自动盘碟洗涤剂组合物
技术领域
本发明属于洗涤剂领域。具体地讲，本发明涉及包含新蛋白酶的不含磷酸盐的自动盘碟洗涤剂组合物。相对于包含常规蛋白酶的组合物，所述组合物在多个条件下提供改善的清洁。
背景技术
长期期望改善自动盘碟洗涤组合物的性能及其环境概况。
由于环境问题，磷酸盐越来越多地被可生物降解的络合剂替代。这些络合剂可对金属具有强结合容量和/或以高含量使用并且可不利地影响酶的性能，具体地讲，络合剂可通过萃取蛋白酶的结构钙金属离子而不利地影响蛋白酶。蛋白酶可在产品中和/或使用中受到影响。它们可在完全构建或过度构建的条件下，即当组合物包含高含量的络合剂并且将组合物用于软水中时受到更多影响，因为将有更多的游离助洗剂与蛋白酶的结构钙金属离子络合。对于最难洗的物品，消费者通常将选择热水长时间自动盘碟洗涤循环。这些循环对酶产生许多应激。
自动盘碟洗涤组合物可被设计成在某些使用条件下具有最佳性能，例如组合物可被设计成在软水循环中具有最佳性能，然而在软水中具有最佳性能的组合物可能在硬水循环中不具有最佳性能，反之亦然。
本发明的目的是提供一种不含磷酸盐的自动盘碟洗涤组合物，其在用于软水中时并且优选地在不同的水硬度下提供更好的清洁。还期望所述组合物即使在应激条件(诸如在热水长时间循环中洗涤的严重脏污的负载)下也提供改善的性能。
发明内容
根据本发明的第一方面，提供了一种不含磷酸盐的自动盘碟洗涤清洁组合物。所述组合物包含络合剂体系和新型蛋白酶。所述组合物对于蛋和糖类污渍(诸如焦糖布丁(crème%20brule))呈现改善的清洁性能。即使在自动盘碟洗涤过程中使用软水，并且即使使用热水长时间循环，所述组合物也确实表现良好。
根据本发明的第二方面，提供了一种使用软水进行自动盘碟洗涤的方法和使用热水长时间循环进行自动盘碟洗涤的方法。根据本发明的第三方面，提供了本发明的组合物使用软水进行自动盘碟洗涤的用途，以及本发明的组合物在热水长时间循环中使用软水进行自动盘碟洗涤的用途。
结合本发明的第一方面描述的本发明组合物的元素作必要修改之后适用于本发明的其他方面。
具体实施方式
本发明涵盖自动盘碟洗涤清洁组合物。所述组合物不含磷酸盐并且包含络合剂体系和蛋白酶。相对于包含常规蛋白酶的清洁组合物，所述组合物在多个条件下递送改善的清洁。所述组合物提供良好的蛋白质清洁，具体地讲对蛋和焦糖布丁污垢的良好清洁。本发明还涵盖利用软水进行自动盘碟洗涤的方法，以及使用热水长时间循环利用软水进行自动盘碟洗涤的方法。
所谓“软”水在本文中意指硬度小于约2gpg(34.3ppm)的水。格令每加仑(gpg)为水硬度的单位，其被定义为溶解于1US加仑水(3.785412L)中的1格令(64.8毫克)碳酸钙。其转化为17.1份每一百万份(ppm)。
所谓“热水”循环在本文中被理解为其中主循环在高于50℃，优选地高于55℃的温度下进行的盘碟洗涤程序。
所谓“长时间”循环在本文中被理解为其中主循环具有至少25分钟，优选地至少30分钟，并且更优选地至少35分钟，并且尤其是至少45分钟的持续时间的盘碟洗涤程序。
本发明的组合物包含变体蛋白酶，所述变体蛋白酶相对于参考蛋白酶(SEQ%20IDNO:1至10的蛋白酶)具有限定的同一性百分比。
本发明的组合物的蛋白酶在本文中有时被称为“本发明的蛋白酶”。具有序列IDNO:1至10中任一者的蛋白酶在本文中有时被称为“参考蛋白酶”。
两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性用参数“序列同一性”描述。
术语“变体”意指相对于参考蛋白酶在一个或多个(例如，若干)位置处包含突变(即，替换、插入和/或删除)的蛋白酶。替换意指占据一个位置的氨基酸被不同的氨基酸替代。删除意指占据一个位置的氨基酸的移除；并且插入意指邻近占据一个位置的氨基酸和紧跟占据一个位置的氨基酸添加氨基酸。本发明的变体与参考蛋白酶具有至少60％，优选地至少70％，更优选地至少75％，并且尤其为90％的同一性。
在优选的实施方案中，变体与SEQ%20ID%20NO:1的蛋白酶呈现出至少90％，更优选地至少92％的同一性。SEQ%20ID%20NO:1对应于吉氏芽孢杆菌(B.gibsonii)-进化枝枯草杆菌蛋白酶Bgi02446。在其他实施方案中，变体与SEQ%20ID%20NO:2的蛋白酶呈现出至少90％，更优选地至少92％的同一性。SEQ%20ID%20NO:2对应于迟缓芽孢杆菌(B.lentus)枯草杆菌蛋白酶。在其他实施方案中，变体与序列SEQ%20ID%20NO:3-10的蛋白酶中的一者呈现出至少90％，更优选地至少92％的同一性。
术语“野生型”蛋白酶意指由天然存在的微生物(诸如天然存在的细菌、酵母或丝状真菌)表达的蛋白酶。
酶相关术语
氨基酸修饰的命名
在描述本文的酶变体时，使用下列命名以便于参考：原来的氨基酸：位置：替换的氨基酸。
根据该命名，例如在位置195中将谷氨酸替换为甘氨酸示为G195E。在相同位置中的甘氨酸的删除示为G195*，并且另一氨基酸残基诸如赖氨酸的插入示为G195GK。如果特定酶包含与其他酶相比的“删除”并且在该位置中发生插入，则将这种在位置36中插入天冬氨酸的情况表示为*36D。多个突变由加号分开，即：S99G+V102N，从而表示在位置99和102中分别将丝氨酸和缬氨酸替换为甘氨酸和天冬酰胺的突变。如果一个位置(例如，102)中的氨基酸可以被选自多个氨基酸例如选自N和I的另一氨基酸替换，这种情况将表示为V102N、I。
在所有情况下，使用公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。
蛋白酶氨基酸编号
本专利中使用的编号相对于所示的序列而不是相对于BPN编号。
氨基酸同一性
两个氨基酸序列之间的相关性由参数“同一性”描述。就本发明目的而言，两个氨基酸序列的比对通过使用来自EMBOSS软件包(http://emboss.org)，版本2.8.0的Needle程序进行确定。Needle程序执行Needleman,S.B.和Wunsch,C.D.在(1970)J.Mol.Biol.48:443-453中描述的全局比对算法。使用的取代矩阵为BLOSUM62，空位开放罚分为10，并且空位延伸罚分为0.5。
由本文所用酶的氨基酸序列(“本发明序列”)与不同氨基酸序列(“外源序列”)比对的精确匹配数除以“本发明序列”长度或“外源序列”长度中最短的一个，计算出两个序列之间的同一性程度。结果表示为同一性百分比。当“本发明序列”和“外源序列”在重叠部分的相同位置中具有相同的氨基酸残基时，发生精确匹配。序列长度是序列中的氨基酸残基数。
术语“基于琥珀酸盐的化合物”和“基于琥珀酸的化合物”在本文中可互换使用。
如本文所用，当用于权利要求中时，冠词诸如“一种”和“一个”被理解为是指一个或多个受权利要求保护或描述的物质。
除非另外指明，否则所有组分或组合物含量均是就该组分或组合物的活性部分而言，且不包括可能存在于此类组分或组合物的可商购获得的来源中的杂质，例如残余溶剂或副产物。
除非另外指明，否则所有百分比和比率均按重量计算。除非另外指明，否则所有百分比和比率均基于总组合物计算。
本发明的蛋白酶
本发明的蛋白酶与SEQ%20ID%20NO:1的蛋白酶具有至少60％，优选地至少70％，更优选地至少75％的同一性。
本发明的蛋白酶包含至少一个氨基酸替换，优选地至少两个，更优选地至少三个氨基酸替换，所述氨基酸替换选自(使用SEQ%20ID%20NO%201编号)：
X54T；
X126A、D、G、V、E、K、I；
X127E、S、T、A、P、G、C；和
X128E、C、T、D、P、G、L、Y、N。
优选地，该变体与SEQ%20ID%20NO:1的氨基酸序列具有至少90％，优选地至少92的％同一性并且包含至少一个，优选地至少两个、更优选地至少三个氨基酸替换，所述氨基酸替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:1编号)：
P54T；
S126A、D、G、V、E、K、I；
D127E、S、T、A、P、G、C；和
F128E、C、T、D、P、G、L、Y、N。
优选地，该变体包含至少一个氨基酸替换，所述氨基酸替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:1编号)S126A、D127E和F128G，更优选地至少两个且优选地三个氨基酸替换，即S126A、D127E和F128G。变体还可包含P54T替换。还优选的是包含以下替换的变体：P54T、S126A、D127E和F128G。还优选的是包含以下替换的变体：I80V、S126A、D127E和F128G。还优选的是包含以下替换的变体：I80V、S126A、D127E、F128G和M211L。优选的变体包含以下替换：P54T、I80V、S126A、D127E、F128G和M211L。
优选地，变体还包含至少一个氨基酸替换，所述氨基酸替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:1编号)：X114Q和X114C，优选地T114Q。
优选地，变体还包含至少一个，并且更优选地至少两个，并且更优选地三个氨基酸替换，所述氨基酸替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:1编号)I80V、R、Y；S99R、D、E、I、K、L；N85S、C、D、I、K；E87D、C。
尤其优选的变体包含至少一个氨基酸替换，所述氨基酸替换选自(使用SEQ%20IDNO:1编号)S39E、S99R、S126A+D127E+F128G和N242D，更优选地至少两个，更优选地至少三个，并且尤其是该组中的所有替换，即S39E-S99R-S126A-D127E-F128G和N242D。尤其优选的变体包含以下替换S39E-I80V-S99R-S126A-D127E-F128G、M211L和N242D。
优选地，变体与SEQ%20ID%20NO:1的氨基酸序列具有至少90％同一性，并且所述变体还包含至少一个替换，更优选地至少两个，并且尤其至少三个或多于三个替换，所述替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:1编号)T3V、T9R、A15T、V66A、N74D、N85R、N97NE、N97AD、N97D/G、S99G/M、S101A、V102E/I、N116V/R、S126L、D127Q、F128A、G157S、Y161A、R164S、T188P、V199I、Q200C/E/I/K/T/V/W/L、Y203W、N212D、M216S/F、Q239R和T249R。
尤其优选用于本发明的组合物中的变体选自与氨基酸序列SEQ%20ID:1具有至少90％，更优选地至少92％同一性并且包含替换的变体，所述替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:1编号)：
1)T056Y-S099R-S126A-D127E-F128G
2)S039E-I080V-S099R-S126A-D127E-F128G-M211L
3)S039E-P054T-S099R-S126A-D127E-F128G-M211L
4)S039E-I043V-S099R-S126A-D127E-F128G-M211L
5)S039E-N042R-S099R-S126A-D127E-F128G
6)S039E-I080V-S099R-S126A-D127E-F128G
7)S039E-S099R-S126A-D127E-F128G-M211L
8)S039E-N085S-S099R-S126A-D127E-F128G-M211L
9)S039E-T056Y-S099R-S126A-D127E-F128G-M211L
10)S039E-A047V-S099R-S126A-D127E-F128G-M211L
11)S039E-S099R-S126A-D127E-F128G-Y203W
12)A037T-S039E-S099R-S126A-D127E-F128G-M211L
13)S039E-S099R-S126A-D127E-F128G-V199I
14)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G
15)S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
16)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G
17)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G
18)S039E-I043V-S099R-S126A-D127E-F128G
19)S039E-S099R-S126A-D127E-F128G-N253D
20)T009E-S039E-S099R-S126A-D127E-F128G
21)S039E-S099R-S126A-D127E-F128G-S255W
22)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
23)A037T-S039E-I043V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
24)S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
25)S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
26)S039E-T056Y-S099R-S126A-D127E-F128G
27)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G
28)A037T-S039E-I043V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
29)A037T-S039E-I043V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
30)A037T-S039E-I043V-A047V-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
31)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
32)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-N242D
33)A037T-S039E-I043V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
34)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-N242D
35)S039E-N085S-S099R-S126A-D127E-F128G
36)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
37)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
38)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-N242D
39)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S126A-D127E-F128G-N242D
40)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-F128G-N242D
41)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
42)S039E-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G
43)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-N242D
44)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
45)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-D127E-F128G-N242D
46)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
47)S039E-A047V-S099R-S126A-D127E-F128G
48)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
49)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G
50)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
51)S039E-P054T-S099R-S126A-D127E-F128G
52)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
53)A037T-S039E-I043V-A047V-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
54)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
55)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-D127E-F128G-N242D
56)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-D127E-F128G-N242D
57)S039E-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G
58)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-D127E-F128G-N242D
59)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-F128G-N242D
60)A037T-S039E-S099R-S126A-D127E-F128G
61)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
62)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
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66)A037T-S039E-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
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68)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
69)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S126A-D127E-F128G-N242D
70)A037T-S039E-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
71)S039E-S099R-S126A-D127E-F128G
72)A037T-S039E-A047V-P054T-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
73)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
74)A037T-S039E-A047V-T056Y-I080V-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
75)S039E-S099R-S126A-D127E-F128G-Q256E
76)S039E-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
77)S039E-S099R-S126A-D127E-F128G-Q200L
78)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
79)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
80)S039E-N074D-I080V-S099R-S126A-D127E-F128G
81)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
82)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
83)A037T-S039E-I043V-A047V
84)A037T-S039E-I043V-A047V-N242D
85)S039E-P054T-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G
86)S039E-A047V-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G
87)A037T-S039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-N085S-E087D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D
88)S039E-N074D-S099R-T114Q-S126A-D127E-F128G
89)S039E-N074D-N085S-S099R-S126A-D127E-F128G
90)A037T-S039E-I043V-A047V-T056Y-N085S-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
91)S039E-N074D-E087D-S099R-S126A-D127E-F128G
92)S039E-I043V-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G
93)S039E-T056Y-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G
94)S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N242D
用于本发明的组合物中的其他优选的变体选自与氨基酸序列SEQ%20ID:1具有至少90％，更优选地至少92％同一性并且包含替换(使用SEQ%20ID%20NO:1编号)的变体，所述替换选自：
(a)A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126D-D127S-F128A-N242D；
(b)A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-T114Q-S126G-D127T-F128E-N242D；
(c)A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-D127A-F128C-N242D；
(d)A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99E-T114Q-S126T-F128A-N242D；
(e)A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126V-D127A-F128T-N242D；
(f)A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q--F128E-N242D；
(g)A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99E-T114Q-D127E-F128G-N242D；
(h)A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126T-D127E-F128A-N242D；
(i)A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-T114Q-D127P-F128E-N242D；
(j)A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126G-D127E-F128D-N242D；
(k)A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-F128E-N242D；
(l)A37T-S39E-I43V-A47V-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126T-D127E-F128E-N242D；
(m)A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-D127G-F128P-N242D；和
(n)A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-D127G-F128E-N242D。
在一个实施方案中，该变体与SEQ%20ID%20NO:2的氨基酸序列具有至少90％，优选地至少95％同一性并且包含至少一个，优选地至少两个，更优选地至少三个氨基酸替换，所述氨基酸替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:2编号)：
X54T；
X126A、D、G、V、E、K、I；
X127E、S、T、A、G、C；和
X128E、C、T、D、P、G、L、Y、N。
优选地，选自：
P54T；
S126A、D、G、V、E、K、I；
P127E、S、T、A、G、C；和
S128E、C、T、D、P、G、L、Y、N。
优选地，该变体包含至少一个氨基酸替换，所述氨基酸替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:2编号)：S126A、P127E和S128G，更优选地至少两个且优选地三个氨基酸替换，即S126A、P127E和S128G。变体还可包含P54T替换。其他优选的变体包含S126A、P127E、S128G和P54T突变。尤其优选的变体包含P54T、L80V、S126A、P127E和S128G。
优选地，变体还包含至少一个氨基酸替换，所述氨基酸替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:2编号)N114Q和N114C。
优选地，变体还包含至少一个，并且更优选地至少两个，并且更优选地三个氨基酸替换，所述氨基酸替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:2编号)S99R、D、E、I、K、L；S85C、D、I、K和E87D、C。
尤其优选的变体包含至少一个氨基酸替换，所述氨基酸替换选自(使用SEQ%20IDNO:2编号)S39E、L80V、S99R、S126A+P127E+S128G和N242D，更优选地至少两个，更优选地至少三个，并且尤其是所有替换，即S39E-L80V-S99R-S126A-P127E-S128G和N242D。
优选地，变体与SEQ%20ID%20NO:2的氨基酸序列具有至少90％同一性，并且所述变体包含至少一个替换，更优选地至少两个，更优选地至少三个并且尤其至少多于三个替换，所述替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:2编号)S3V、S9R、A15T、V66A、N74D、S85N/R、S97SE、S97AD、S97D/G、S99G/M、S101A、V102E/I、G116V/R、S126L、P127Q、S128A、G157S、Y161A、R164S、A188P、V199I、Q200C/E/I/K/T/V/W/L、Y203W、L211D/C/M、N212D、M216S/F、Q239R和T249R。
用于本发明的组合物中的尤其优选的变体选自与氨基酸序列SEQ%20ID%20NO:2具有至少90％，更优选地至少92％的同一性并且包含替换的变体，所述替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:2编号)：
1)T056Y-S099R-S126A-P127E-S128G
2)P039E-L080V-S099R-S126A-P127E-S128G-M211L
3)P039E-P054T-S099R-S126A-P127E-S128G-M211L
4)P039E-I043V-S099R-S126A-P127E-S128G-M211L
5)P039E-N042R-S099R-S126A-P127E-S128G
6)P039E-L080V-S099R-S126A-P127E-S128G
7)P039E-S099R-S126A-P127E-S128G-M211L
8)P039E--S099R-S126A-P127E-S128G-M211L
9)P039E-T056Y-S099R-S126A-P127E-S128G-M211L
10)P039E-A047V-S099R-S126A-P127E-S128G-M211L
11)P039E-S099R-S126A-P127E-S128G-Y203W
12)P039E-S099R-S126A-P127E-S128G-M211L
13)P039E-S099R-S126A-P127E-S128G-V199I
14)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G
15)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
16)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G
17)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G
18)P039E-I043V-S099R-S126A-P127E-S128G
19)P039E-S099R-S126A-P127E-S128G-N253D
20)T009E-P039E-S099R-S126A-P127E-S128G
21)P039E-S099R-S126A-P127E-S128G-S255W
22)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
23)P039E-I043V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
24)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
25)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
26)P039E-T056Y-S099R-S126A-P127E-S128G
27)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G
28)P039E-I043V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
29)P039E-I043V-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
30)P039E-I043V-A047V-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
31)P039E-I043V-A047V-P054T-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
32)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-N242D
33)P039E-I043V-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
34)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-N242D
35)P039E--S099R-S126A-P127E-S128G
36)P039E-I043V-A047V-P054T-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
37)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
38)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-N242D
39)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S126A-P127E-S128G-N242D
40)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-S128G-N242D
41)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V-E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
42)P039E-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G
43)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-N242D
44)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
45)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-P127E-S128G-N242D
46)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
47)P039E-A047V-S099R-S126A-P127E-S128G
48)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
49)P039E-I043V-A047V-T056Y-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G
50)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V-E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
51)P039E-P054T-S099R-S126A-P127E-S128G
52)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
53)P039E-I043V-A047V-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
54)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V-E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
55)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-P127E-S128G-N242D
56)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-P127E-S128G-N242D
57)P039E-E087D-S099R-S126A-P127E-S128G
58)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-P127E-S128G-N242D
59)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-S128G-N242D
60)P039E-S099R-S126A-P127E-S128G
61)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V-E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
62)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
63)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-S128G-N242D
64)P039E-I043V-A047V-T056Y-S099R-S126A-P127E-S128G
65)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G
66)P039E-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
67)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-S128G-N242D
68)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
69)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-S126A-P127E-S128G-N242D
70)P039E-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
71)P039E-S099R-S126A-P127E-S128G
72)P039E-A047V-P054T-T056Y-L080V--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
73)P039E-I043V-A047V-T056Y-L080V--E087D-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
74)P039E-A047V-T056Y-L080V--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
75)P039E-S099R-S126A-P127E-S128G-Q256E
76)P039E-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
77)P039E-S099R-S126A-P127E-S128G-Q200L
78)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
79)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
80)P039E-N074D-L080V-S099R-S126A-P127E-S128G
81)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
82)P039E-I043V-A047V-T056Y--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
83)P039E-I043V-A047V
84)P039E-I043V-A047V-N242D
85)P039E-P054T-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G
86)P039E-A047V-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G
87)P039E-I043V-A047V-P054T-T056Y--E087D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G-N242D
88)P039E-N074D-S099R-N114Q-S126A-P127E-S128G
89)P039E-N074D--S099R-S126A-P127E-S128G
90)P039E-I043V-A047V-T056Y--E087D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
91)P039E-N074D-E087D-S099R-S126A-P127E-S128G
92)P039E-I043V-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G
93)P039E-T056Y-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G
94)P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N242D
用于本发明的组合物中的其他优选的变体选自与氨基酸序列SEQ%20ID%20NO:2具有至少90％，更优选地至少92％的同一性并且包含替换的变体，所述替换选自(使用SEQ%20ID%20NO:2编号)：
(i)P39E-I43V-A47V-T56Y-L80V-E87D-S99R-N114Q-S126D-P127S-S128A-N242D；
(ii)P39E-I43V-A47V-T56Y-L80V-E87D-N114Q-S126G-P127T-S128E-N242D；
(iii)P39E-I43V-A47V-T56Y-L80V-E87D-S99R-N114Q-P127A-S128C-N242D；
(iv)P39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-L80V-E87D-S99E-N114Q-S126T-P127D-S128A-N242D；
(v)P39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-L80V-E87D-S99R-N114Q-S126V-P127A-S128T-N242D；
(vi)P39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-L80V-E87D-S99R-N114Q--S128E-N242D；
(vii)P39E-I43V-A47V-T56Y-L80V-E87D-S99E-N114Q-P127E-S128G-N242D；
(viii)P39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-L80V-E87D-S99R-N114Q-S126T-P127E-S128A-N242D；
(ix)P39E-I43V-A47V-T56Y-L80V-E87D-S128E-N242D；
(x)P39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-L80V-E87D-S99R-N114Q-S126G-P127E-S128D-N242D；
(xi)P39E-I43V-A47V-T56Y-L80V-E87D-S99R-N114Q-P127D-S128E-N242D；
(xii)P39E-I43V-A47V-T56Y-L80V-E87D-S99R-N114Q-S126T-P127E-S128E-N242D；
(xiii)P39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-L80V-E87D-S99R-N114Q-P127G-S128P-N242D；
(xiv)P39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-L80V-E87D-S99R-N114Q-P127G-S128E-N242D；和/或
(xv)P39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-L80V-E87D-S99E-N114Q-S126T-P127D-S128A-N242D。
在其他实施方案中，蛋白酶为与选自SEQ%20ID%20NO:3、SEQ%20ID%20NO:4、SEQ%20ID%20NO:5、SEQ%20ID%20NO:6、SEQ%20ID%20NO:7；SEQ%20ID%20NO:8、SEQ%20ID%20NO:9和SEQ%20ID%20NO:10的序列具有至少90％同一性的变体并且所述变体包含至少一个替换，所述替换选自：
X54T；
X80V、R、Y；
X126A、D、G、V、E、K、I；
X127E、S、T、A、G、C；和
X128E、C、T、D、P、G、L、Y、N。
优选地，所述变体具有与选自SEQ%20ID%20NO:3、SEQ%20ID%20NO:4、SEQ%20ID%20NO:5、SEQ%20IDNO:6、SEQ%20ID%20NO:7；SEQ%20ID%20NO:8、SEQ%20ID%20NO:9和SEQ%20ID%20NO:10的序列具有至少90％同一性的序列并且所述变体包含至少一个氨基酸替换，所述氨基酸替换选自：X54T、X80V、X126A、X127E和X128G。
优选的变体具有与选自SEQ%20ID%20NO:3、SEQ%20ID%20NO:4、SEQ%20ID%20NO:5、SEQ%20ID%20NO:6、SEQ%20ID%20NO:7；SEQ%20ID%20NO:8、SEQ%20ID%20NO:9和SEQ%20ID%20NO:10的序列具有至少90％同一性的序列。上文对于SEQ%20ID%20NO:2列出的替换(1)-(94)以及(i)至(xv)作必要修改后适用于SEQ%20IDNO:3、SEQ%20ID%20NO:4、SEQ%20ID%20NO:5、SEQ%20ID%20NO:6、SEQ%20ID%20NO:7；SEQ%20ID%20NO:8、SEQ%20ID%20NO:9和SEQ%20ID%20NO:10，不考虑在这些序列中存在于对于SEQ%20ID%20NO:2所列的位置处的氨基酸残基。应当理解，SEQ%20ID%20NO:3、SEQ%20ID%20NO:4、SEQ%20ID%20NO:5、SEQ%20ID%20NO:6、SEQ%20ID%20NO:7；SEQID%20NO:8、SEQ%20ID%20NO:9和SEQ%20ID%20NO:10在同一位置中可不具有与SEQ%20ID.NO:2相同的氨基酸残基，但该变体包含相同的替换。
例如：
相对于SEQ%20ID%20No:2的T056Y-S099R-S126A-P127E-S128G变成相对于SEQ%20ID%20NO:3、SEQ%20ID%20NO:4、SEQ%20ID%20NO:5、SEQ%20ID%20NO:6、SEQ%20IDNO:7；SEQ%20ID%20NO:8、SEQ%20ID%20NO:9和SEQID%20NO:10中任一者的X056Y-X099R-X126A-X127E-X128G。
本发明的蛋白酶在不含磷酸盐的组合物中表现非常好，即使当所述组合物用于软水中时也是如此。
本发明组合物中优选的蛋白酶含量包括约0.04至约5mg活性蛋白酶/克组合物，更优选地约0.05至约2mg活性蛋白酶/克组合物。
自动盘碟洗涤清洁组合物
自动盘碟洗涤清洁组合物可以呈任何物理形式。其可以为散粉、凝胶或以单位剂型呈现。优选地其为单位剂型，单位剂型包括压制片剂和水溶性包。本发明的自动盘碟洗涤清洁组合物优选以单位剂型呈现，并且其可以为任何物理形式，包括固体、液体和凝胶形式。本发明的组合物非常适于以多隔室包的形式呈现，更具体地讲，包括具有呈不同物理形式的组合物的隔室的多隔室包(例如一个隔室包含呈固体形式的组合物且另一个隔室包含呈液体形式的组合物)。所述组合物优选地被水溶性膜诸如聚乙烯醇包封。尤其优选的是呈包裹在聚乙烯醇膜中的单位剂型的组合物，所述聚乙烯醇膜具有小于100μm，优选地20μm至90μm的厚度。本发明的洗涤剂组合物的重量为约8克至约25克，优选地约10克至约20克。该重量范围适合于洗碗机分配器。尽管该范围相当于少量的洗涤剂，但洗涤剂已经以提供上文提及的所有有益效果的方式配制。
该组合物优选不含磷酸盐。所谓“不含磷酸盐”，在本文中理解为该组合物包含按所述组合物的重量计小于1％，优选地小于0.1％的磷酸盐。
本发明的组合物不含磷酸盐并且包含络合剂体系。
络合剂体系
就本发明的目的而言，“络合剂”是能够结合多价离子诸如钙、镁、铅、铜、锌、镉、汞、锰、铁、铝和其他阳离子多价离子以形成水溶性络合物的化合物。该络合剂对Ca2+的对数稳定性常数([log%20K]为至少3。稳定性常数log%20K在25℃的温度下在离子强度为0.1的溶液中测量。
本发明的组合物包含按所述组合物的重量计10％至50％的络合剂体系。优选地，所述组合物包含络合剂，所述络合剂选自柠檬酸、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、羧甲基菊粉、L-天冬氨酸N,N-二乙酸四钠盐(ASDA)以及它们的混合物。就本发明的目的而言，当提及络合剂时，术语“酸”包括酸及其盐。
在一个优选的实施方案中，组合物包含按本发明的重量计15％至40％的MGDA，更优选地MGDA的三钠盐。包含该高含量MGDA的组合物在软水中以及在长时间循环和/或热水循环中表现良好。
在一个优选的实施方案中，组合物包含按本发明的重量计15％至28％的柠檬酸，更优选地柠檬酸钠。包含柠檬酸的组合物在软水中表现良好。
在一个优选的实施方案中，络合剂体系包含柠檬酸和MGDA，其重量比优选为约0.5:1至约5:1，更优选地约0.5:1至约2.5:1。
分散剂聚合物
优选地，本发明的组合物包含分散剂聚合物。分散剂聚合物可以按所述组合物的重量计约0.1％至约20％，优选地0.2％至约15％，更优选地0.3％至％的任何适宜量使用。
分散剂聚合物能够在自动盘碟洗涤过程中使钙或碳酸钙悬浮。
分散剂聚合物具有在25℃下在介于30至250mg的Ca/g分散剂聚合物之间，优选地介于35至200mg的Ca/g分散剂聚合物之间，更优选地介于40至150mg的Ca/g分散剂聚合物之间的范围内的钙结合容量。为了确定聚合物是否为本发明含义内的分散剂聚合物，根据以下说明进行以下钙结合容量测定：
钙结合容量测试方法
本文提及的钙结合容量经由使用pH/离子计(诸如Mettler%20Toledo%20SevenMultiTM台式计)和PerfectIONTM%20comb%20Ca组合电极进行滴定来测定。为测量结合容量，将适用于烧杯或tergotometer罐的加热和搅拌装置设置为25℃，并且根据制造商的说明校准具有计量表的离子电极。电极校准的标准浓度应在测试浓度的范围内，并且应在25℃下测量。通过将3.67g的CaCl2-2H2O加入1L去离子水中来制备1000mg/g%20Ca的原液，然后进行稀释以制备三种100mL的工作溶液，其各自分别包含100mg/g、10mg/g和1mg/g浓度的钙。将100mg%20Ca/g工作溶液用作滴定期间的初始浓度，所述滴定在25℃下进行。通过向每种工作溶液添加2.5g/L的NaCl来调节每种工作溶液的离子强度。加热并搅拌100mL的100mg%20Ca/g工作溶液，直至其达到25℃。使用离子电极在溶液达到25℃时进行钙离子浓度的初始读数。然后将测试聚合物增量添加到钙工作溶液(以0.01g/L间隔)，并且在每次增量添加后进行搅拌5分钟之后测量。当溶液达到1mg/g钙时停止滴定。使用剩余的两种钙浓度工作溶液重复滴定程序。将测试聚合物的结合容量计算为测量的钙浓度相对于所添加的测试聚合物的克数/升的线性斜率。
当溶解于pH大于6的水溶液中时，分散剂聚合物优选地带有负净电荷。
分散剂聚合物还可带有磺化羧酸酯或酰胺，以便在较低的pH下增加负电荷并改善其在硬水中的分散特性。优选的分散剂聚合物为磺化/羧化聚合物，即包含磺化和羧化单体两者的聚合物。
所述分散剂聚合物优选为多元羧酸的磺化衍生物，并且可包含两个、三个、四个或更多个不同的单体单元。优选的共聚物包含：
至少一个衍生自具有通式(III)的羧酸单体的结构单元：
其中R1至R3独立地选自氢、甲基、具有2至12个碳原子的直链或支链的饱和烷基基团、具有2至12个碳原子的直链或支链的单不饱和或多不饱和的烯基基团、如上所述的被-NH2或-OH、或-COOH、或COOR4取代的烷基或烯基基团，其中R4选自氢、碱金属、或具有2至12个碳的直链或支链的、饱和或不饱和的烷基或烯基基团；
优选的羧酸单体包括下列中的一种或多种：丙烯酸、马来酸、马来酸酐、衣康酸、柠康酸、2-苯基丙烯酸、肉桂酸、巴豆酸、富马酸、甲基丙烯酸、2-乙基丙烯酸、亚甲基丙二酸或山梨酸。丙烯酸和甲基丙烯酸是更优选的。
任选地，一个或多个结构单元衍生自至少一种具有通式(IV)的非离子单体：
其中R5至R7独立地选自氢、甲基、苯基或包含1至6个碳原子的羟烷基基团，并且可以为环状结构的部分，X为任选存在的间隔基团，其选自-CH2-、-COO-、-CONH-或-CONR8-，并且R8选自具有1至22个碳原子的直链或支链的饱和烷基基团，或具有6至22个碳原子的不饱和(优选地芳族)基团。
优选的非离子单体包括下列中的一种或多种：丁烯、异丁烯、戊烯、2-甲基戊-1-烯、3-甲基戊-1-烯、2,4,4-三甲基戊-1-烯、2,4,4-三甲基戊-2-烯、环戊烯、甲基环戊烯、2-甲基-3-甲基-环戊烯、己烯、2,3-二甲基己-1-烯、2,4-二甲基己-1-烯、2,5-二甲基己-1-烯、3,5-二甲基己-1-烯、4,4-二甲基己-1-烯、环己烯、甲基环己烯、环庚烯、具有10个或更多个碳原子的α-烯烃，诸如癸-1-烯、十二-1-烯、十六-1-烯、十八-1-烯和二十二-1-烯，优选的芳族单体为苯乙烯、α-甲基苯乙烯、3-甲基苯乙烯、4-十二烷基苯乙烯、2-乙基-4-苄基苯乙烯、4-环己基苯乙烯、4-丙基苯乙烯、1-乙烯基萘、2-乙烯基萘；优选的羧酸酯单体为(甲基)丙烯酸甲酯、(甲基)丙烯酸乙酯、(甲基)丙烯酸丙酯、(甲基)丙烯酸叔丁酯、(甲基)丙烯酸戊酯、(甲基)丙烯酸己酯、(甲基)丙烯酸2-乙基己基酯、(甲基)丙烯酸辛基酯、(甲基)丙烯酸月桂酯、(甲基)丙烯酸硬脂基酯和(甲基)丙烯酸二十二酯；优选的酰胺为N-甲基丙烯酰胺、N-乙基丙烯酰胺、N-叔丁基丙烯酰胺、N-2-乙基己基丙烯酰胺、N-辛基丙烯酰胺、N-月桂基丙烯酰胺、N-硬脂基丙烯酰胺、N-二十二烷基丙烯酰胺。
和至少一个衍生自至少一种磺酸单体的结构单元，所述磺酸单体具有通式(V)和(VI)：
其中R7为包含至少一个sp2键的基团，A为O、N、P、S、酰胺基或酯键，B为单环或多环芳族基团或脂族基团，每个t独立地为0或1，并且M+为阳离子。在一个方面，R7为C2至C6烯烃。在另一方面，R7为乙烯、丁烯或丙烯。
优选的磺化单体包括下列中的一个或多个：1-丙烯酰胺基-1-丙磺酸、2-丙烯酰胺基-2-丙磺酸、2-丙烯酰胺基-2-甲基-1-丙磺酸、2-甲基丙烯酰胺基-2-甲基-1-丙磺酸、3-甲基丙烯酰胺基-2-羟基-丙磺酸、烯丙基磺酸、甲基烯丙基磺酸、烯丙氧基苯磺酸、甲基烯丙氧基苯磺酸、2-羟基-3-(2-丙烯氧基)丙磺酸、2-甲基-2-丙烯-1-磺酸、苯乙烯磺酸、乙烯基磺酸、3-磺基丙基,3-磺基丙基甲基丙烯酸酯、磺基甲基丙烯酰胺、磺基甲基甲基丙烯酰胺、以及所述酸或其水溶性盐的混合物。
优选地，所述聚合物包含以下含量的单体：按所述聚合物的重量计约40％至约90％，优选地约60％至约90％的一种或多种羧酸单体；按所述聚合物的重量计约5％至约50％，优选地约10％至约40％的一种或多种磺酸单体；以及任选地按所述聚合物的重量计约1％至约30％，优选地约2％至约20％的一种或多种非离子单体。尤其优选的聚合物包含按所述聚合物的重量计约70％至约80％的至少一种羧酸单体和按所述聚合物的重量计约20％至约30％的至少一种磺酸单体。
在所述聚合物中，羧酸或磺酸基团中的全部或一些可以中和形式存在，即一些或所有酸基团中的羧酸基团和/或磺酸基团的酸性氢原子可被金属离子，优选地碱金属离子，并且具体地讲被钠离子取代。
羧酸优选为(甲基)丙烯酸。磺酸单体优选为2-丙烯酰胺-2-丙磺酸(AMPS)。
优选的可商购获得的聚合物包括：由Alco Chemical提供的Alcoperse240、Aquatreat AR 540和Aquatreat MPS；由Rohm&Haas提供的Acumer3100、Acumer 2000、Acusol 587G和Acusol 588G；由BF Goodrich提供的Goodrich K-798、K-775和K-797；以及由ISP technologies Inc.提供的ACP1042。特别优选的聚合物是由Rohm&Haas提供的Acusol 587G和Acusol588G。
适宜的分散剂聚合物包括低分子量的阴离子羧酸聚合物。其可以为重均分子量小于或等于约200,000g/mol、或小于或等于约75,000g/mol、或小于或等于约50,000g/mol、或约3,000至约50,000g/mol，优选地约5,000至约45,000g/mol的均聚物或共聚物。分散剂聚合物可为聚丙烯酸酯的低分子量均聚物，其中平均分子量为1,000至20,000，具体地讲2,000至10,000，并且特别优选3,000至5,000。
分散剂聚合物可为丙烯酸与甲基丙烯酸、丙烯酸和/或甲基丙烯酸与马来酸、以及丙烯酸和/或甲基丙烯酸与富马酸的共聚物，其中分子量小于70,000。其分子量在2,000至80,000g/mol，并且更优选地20,000至50,000g/mol，并且具体地讲30,000至40,000g/mol的范围内，并且(甲基)丙烯酸酯与马来酸酯或富马酸酯链段的比率为30:1至1:2。
分散剂聚合物可以为丙烯酰胺和丙烯酸酯的共聚物，其具有3,000至100,000，或者4,000至20,000的分子量，并且还可使用按所述分散剂聚合物的重量计小于50％，或者小于20％的丙烯酰胺含量。另选地，此类分散剂聚合物可具有4,000至20,000的分子量和按所述聚合物的重量计0％至15％的丙烯酰胺含量。
适用于本文的分散剂聚合物还包括衣康酸均聚物和共聚物。
另选地，分散剂聚合物可选自烷氧基化聚亚烷基亚胺、烷氧基化聚羧酸酯、聚乙二醇、苯乙烯共聚物、硫酸纤维素酯、羧化多糖、两亲性接枝共聚物以及它们的混合物。
漂白剂
本发明的组合物优选包含按所述组合物的重量计约10％至约20％，更优选地约12％至约18％的漂白剂，优选地过碳酸盐。
无机和有机漂白剂适用于本文。无机漂白剂包括过氧化氢合物盐，诸如过硼酸盐、过碳酸盐、过磷酸盐、过硫酸盐和过硅酸盐。无机过氧化氢合物盐通常是碱金属盐。无机过氧化氢合物盐可作为没有附加保护的结晶固体包含在组合物中。另选地，所述盐可被涂覆。合适的涂层包括硫酸钠、碳酸钠、硅酸钠以及它们的混合物。所述涂层可作为施加于表面的混合物施用或以层的形式依次施用。
碱金属过碳酸盐，具体地讲过碳酸钠是优选用于本文的漂白剂。最优选以经涂覆的形式将过碳酸盐掺入产品中以提供产品中稳定性。
过氧化单硫酸钾是另一种可用于本文的无机过氢化合物盐。
典型的有机漂白剂为有机过氧酸，尤其是十二烷二过氧酸、十四烷二过氧酸和十六烷二过氧酸。单过氧壬二酸和二过氧壬二酸、单过氧十三烷二酸和二过氧十三烷二酸也适用于本文。二酰基过氧化物和四酰基过氧化物(例如过氧化二苯甲酰和过氧化二月桂酰)是可用于本发明上下文中的其他有机过氧化物。
其他典型的有机漂白剂包括过氧酸，具体的示例是烷基过氧酸和芳基过氧酸。优选的代表物是(a)过氧苯甲酸及其环上取代的衍生物如烷基过氧苯甲酸，以及过氧-α-萘甲酸和一过氧邻苯二甲酸镁，(b)脂族过氧酸或取代的脂族过氧酸，如过氧月桂酸、过氧硬脂酸、ε-苯二甲酰亚氨基过氧己酸[苯二甲酰亚氨基己酸(PAP)]、邻羧基苯酰胺过氧己酸、N-壬烯酰胺基过氧己二酸和N-壬烯酰胺基过氧琥珀酸，以及(c)脂族和芳脂族过氧二羧酸，如1,12-二过氧羧酸、1,9-二过氧壬二酸、二过氧癸二酸、二过氧十三烷二酸、二过氧邻苯二甲酸、2-癸基二过氧丁-1,4-二酸、N,N-对苯二甲酰基二(6-氨基过氧己酸)。
漂白活化剂
漂白活化剂典型为有机过酸前体，其可在60℃以及60℃以下的温度下增加清洁期间的漂白作用。适用于本文的漂白活化剂包括在过氧化氢解条件下生成优选具有1至12个碳原子、具体地讲2至10个碳原子的脂族过氧羧酸和/或任选被取代的过苯甲酸的化合物。适宜的物质具有含指定碳原子数的O-酰基和/或N-酰基基团和/或任选被取代的苯甲酰基基团。优选多酰化的亚烷基二胺(具体地讲是四乙酰基乙二胺(TAED))、酰化的三嗪衍生物(具体地讲是1,5-二乙酰基-2,4-二氧代六氢-1,3,5-三嗪(DADHT))、酰化的甘脲(具体地讲是四乙酰基甘脲(TAGU))、N-酰基酰亚胺(具体地讲是N-壬酰基琥珀酰亚胺(NOSI))、酰化的酚磺酸盐(具体地讲是正壬酰基羟基苯磺酸盐或异壬酰基羟基苯磺酸盐(正-NOBS或异-NOBS))、癸酰氧基苯甲酸(DOBA)、羧酸酐(具体地讲是邻苯二甲酸酐)、酰化的多元醇，具体地讲是三乙酸甘油酯、二乙酸乙二醇酯和2,5-二乙酰氧基-2,5-二氢呋喃、以及乙酰柠檬酸三乙酯(TEAC)。如果存在，则本发明的组合物包含按所述组合物的重量计0.01％至5％，优选地0.2％至2％的漂白活化剂，优选地TAED。
漂白催化剂
本文的组合物优选包含漂白催化剂，优选地包含金属的漂白催化剂。更优选地，包含金属的漂白催化剂为包含过渡金属的漂白催化剂，尤其是包含锰或钴的漂白催化剂。
优选用于本文的漂白催化剂包括锰三氮杂环壬烷和相关的络合物；Co、Cu、Mn和Fe联吡啶胺和相关的络合物；以及五胺乙酸钴(III)和相关的络合物。尤其优选用于本文的漂白催化剂为1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me-TACN)和1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me/Me-TACN)。
优选地，本发明的组合物包含按所述组合物的重量计0.005％至0.5％，更优选地0.005％至0.075％的漂白催化剂。优选地，所述漂白催化剂为锰漂白催化剂。
无机助洗剂
本发明的组合物优选包含无机助洗剂。合适的无机助洗剂选自：碳酸盐、硅酸盐以及它们的混合物。尤其优选用于本文的是碳酸钠。优选地，本发明的组合物包含按所述组合物的重量计5％至60％，更优选地10％至50％，并且尤其是15％至45％的碳酸钠。
表面活性剂
适用于本文的表面活性剂包括非离子表面活性剂，优选地所述组合物不含任何其他表面活性剂。传统上，非离子表面活性剂已被用于自动盘碟洗涤中以用于表面改性目的，具体地讲用于片材以避免成膜和斑染并改善光泽。已发现，非离子表面活性剂也可有助于防止污垢的再沉积。
优选地，本发明的组合物包含非离子表面活性剂或非离子表面活性剂体系，更优选地，如以1％的浓度在蒸馏水中测量的，所述非离子表面活性剂或非离子表面活性剂体系具有介于40℃和70℃之间，优选介于45℃和65℃之间的相转变温度。所谓“非离子表面活性剂体系”在本文中意指两种或更多种非离子表面活性剂的混合物。优选用于本文的是非离子表面活性剂体系。与单一非离子表面活性剂相比，它们似乎具有改善的清洁和整理特性以及更好的产品中稳定性。
相转变温度是以下温度：低于所述温度，表面活性剂或它们的混合物优先以油溶胀胶束形式分配到水相中，并且高于所述温度，其优先以水溶胀的反胶束形式分配到油相中。通过鉴别浑浊出现时的温度，可在视觉上确定相转变温度。
非离子表面活性剂或体系的相转变温度可如下测定：制备蒸馏水中的溶液，其包含按所述溶液的重量计，1％的相应表面活性剂或混合物。将溶液轻轻地搅拌，然后进行相转变温度分析以确保该方法在化学平衡时进行。通过将溶液浸没在75mm密封玻璃试管中，在热稳定浴中获取相转变温度。为确保不存在渗漏，在相转变温度测量之前和之后对试管称重。温度以低于1℃/分钟的速率逐渐增加，直至温度达到预估计的相转变温度以下几度。在浊度首次出现时，在视觉上确定相转变温度。
适宜的非离子表面活性剂包括：i)乙氧基化非离子表面活性剂，所述乙氧基化非离子表面活性剂通过具有6至20个碳原子的单羟基链烷醇或烷基酚与每摩尔醇或烷基酚优选地至少12摩尔、特别优选地至少16摩尔、并且还更优选地至少20摩尔环氧乙烷的反应来制备；ii)具有6至20个碳原子和至少一个乙氧基基团和丙氧基基团的醇烷氧基化表面活性剂。优选用于本文的是表面活性剂i)和ii)的混合物。
另一种适宜的非离子表面活性剂是由下式表示的环氧基封端的聚(烷氧基化)醇：
R1O[CH2CH(CH3)O]x[CH2CH2O]y[CH2CH(OH)R2] (I)
优选地，R1为具有4至18个碳原子的直链或支链的脂族烃基；R2为具有2至26个碳原子的直链或支链的脂族烃基；x为具有0.5至1.5，更优选地约1的平均值的整数；并且y为具有至少15，更优选地至少20的值的整数。
优选地，式I的表面活性剂在末端环氧化物单元[CH2CH(OH)R2]中具有至少约10个碳原子。根据本发明，合适的式I的表面活性剂为Olin Corporation的
酶
其他蛋白酶
本发明的组合物可包含除了本发明的蛋白酶之外的蛋白酶。两种或更多种蛋白酶的混合物可有助于在更宽的温度、循环持续时间和/或底物范围内增强清洁，并且提供优异的光泽有益效果，尤其是当与抗再沉积剂和/或磺化聚合物结合使用时。
适合与本发明的变体蛋白酶组合使用的蛋白酶包括金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶，包括中性或碱性微生物丝氨酸蛋白酶，诸如枯草杆菌蛋白酶(EC 3.4.21.62)。合适的蛋白酶包括动物源、植物源或微生物源的那些。在一个方面，此类合适的蛋白酶可为微生物源。合适的蛋白酶包括前述合适蛋白酶的经化学修饰或基因修饰的突变体。在一个方面，合适的蛋白酶可为丝氨酸蛋白酶，诸如碱性微生物蛋白酶或/和胰蛋白酶型蛋白酶。合适的中性或碱性蛋白酶的示例包括：
(a)枯草杆菌蛋白酶(EC 3.4.21.62))，尤其是来源于芽孢杆菌的那些，诸如描述于WO2004067737、WO2015091989、WO2015091990、WO2015024739、WO2015143360、US6,312,936B1、US 5,679,630、US 4,760,025、DE102006022216A1、DE102006022224A1、WO2015089447、WO2015089441、WO2016066756、WO2016066757、WO2016069557、WO2016069563、WO2016069569中的芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、迟缓芽孢杆菌(B.lentus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、短小芽胞杆菌(B.pumilus)、吉氏芽孢杆菌(B.gibsonii)和秋白氏芽孢杆菌(B.Akibaii)芽孢杆菌。
(b)胰蛋白酶型或胰凝乳蛋白酶型蛋白酶，诸如胰蛋白酶(例如源自猪或牛)，包括描述于WO 89/06270中的镰孢属(Fusarium)蛋白酶，以及描述于WO 05/052161和WO 05/052146中的来源于纤维单胞菌属(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶型蛋白酶。
(c)金属蛋白酶，尤其是来源于下列的那些：描述于WO07/044993A2中的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)；描述于WO2014194032、WO2014194054和WO2014194117中的芽孢杆菌(Bacillus)、短芽孢杆菌(Brevibacillus)、热放线菌(Thermoactinomyces)、土芽孢杆菌(Geobacillus)、类芽孢杆菌(Paenibacillus)、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus)或链霉菌属(Streptomyces spp.)；描述于WO2015193488中的嗜铝克里伯氏菌(Kribella alluminosa)；以及描述于WO2016075078中的链霉菌和溶杆菌(Lysobacter)。
(d)描述于WO92/17577中的与来自芽孢杆菌属TY145、NCIMB40339的枯草杆菌酶具有至少90％同一性的蛋白酶(NovozymesA/S)，其包括描述于WO2015024739和WO2016066757中的该芽孢杆菌属TY145枯草杆菌酶的变体。
用于本发明的洗涤剂的尤其优选的附加蛋白酶是，与来自迟缓芽孢杆菌的野生型酶展示出至少90％，优选至少95％，更优选至少98％，甚至更优选至少99％并且尤其是100％同一性的多肽，其包含在使用如通过引用并入本文的WO00/37627中示出的BPN编号体系和氨基酸缩写的一个或多个，优选两个或更多个，并且更优选三个或更多个以下位置中的突变：V68A、N76D、N87S、S99D、S99SD、S99A、S101G、S101M、S103A、V104N/I、G118V、G118R、S128L、P129Q、S130A、Y167A、R170S、A194P、V205I、Q206L/D/E、Y209W和/或M222S。
最优选的所述附加蛋白酶选自包含相对于PB92野生型(WO08/010925中的SEQ IDNO:2)或枯草杆菌蛋白酶309野生型(如PB92主链的序列，除了包含N87S的自然变异之外)的下列突变(BPN编号体系)的蛋白酶。
(i)G118V+S128L+P129Q+S130A
(ii)S101M+G118V+S128L+P129Q+S130A
(iii)N76D+N87R+G118R+S128L+P129Q+S130A+S188D+N248R
(iv)N76D+N87R+G118R+S128L+P129Q+S130A+S188D+V244R
(v)N76D+N87R+G118R+S128L+P129Q+S130A
(vi)V68A+N87S+S101G+V104N
(vii)S99AD
合适的可商购获得的附加蛋白酶包括以商品名
尤其优选用于本文的与本发明的变体蛋白酶组合使用的是选自以下的商业蛋白酶：
本发明产品中的优选的蛋白酶含量包括约0.05至约10mg活性蛋白酶/g组合物，更优选地约0.5至约7mg活性蛋白酶/g组合物，并且尤其是约1至约6mg活性蛋白酶/g组合物。
淀粉酶
优选地，本发明的组合物可包含淀粉酶。合适的α-淀粉酶包括源自细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或基因修饰的突变体(变体)。优选的碱性α-淀粉酶来源于芽孢杆菌属的菌株，诸如地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或其他芽孢杆菌属(Bacillus sp.)，诸如芽孢杆菌属NCBI 12289、NCBI12512、NCBI 12513、DSM 9375(USP 7,153,818)DSM 12368、DSMZ号12649、KSM AP1378(WO 97/00324)、KSM K36或KSM K38(EP1,022,334)。优选的淀粉酶包括：
(a)描述于WO 96/23873、WO00/60060、WO06/002643和WO2017/192657中的变体，尤其是相对于WO06/002643中作为SEQ ID NO.12列出的AA560酶，在以下位置中具有一个或多个替换的变体：
26、30、33、82、37、106、118、128、133、149、150、160、178、182、186、193、202、214、231、246、256、257、258、269、270、272、283、295、296、298、299、303、304、305、311、314、315、318、319、339、345、361、378、383、419、421、437、441、444、445、446、447、450、461、471、482、484，优选地所述变体还包含D183*和G184*的删除。
(b)与WO06/002643中的SEQ ID No.4(来自芽孢杆菌属SP722的野生型酶)表现出至少90％同一性的变体，尤其是在183和184位置中具有删除的变体，以及描述于WO 00/60060、WO2011/100410和WO2013/003659中的变体，所述专利文献以引用方式并入本文。
(c)与来自芽孢杆菌属707的野生型酶(US 6,093,562中的SEQ IDNO:7)表现出至少95％同一性的变体，尤其是包含下列突变中的一个或多个的那些：M202、M208、S255、R172和/或M261。优选地，所述淀粉酶包含M202L、M202V、M202S、M202T、M202I、M202Q、M202W、S255N和/或R172Q中的一个或多个。尤其优选的是包含M202L或M202T突变的那些。
(d)描述于WO 09/149130中的变体，优选地与WO 09/149130中的SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2(来自嗜热脂肪芽孢杆菌的野生型酶或其截短型式)表现出至少90％同一性的那些。
(e)与WO2016091688中的SEQ ID NO:1表现出至少89％同一性的变体，尤其是在位置H183+G184处包含删除并且另外在位置405、421、422和/或428处包含一个或多个突变的那些。
(f)与来自解凝乳类芽胞杆菌(Paenibacillus curdlanolyticus)YK9的“PcuAmy1α-淀粉酶”(WO2014099523中的SEQ ID NO:3)表现出至少60％氨基酸序列同一性的变体。
(g)与来自噬纤维菌属(Cytophaga sp.)的“CspAmy2淀粉酶”(WO2014164777中的SEQ ID NO:1)表现出至少60％氨基酸序列同一性的变体。
(h)与来自枯草芽孢杆菌的AmyE(WO2009149271中的SEQ IDNO:1)表现出至少85％同一性的变体。
(i)与来自具有登录号AB051102的芽孢杆菌属KSM-K38的野生型淀粉酶表现出至少90％同一性的变体。
(j)与来自芽孢杆菌属的成熟氨基酸序列AAI10(WO2016180748中的SEQ ID NO:7)表现出至少80％同一性的变体。
(k)与脂环酸芽孢杆菌属(Alicyclobacillus sp.)淀粉酶的成熟氨基酸序列(WO2016180748中的SEQ ID NO:8)表现出至少80％同一性的变体。
优选地，该淀粉酶为工程化酶，其中易于漂白氧化的氨基酸中的一种或多种已被较不易氧化的氨基酸替换。具体地讲，优选的是甲硫氨酸残基被任何其他氨基酸替换。具体地讲，优选的是最易于氧化的甲硫氨酸被替换。优选地，在WO06/002643中作为SEQ IDNO.12列出的AA560酶中的等同于202的位置处的甲硫氨酸被替换。优选地，在该位置处的甲硫氨酸被苏氨酸或亮氨酸(优选地亮氨酸)替换。
适宜的可商购获得的α-淀粉酶包括
优选地，本发明的产品包含至少0.01mg活性淀粉酶/g组合物，优选地约0.05至约10mg活性淀粉酶/g组合物，更优选地约0.1至约6mg活性淀粉酶/g组合物，尤其是约0.2至约5mg活性淀粉酶/g组合物。
优选地，本发明组合物的蛋白酶和/或淀粉酶呈颗粒形式，该颗粒包含按所述颗粒的重量计多于29％的硫酸钠，和/或硫酸钠和活性酶(蛋白酶和/或淀粉酶)的重量比介于3:1和100:1之间，或优选地介于4:1和30:1之间，或更优选地介于5:1和20:1之间。
晶体生长抑制剂
晶体生长抑制剂是可与碳酸钙晶体结合并防止诸如霰石和方解石的物质进一步生长的材料。
有效的晶体生长抑制剂的示例包括膦酸盐、聚膦酸盐、菊粉衍生物、聚衣康酸均聚物和环状聚羧酸盐。
合适的晶体生长抑制剂可选自HEDP(1-羟基亚乙基1,1-二膦酸)、羧甲基菊粉(CMI)、均丙三羧酸和环状羧酸盐。就本发明的目的而言，术语羧酸盐涵盖阴离子形式和质子化羧酸形式两者。
环状羧酸盐包含至少两个、优选地三个或优选地至少四个羧酸根基团，并且环状结构基于单环烷烃或双环烷烃或杂环。合适的环状结构包括环丙烷、环丁烷、环己烷或环戊烷或环庚烷、双环庚烷或双环辛烷和/或四氟呋喃。一种优选的晶体生长抑制剂为环戊烷四甲酸盐。
在环的3D结构的同一侧上或在其“顺式”位置中具有至少75％、优选地100％的羧酸根基团的环状羧酸盐优选用于本文。
优选的是，在环的同一侧上的两个羧酸根基团处于直接相邻或“邻位”位置。
优选的晶体生长抑制剂包括HEDP、均丙三羧酸、四氢呋喃四羧酸(THFTCA)和环戊烷四羧酸(CPTCA)。THFTCA优选地呈2c,3t,4t,5c-构型，并且CPTCA呈顺式,顺式,顺式,顺式-构型。尤其优选用于本文的晶体生长抑制剂为HEDP。
还优选用于本文的是部分脱羧的聚衣康酸均聚物，优选具有在50摩尔％至90摩尔％范围内的脱羧水平。尤其优选用于本文的聚合物为由Itaconix提供的Itaconix
晶体生长抑制剂优选以按所述组合物的重量计约0.01％至约10％，具体地讲约0.02％至约5％，并且具体地讲0.05％至3％的量存在。
金属护理剂
金属护理剂可防止或减少金属(包括铝、不锈钢和有色金属，诸如银和铜)的锈蚀、腐蚀或氧化。优选地，本发明的组合物包含按所述产品的重量计0.1％至5％，更优选地0.2％至4％，并且尤其是0.3％至3％的金属护理剂，优选地所述金属护理剂为苯并三唑(BTA)。
玻璃护理剂
玻璃护理剂在盘碟洗涤过程中保护玻璃物品的外观。优选地，本发明的组合物包含按所述组合物的重量计0.1％至5％，更优选地0.2％至4％，并且尤其是0.3％至3％的金属护理剂，玻璃护理剂优选为含锌物质，尤其是水锌矿。其他合适的玻璃护理剂为聚氮丙啶(PET)。特别优选的PEI是由BASF提供的
本发明的自动盘碟洗涤组合物优选地具有如在20℃下在蒸馏水中的1重量/体积％水溶液中测量的约9至约12，更优选地约10至小于约11.5，并且尤其是约10.5至约11.5的pH。
本发明的自动盘碟洗涤组合物优选地具有如在20℃下在100克产品的NaOH溶液中测量的，在pH为9.5时约10至约20，更优选地约12至约18的储备碱度。
本发明的优选的自动盘碟洗涤组合物包含：
i)按所述组合物的重量计10％至20％的漂白剂，优选地过碳酸钠；
ii)优选地漂白活化剂，更优选地TAED；
iii)淀粉酶；
iv)任选地但优选地按所述组合物的重量计5％至50％的无机助洗剂，优选地碳酸钠；
v)任选地但优选地按所述组合物的重量计2％至10％的非离子表面活性剂；
vi)任选地但优选地漂白催化剂，更优选地锰漂白催化剂；和
vii)其他任选成分包括：晶体生长抑制剂，优选地HEDP，和玻璃护理剂。
本文所公开的量纲和值不应理解为严格限于所引用的精确数值。相反，除非另外指明，否则每个此类量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。
实施例
将通过包含变体蛋白酶的自动盘碟洗涤组合物的蛋黄去除与包含亲本蛋白酶的相同组合物进行比较。
使用表1中显示的组合物。将3g每种组合物溶解于一升去离子水中以产生pH为11的清洁溶液。将相应的蛋白酶以介于0.25-0.75ppm之间的含量添加到清洁溶液中。
表1：自动盘碟洗涤组合物
表1：自动盘碟洗涤(ADW)组合物
清洁性能方法：使用PAS-38的蛋黄清洁性能
表2中所列的蛋白酶变体的清洁性能使用自动盘碟洗涤组合物A、B和C(参见表1)相对于亲本进行测试，如通过蛋黄微样本(PAS-38，Center for Testmaterials BV,Vlaardingen,Netherlands)上的污渍去除所测量的。预先设定蛋样本污渍的尺寸以适合微量滴定板(MTP)；标准96孔板。在洗涤后相对于参照测量PAS-38蛋样本的污渍去除。
在添加蛋白酶之前，用3g/l的洗涤剂以及洗涤剂和去离子水填充MTP。
在50℃下将PAS-38样本温育30分钟之后，用SpectraMax读板仪在405nm处读取吸光度。通过从每个样本值中减去空白对照(不包含蛋白酶)的值获得吸光度结果(下文称为“减去空白的吸光度”)。对于每种条件和变体，通过用减去空白的吸光度除以相同浓度下亲本蛋白酶的吸光度来计算性能指数(PI)。由亲本蛋白酶的标准曲线确定亲本蛋白酶的值，其被包括在测试中并且拟合到Langmuir拟合。
蛋白酶活性方法2：AAPF测定
通过测量N-suc-AAPF-pNA的水解来测试亲本和其枯草杆菌蛋白酶变体的蛋白酶活性用于AAPF水解测定法的试剂溶液为：100mM Tris/HCl，pH 8.6，包含0.005％
蛋白酶稳定性-稳定性测定
本文所述变体的稳定性通过在应激缓冲液中稀释变体，并且在56℃下的5分钟热温育步骤之前和之后，使用上述AAPF测定法测量变体的蛋白水解活性来测量。稳定性在Tris-EDTA(50mM Tris，pH 9；5mM EDTA；0.005％Tween 80)缓冲条件中测量。残余活性％通过采用应激活性与非应激活性的比率并乘以100来计算。
蛋白酶数据表2
如由表2中可以看出，本发明组合物的变体对蛋污渍的去除显著优于亲本蛋白酶。
