包含脂肪酸加工酶的洗涤剂组合物
序列表的引用
本申请包含计算机可读形式的序列表。所述计算机可读形式以引用方式并入本文。
技术领域
本发明涉及一种液体洗涤剂组合物，其包含表面活性剂体系、一种或多种氢过氧脂肪酸产生酶和液体载体(即水)，所述氢过氧脂肪酸产生酶选自：花生四烯酸脂氧合酶、α-双加氧酶、以及它们的混合物，优选α-双加氧酶。所述组合物提供一种或多种有益效果，包括良好的清洁，特别是良好的油脂乳化，以及持久的肥皂泡沫，尤其是在油脂污垢的存在下。
背景技术
液体洗涤剂组合物应具有良好的起泡特征，特别是持久的起泡特征，尤其是在油脂污垢的存在下，同时提供良好的污垢和/或油脂清洁。使用者通常将肥皂泡沫视为液体洗涤剂组合物性能的指标。此外，液体洗涤剂组合物的使用者还可使用起泡特征和肥皂泡沫的外观(例如密度、白度)作为洗涤溶液仍含有活性洗涤剂成分的指标。这对于手动洗涤(在本文中也称为手洗)尤其如此，其中使用者通常根据剩余的肥皂泡沫按剂量施用液体洗涤剂组合物并且当肥皂泡沫消退时或当肥皂泡沫看起来不足够稠厚时更新洗涤溶液。因此，液体洗涤剂组合物，特别是产生很少或低密度肥皂泡沫的液体手动洗涤洗涤剂组合物往往会被使用者比所需的更频繁地更换。因此，希望液体洗涤剂组合物提供“良好的起泡特征”，这些良好的起泡特征在液体洗涤剂与水的初始混合期间和/或整个洗涤操作期间提供良好的肥皂泡沫高度和/或密度以及良好的肥皂泡沫持续时间。
还需要改善的液体洗涤剂组合物，当在手动洗涤过程中使用时，该组合物优选还提供令人愉快的洗涤体验，即在洗涤过程中使用者的手感觉良好。优选地，液体洗涤剂组合物也易于冲洗。此外，希望改善的液体洗涤剂组合物是稳定的并且不会相分离，从而导致产品更大的储存寿命。此外，该组合物优选为洗涤过的物品提供良好的光洁度。还期望减少表面活性剂的量而不会不利地影响起泡和油脂清洁和乳化特征。因此，需要发现在手洗条件下改善清洁和肥皂泡沫寿命的新组合物。
已经发现，某些类型的污垢，特别是包含不饱和脂肪酸的油脂污垢起抑泡剂的作用，引发消费者比所需的更频繁地更换产品。因此，需要提供具有所需肥皂泡沫特性，尤其是在油脂污垢存在下，甚至更加在包含不饱和脂肪酸的油脂污垢存在下，并同时提供良好的污垢和油脂去除性质的液体洗涤剂组合物。申请人发现，通过如本文在下文所述的改善的液体洗涤剂组合物，可至少部分地满足上述需要中的一些或全部。
发明内容
基于如下令人惊讶的发现，本发明满足了这些需要中的一个或多个：通过配制包含能够将一种或多种脂肪酸转化为一种或多种氢过氧脂肪酸的一种或多种氢过氧脂肪酸产生酶、表面活性剂体系和液体载体的液体洗涤剂组合物，这种组合物表现出良好的起泡特征，特别是期望的肥皂泡沫体积和/或持续的肥皂泡沫稳定性，尤其是在油脂污垢的存在下。它还提供良好的油脂清洁和乳化有益效果。
根据本发明的一个方面，提供了一种液体洗涤剂组合物，其包含一种或多种氢过氧脂肪酸产生酶、表面活性剂体系和按所述组合物的重量计30重量％至95重量％的液体载体(即水)。所述氢过氧脂肪酸产生酶选自：花生四烯酸脂氧合酶、α-双加氧酶、以及它们的混合物，优选α-双加氧酶。所述表面活性剂体系包含一种或多种阴离子表面活性剂和一种或多种选自两性表面活性剂、两性离子表面活性剂、以及它们的混合物的辅助表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂与所述辅助表面活性剂的重量比小于9:1、更优选为5:1至1:1、更优选为4:1至2:1。
优选地，所述液体洗涤剂组合物是手动洗涤组合物。优选地，所述液体洗涤剂组合物用于手动盘碟洗涤。本发明的组合物提供良好的清洁和良好的起泡特征，特别是在油脂污垢存在下。
根据另一个方面，本发明涉及一种手动洗涤脏污制品，优选盘碟的方法，该方法包括以下步骤：将本发明的组合物递送至一定体积的水中以形成洗涤溶液，并且将所述脏污制品浸入所述洗涤溶液中。优选地，在洗涤过程期间，氢过氧脂肪酸产生酶以基于活性蛋白质0.005ppm至15ppm、优选0.01ppm至5ppm、更优选0.02ppm至0.5ppm的浓度存在于洗涤溶液中。优选地，手动洗涤是盘碟洗涤，并且脏污制品包括脏污的盘碟。如本文所用，“盘碟”包括炊具和餐具。
当根据该方法使用本发明的组合物时，实现了良好的起泡特征，具有持久的效果。
在又一方面，本发明涉及一种手动洗涤盘碟的方法，该方法包括以下步骤：i)将本发明的组合物递送至盘碟或清洁工具上；ii)在水的存在下用所述组合物清洁所述盘碟；以及iii)任选地漂洗所述盘碟。优选地，本发明的组合物以纯态形式(即直接施用)使用，因为当将所述组合物直接施用于脏污的表面上或待用于清洁脏污表面的清洁工具(诸如海绵)上时，获得油脂清洁方面更大的有益效果。
根据另一方面，本发明涉及一种或多种氢过氧脂肪酸产生酶在本发明的液体洗涤剂组合物中用于在包含污垢、尤其是油脂污垢、尤其是包含不饱和脂肪酸的油脂污垢的含水洗涤液体中提供增加的肥皂泡沫寿命的用途。本发明的组合物提供良好的清洁和良好的起泡特征，特别是在油脂污垢存在下。
相对于本发明的第一方面描述的本发明的组合物的元素作必要修改之后适用于本发明的其他方面。
对于本领域技术人员来说，通过下文的具体实施方式，本发明的这些和其他的特征、方面和优点将变得显而易见。
具体实施方式
定义
如本文所用，当用于权利要求中时，冠词“一个”和“一种”被理解为是指受权利要求书保护或描述的一种或多种。
如本文所用，术语“基本上不含”或“基本上没有”意指按组合物的重量计，所指示的物质以不超过约5重量％，优选不超过约2％，并且更优选不超过约1重量％的量存在。
如本文所用，术语“实质上不含”或“实质上没有”意指按组合物的重量计，所指示的物质以不超过约0.1重量％的量存在，或优选地不以分析上可检测的水平存在于这种组合物中。其可包括这样的组合物，其中所指示的物质仅作为有意加入此类组合物中的一种或多种物质的杂质。
如本文所用，术语“洗涤剂组合物”是指设计用于清洁脏污表面的组合物或制剂。此类组合物包括但不限于盘碟洗涤组合物、衣物洗涤剂组合物、织物软化组合物、织物增强组合物、织物清新组合物、衣物洗涤预洗剂、衣物洗涤预处理剂、衣物洗涤添加剂、喷雾产品、干洗剂或组合物、衣物洗涤冲洗添加剂、洗涤添加剂、后冲洗织物处理剂、熨烫助剂、硬质表面清洁组合物、单位剂量制剂、延迟递送制剂、在多孔基底或非织造片材上或之内包含的洗涤剂、以及根据本文的教导内容对本领域技术人员显而易见的其他合适的形式。此类组合物可被用作清洁预处理剂、清洁后处理剂，或也可在清洁过程的漂洗循环或洗涤循环期间添加。洗涤剂组合物呈液体形式。优选地，组合物用于手动洗涤。优选地，本发明的洗涤剂组合物为手动盘碟洗涤洗涤剂。
如本文所用，术语“片段”意指参考序列的至少30、60、100、150个连续氨基酸或其间的任何整数的氨基酸序列。
如本文所用，术语“同一性”意指两个或更多个序列之间的同一性，并且以序列之间的同一性或相似性来表示。序列同一性可以同一性百分比测量；百分比越高，序列同一性越高。在比较长度上计算同一性百分比。例如，同一性典型地在针对参考序列的整个长度比对的序列的整个长度上计算。用于比较的序列比对方法是本领域熟知的并且同一性可通过许多已知的方法计算。各种程序和比对算法在本领域中有所描述。应当指出的是，术语“序列同一性”和“序列相似性”可互换使用。
如本文所用，术语“增加的肥皂泡沫寿命”意指在使用包含一种或多种氢过氧脂肪酸产生酶，并且优选一种或多种氢过氧脂肪酸转化酶的组合物清洁脏污制品的洗涤方法中，与在不存在氢过氧脂肪酸产生酶和氢过氧脂肪酸转化酶的情况下由相同的组合物和方法提供的肥皂泡沫寿命相比，可见肥皂泡沫的持续时间增加。
如本文所用，术语“脏污表面”非特定地指任何类型的由天然纤维或人造纤维的网络构成的柔性材料，包括天然纤维、人造纤维和合成纤维，诸如但不限于棉、亚麻布、羊毛、聚酯、尼龙、丝绸、丙烯酸类等、以及各种共混物和组合。脏污表面还可指任何类型的硬质表面，包括天然表面、人造表面或合成表面，诸如但不限于砖材、花岗石、灰浆、玻璃、复合材料、乙烯树脂、硬木、金属、烹饪表面、塑料等、以及共混物和组合。本专利申请的关键目标脏污表面为脏污盘碟。
如本文所用，术语氢过氧脂肪酸产生酶或氢过氧脂肪酸转化酶的“变体”意指当氢过氧脂肪酸产生酶或氢过氧脂肪酸转化酶由选自取代、插入、缺失以及它们的组合的一个或多个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10或更多个氨基酸修饰)修饰或在所述一个或多个氨基酸处修饰时的氨基酸序列。变体可具有“保守”取代，其中取代的氨基酸具有与置换它的氨基酸类似的结构或化学特性，例如用异亮氨酸置换亮氨酸。变体可具有“非保守”变化，例如用色氨酸置换甘氨酸。变体还可包括具有氨基酸缺失或插入，或两者的序列。可以使用本领域熟知的计算机程序发现确定哪些氨基酸残基可被取代、插入或缺失而不消除蛋白质活性的指导。变体还可包括衍生自氢过氧脂肪酸产生酶或氢过氧脂肪酸转化酶的截短形式，诸如例如具有截短的N末端的蛋白质。变体还可包括通过将额外的氨基酸序列添加到野生型蛋白质而衍生的形式，诸如例如N末端标记、C末端标记或蛋白质序列中间的插入。
如本文所用，术语“水硬度”或“硬度”意指存在于水中的未络合阳离子(即，Ca2+或Mg2+)，这些阳离子在碱性条件下可能与阴离子表面活性剂或任何其他带阴离子电荷的洗涤剂活性物质发生沉淀，从而削弱表面活性剂的表面活性和清洁能力。另外，术语“高水硬度”或“提升的水硬度”可互换使用，并且出于本发明的目的，是相关术语，并且旨在包括但不限于包含至少12克钙离子每加仑水(gpg，“美国格令硬度”单位)的硬度水平。
洗涤剂组合物
本发明涉及一种液体洗涤剂组合物，优选液体手动盘碟洗涤组合物。其含有按所述组合物的重量计30％至95％、优选40％至90％、更优选50％至85％的液体载体，其中其他基本组分和任选组分溶解、分散或悬浮。所述液体载体为水。
优选地，本发明的液体洗涤剂组合物的pH(测量为20℃下脱矿质水中的10％产物浓度)被调节至在3与14之间、更优选在4与13之间、更优选在6与12之间，并且最优选在8与10之间。可使用本领域已知的pH调节成分来调节液体洗涤剂组合物的pH。
酶
脂肪酸可在分子氧(O2)的存在下被双加氧酶诸如花生四烯酸脂氧合酶和α-双加氧酶氧化，以产生氢过氧脂肪酸。这些氢过氧化化合物可通过其他酶进一步加工或自发地转化成不同组的含氧脂肪酸和其他衍生物。在本专利申请的上下文中，“氢过氧脂肪酸产生酶”是能够将至少一种脂肪酸转化成含氧化合物的混合物的酶，所述含氧化合物包含至少一种氢过氧脂肪酸作为中间体或作为最终产物。
出乎意料的是，申请人发现一组氢过氧脂肪酸产生酶能够在包含油性和/或油脂污垢的洗涤剂洗涤溶液中产生更稳定，从而更持久的起泡特征。不希望受理论的束缚，申请人相信，增加的起泡有益效果归因于存在于油性和/或油脂污垢中的脂肪酸转化为含氧脂肪酸，其具有增强的表面活性剂特性和在硬水存在下降低的沉淀趋势。
因此，本发明的液体洗涤剂组合物包含一种或多种氢过氧脂肪酸产生酶。氢过氧脂肪酸产生酶能够将一种或多种脂肪酸转化成一种或多种氢过氧脂肪酸。所述氢过氧脂肪酸产生酶选自：花生四烯酸脂氧合酶、α-双加氧酶、以及它们的混合物，优选α-双加氧酶。
优选地，由氢过氧脂肪酸产生酶转化的脂肪酸选自：单不饱和脂肪酸、二不饱和脂肪酸、三不饱和脂肪酸、四不饱和脂肪酸、五不饱和脂肪酸、六不饱和脂肪酸、饱和脂肪酸以及它们的混合物；优选肉豆蔻脑酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈油酸、棕榈酸、十六碳烯酸、十七碳烯酸、油酸、反油酸、异油酸、亚油酸、反式亚麻酸、α-亚麻酸、γ-亚麻酸、硬脂酸、鳕油酸、花生酸、山嵛酸、α-桐酸、β-桐酸、蓖麻酸、二十烷酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸、二十二碳二烯酸、二十二碳六烯酸、二十四碳烯酸、以及它们的混合物，优选棕榈油酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸、γ-亚麻酸、以及它们的混合物，更优选油酸。
优选地，由脂肪酸与氢过氧脂肪酸产生酶的转化反应形成的所得氢过氧脂肪酸选自2-氢过氧脂肪酸、8R-氢过氧脂肪酸、8S-氢过氧脂肪酸、9R-氢过氧脂肪酸、9S-氢过氧脂肪酸、10R-氢过氧脂肪酸、11R-氢过氧脂肪酸、11S-氢过氧脂肪酸、12R-氢过氧脂肪酸、12S-氢过氧脂肪酸、13R-氢过氧脂肪酸、13S-氢过氧脂肪酸、14R-氢过氧脂肪酸、14S-氢过氧脂肪酸、15S-氢过氧脂肪酸、它们的衍生物、以及它们的混合物；优选2R-氢过氧脂肪酸、不饱和5S-氢过氧脂肪酸、不饱和8R-氢过氧脂肪酸、不饱和9R-氢过氧脂肪酸、不饱和11R-氢过氧脂肪酸、不饱和12R-氢过氧脂肪酸、不饱和12S-氢过氧脂肪酸、不饱和13S-氢过氧脂肪酸、不饱和15S-氢过氧脂肪酸、它们的衍生物、以及它们的混合物；更优选2R-氢过氧脂肪酸。所得氢过氧脂肪酸可自发地或酶转化成羟基脂肪酸、醛、短脂肪酸或其他衍生物。羟基脂肪酸的非限制性示例为2-羟基脂肪酸、不饱和5-羟基脂肪酸、不饱和8-羟基脂肪酸、不饱和9-羟基脂肪酸、不饱和11-羟基脂肪酸、不饱和12-羟基脂肪酸、不饱和13-羟基脂肪酸、不饱和15-羟基脂肪酸、它们的衍生物、以及它们的混合物。醛的非限制性示例为1-链烷醛、链烯-1-醛、链烷二烯-1-醛、链烷三烯-1-醛、链烷四烯-1醛、以及它们的混合物。
脂氧合酶(EC%201.13.11.-)为催化分子氧插入不饱和脂肪酸中以产生对应的氢过氧脂肪酸的(非血红素)含铁双加氧酶家族。本发明包含花生四烯酸脂氧合酶。尽管花生四烯酸脂氧合酶典型地将花生四烯酸/花生四烯酸盐识别为优选的底物，但术语“花生四烯酸脂氧合酶”并不暗示任何底物特异性，即，相应的酶可作用于任何底物(例如，亚油酸/亚油酸盐、亚麻酸/亚麻酸盐、花生四烯酸/花生四烯酸盐)。优选地，花生四烯酸脂氧合酶选自花生四烯酸5-脂氧合酶(EC%201.13.11.34)、花生四烯酸8-脂氧合酶(EC%201.13.11.40)、花生四烯酸12-脂氧合酶(E.C.1.13.11.31)，和花生四烯酸15-脂氧合酶(EC%201.13.11.33)，优选花生四烯酸5-脂氧合酶(EC%201.13.11.34)。
作为本发明的一部分的花生四烯酸脂氧合酶的非限制性示例包括表1中列出的野生型及其表现出花生四烯酸脂氧合酶活性的变体。优选地，如在针对至少一个参考序列的整个长度比对的序列的整个长度上所计算，花生四烯酸脂氧合酶具有至少60％、优选至少70％、优选至少80％、优选至少85％、优选至少90％、优选至少95％、优选至少98％或优选甚至100％的同一性，所述参考序列选自表1中列出的野生型花生四烯酸脂氧合酶。
表1：花生四烯酸脂氧合酶
区域特异性脂氧合酶催化不饱和脂肪酸的位置特异性氢过氧化。例如，花生四烯酸12脂氧合酶和花生四烯酸15脂氧合酶将花生四烯酸转化成对应的12-氢过氧脂肪酸和15-氢过氧脂肪酸；而相同酶的一些变体(例如SEQ ID NO:11、12、15、16和17)可将亚油酸转化成9-氢过氧、11-氢过氧或13-氢过氧衍生物。此外，一些脂氧合酶能够催化分子氧在不饱和脂肪酸(例如SEQ ID NO:11)的若干位置处的掺入。
α-双加氧酶经由立体选择性双加氧化将饱和和不饱和的脂肪酸转化成其对应的2-氢过氧脂肪酸。所得氢过氧脂肪酸可经历自发脱羧，生成较短的醛。α-双加氧酶与脂氧合酶的不同之处在于氧化期间不需要不饱和碳键。它们一般由不同物种的植物和真菌编码，其中它们在针对病原体攻击的宿主防御应答期间上调，但是同源物也存在于细菌中。
作为本发明的一部分的α-双加氧酶的非限制性示例包括表2中列出的野生型及其表现出α-双加氧酶活性的变体。如在针对至少一个参考序列的整个长度比对的序列的整个长度上所计算，优选的α-双加氧酶表现出至少20％、优选至少30％、优选至少40％、优选至少50％、优选至少60％、优选至少70％、优选至少80％、优选至少90％、优选至少95％、优选至少98％或优选甚至100％的同一性，所述参考序列选自表2中列出的野生型α-双加氧酶。
表2：α-双加氧酶
优选地，氢过氧脂肪酸产生酶以基于组合物中的活性蛋白质按组合物的重量计0.0001重量％至1重量％的量存在。更优选地，氢过氧脂肪酸产生酶以基于组合物中的活性蛋白质按组合物的重量计0.001重量％至0.2重量％的量存在。
本发明还包括酶的变体。如本文所用，酶的变体包括当相应蛋白质的野生型蛋白质被一个或多个氨基酸(例如1、2、5或10个氨基酸)修饰或在所述一个或多个氨基酸处修饰时所产生的序列。本发明还包括衍生自野生型酶的截短形式的形式的变体，诸如具有截短的N末端或截短的C末端的蛋白质。一些酶可包括在由细胞分泌时可能被移除的N末端信号肽。本发明包括不含N末端信号肽的变体。生物信息学工具，诸如SignalP ver 4.1(Petersen TN.,Brunak S.,von Heijne G.及Nielsen H.(2011),Nature Methods,8:785-786)，可用于预测此类信号肽的存在和长度。本发明还包括通过将额外的氨基酸序列添加到野生型蛋白质而衍生的变体，诸如例如N末端标记、C末端标记或蛋白质序列中间的插入。标记的非限制性示例为麦芽糖结合蛋白(MBP)标记、谷胱甘肽S转移酶(GST)标记、硫毒素(Trx)标记、His标记，以及本领域技术人员已知的任何其他标记。标记可用于提高发酵期间的溶解度和表达水平，或用作酶纯化的处理手段。
重要的是，酶的变体保持并优选提高野生型蛋白质催化不饱和脂肪酸转化的能力。当然可以容忍在变体给定特性的一些性能下降，但变体应当保留并优选改善它们所针对的相关应用的合适特性。可使用野生型之一的变体的筛选来鉴定它们是否保留并优选改善适当的特性。
变体可具有“保守”取代。保守取代的合适示例包括酶中的一个保守取代，诸如SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、或SEQ ID NO:17中的保守取代。其他合适的示例包括蛋白质中10个或更少的保守取代，诸如五个或更少。本发明的酶因此可包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个保守取代。可通过使用例如标准程序(诸如定点诱变或PCR)操纵编码酶的核苷酸序列来产生含有一个或多个保守取代的酶。
可取代酶中的原始氨基酸并且被视为保守取代的氨基酸的示例包括：Ser取代Ala；Lys取代Arg；Gln或His取代Asn；Glu取代Asp；Asn取代Gln；Asp取代Glu；Pro取代Gly；Asn或Gln取代His；Leu或Val取代Ile；Ile或Val取代Leu；Arg或Gln取代Lys；Leu或Ile取代Met；Met、Leu或Tyr取代Phe；Thr取代Ser；Ser取代Thr；Tyr取代Trp；Trp或Phe取代Tyr；以及Ile或Leu取代Val。
变体包括“经修饰酶”或“突变酶”，其涵盖具有氨基酸的至少一个取代、插入和/或缺失的蛋白质。经修饰酶可具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个氨基酸修饰(选自取代、插入、缺失以及它们的组合)。
酶可通过多种化学技术修饰以产生衍生物，所述衍生物具有与未修饰酶基本上相同或优选改善的活性，并且任选地具有其他期望的特性。例如，蛋白质的羧酸基团，无论是羧基末端还是侧链，可以药学上可接受的阳离子的盐形式提供，或经酯化，例如以形成C1-C6烷基酯，或转化成例如式CONR1R2的酰胺，其中R1和R2各自独立地为H或C1-C6烷基，或经组合以形成杂环环，诸如5元或6元环。酶的氨基基团，无论是氨基末端还是侧链，可以呈药学上可接受的酸加成盐的形式，诸如HCI、HBr、乙酸、苯甲酸、甲苯磺酸、马来酸、酒石酸和其他有机盐，或者可以经修饰为C1-C20烷基或二烷基氨基或进一步转化成酰胺。蛋白质侧链的羟基基团可使用熟知的技术转化成烷氧基或酯基，例如C1-C20烷氧基或C1-C20烷基酯。蛋白质侧链的苯基和酚环可被一个或多个卤素原子取代，诸如F、CI、Br或I，或被C1-C20烷基、C1-C20烷氧基、羧酸和酯，或此类羧酸的酰胺取代。蛋白质侧链的亚甲基基团可延伸至同源C2-C4亚烷基。硫醇可用多种公认的保护基团(诸如乙酰胺基团)中的任何一种来保护。本领域的技术人员还将认识到用于将环状结构引入本公开的蛋白质中以选择并提供导致稳定性增强的对结构的构象约束的方法。
如本文关于本发明所提及的同一性或同源性百分比是可使用GAP程序计算的那些，该GAP程序可获自GCG(美国威斯康星州麦迪逊的Genetics Computer Group公司)。另选地，可进行手动比对。
为了进行酶序列比较，可使用以下设置：比对算法：Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.1970,48:443-453。作为氨基酸相似性的比较矩阵，使用Blosum62矩阵(Henikoff S.和Henikoff J.G.,P.N.A.S.USA 1992,89:10915-10919)。使用以下空位评分参数：空位罚分：12，空位长度罚分：2，无终点空位的罚分。
典型地将给定序列与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或SEQID NO:17的全长序列比较以获得评分。
氢过氧脂肪酸产生酶可经由添加剂颗粒(诸如酶颗粒)或以包封物的形式掺入液体洗涤剂组合物中，或者可以液体制剂的形式加入。优选地，所述酶经由包封物掺入到液体洗涤剂组合物中。包封酶促进了酶在组合物中的稳定性，并有助于抵消组合物中存在的任何不利化合物诸如漂白剂、蛋白酶、表面活性剂、螯合剂等的影响。
存在于添加剂颗粒中的氢过氧脂肪酸产生酶可以是添加剂颗粒中的唯一酶，或者可与一种或多种附加酶组合存在于添加剂颗粒中。
优选地，本发明的组合物还可包含一种或多种辅酶，所述辅酶选自：脂肪酸过氧化物酶(EC 1.11.1.3)、非特异性过加氧酶(EC 1.11.2.1)、植物种子过加氧酶(EC1.11.2.3)、脂肪酸过加氧酶(EC 1.11.2.4)、亚油酸二醇合酶(EC 1.13.11.44)、5,8-亚油酸二醇合酶(EC 1.13.11.60和EC 5.4.4.5)、7,8-亚油酸二醇合酶(EC 1.13.11.60和EC5.4.4.6)、9,14-亚油酸二醇合酶(EC 1.13.11.B1)、8,11-亚油酸二醇合酶、油酸二醇合酶、其他亚油酸二醇合酶、非特异性单加氧酶(EC 1.14.14.1)、烷烃1-单加氧酶(EC1.14.15.3)、油酸12-羟化酶(EC 1.14.18.4)、脂肪酸酰胺水解酶(EC 3.5.1.99)、油酸水合酶(EC 4.2.1.53)、亚油酸异构酶(EC 5.2.1.5)、亚油酸(10E,12Z)-异构酶(EC 5.3.3.B2)、脂肪酸脱羧酶(OleT样)、铁依赖性脱羧酶(UndA样)、其他CYP450单加氧酶、淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶、纤维素酶、以及它们的混合物。优选地，所述辅酶为脂肪酸过氧化物酶(EC1.11.1.3)、非特异性过加氧酶(EC 1.11.2.1)、植物种子过加氧酶(EC 1.11.2.3)、脂肪酸过加氧酶(EC 1.11.2.4)、以及它们的混合物。
其他合适的附加辅酶包括蛋白酶，诸如金属蛋白酶或碱性丝氨酸蛋白酶，诸如枯草杆菌蛋白酶、甘露聚糖酶、果胶酶、DNA酶、氧化还原酶、过氧化物酶、脂肪酶、磷脂酶、纤维二糖水解酶、纤维二糖脱氢酶、酯酶、角质酶、果胶酶、果胶酸裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质素酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、漆酶、淀粉酶以及它们的混合物。
必要时，该组合物包含，提供进入或原位形成酶的有效功能所必需的任何附加底物。例如，提供分子氧作为α-双加氧酶和花生四烯酸脂氧合酶的附加底物；提供水作为油酸水合酶的附加底物；并且可以提供过氧化氢作为过氧化物酶、过加氧酶和/或脂肪酸脱羧酶(OleT样)的附加底物。α-双加氧酶和花生四烯酸脂氧合酶所需的氧气可得自大气环境或可转化以原位产生氧气的前体。在许多应用中，来自大气的氧气可以足够的量存在。
表面活性剂体系
优选地，液体洗涤剂组合物包含按所述总组合物的重量计1重量％至60重量％、优选5重量％至50重量％、更优选8重量％至40重量％的表面活性剂体系。
本发明的组合物的表面活性剂体系包含一种或多种阴离子表面活性剂。优选地，用于本发明的液体洗涤剂组合物的表面活性剂体系包含按总组合物的重量计1重量％至40重量％、优选6重量％至35重量％、更优选8重量％至30重量％的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂可以是任何阴离子清洁表面活性剂，优选选自硫酸盐和/或磺酸盐阴离子表面活性剂。HLAS(直链烷基苯磺酸盐)将是最优选的磺酸盐阴离子表面活性剂。尤其优选的阴离子表面活性剂选自烷基硫酸盐、烷基烷氧基硫酸盐(优选烷基乙氧基硫酸盐)、烷基苯磺酸盐、链烷磺酸盐、以及它们的混合物。优选的阴离子表面活性剂为烷基硫酸盐和烷基乙氧基硫酸盐的组合，其具有小于5、优选地小于3、更优选地小于2且大于0.5的组合平均乙氧基化度和约5％至约40％、更优选约10％至35％，并且甚至更优选约20％至30％的平均支化水平。
平均烷氧基化度为阴离子表面活性剂的混合物的所有组分的摩尔平均烷氧基化度(即，摩尔平均烷氧基化度)。在摩尔平均烷氧基化度计算中，还应包括不具有烷氧基化基团的硫酸盐阴离子表面活性剂组分的重量。
摩尔平均烷氧基化度＝(x1*表面活性剂1的烷氧基化度+x2*表面活性剂2的烷氧基化度+……)/(x1+x2+……)
其中x1、x2、……为混合物中的每种硫酸盐阴离子表面活性剂的摩尔数，并且烷氧基化度是每种硫酸盐阴离子表面活性剂中烷氧基基团的数目。
平均支化水平为支化的重均％，并且其根据下式定义：
支化的重均分子量(％)＝[(x1*在醇1中的支链醇1的重量％+x2*在醇2中的支链醇2的重量％+……)/(x1+x2+……)]*100其中x1、x2、……是在用作本发明组合物的阴离子表面活性剂的原料的醇的总醇混合物中每种醇的重量(以克为单位)。在重均支化度计算中，还应包括不具有支链基团的阴离子表面活性剂组分的重量。
可商购获得的硫酸盐的合适示例包括基于Shell公司的Neodol醇、Sasol公司的Lial-Isalchem和Safol、Procter&Gamble Chemicals公司的天然醇的那些。用于本文的合适的磺酸盐表面活性剂包括C8-C18烷基或羟烷基磺酸盐的水溶性盐；C11-C18烷基苯磺酸盐(LAS)、改性烷基苯磺酸盐(MLAS)；甲基酯磺酸盐(MES)；和α-烯烃磺酸盐(AOS)。还包括链烷磺酸盐的那些可以是单磺酸盐和/或二磺酸盐，它们通过磺化10至20个碳原子的链烷烃获得。磺酸盐表面活性剂还包括烷基甘油基磺酸盐表面活性剂。
本发明的组合物的表面活性剂体系还包含主要辅助表面活性剂体系，其中主要辅助表面活性剂体系优选选自两性表面活性剂、两性离子表面活性剂、以及它们的混合物。优选地，两性表面活性剂为氧化胺表面活性剂，并且所述两性离子表面活性剂为甜菜碱表面活性剂。优选地，用于本发明的液体洗涤剂组合物的表面活性剂体系包含按总组合物的重量计0.5重量％至15重量％、优选1重量％至12重量％、更优选2重量％至10重量％的主要辅助表面活性剂体系。
优选地，阴离子表面活性剂与主要辅助表面活性剂的重量比小于9:1，更优选为5:1至1:1，更优选为4:1至2:1。优选地，主要辅助表面活性剂体系为两性表面活性剂。优选地，主要辅助表面活性剂体系为氧化胺表面活性剂，优选烷基二甲基氧化胺，其中所述阴离子表面活性剂为烷基硫酸盐和烷基烷氧基硫酸盐的混合物，并且其中所述组合物包含重量比小于9:1、更优选为5:1至1:1、更优选为4:1至2:1、优选为3:1至2.5:1的阴离子表面活性剂和氧化胺表面活性剂。优选的氧化胺是烷基二甲基氧化胺或烷基酰氨基丙基二甲基氧化胺，更优选地烷基二甲基氧化胺，并且尤其是椰油二甲基氧化胺。氧化胺可具有直链的或支链的烷基部分。
任选地，氧化胺表面活性剂为包含低切氧化胺和中切氧化胺的氧化胺的混合物。本发明的组合物的氧化胺然后包含：
a)按氧化胺的重量计约10％至约45％的式R1R2R3AO的低切氧化胺，其中R1和R2独立地选自氢、C1-C4烷基或它们的混合物，并且R3选自C10烷基或它们的混合物；和
b)按氧化胺的重量计55％至90％的式R4R5R6AO的中切氧化胺，其中R4和R5独立地选自氢、C1-C4烷基或它们的混合物，并且R6选自C12-C16烷基或它们的混合物。
在用于本文的优选的低切氧化胺中，R3为正癸基。在用于本文的另一种优选的低切氧化胺中，R1和R2均为甲基。在用于本文的尤其优选的低切氧化胺中，R1和R2均为甲基并且R3为正癸基。
优选地，氧化胺包含按所述氧化胺的重量计小于约5％、更优选小于3％的式R7R8R9AO的氧化胺，其中R7和R8选自氢、C1-C4烷基以及它们的混合物，并且其中R9选自C8烷基以及它们的混合物。包含R7R8R9AO的组合物趋于不稳定并且不提供非常的肥皂泡沫哩数。
优选地，主要辅助表面活性剂体系为两性离子表面活性剂。两性离子表面活性剂的合适示例包括甜菜碱，诸如烷基甜菜碱、烷基酰氨基甜菜碱、amidazoliniumbetaine、磺基甜菜碱(INCI磺基甜菜碱)以及磷酸甜菜碱，并且优选地满足式(I)：
R1-[CO-X(CH2)n]x-N+(R2)(R3)-(CH2)m-[CH(OH)-CH2]y-Y-（I）
其中：
R1为饱和或不饱和的C6-22烷基残基，优选地C8-18烷基残基，具体地为饱和的C10-16烷基残基，例如饱和的C12-14烷基残基；
X为NH、具有C1-4烷基残基R4的NR4、O或S；
n为1至10，优选为2至5，具体地3的数；
x为0或1，优选1；
R2和R3独立地为C1-4烷基残基，可能是羟基取代的，诸如羟乙基，优选甲基；
m为1至4，具体地为1、2或3的数；
y为0或1；并且
Y为COO、SO3、OPO(OR5)O或P(O)(OR5)O，其中R5为氢原子H或C1-4烷基残基。
优选的甜菜碱为式(Ia)的烷基甜菜碱、式(Ib)的烷基酰氨基丙基甜菜碱、式(Ic)的磺基甜菜碱，和式(Id)的酰氨基磺基甜菜碱；
R1-N+(CH3)2-CH2COO-(Ia)
R1-CO-NH(CH2)3-N+(CH3)2-CH2COO-(Ib)
R1-N+(CH3)2-CH2CH(OH)CH2SO3-(Ic)
R1-CO-NH-(CH2)3-N+(CH3)2-CH2CH(OH)CH2SO3-(Id)
其中R1具有与式(I)中相同的含义。特别优选的甜菜碱是碳酰甜菜碱[其中Y-＝COO-]，特别是式(Ia)和(Ib)的碳酰甜菜碱，更优选的是式(Ib)的烷基酰氨基甜菜碱。优选的甜菜碱为例如椰油酰胺丙基甜菜碱。
优选地，本发明的组合物的表面活性剂体系还包含按总组合物的重量计0.1重量％至10重量％的优选地包含非离子表面活性剂的次要辅助表面活性剂体系。合适的非离子表面活性剂包括脂族醇与1摩尔至25摩尔环氧乙烷的缩合产物。脂族醇的烷基链可为直链或支链、伯烷基或仲烷基，并通常含有8至22个碳原子。尤其优选的是具有具有10至18个碳原子，优选地10至15个碳原子的烷基的醇与每摩尔醇2摩尔至18摩尔，优选地2摩尔至15摩尔，更优选5摩尔至12摩尔的环氧乙烷的缩合产物。高度优选的非离子表面活性剂是格尔伯特醇与每摩尔醇2摩尔至18摩尔、优选2摩尔至15摩尔、更优选5摩尔至12摩尔的环氧乙烷的缩合产物。优选地，非离子表面活性剂为烷基乙氧基化表面活性剂，其优选地在烷基链中包含9至15个碳原子，并且每摩尔醇包含5至12个环氧乙烷单元。用于本文的其他合适的非离子表面活性剂包括脂肪醇聚乙二醇醚、烷基聚葡糖苷和脂肪酸葡糖酰胺，优选烷基聚葡糖苷。优选地，烷基聚葡糖苷表面活性剂为C8-C16烷基聚葡糖苷表面活性剂，优选C8-C14烷基聚葡糖苷表面活性剂，优选具有在0.1和3之间、更优选在0.5和2.5之间、甚至更优选在1和2之间的平均聚合度。最优选地，烷基聚葡糖苷表面活性剂具有在10和16之间、优选在10和14之间、最优选在12和14之间的平均烷基碳链长度，其中平均聚合度在0.5和2.5之间、优选在1和2之间、最优选在1.2和1.6之间。C8-C16烷基聚葡糖苷可从若干供应商商购获得(例如，来自Seppic公司的
酶稳定剂
优选地，本发明的组合物包含选自化学稳定剂和物理稳定剂的酶稳定剂，优选地所述物理稳定剂包含包封的酶。合适的酶稳定剂可选自由下列构成的组：(a)优选选自由下列构成的组的单价、二价和/或三价阳离子：碱土金属、碱金属、铝、铁、铜和锌的无机或有机盐，优选碱金属和碱土金属，优选碱金属和碱土金属盐与卤化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、硝酸盐、亚硝酸盐、磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、乳酸盐、以及它们的混合物。在优选的实施方案中，盐选自由下列构成的组：氯化钠、氯化钙、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾、乙酸钠、乙酸钾、甲酸钠、甲酸钾、乳酸钙、硝酸钙以及它们的混合物。最优选的是选自由下列构成的组的盐：氯化钙、氯化钾、硫酸钾、乙酸钠、乙酸钾、甲酸钠、甲酸钾、乳酸钙、硝酸钙以及它们的混合物的盐，特别是选自由下列构成的组的钾盐：氯化钾、硫酸钾、乙酸钾、甲酸钾、丙酸钾、乳酸钾以及它们的混合物。最优选的是乙酸钾和氯化钾。优选的钙盐是甲酸钙、乳酸钙和硝酸钙，包括硝酸钙四水合物。可优选甲酸钙和甲酸钠盐。这些阳离子以按总组合物的重量计至少0.01重量％、优选至少0.03重量％、更优选至少0.05重量％、最优选至少0.25重量％、至多2重量％或甚至至多1重量％的量存在。这些盐被配制为相对于组合物的总重量的0.1重量％至5重量％、优选0.2重量％至4重量％、更优选0.3重量％至3重量％、最优选0.5重量％至2重量％。其它酶稳定剂可选自由下列构成的组：(b)选自由低聚糖、多糖以及它们的混合物构成的组的碳水化合物，如WO201219844中所述的单糖甘油酸酯；(c)高效可逆蛋白酶抑制剂，高效可逆蛋白酶抑制剂选自由下列构成的组：苯基硼酸以及它们的衍生物，优选4-甲酰基苯基硼酸；(d)醇类，如1,2-丙烷二醇、丙二醇；(e)肽醛稳定剂，如三肽醛，如Cbz-Gly-Ala-Tyr-H，或二取代的丙氨酰胺；(f)羧酸，如WO2012/19849中所述的苯基烷基二羧酸或如WO2012/19848中所述的在苄基的至少两个碳原子上包含羧基的多取代苄基羧酸，邻苯二甲酰谷氨酰胺酸，邻苯二甲酰基天冬酰胺酸，氨基邻苯二甲酸和/或低聚氨基-联苯-低聚羧酸；以及(g)它们的混合物。
附加酶
本发明的优选组合物包含一种或多种附加酶，所述附加酶选自淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶、纤维素酶、脂氧合酶、二醇合酶、以及它们的混合物。本发明的甚至更优选组合物包含一种或多种选自脂肪酶、蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶以及它们的任何组合的酶。本发明的最优选组合物包含一种或多种选自脂肪酶、蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶以及它们的任何组合的酶。
特别优选的是，本发明的组合物另外包含蛋白酶。由于油酸和其他泡沫抑制不饱和脂肪酸存在于体垢或甚至人体皮肤中，因为蛋白酶用作皮肤护理剂或分解蛋白质污垢，释放的脂肪酸被分解，防止泡沫抑制。
特别优选的是，本发明的组合物另外包含淀粉酶。由于油性污垢通常被捕获在淀粉质污垢中，淀粉酶和不饱和脂肪酸转化酶一起协同作用：通过用淀粉酶分解淀粉质污垢来释放脂肪酸污垢，因此，不饱和脂肪酸转化酶特别有效地确保不会对洗涤液体中的肥皂泡沫产生负面影响。
每种附加酶典型地以基于活性蛋白质按组合物的重量计0.0001重量％至1重量％(按活性蛋白质的重量计)、更优选0.0005重量％至0.5重量％、最优选0.005重量％至0.1重量％的量存在。
盐
本发明的组合物可任选地包含按总组合物的重量计0.01％至3％、优选0.05％至2％、更优选0.2％至1.5％、或最优选0.5％至1％的盐，优选一价、二价无机盐或它们的混合物，优选氯化钠。最优选地，所述组合物另选地或还包含按所述组合物的重量计0.01重量％至2重量％、优选0.1重量％至1重量％、更优选0.2重量％至0.8重量％的量的多价金属阳离子，优选所述多价金属阳离子为镁、铝、铜、钙或铁，更优选镁，最优选所述多价盐为氯化镁。不受理论的束缚，据信使用多价阳离子有助于在油水和空气水界面处形成增强肥皂泡沫的蛋白质/蛋白质、表面活性剂/表面活性剂或混合蛋白质/表面活性剂网络。
碳水化合物
优选地，本发明的组合物包含一种或多种碳水化合物，所述碳水化合物选自包含O-聚糖、N-聚糖、以及它们的混合物的组。合适的碳水化合物包括具有1,3和/或1,4和/或1,6键的α葡聚糖或β葡聚糖。葡聚糖尤其可用羧基硫酸盐、具有氨基基团的乙二醇醚改性。葡聚糖可从右旋糖酐、淀粉或纤维素中提取。具有接近天然葡聚糖的结构的葡聚糖，诸如裂褶菌多糖、小核菌葡聚糖或副淀粉是特别优选的。
水溶助长剂
本发明的组合物可任选地包含按总组合物的重量计1％至10％、或优选0.5％至10％、更优选1％至6％、或最优选0.1％至3％、或它们的组合的水溶助长剂，优选异丙基苯磺酸钠。用于本文的其他合适的水溶助长剂包括阴离子型水溶助长剂，特别是二甲苯磺酸钠、二甲苯磺酸钾和二甲苯磺酸铵，甲苯磺酸钠、甲苯磺酸钾和甲苯磺酸铵，异丙基苯磺酸钠、异丙基苯磺酸钾和异丙基苯磺酸铵、以及它们的混合物，如美国专利3,915,903中所公开的。优选地，本发明的组合物为各向同性的。各向同性组合物区别于水包油乳液和层状相组合物。偏振光显微镜可评估组合物是否为各向同性的。参见例如，The Aqueous PhaseBehaviour of Surfactants,Robert Laughlin,Academic Press,1994，第538-542页。优选地，提供了各向同性组合物。优选地，所述组合物包含按总组合物的重量计0.1％至3％的水溶助长剂，优选地其中所述水溶助长剂选自二甲苯磺酸钠、二甲苯磺酸钾和二甲苯磺酸铵、甲苯磺酸钠、甲苯磺酸钾和甲苯磺酸铵、异丙基苯磺酸钠、异丙基苯磺酸钾和异丙基苯磺酸铵、以及它们的混合物。
有机溶剂
本发明的组合物可任选地包含有机溶剂。合适的有机溶剂包括C4-14醚和二醚、多元醇、二醇、烷氧基化二醇、C6-C16二醇醚、烷氧基化芳香醇、芳香醇、脂族直链或支链醇、烷氧基化脂族直链或支链醇、烷氧基化C1-C5醇、C8-C14烷基和环烷基烃以及卤代烃、以及它们的混合物。优选地，有机溶剂包括醇、二醇和二醇醚，另选地醇和二醇。所述组合物包含按总组合物的重量计0％至小于50％、优选0.01％至25％、更优选0.1％至10％、或最优选0.5％至5％的有机溶剂，优选醇，更优选乙醇、聚亚烷基二醇，更优选聚丙二醇、以及它们的混合物。
两亲性聚合物
本发明的组合物还可包含按总组合物的重量计约0.01％至约5％、优选约0.05％至约2％、更优选约0.07％至约1％的两亲性聚合物，所述两亲性聚合物选自两亲性烷氧基化聚亚烷基亚胺以及它们的混合物，优选两亲性烷氧基化聚亚烷基亚胺。
优选地，两亲性烷氧基化聚亚烷基亚胺为烷氧基化聚乙烯亚胺聚合物，其包含平均分子量在100道尔顿至5,000道尔顿、优选400道尔顿至2,000道尔顿、更优选400道尔顿至1,000道尔顿范围内的聚乙烯亚胺主链，并且所述烷氧基化聚乙烯亚胺聚合物还包含：
(i)通过具有每个改性平均约1至约50个烷氧基部分的聚亚烷氧基链，每个氮原子一个或两个烷氧基化改性，其中所述烷氧基化改性的末端烷氧基部分被氢、C1-C4烷基或它们的混合物封端；
(ii)通过具有每个改性平均约1至约50个烷氧基部分的聚亚烷氧基链，每个氮原子一个C1-C4烷基部分的添加和一个或两个烷氧基化改性，其中所述末端烷氧基部分被氢、C1-C4烷基或它们的混合物封端；或者
(iii)它们的组合；并且
其中所述烷氧基部分包含乙氧基(EO)和/或丙氧基(PO)和/或丁氧基(BO)，并且其中当所述烷氧基化改性包含EO时，其还包含PO或BO。
优选的两亲性烷氧基化聚乙烯亚胺聚合物在其烷氧基化链内包含EO和PO基团，PO基团优选地在烷氧基链的末端位置中，并且烷氧基化链优选地为氢封端的。在烷氧基化链内仅包含乙氧基(EO)单元的亲水性烷氧基化聚乙烯亚胺聚合物也可任选地在本发明的范围内配制。
例如但不限于，下文展示了对聚乙烯亚胺主链中末端氮原子的可能改性，其中R代表亚乙基间隔体，并且E代表C1-C4烷基部分，而X-代表适宜的水溶性抗衡离子。
同样，例如但不限于，下文展示了对聚乙烯亚胺主链中内部氮原子的可能改性，其中R代表亚乙基间隔体，并且E代表C1-C4烷基部分，而X-代表合适的水溶性抗衡离子。
聚乙烯亚胺主链的烷氧基化改性包括具有平均约1至约50个烷氧基部分、优选约20至约45个烷氧基部分、最优选约30至约45个烷氧基部分的聚亚烷氧基链对氢原子的置换。所述烷氧基部分选自乙氧基(EO)、丙氧基(PO)、丁氧基(BO)、以及它们的混合物。尽管仅包含乙氧基单元的烷氧基部分在本发明的范围之外。优选地，聚亚烷氧基链选自乙氧基/丙氧基嵌段部分。更优选地，聚亚烷氧基链为具有约3至约30的平均乙氧基化度和约1至约20的平均丙氧基化度的乙氧基/丙氧基嵌段部分，更优选的是具有约20至约30的平均乙氧基化度和约10至约20的平均丙氧基化度的乙氧基/丙氧基嵌段部分。
更优选地，乙氧基/丙氧基嵌段部分具有在3至1和1至1之间、优选在2至1和1至1之间的相对乙氧基与丙氧基单元的比率。最优选地，聚亚烷氧基链为乙氧基/丙氧基嵌段部分，其中丙氧基部分嵌段为末端烷氧基部分嵌段。
改性可导致聚乙烯亚胺主链氮原子的永久季铵化。永久季铵化度可占聚乙烯亚胺主链氮原子的0％至约30％。优选的是有小于30％的聚乙烯亚胺主链氮原子被永久季铵化。最优选地，季铵化度为约0％。
优选的聚乙烯亚胺具有式(II)的通式结构：
其中所述聚乙烯亚胺主链具有约600的重均分子量，式(II)中的n平均值为约10，式(II)中的m平均值为约7，并且式(II)中的R选自氢、C1-C4烷基、以及它们的混合物，优选是氢。化学式(II)中的永久季铵化度可占聚乙烯亚胺主链氮原子的0％至约22％。此聚乙烯亚胺的分子量优选在10,000和15,000之间。
替代的聚乙烯亚胺具有式(II)的通式结构，但其中所述聚乙烯亚胺主链具有约600的重均分子量，式(II)中的n平均值为约24，式(II)中的m平均值为约16，并且式(II)中的R选自氢、C1-C4烷基、以及它们的混合物，优选是氢。化学式(II)中的永久季铵化度可占聚乙烯亚胺主链氮原子的0％至约22％。此聚乙烯亚胺的分子量优选在25,000和30,000之间。
最优选的聚乙烯亚胺具有式(II)的通式结构，其中所述聚乙烯亚胺主链具有约600的重均分子量，式(II)中的n平均值为约24，式(II)中的m平均值为约16，并且式(II)中的R为氢。式(II)中的永久季铵化度占聚乙烯亚胺主链氮原子的0％。此聚乙烯亚胺的分子量优选为约25,000至30,000，最优选约28,000。
例如，可在催化剂诸如二氧化碳、亚硫酸氢钠、硫酸、过氧化氢、盐酸、乙酸等的存在下，通过使乙烯亚胺聚合，来制备这些聚乙烯亚胺，如PCT公开WO 2007/135645中更详细地描述。
螯合剂
本文液体洗涤剂组合物可包含按总组合物的重量计含量为0.1％至20％、优选0.2％至5％、更优选0.2％至3％的螯合剂。
如洗涤剂领域中通常理解的，本文的螯合是指双齿或多齿配体的结合或络合。这些配体通常是有机化合物，称为螯合剂、螯合物、螯合试剂和/或多价螯合剂。螯合剂与单一金属离子形成多个键。螯合剂是与某些金属离子形成可溶性络合分子的化学物质，使离子失活，使得它们不能与其它元素或离子发生正常反应，产生沉淀物或结垢，或在污垢上形成结壳，使其更难被除去。配体与底物形成螯合络合物。该术语保留用于其中金属离子与螯合剂的两个或更多个原子结合的络合物。
优选地，本发明的组合物包含一种或多种螯合剂，所述螯合剂优选地选自包含以下各项的组：羧酸盐螯合剂、氨基羧酸盐螯合剂、氨基膦酸盐螯合剂、以及它们的混合物。优选地，螯合剂选自MGDA(甲基甘氨酸-N,N-二乙酸)、GLDA(谷氨酸-N,N-二乙酸)、以及它们的混合物。
合适的螯合剂可选自由下列构成的组：氨基羧酸盐、氨基膦酸盐、多羧酸盐螯合剂以及它们的混合物。
其它螯合剂包括多元羧酸的均聚物和共聚物以及它们的部分或完全中和的盐、单体多元羧酸和羟基羧酸以及它们的盐。合适的多元羧酸是无环、脂环、杂环和芳族羧酸，在这种情况下它们含有至少两个羧基，它们在每种情况下通过优选不多于两个碳原子彼此分开。合适的羟基羧酸是例如柠檬酸。另一种合适的多元羧酸是丙烯酸的均聚物。优选的是用磺酸盐封端的聚羧酸盐。
助剂成分
本文的液体洗涤剂组合物可任选地包含许多其他助剂成分，诸如助洗剂(例如，优选柠檬酸盐)、清洁溶剂、清洁胺、调理聚合物、清洁聚合物、表面改性聚合物、污垢絮凝聚合物、结构剂、润肤剂、湿润剂、皮肤焕新活性物质、酶、羧酸、擦洗颗粒、漂白剂和漂白活化剂、香料、恶臭控制剂、颜料、染料、遮光剂、珠粒、珠光剂颗粒、微胶囊、无机阳离子诸如碱土金属(诸如Ca/Mg离子)、抗菌剂、防腐剂、粘度调节剂(例如盐，诸如NaCl，以及其他一价、二价和三价盐)以及pH调节剂和缓冲剂(例如羧酸诸如柠檬酸、HCl、NaOH、KOH、链烷醇胺、磷酸和磺酸、碳酸盐(诸如碳酸钠、碳酸氢钠、倍半碳酸钠、硼酸钠、硅酸钠、磷酸钠、咪唑等))。
洗涤方法
本发明的其他方面涉及用本发明的组合物洗涤脏污制品的方法。因此，提供了一种手动洗涤脏污制品，优选盘碟的方法，该方法包括以下步骤：将本发明的液体洗涤剂组合物递送至一定体积的水中以形成洗涤溶液，并且将所述脏污制品浸入所述溶液中。优选地，在洗涤过程期间，氢过氧脂肪酸产生酶以基于活性蛋白质0.005ppm至15ppm、优选0.01ppm至5ppm、更优选0.02ppm至0.5ppm的浓度存在于含水洗涤液体中。因此，本文的组合物将以其稀释形式施用到盘碟。使脏污表面(例如盘碟)与有效量的，通常为0.5mL至20mL(每25个被处理的盘碟)，优选3mL至10mL的在水中稀释的本发明的液体洗涤剂组合物接触。所使用的液体洗涤剂组合物的实际量将基于使用者的判断，并且将典型地根据以下因素：诸如具体的组合物产品制剂，包括组合物中活性成分的浓度、待清洁的脏污盘碟数量、盘碟上脏污的程度等等。通常，将0.01mL至150mL、优选3mL至40mL的本发明的液体洗涤剂组合物与2,000mL至20,000mL、更典型5,000mL至15,000mL的水在洗碗池中组合，该洗碗池具有在1,000mL至20,000mL、更典型5,000mL至15,000mL的范围内的体积容量。将脏污盘碟浸入包含稀释组合物的洗碗池，然后用洗碗布、海绵或类似制品接触盘碟的脏污表面来实现清洁它们。可将洗碗布、海绵或类似制品在与盘碟表面接触之前浸入液体洗涤剂组合物和水的混合物中，并且典型地与盘碟表面接触持续1秒至10秒范围内的时间段，虽然实际时间将随每个应用和使用者的不同而不同。织物、海绵或类似制品与表面的接触优选伴随着表面的同时洗擦。
本发明的另一方面是一种或多种氢过氧脂肪酸产生酶在本发明的液体洗涤剂组合物中用于在包含污垢的含水洗涤液体中提供增加的肥皂泡沫寿命的用途。所述氢过氧脂肪酸产生酶选自：花生四烯酸脂氧合酶、α-双加氧酶、以及它们的混合物，优选α-双加氧酶。
测试方法
以下所述测定必须依次采用，使得本文描述并且受权利要求书保护的发明可被更完全理解。
测试方法1-玻璃小瓶肥皂泡沫哩数方法
玻璃小瓶肥皂泡沫哩数测试方法的目的是测量由液体洗涤剂组合物的某种溶液在油脂污垢(例如，橄榄油)的存在下产生的肥皂泡沫体积随时间的演化。该方法的步骤如下：
1.如下制备测试溶液：在室温下将以下等分试样依序添加到40mL玻璃小瓶(尺寸：95mm H×27.5mm D)中：a)10g指定洗涤剂浓度和水硬度下的含水洗涤剂溶液，b)1.0g指定浓度和水硬度下的含水蛋白质溶液，和c)0.11g橄榄油(
2.通过以下将测试溶液在封闭的测试小瓶中混合：在磁力搅拌板(IKA，型号RTC BS001；VWR磁力搅拌器，目录号58949-012；500RPM)上在室温下搅拌2分钟，然后以向上向下移动(每秒约2次上下循环，+/-30cm向上和30cm向下)手动摇动20秒。
3.在摇动后，将封闭小瓶中的测试溶液在磁力搅拌板(IKA，型号RTC B S001，VWR磁力搅拌器，目录号58949-012，500RPM)上在46℃水浴内部保持60分钟以保持恒定温度。然后如上文所述将样品再手动摇动20秒，并且用尺子记录初始肥皂泡沫高度(H1)。
4.在搅拌(IKA，型号RTC B S001，VWR磁力搅拌器，目录号58949-012，500RPM)同时将样品在46℃水浴内部再温育30分钟，然后如上文所述再手动摇动20秒。记录最终肥皂泡沫高度(H2)。
5.产生较大肥皂泡沫高度(H1和H2)，优选地结合在H1和H2之间的肥皂泡沫高度的较低降低的蛋白质溶液为更期望的。
测试方法2-小洗碗池肥皂泡沫哩数方法
可以在如下周期性地添加污垢负荷的同时确定由液体洗涤剂组合物溶液产生的肥皂泡末体积的演化。将500mL液体洗涤剂组合物在15dH硬水中的溶液等分试样(最终浓度为0.12重量％，初始温度为46℃)加入到圆柱形容器(尺寸：150mm D×150mm H)中。在测试期间将容器在水浴中温育以将溶液的温度保持在46℃和40℃之间。通过用定位在容器中部的桨叶(尺寸：50mm×25mm)以135rpm机械搅拌120秒，在容器中产生初始肥皂泡沫体积。
然后，使用20-mL注射器和自动泵(KDS Legato 110单注射器I/W泵)将0.5mL油脂污垢(组成：参见表3，0.5mL)的等分试样投配到溶液中，同时桨叶以135rpm在溶液中旋转14秒。在混合之后，在下一个循环之前将溶液再温育166秒。每180秒重复污垢注射、搅拌和温育步骤，直到达到终点并记录所需的污垢添加量。当连续两次或更多次观察到在最后一半途径处环绕叶轮的透明无肥皂泡沫环时，出现终点。将整个过程重复至少3次，并且针对每种液体洗涤剂组合物计算所有平行测定的添加次数的平均值。
最后，随后将肥皂泡沫哩数指数计算为：(测试液体洗涤剂组合物的污垢添加的平均数量)/(参考液体洗涤剂组合物的污垢添加的平均数量)×100。根据测试目的，技术人员可选择去挑选替代的水硬度、溶液温度、产物浓度或污垢类型。
表3-油脂污垢组成
测试方法3-大洗碗池肥皂泡沫哩数方法
可以在如下周期性地添加污垢负荷的同时确定由液体洗涤剂组合物溶液产生的肥皂泡末体积的演化。在恒定压力为4巴的情况下，将硬水(15dH)流填充洗碗池(圆筒尺寸：300mm D×288mm H)直至4L。同时，通过移液管以0.67mL/秒的流速在洗碗池表面底部上方37cm的高度处分配液体洗涤剂组合物的等分试样(最终浓度为0.12重量％)。由于水的压力，在洗碗池中产生初始肥皂泡沫体积。在测试期间将溶液的温度保持在46℃。
在记录初始肥皂泡沫体积(平均肥皂泡沫高度x洗碗池表面积)之后，将固定量的油脂污垢(组成：参见表3，4mL)注入到洗碗池的中间，同时桨叶(尺寸：10cm×5cm，以45度的角度定位在洗碗池中间空气液体界面处)以85rpm到溶液中旋转20次。紧接在此步骤之后是对总肥皂泡沫体积进行另一次测量。重复污垢注入、搅拌和测量步骤，直至测得的肥皂泡沫体积达到设定为400cm3的最低水平。记录达到该水平所需的污垢添加量。将整个过程重复若干次，并且针对每种液体洗涤剂组合物计算所有平行测定的添加次数的平均值。
最后，随后将肥皂泡沫哩数指数计算为：(测试液体洗涤剂组合物的污垢添加的平均数量)/(参考液体洗涤剂组合物的污垢添加的平均数量)×100。
根据测试目的，技术人员可选择去挑选替代的水硬度、溶液温度、产物浓度或污垢类型。
实施例
提供以下实施例以进一步说明本发明，而非解释为是对本发明的限制，因为在不脱离本发明实质或范围的条件下可以对本发明进行许多改变。
实施例1a-拟南芥α双加氧酶2(αDOX2)Q9C9U3
设计并合成编码拟南芥α双加氧酶2(αDOX2)变体的密码子优化的基因(SEQ IDNO:18)，其包括含有His标签、MBP标签和TEV蛋白酶切割位点的N末端氨基酸序列(SEQ IDNO:19)。在基因合成之后，通过Genscript(Piscataway，NJ)表达并纯化蛋白质。简而言之，将完整的合成基因序列亚克隆到pET28a载体中以异源表达。用重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)细胞，并且在37℃下将单个菌落接种到含有卡那霉素的TB培养基中。当OD600达到约3.8时，通过加入异丙基β-D-1-硫代半乳糖苷(IPTG)(终浓度0.1mM)和δ-氨基乙酰丙酸(终浓度0.25mM)诱导蛋白质表达。将培养物在16℃下以200rpm温育16h。通过离心收获细胞，并且通过超声处理使粒料裂解。在离心之后，收集上清液，并且通过使用镍亲和柱和本领域已知的标准方案的一步纯化来纯化蛋白质。将蛋白质储存在含有10％甘油的1X PBS缓冲液(pH 7.4)中。如通过Bradford蛋白质测定法用BSA作为标准物(ThermoFisher，目录号23236)测定，最终蛋白质浓度为0.58mg/mL，并且如在还原条件下通过考马斯蓝染色的SDS-PAGE凝胶的光密度分析估计，纯度为约60％。
实施例1b-拟南芥α双加氧酶1(αDOX1)Q9SGH6
设计并合成编码拟南芥α双加氧酶1(αDOX1)变体的密码子优化的基因(SEQ IDNO:20)，其包括含有His标签、MBP标签和TEV蛋白酶切割位点的N末端氨基酸序列(SEQ IDNO:21)。在基因合成之后，通过Genscript(Piscataway，NJ)表达并纯化蛋白质。简而言之，将完整的合成基因序列亚克隆到pET28a载体中以异源表达。用重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)细胞，并且在37℃下将单个菌落接种到含有卡那霉素的TB培养基中。当OD600达到约4时，通过加入异丙基β-D-1-硫代半乳糖苷(IPTG)(终浓度0.1mM)和δ-氨基乙酰丙酸(终浓度0.25mM)诱导蛋白质表达。将培养物在16℃下以200rpm温育16h。通过离心收获细胞，并且通过超声处理使粒料裂解。在离心之后，收集上清液，并且通过使用镍亲和柱和本领域已知的标准方案的一步纯化来纯化蛋白质。将蛋白质储存在含有10％甘油的1X PBS缓冲液(pH 7.4)中。如通过Bradford蛋白质测定法用BSA作为标准物(ThermoFisher，目录号23236)测定，最终蛋白质浓度为1.58mg/mL，并且如在还原条件下通过考马斯蓝染色的SDS-PAGE凝胶的光密度分析估计，纯度为约80％。
实施例1c-水稻脂肪酸α-双氧化酶Q9M5J1
设计并合成编码水稻脂肪酸α-双加氧酶变体的密码子优化的基因(SEQ ID NO:22)，其包括N末端His标签序列(SEQ ID NO:23)。在基因合成之后，通过Genscript(Piscataway，NJ)表达并纯化蛋白质。简而言之，将完整的合成基因序列亚克隆到pET30a载体中以异源表达。用重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞，并且在37℃下将单个菌落接种到含有卡那霉素的2xYT培养基中。当OD600达到约0.85时，通过加入异丙基β-D-1-硫代半乳糖苷(IPTG)(终浓度0.1mM)和δ-氨基乙酰丙酸(终浓度0.25mM)诱导蛋白质表达。将培养物在16℃下以200rpm温育16h。通过离心收获细胞，并且通过超声处理使粒料裂解。在离心之后，收集上清液，并且通过使用镍亲和柱和本领域已知的标准方案的一步纯化来纯化蛋白质。将蛋白质储存在含有10％甘油的1X PBS缓冲液(pH 7.4)中。如通过Bradford蛋白质测定法用BSA作为标准物(ThermoFisher，目录号23236)测定，最终蛋白质浓度为1.29mg/mL，并且如在还原条件下通过考马斯蓝染色的SDS-PAGE凝胶的光密度分析估计，纯度为约85％。
实施例1d-羟基脂肪酸产生酶洗涤剂组合物
在特定条件(例如，水硬度、溶液温度、洗涤剂浓度等)下，追踪在污垢(即油脂污垢)的存在下由液体洗涤剂组合物的某种溶液产生的肥皂泡沫体积的演化。制备以下溶液：
A.将硬水(15dH)：0.75g MgCl2.6H2O(Sigma-Aldrich，目录号M9272)、2.10gCaCl2.6H2O(Sigma-Aldrich，目录号21108)和0.689g NaHCO3(Sigma-Aldrich，目录号31437)溶解于5L脱矿质水中。
B.对照参考洗涤剂组合物的洗涤剂溶液(“溶液DG-R”)使用Fairy Dark Green(如2017年2月在英国可商购获得的)制备，包含重量％比率在2:1和4:1之间的C1213AE0.6S阴离子表面活性剂和C1214-二甲基氧化胺两性表面活性剂以及在50％和85％之间的水，稀释于如上文制得的硬水(15dH)中，在0.12％的目标洗涤剂浓度下。
C.油脂污垢：根据表3中所述的组成制备油脂污垢。
实施例2-α-双加氧酶和花生四烯酸脂氧合酶的肥皂泡沫哩数
本发明组合物A是根据本发明的液体洗涤剂组合物的实施例，由以下各项制成：a)洗涤剂溶液DG-LS(如实施例1d中所述制备)，和b)经纯化的拟南芥α双加氧酶2(αDOX2)的稀释样品(如实施例1a中所述制备)。
本发明组合物B是根据本发明的液体洗涤剂组合物的实施例，由以下各项制成：a)洗涤剂溶液DG-R(如实施例1d中所述制备)，和b)经纯化的拟南芥α双加氧酶1(αDOX1)的稀释样品(如实施例1b中所述制备)。
本发明组合物C是根据本发明的液体洗涤剂组合物的实施例，由以下各项制成：a)洗涤剂溶液DG-R(如实施例1d中所述制备)，和b)经纯化的水稻脂肪酸α-双加氧酶的稀释样品(如实施例1c中所述制备)。
本发明组合物D是根据本发明的液体洗涤剂组合物的实施例，由以下各项制成：a)洗涤剂溶液DG-R(如实施例1d中所述制备)，和b)经纯化的智人花生四烯酸5-脂氧合酶(EC1.13.11.34)的稀释样品，获自Sigma-Aldrich(目录号437996)。
比较组合物E在不存在酶的情况下含有相同的洗涤剂溶液DG-R。
如测试方法部分中所述，使用小洗碗池肥皂泡末哩数方法(测试方法2)测试所述组合物。结果示于表4中。
表4：肥皂泡沫哩数
表4中的结果证实，包含根据本发明的α-双加氧酶和花生四烯酸脂氧合酶的本发明洗涤剂组合物A至D以单一变量与不含所述的比较组合物E相比，在整个洗涤过程具有优异的起泡特征。
实施例3：示例性液体手动盘碟洗涤洗涤剂组合物
根据本发明的包含拟南芥α-双加氧酶(SEQ ID NO:2)或智人花生四烯酸5-脂氧合酶(SEQ ID NO:7)的液体手动盘碟洗涤洗涤剂组合物示于表5中。
表5-液体洗涤剂组合物
针对酶给出的所有百分比和比率均基于活性蛋白质。除非另外指明，本文所有的百分比和比率都按重量计算。除非另外指明，否则所有百分比和比率均基于总组合物计算。
应当理解，贯穿本说明书给出的每一最大数值限度包括每一较低数值限度，如同此类较低数值限度在本文中明确写出。贯穿本说明书给出的每一最小数值限度将包括每一较高数值限度，如同此类较高数值限度在本文中明确写出。贯穿本说明书给出的每一数值范围将包括落在此类较宽数值范围内的每一较窄数值范围，如同此类较窄的数值范围全部在本文中明确写出。
本文所公开的量纲和值不应理解为严格限于所引用的精确数值。相反，除非另外指明，否则每个此类量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。
