使用的蛋白酶和淀粉酶在抑制案板上的黑曲霉生长的效果。
2.孢子密度评分测量
通过遵循前述段落中的测定部分的孢子密度评分测定部分中描述的程序培养7天后，通过小组观察每个案板的孢子密度评分评估。
表2.孢子密度评分-小组评分和平均值
如表2中示出的，来自酶处理的所有测试组1-3的案板具有比空白组(评分7)低得多的孢子密度得分，并且至少一个评分低于阴性对照组(评分3)，该空白组和阴性对照组是染污的并且仅用水或用本身不包含这种蛋白酶和淀粉酶的液体洗涤剂洗涤。
这清楚地表明在水或液体洗涤剂中使用的蛋白酶和淀粉酶帮助抑制案板上的真菌，黑曲霉生长的效果。
实例2.通过用包含不同剂量的酶的酶液体洗涤剂洗涤来抑制细菌生长
材料
1.细菌：恶臭假单胞菌(中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，菌株号1.3096)
2.洗涤剂：SEA标准洗涤剂
3.酶：蛋白酶(SEQ ID NO:3)，淀粉酶(SEQ ID NO:9)
4.表面：塑料案板(从超市采购的洁能(Jie neng)牌，聚丙烯)，用锯略微切片，在其表面上划几条线，以模拟现实生活中使用的板。
5.污渍配方：2号婴儿食品
6.分组：
程序：
1.制备污垢溶液的程序
根据测定部分中的污渍配方部分中的描述制备2号婴儿食品污垢。将1mL的每种污垢溶液施用到每个相应的案板上。然后将板在室温下风干3hr。
2.酶处理案板以及细菌的生长比较
然后，向来自每组的板添加1mL其相应的洗涤溶液，如上面示出的分组表中所列出的。然后将板静置10min。之后，在流动的自来水下用5次擦洗对板进行海绵擦洗。
在OD＝0.124的浓度下，将根据上述测定部分的TTC测定部分中描述的程序制备的700uL的细菌溶液分别通过使用移液管接种到每个板上。然后将案板在34℃，90％-98％RH下孵育，其中在孵育板之前将培养箱用UV灭菌。通过遵循测定部分中的TTC测定部分中描述的程序，观察板的TTC可检测时间。
结果
1.TTC可检测时间
TTC可检测时间是遵循测定部分中的TTC测定部分中的程序测量的。
表3
表3中的结果显示，对于来自所有测试组1-3的板，分别用水或包含蛋白酶和淀粉酶的共混物的洗涤剂洗涤，与阴性对照组相比，TTC可检测时间显著延长(比率>2)。这表明通过在水中使用这些酶或用于塑料案板表面的液体洗涤剂来抑制细菌生长。
实例3.通过用包含淀粉酶和蛋白酶的组合的酶液体洗涤剂洗涤来抑制真菌生长
材料
1.微生物-黑曲霉(与实例2中相同)
2.污渍：3号婴儿食品
3.洗涤剂：蓝月深度清洁(BlueMoon Deepclean)液体洗涤剂
4.小块布样类型：PCN01、W30A和CN42
5.酶：蛋白酶(SEQ ID NO:3)，淀粉酶(SEQ ID NO:9)
6.分组：
程序：
1.根据以上洗涤测定部分中描述的程序制备染污的小块布样。
2.使用TOM洗涤程序。洗涤条件：TOM，30℃，120rpm，14°dH(Ca2+:Mg2+＝3:2)，10/20min(当测试的小块布样的纺织品为CN42时，洗涤20min，当测试的小块布样的纺织品为PCN01或W30A，洗涤10min)。
3.真菌孢子接种的制备和将其应用于洗涤的小块布样，以及遵循测定部分中的孢子形成测定部分中的描述观察在来自不同组的小块布样上的真菌的生长。
结果
1.孢子形成时间
表4.在小块布样上黑曲霉的可见的分生孢子形成的时间
从表4的结果可以看出，试验组小块布样用包含蛋白酶和淀粉酶的洗涤剂洗涤，至少PCN01和W30A显示出与未染污的和未洗涤的小块布样相同的结果。来自测试组和空白对照组的结果比两个阴性对照组显著更长，该阴性对照组是染污但未洗涤的，或染污并用不含这种蛋白酶和淀粉酶的液体洗涤剂本身洗涤的。这清楚地表明蛋白酶和淀粉酶可用于抑制真菌，黑曲霉的生长。
2.孢子密度评分测量
通过小组观察每个小块布样，并给出孢子分生孢子大小和密度的评分。测量是指测定部分下的“孢子密度评分”部分。
表5.孢子密度评分—小组评分和平均值
如表5中示出的结果表明的，试验组小块布样用包含蛋白酶和淀粉酶的洗涤剂洗涤，至少PCN01和W30A小块布样显示出与未染污的和未洗涤的小块布样相同的结果。
除此之外，来自测试组和空白对照组两者的结果比两个阴性对照组显著更小，该阴性对照组是染污但未洗涤的，或染污并用不含这种蛋白酶和淀粉酶的洗涤剂本身洗涤的。
这两个方面清楚地表明蛋白酶和淀粉酶可用于防止、抑制或减少真菌，黑曲霉的生长。
实例4.通过用包含淀粉酶和蛋白酶的组合的酶粉末洗涤剂洗涤来抑制真菌生长
材料
1.微生物-黑曲霉(与实例2中相同)
2.污渍：3号婴儿食品
3.洗涤剂：标准X
4.小块布样类型：W30A和CN42
5.酶：蛋白酶(SEQ ID NO:1)和淀粉酶(SEQ ID NO:10)的共混物。
6.分组：
程序：
1.根据以上洗涤测定部分中描述的程序制备染污的小块布样。
2.使用TOM洗涤程序。洗涤条件：TOM，30℃，120rpm，14°dH(Ca2+:Mg2+＝3:2)，20min。
3.真菌孢子接种的制备和将其应用于洗涤的小块布样，以及遵循测定部分中的孢子形成测定部分中的描述观察在来自不同组的小块布样上的真菌的生长。
结果
1.孢子形成时间
黑曲霉是一种长黑色孢子的丝状真菌，在生长过程中形成称为分生孢子(conidospore，conidia)的无性孢子。可以用肉眼观察黑曲霉分生孢子头。当可以看到可见的黑色分生孢子时记录。
表6
从表6的结果可以看出，试验组小块布样用包含蛋白酶和淀粉酶的洗涤剂洗涤，至少W30A小块布样显示出与未染污的和未洗涤的小块布样相同的结果。除此之外，以上结果显示测试组和空白对照组比两个阴性对照组具有显著更长的孢子形成时间，该阴性对照组是染污但未洗涤的，或染污并用不含这种蛋白酶和淀粉酶的粉末洗涤剂本身洗涤的。结果的两个方面清楚地表明蛋白酶和淀粉酶可用于抑制真菌，黑曲霉的生长。
2.孢子密度评分测量
通过小组观察每个小块布样，并给出孢子分生孢子大小和密度的评分。测量是指测定部分下的“孢子密度评分”部分。
表7.孢子密度评分
以上表7的结果显示，试验组小块布样用包含蛋白酶和淀粉酶的洗涤剂洗涤，显示出与来自空白对照组的未染污的和未洗涤的小块布样基本上相同的结果。来自测试组和空白对照组两者的结果比两个阴性对照组显著更小，该阴性对照组是染污但未洗涤的，或染污并用不含这种蛋白酶和淀粉酶的洗涤剂本身洗涤的。这清楚地表明蛋白酶和淀粉酶用于防止、抑制或减少真菌，黑曲霉的效果。
实例5.通过用包含不同剂量的酶的酶液体洗涤剂洗涤来抑制真菌生长
材料
1.微生物-黑曲霉。(与实例2中相同)
2.污渍：1号婴儿食品
3.洗涤剂：标准O
4.小块布样类型：PCN01和CN42
5.不同的酶组：
A：单独的蛋白酶(SEQ ID NO:3)，
B：单独的淀粉酶(SEQ ID NO:9)，
C：蛋白酶(SEQ ID NO:3)，淀粉酶(SEQ ID NO:9)的共混物，重量比率为4:1。
6.分组：
程序：
1.根据以上洗涤测定部分中描述的程序制备染污的小块布样。
2.使用TOM洗涤程序。洗涤条件：TOM，30℃，120rpm，14°dH(Ca2+:Mg2+＝3:2)，20min。
3.真菌孢子接种的制备和将其应用于洗涤的小块布样，以及遵循测定部分中的孢子形成测定部分中的描述观察在来自不同组的小块布样上的真菌的生长。
结果
1.孢子形成时间
遵循前述实例中的相同程序可以通过肉眼观察来观察黑曲霉分生孢子。当可以看到可见的黑色分生孢子时记录。
表8.可见的分生孢子形成时间
从表8的结果可以看出，对于测试组C和组B，它们分别用包含蛋白酶和淀粉酶和淀粉酶本身的共混物的洗涤剂洗涤。对于PCN01和W30A小块布样两者，以上结果显示，在较低的酶剂量下，与阴性对照组相比，真菌孢子形成时间显著延长，并且在较高剂量下，真菌孢子形成时间甚至与未染污的和未洗涤的空白对照相同。
该结果表明在粉末洗涤剂中使用酶的真菌生长抑制益处。还可以看出W30A在延缓真菌孢子形成上比PCN01好一些。
2.孢子密度评分测量
通过小组观察每个小块布样，并给出孢子分生孢子大小和密度的评分。测量是指测定部分下的“孢子密度评分”部分。
表9
表9中的结果显示来自所有三个测试组A-C的小块布样，并且对于PCN01和W30A小块布样，显示了在较低的酶剂量下，与阴性对照组相比，真菌密度评分小得多，并且在较高剂量下，真菌孢子形成时间甚至与未染污的和未洗涤空白对照相同。
这清楚地表明蛋白酶和淀粉酶可用于防止、抑制或减少真菌，黑曲霉的生长。
3.CFU计数
此外，进行CFU计数以量化小块布样上的真菌。来自测试组C的PCN01小块布样用于此目的。通过以下等式从CFU计算孢子量：((剂量为10-n的平均CFU)×10n/0.2mL)×10Ml。
表10
表10中的结果清楚地显示，试验组在小块布样上的真菌残留具有显著较低的量，该小块布样用包含蛋白酶和淀粉酶的酶洗涤剂处理。
实例6.通过用包含不同剂量的酶的酶液体洗涤剂洗涤来抑制细菌生长
材料
1.细菌：恶臭假单胞菌(中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，菌株号1.3096)
2.洗涤剂：标准O，洗涤液浓度2g/L
3.酶：蛋白酶(SEQ ID NO:3)，淀粉酶(SEQ ID NO:9)
4.小块布样：CN42和W30A
5.污渍配方：2号婴儿食品
6.分组：
程序：
1.根据以上洗涤测定部分中描述的程序制备染污的小块布样。
2.使用TOM洗涤程序。洗涤条件：TOM，30℃，120rpm，14°dH(Ca2+:Mg2+＝3:2)，持续10/20min(当测试的小块布样的纺织品为CN42时，洗涤20min，当测试的小块布样的纺织品为PCN01或W30A，洗涤10min)。
3.细菌接种的制备和将其应用于洗涤的小块布样，以及遵循测定部分中的TTC测定部分中的描述观察在来自不同组的小块布样上的TTC颜色变化的生长。
结果
1.TTC可检测时间
TTC可检测时间是遵循测定部分中的TTC测定部分中的程序测量的。
表11
从表11的结果可以看出，对于用包含蛋白酶和淀粉酶的共混物的洗涤剂洗涤的测试组小块布样，W30A和CN42两者均显示与阴性对照1组相比显著延长的TTC可检测的时间，并且对于W30A小块布样和CN42小块布样的测试/阴性1比率分别为2和1.5。
这表明通过在液体洗涤剂中使用这些酶用于清洁织物表面的细菌生长抑制益处。
实例7.纤维素酶在减少细菌在纺织品上的附着中的用途
材料：
1.洗涤剂：液体洗涤剂：标准A；粉末洗涤剂：标准X
2.微生物：恶臭假单胞菌(中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，菌株号1.3096)
3.颜料污垢：来自测试材料BV中心(Center For Testmaterials BV，CFT)的WFK09V。它是含有“颜料”的所有污垢的/染污的测试织物中的标准颜料混合物。颜料污垢的添加是模拟真实的洗涤情况，其中存在相对脏的衣物将污垢释放到洗涤液中。
4.洗涤机：
a.迷你LOM，25℃，60min，20rpm，20ml洗涤液，在400ml洗涤烧杯中漂洗10min，当使用液体洗涤剂标准N时
b.TOM，25℃，30或20min，120rpm，500ml洗涤液，在500ml洗涤烧杯中漂洗10min，当使用粉末洗涤剂标准X时
5.小块布样：Emp252(针织条纹棉纺织品)
程序：
1.小块布样的预洗涤：小块布样首先在Wascator机器中老化，程序151，老化时间：10h。然后用标准洗涤剂洗涤测试小块布样，该标准洗涤剂是包含0.075ppm纤维素酶(SEQID NO:15)的液体洗涤剂标准A；或包含0.05ppm纤维素酶(SEQ ID NO:15)的粉末洗涤剂X；并且在FSW中仅用各自的标准洗涤剂洗涤对照小块布样。洗涤20个循环后，将该小块布样切成直径为1.9cm的圆形，并且然后在121℃下在高压灭菌器中灭菌15min，并且在60℃的烘箱中干燥。
表12.用于标准A的FSW洗涤条件：
表13.用于标准X的FSW洗涤条件：
2.第二次洗涤以上预洗涤的小块布样以及颜料污垢和细菌接种
1)根据常规程序制备达到OD600＝0.3的新鲜恶臭假单胞菌培养液。
2)通过加添加水(水硬度14°dH，Ca2+:Mg2+:Na+＝2:1:4.5)将洗涤剂和颜料污垢加载入迷你LOM烧杯(或TOM烧杯的500mL洗涤液)中，达到颜料污垢浓度为0.7g/L，并且洗涤剂浓度为2g/L，以制备20ml洗涤液。然后将100μL用于迷你LOM洗涤或1900ul用于TOM洗涤的新鲜细菌培养液(OD600＝0.3)添加至洗涤液中。
3)将3片预洗涤的小块布样放入迷你LOM烧杯或TOM烧杯中的每一个中，对于迷你LOM，在25℃、20rpm下洗涤60min，对于TOM，在30℃、120rpm下洗涤30min。
4)洗涤后，从烧杯中取出小块布样，并且在TOM中洗涤后，在迷你LOM或500ml灭菌水中洗涤后放入400mL灭菌水中。漂洗10min。
3.测量小块布样上残留的细菌量：将不同的小块布样转移到营养琼脂平板上，并且让它静置20秒。将琼脂平板在28℃的培养箱中孵育约12-24小时直至形成菌落，确定CFU。
结果：
表14.用液体洗涤剂预洗涤后，附着在Emp252小块布样上的细菌CFU
从上表中的结果可以看出，对于那些用包含纤维素酶(SEQ ID NO:15)的液体洗涤剂预洗涤的小块布样，当它进一步与相对较脏的衣物进行共同洗涤时(通过添加颜料污垢和细菌来模拟那些从这种相对脏的衣物释放到洗涤液中的细菌)，与仅用不包含纤维素酶的洗涤剂预洗涤的那些小块布样相比，预洗涤的小块布样表面上残留的细菌CFU少23.9％。该结果显示纤维素酶可以有效地用于减少细菌附着到纺织品上。
表15.用粉末洗涤剂预洗涤后，Emp252小块布样上的细菌CFU残余物
从上表中的结果可以看出，对于那些用包含纤维素酶(SEQ ID NO:15)的液体洗涤剂预洗涤的小块布样，当它进一步与相对较脏的衣物进行共同洗涤时(通过添加颜料污垢和细菌来模拟那些从这种相对脏的衣物释放到洗涤液中的细菌)，与仅用不包含纤维素酶的洗涤剂预洗涤的那些小块布样相比，预洗涤的小块布样表面上残留的细菌CFU少33.0％。该结果显示纤维素酶可以有效地用于减少细菌附着到纺织品上。
实例8纤维素酶在减少真菌在纺织品上的附着中的用途
实例8的进行基本上与前述实例相同，不同之处在于真菌近平滑假丝酵母(中国普通微生物菌种保藏管理中心，(菌株号：2.1846))取代了细菌恶臭假单胞菌，近平滑假丝酵母的量和培养条件相应地与前述的实例不同。
1)酵母加载量是：将100μL酵母新鲜培养液(OD600＝0.3)加载到用于迷你LOM的洗涤液中，将1000μL酵母新鲜培养液(OD600＝0.3)加载到用于TOM的洗涤液中。
2)TOM的洗涤时间为20min。
3)用于近平滑假丝酵母的培养基是酵母提取物-蛋白胨-右旋糖(YPD)培养基：10g/L酵母提取物、20g/L蛋白胨、20g/L右旋糖(将右旋糖与其他成分分开灭菌，灭菌后混合在一起)、20g/L琼脂用于固体培养基。
独立于CFU测定，使用PrestoBlueTM细胞活力试剂对小块布样进行来自小块布样上剩余的微生物的荧光检测，以比较第二次洗涤后残留在其上的微生物的活力。
使用PrestoBlueTM细胞活力试剂(赛默飞世尔科技公司(Thermo FisherScientific)，目录号：A13261)。PrestoBlue是一种基于刃天青的细胞渗透性溶液，该溶液通过使用活细胞的还原力定量地测量细胞的增殖，起到细胞活力指示物的作用。当添加到细胞中时，PrestoBlue试剂被活细胞的还原环境修饰并且颜色变成红色，变得具有高度荧光。可以使用荧光或吸光度测量来检测该颜色变化。PrestoBlue溶液以PrestoBlueTM细胞活力试剂:YPD培养基＝1:9的比率制备。
在TOM或迷你LOM中洗涤后，将不同烧杯中的小块布样分别用500mL灭菌水漂洗10min，然后小心地从小块布样中去除过量的水。将小块布样转移到12孔板中。在每个孔中添加2ml PrestoBlue溶液，然后盖上板并检测荧光动力学(激发：544nm，发射：590nm；间隔：30min，持续时间：22小时)。
结果：
表16用液体洗涤剂预洗涤后，Emp252小块布样上的真菌CFU残余物。
从上表中的结果可以看出，对于那些用包含纤维素酶(SEQ ID NO:15)的液体洗涤剂预洗涤的小块布样，当它进一步与相对较脏的衣物进行共同洗涤时(通过添加颜料污垢和细菌来模拟那些从这种相对脏的衣物释放到洗涤液中的细菌)，与仅用不包含纤维素酶的洗涤剂预洗涤的那些小块布样相比，预洗涤的小块布样表面上残留的真菌CFU少67.3％。该结果显示纤维素酶可以有效地用于减少真菌附着到纺织品上。
表17.用粉末洗涤剂预洗涤后，Emp252小块布样上的真菌CFU残余物
从上表中的结果可以看出，对于那些用包含纤维素酶(SEQ ID NO:15)的液体洗涤剂预洗涤的小块布样，当它进一步与相对较脏的衣物进行共同洗涤时(通过添加颜料污垢和细菌来模拟那些从这种相对脏的衣物释放到洗涤液中的细菌)，与仅用不包含纤维素酶的洗涤剂预洗涤的那些小块布样相比，预洗涤的小块布样表面上残留的真菌CFU少85％。该结果显示纤维素酶可以有效地用于减少真菌附着到纺织品上。
表18PrestoBlue荧光发射结果
对应于表18的相同结果也示出于图1中。
从以上表和图1的PestoBlue荧光测定结果可以看出，对于那些用包含纤维素酶(SEQ ID NO:15)的液体洗涤剂预洗涤的小块布样，当它进一步与相对较脏的衣物进行共同洗涤时(通过添加颜料污垢和细菌来模拟那些从这种相对脏的衣物释放到洗涤液中的细菌)，荧光动力学图表表明，与仅用不包含纤维素酶的洗涤剂预洗涤的那些小块布样相比，残留在预洗涤的小块布样上的真菌的活力低得多。具体地，酶法预洗涤的小块布样显示出荧光单位值的更慢更平坦的上升，并且当小块布样已经孵育超过900min的时间段时这是显著的。该结果显示纤维素酶可以有效地用于减少真菌附着到纺织品上。
实例9.酶在抑制用酶液体洗涤剂产生的细菌中的用途
材料
1.细菌：恶臭假单胞菌(中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，菌株号1.3096)
2.洗涤剂：蓝月深度清洁液体洗涤剂，洗涤液浓度2g/L
3.酶：
a.蛋白酶，SEQ ID NO:3
b.酶混合物1：0.41ppm蛋白酶(SEQ ID NO:3)，0.052ppm淀粉酶(SEQ ID NO:9)
c.酶混合物2：0.62ppm蛋白酶(SEQ ID NO:3)，0.052ppm淀粉酶(SEQ ID NO:9)和0.16ppm纤维素酶(SEQ ID No:17)
4.小块布样：预老化的PCN01：小块布样在Wascator机器中老化，程序151，老化时间：10h。
5.污渍：2号婴儿食品，红烧牛肉污渍
程序：
1.根据测定部分描述的程序制备婴儿食品染污的小块布样或红烧牛肉染污的小块布样：染污的小块布样的制备。
2.使用FSW洗涤程序以洗涤上述染污的小块布样。洗涤条件：AP顶部加载型机器，25℃，14°dH(Ca2+:Mg2+＝3:2)，主要洗涤时间为15min，漂洗2次。对于不同的组，该小块布样仅用洗涤剂(蓝月亮深度清洁)或包含各种酶或酶组合的洗涤剂洗涤。
3.将来自步骤2的小块布样放入灭菌培养皿(直径＝9cm)，一片小块布样放入一个培养皿中，用于接受恶臭假单胞菌的接种。细菌接种的制备和将其应用于洗涤的小块布样，以及遵循测定部分中的TTC测定部分中的相关描述观察在小块布样上的TTC颜色变化的生长。
4.将小块布样孵育30±4小时后，从培养箱中取出所有培养皿，通过上述说明进行气味小组评估。
5.气味小组评估
允许从培养箱中取出的小块布样在室温和室内湿度下平衡30min，然后移入小组室进行评估。小组成员选自经验丰富并且有资格的候选者库。小组成员进行评估而无法看到小块布样。提供了需要评估的两个培养皿中的两个样品，该小组成员闻每个样品2秒钟，并且然后在闻另一个样品之前吸新鲜空气超过10s。呼吸新鲜空气超过10s后，他们可以遵循相同的程序评估下一对样品。
6.在小组评估的同时，来自步骤4的小块布样也经历了对恶臭的GS-MS测量：
从培养箱中取出微生物染污的小块布样。使用灭菌剪刀切除距离污渍区域1.5cm×1.5cm的一小块污渍。然后使用干净的灭菌镊子将每个切下的小块布样转移到20mL GC顶空小瓶中，并且然后分析来自加盖的小瓶的顶空。
通过GC-MS分析来自加盖的小瓶的顶空：
具有分流/无分流注入器的GCMS Agilent(安捷伦)7890GC和具有提取器离子源的5977MS偶联到具有HS/SPME，SPME针加热器的Gerstel MPS2采样器上。
Gerstel MPS SPME培养箱：搅拌器。孵育温度：60℃。孵育时间：10.00min。搅拌速度：250rpm。样品参数：提取时间：20min；注入解吸时间：120s。
SPME(固相微提取)纤维类型：碳分子筛(Carboxen)/聚二甲基硅氧烷(CAR/PDMS)
使用的方法是：GC烘箱温度：初始40℃；保持2min；速率5℃/min直至150℃；速率35℃/min直至240℃；保持3min。前SS入口He：模式分流；Ta 230℃，分流比率10:1；分流气流15mL/min。柱：安捷伦19091F-433：FFAP-01HP-FFAP 30m x 250μm x 0.25μm
MS信息：采集模式：扫描。溶剂延迟(分钟)：1。扫描参数：开始时间：1.低质量：35.高质量：350.阈值：100.A/D样品：4.MS区：MS源：230℃。MS Quad：150℃
结果
1.气味小组
表19.5名小组成员对婴儿食品和恶臭假单胞菌染污的小块布样进行气味评估：
上表19的结果显示，对于那些用包含不同酶或酶混合物的洗涤剂洗涤并随后暴露于细菌(恶臭假单胞菌)的婴儿食品染污的小块布样，与仅用洗涤剂洗涤的小块布样平行组相比，它们都显示出如小组评估所示的显著更好的恶臭抑制结果。
表20.11名小组成员对婴儿食品和恶臭假单胞菌染污的小块布样进行气味评估：
上表20的结果显示，对于那些用包含不同酶或酶混合物的洗涤剂洗涤并随后暴露于细菌(恶臭假单胞菌)的婴儿食品染污的小块布样，与仅用洗涤剂洗涤的小块布样平行组相比，它们都显示出如小组评估所示的显著更好的恶臭抑制结果。
2.GCMS结果
表21.对婴儿食品和恶臭假单胞菌染污的小块布样的GCMS恶臭检测结果：
四种VOC分子是代表性的恶臭分子。
上表21的结果显示，对于那些用包含不同酶或酶混合物的洗涤剂洗涤并随后暴露于细菌(恶臭假单胞菌)的婴儿食品染污的小块布样，与仅用不包含酶的洗涤剂洗涤的那些平行组小块布样相比，VOC水平显著降低。
表22.红烧牛肉污渍和恶臭假单胞菌染污的小块布样的GCMS恶臭检测结果：
七种VOC分子可以是代表性的恶臭分子，特别是3-辛酮具有味和发霉的气味，2,3-丁二酮具有臭味。
上表22的结果显示，对于那些用包含不同酶或酶混合物的洗涤剂洗涤并随后暴露于细菌(恶臭假单胞菌)的红烧牛肉染污的小块布样，与仅用不包含酶的洗涤剂洗涤的那些平行组小块布样相比，VOC水平显著降低。
实例10通过用包含酶的多酶液体洗涤剂洗涤来抑制真菌恶臭的产生
实例9的进行基本上与前述实例相同，不同之处在于真菌黑曲霉(菌株信息与实例2中相同)取代了细菌恶臭假单胞菌。真菌接种的制备和将其应用于洗涤的小块布样，以及遵循测定部分中的真菌孢子/菌丝体形成时间测定部分中的相关描述观察在小块布样上的真菌的生长相应地与前述的实例不同。仅使用GS-MS测量恶臭来评估小块布样。
结果
表23.对婴儿食品和黑曲霉染污的小块布样的GCMS恶臭结果：
上表23的结果显示，对于那些用包含不同酶或酶混合物的洗涤剂洗涤并随后暴露于黑曲霉的婴儿食品染污的小块布样，与仅用不包含酶的洗涤剂洗涤的那些平行组小块布样相比，VOC水平显著降低。
表24.红烧牛肉污渍和黑曲霉染污的小块布样的GCMS恶臭检测结果：
上表24的结果显示，对于那些用包含不同酶或酶混合物的洗涤剂洗涤并随后暴露于黑曲霉的红烧牛肉染污的小块布样，与仅用不包含酶的洗涤剂洗涤的那些平行组小块布样相比，VOC水平显著降低。
序列表
<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）
<120> 一种或多种酶在防止、抑制或减少表面上微生物生长中的用途
<130> 14376-WO-PCT
<160> 18
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 1
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 1015
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
202530
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
354045
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
505560
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65707580
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
859095
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 2
<211> 275
<212> PRT
<213> 解淀粉芽孢杆菌
<400> 2
Ala Gln Ser Val Pro Tyr Gly Val Ser Gln Ile Lys Ala Pro Ala Leu
1 5 1015
His Ser Gln Gly Tyr Thr Gly Ser Asn Val Lys Val Ala Val Ile Asp
202530
Ser Gly Ile Asp Ser Ser His Pro Asp Leu Lys Val Ala Gly Gly Ala
354045
Ser Met Val Pro Ser Glu Thr Asn Pro Phe Gln Asp Asn Asn Ser His
505560
Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly
65707580
Val Leu Gly Val Ala Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu
859095
Gly Ala Asp Gly Ser Gly Gln Tyr Ser Trp Ile Ile Asn Gly Ile Glu
100 105 110
Trp Ala Ile Ala Asn Asn Met Asp Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Gly
115 120 125
Pro Ser Gly Ser Ala Ala Leu Lys Ala Ala Val Asp Lys Ala Val Ala
130 135 140
Ser Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Glu Gly Thr Ser Gly
145 150 155 160
Ser Ser Ser Thr Val Gly Tyr Pro Gly Lys Tyr Pro Ser Val Ile Ala
165 170 175
Val Gly Ala Val Asp Ser Ser Asn Gln Arg Ala Ser Phe Ser Ser Val
180 185 190
Gly Pro Glu Leu Asp Val Met Ala Pro Gly Val Ser Ile Gln Ser Thr
195 200 205
Leu Pro Gly Asn Lys Tyr Gly Ala Tyr Asn Gly Thr Ser Met Ala Ser
210 215 220
Pro His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ile Leu Ser Lys His Pro Asn
225 230 235 240
Trp Thr Asn Thr Gln Val Arg Ser Ser Leu Glu Asn Thr Thr Thr Lys
245 250 255
Leu Gly Asp Ser Phe Tyr Tyr Gly Lys Gly Leu Ile Asn Val Gln Ala
260 265 270
Ala Ala Gln
275
<210> 3
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 3
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 1015
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
202530
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser
354045
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505560
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65707580
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Leu Ser Thr Trp Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
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<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 4
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 1015
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
202530
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser
354045
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
505560
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu
65707580
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
859095
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met Val Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Glu
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Pro Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Leu Ser Thr Trp Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
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210 215 220
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Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
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<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 5
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 1015
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
202530
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser
354045
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505560
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Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
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100 105 110
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130 135 140
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145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
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195 200 205
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Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 6
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 6
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 1015
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
202530
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser
354045
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
505560
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu
65707580
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
859095
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Glu
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Pro Gly Leu Asp Ile
180 185 190
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195 200 205
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Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
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245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
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<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 7
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 1015
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
202530
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser
354045
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
505560
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu
65707580
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
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Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met Val Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Glu
165 170 175
Asn Asn Glu Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Pro Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Leu Ser Thr Trp Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
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225 230 235 240
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245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 8
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 8
Ala Gln Val Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 1015
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
202530
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
354045
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
505560
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu
65707580
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
859095
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met Val Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Glu
165 170 175
Asn Asn Glu Arg Ala Glu Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Leu Ser Thr Trp Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Val Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Asp Leu Gly Ser Thr Trp Glu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 9
<211> 482
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 融合蛋白
<400> 9
His Asp Gly Thr Asn Gly Thr Ile Met Gln Tyr Phe Glu Trp Asn Val
1 5 1015
Pro Asn Asp Gly Gln His Trp Asn Arg Leu His Asn Asn Ala Gln Asn
202530
Leu Lys Asn Ala Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp Lys
354045
Gly Thr Ser Gln Ser Asp Thr Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr Asp
505560
Leu Gly Glu Phe Asn Gln Arg Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr
65707580
Lys Ala Glu Leu Glu Arg Ala Ile Arg Ser Leu Lys Ala Asn Gly Ile
859095
Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Ala Gly Ala Asp Gln
100 105 110
Thr Glu Gln Val Gln Ala Val Glu Val Asn Pro Gln Asn Arg Asn Gln
115 120 125
Glu Val Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Glu Ala Trp Thr Gly Phe Asn Phe
130 135 140
Pro Gly Arg Gly Asn Gln His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His
145 150 155 160
Phe Asp Gly Thr Asp Phe Asp Gln Ser Arg Gly Leu Ser Asn Arg Ile
165 170 175
Tyr Lys Phe Arg Thr Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu Phe
180 185 190
Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Met Asp His Pro
195 200 205
Glu Val Ile Asn Glu Leu Asn Arg Trp Gly Val Trp Tyr Ala Asn Thr
210 215 220
Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys Phe
225 230 235 240
Ser Phe Met Arg Asp Trp Leu Gly His Val Arg Gly Gln Thr Gly Lys
245 250 255
Asn Leu Phe Ala Val Ala Glu Tyr Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala Leu
260 265 270
Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Thr Met Ser Ala Phe Asp Val
275 280 285
Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Gln Ala Ser Asn Ser Ser Gly Asn Tyr
290 295 300
Asp Met Arg Asn Leu Leu Asn Gly Thr Leu Val Gln Arg His Pro Ser
305 310 315 320
His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Glu Ala
325 330 335
Leu Glu Ser Phe Val Gln Gly Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Thr
340 345 350
Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr Gly Asp Tyr
355 360 365
Tyr Gly Ile Pro Ser Asp Gly Val Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Ile Asp
370 375 380
Pro Leu Leu Ala Ala Arg Gln Gln Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His Asp
385 390 395 400
Tyr Leu Asp Asn Gln Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asp Ser
405 410 415
Ala His Ala Gly Ser Gly Leu Ala Thr Val Met Ser Asp Gly Pro Gly
420 425 430
Gly Ser Lys Thr Met Tyr Val Gly Thr Ala His Ala Gly Gln Val Phe
435 440 445
Lys Asp Ile Thr Gly Asn Arg Thr Asp Thr Val Thr Ile Asn Ser Ala
450 455 460
Gly Asn Gly Thr Phe Arg Cys Asn Lys Gly Ser Val Ser Ile Trp Val
465 470 475 480
Lys Gln
<210> 10
<211> 483
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种
<400> 10
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 1015
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser
202530
Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Ser Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
354045
Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
505560
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly
65707580
Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Asn Ala Leu Lys Ser Asn Gly
859095
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Met Val Lys Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Lys Leu Asn Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu
180 185 190
Phe Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met Asp His
195 200 205
Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr Thr Asn
210 215 220
Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His Ile Lys
225 230 235 240
Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala Thr Gly
245 250 255
Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala
260 265 270
Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val Phe Asp
275 280 285
Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Lys Ser Gly Gly Asn
290 295 300
Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Lys His Pro
305 310 315 320
Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro Glu Glu
325 330 335
Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala
340 345 350
Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp
355 360 365
Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser Lys Ile
370 375 380
Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Arg Gln Asn
385 390 395 400
Asp Tyr Leu Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asn
405 410 415
Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp Gly Ala
420 425 430
Gly Gly Asn Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly Gln Val
435 440 445
Trp Thr Asp Ile Thr Gly Asn Lys Ala Gly Thr Val Thr Ile Asn Ala
450 455 460
Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Trp
465 470 475 480
Val Asn Lys
<210> 11
<211> 485
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种
<400> 11
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 1015
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser
202530
Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Ser Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
354045
Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
505560
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly
65707580
Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Asn Ala Leu Lys Ser Asn Gly
859095
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Met Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Lys Leu Asn Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr
210 215 220
Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala
245 250 255
Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu
260 265 270
Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Lys Ser Gly
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg
305 310 315 320
His Pro Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro
325 330 335
Glu Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
Tyr Ala Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr
355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser
370 375 380
Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Arg
385 390 395 400
Gln Asn Asp Tyr Leu Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu
405 410 415
Gly Asn Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp
420 425 430
Gly Ala Gly Gly Asn Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly
435 440 445
Gln Val Trp Thr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ala Gly Thr Val Thr Ile
450 455 460
Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Ile Trp Val Asn Lys
485
<210> 12
<211> 485
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种NCIB 12513
<400> 12
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His
1 5 1015
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser
202530
Asn Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp
354045
Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
505560
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65707580
Thr Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly
859095
Val Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Asn Val Leu Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Ile Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Phe Gln Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Ser Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr
210 215 220
Thr Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala
245 250 255
Thr Gly Lys Glu Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu
260 265 270
Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys
305 310 315 320
His Pro Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro
325 330 335
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Tyr Ala Leu Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr
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Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Thr
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Gly Pro Gly Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asn Lys Ala Gly
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Asn Ala Asp Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
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Ile Trp Val Lys Arg
485
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<211> 485
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种号707
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202530
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<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种TY145
<400> 14
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202530
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275 280 285
Ile Lys Gly Gly Ile Gly Ala Gly Thr Gly Asp Asp Tyr Ala Ser Gly
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<212> PRT
<213> 土生梭孢壳霉
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202530
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<212> PRT
<213> 特异腐质霉
<400> 16
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Val Leu Ala Leu Ala Ala Asp Gly Arg Ser Thr Arg Tyr Trp Asp Cys
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Gly Gly Ile Ser Ser Arg Asn Glu Cys Asp Arg Phe Pro Asp Ala Leu
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Arg Thr Gly Cys Arg Arg
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<211> 425
<212> PRT
<213> 大肠杆菌
<400> 17
Thr Ala Leu Leu Leu Gly Leu Val Asn Gly Gln Lys Pro Gly Glu Thr
1 5 1015
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Gly Cys Lys Pro Ala Thr Asn Phe Ile Val Leu Asp Ser Leu Ser His
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<210> 18
<211> 773
<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌
<400> 18
Ala Glu Gly Asn Thr Arg Glu Asp Asn Phe Lys His Leu Leu Gly Asn
1 5 1015
Asp Asn Val Lys Arg Pro Ser Glu Ala Gly Ala Leu Gln Leu Gln Glu
202530
Val Asp Gly Gln Met Thr Leu Val Asp Gln His Gly Glu Lys Ile Gln
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Leu Arg Gly Met Ser Thr His Gly Leu Gln Trp Phe Pro Glu Ile Leu
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Asn Asp Asn Ala Tyr Lys Ala Leu Ala Asn Asp Trp Glu Ser Asn Met
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Ile Arg Leu Ala Met Tyr Val Gly Glu Asn Gly Tyr Ala Ser Asn Pro
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Glu Leu Ile Lys Ser Arg Val Ile Lys Gly Ile Asp Leu Ala Ile Glu
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Asn Asp Met Tyr Val Ile Val Asp Trp His Val His Ala Pro Gly Asp
115 120 125
Pro Arg Asp Pro Val Tyr Ala Gly Ala Glu Asp Phe Phe Arg Asp Ile
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Ala Ala Leu Tyr Pro Asn Asn Pro His Ile Ile Tyr Glu Leu Ala Asn
145 150 155 160
Glu Pro Ser Ser Asn Asn Asn Gly Gly Ala Gly Ile Pro Asn Asn Glu
165 170 175
Glu Gly Trp Asn Ala Val Lys Glu Tyr Ala Asp Pro Ile Val Glu Met
180 185 190
Leu Arg Asp Ser Gly Asn Ala Asp Asp Asn Ile Ile Ile Val Gly Ser
195 200 205
Pro Asn Trp Ser Gln Arg Pro Asp Leu Ala Ala Asp Asn Pro Ile Asn
210 215 220
Asp His His Thr Met Tyr Thr Val His Phe Tyr Thr Gly Ser His Ala
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Asp Gly Trp Gly Lys Ser Val Asp Ile Leu Gly Ala Glu Lys Leu Thr
435 440 445
Met Asp Val Ile Val Asp Glu Pro Thr Thr Val Ala Ile Ala Ala Ile
450 455 460
Pro Gln Ser Ser Lys Ser Gly Trp Ala Asn Pro Glu Arg Ala Val Arg
465 470 475 480
Val Asn Ala Glu Asp Phe Val Gln Gln Thr Asp Gly Lys Tyr Lys Ala
485 490 495
Gly Leu Thr Ile Thr Gly Glu Asp Ala Pro Asn Leu Lys Asn Ile Ala
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Phe His Glu Glu Asp Asn Asn Met Asn Asn Ile Ile Leu Phe Val Gly
515 520 525
Thr Asp Ala Ala Asp Val Ile Tyr Leu Asp Asn Ile Lys Val Ile Gly
530 535 540
Thr Glu Val Glu Ile Pro Val Val His Asp Pro Lys Gly Glu Ala Val
545 550 555 560
Leu Pro Ser Val Phe Glu Asp Gly Thr Arg Gln Gly Trp Asp Trp Ala
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580 585 590
Ser Asn Ala Leu Ser Trp Glu Phe Gly Tyr Pro Glu Val Lys Pro Ser
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770
