一种发酵李子精提物的制备方法
技术领域
本发明属于烟用香料制备技术领域，涉及一种发酵李子精提物的制备方法。
背景技术
吸烟对人体危害很大，为了尽可能的减缓对人体的危害，降低焦油含量成为了烟草产品的发展主流。但与此同时，随着烟草焦油降低的同时，带来了一些新的问题，如香气淡弱欠丰满、烟气干燥、甜润度不够、舒适度较差等，为了增进和提高卷烟的烟气浓度和香味，加香加料技术是一条有效途径。其中利用李子提取物作为天然的植物香精香料是有效手段，具有改善余味、增香的作用。李子含有丰富的氨基酸、维生素等物质,主要以天冬氨酸、谷氨酸和赖氨酸为主，尚含丝氨酸、甘氨酸、脯氨酸、苏氨酸、丙氨酸、γ－氨基丁酸等氨基酸。但是目前李子提取物作为香精香料作用于烟丝，提取方法效果差，应用于烟丝，香味淡薄粗糙，感官效果不好。
发明内容
本发明提出一种发酵李子精提物的制备方法，解决了现有技术中李子提取效果差，应用于烟丝，香味淡薄粗糙，感官效果不好的问题。
本发明的技术方案是这样实现的：一种发酵李子精提物的制备方法，将汉逊德巴利酵母、马克斯克鲁维酵母按照1：(2-3)的质量比接种至李子培养基进行发酵后，将得到的发酵物进行提取，得到发酵李子精提物；所述李子培养基为洗净破碎后形成的李子浆液。
进一步地，所述提取步骤包括：在发酵物中加入浸提液，浸提2～4h，然后离心，取上清液，得到发酵李子精提物；所述发酵物与浸提液的体积比为1：(4-5)。
进一步地，所述浸提液包括体积比为1：(2-3)的异戊醇、乙酸乙酯。
进一步地，所述离心条件为8000-12000rpm。
进一步地，所述汉逊德巴利酵母的接种量为李子培养基质量的1-2％。
进一步地，所述汉逊德巴利酵母的菌浓度为1×106～1×107CFU。
进一步地，所述发酵温度25～30℃、时间为5～7d。
进一步地，所述马克斯克鲁维酵母的菌浓度为1×106～1×107CFU。
本发明的工作原理及有益效果为：
1、本发明中发酵酵母菌相互协同发酵，提高了发酵物中总酚含量，并且通过对发酵物浸提，提高了发酵物中总酚的提取率，改善了李子提取物作为烟用香精的提香作用，并且改善了烟丝的霉情。
2、试验发现，本发明中通过采用汉逊德巴利酵母和马克斯克鲁维酵母共同发酵李子浆液，使得制备的李子精提物用作烟支香料的感官效果更好，提升了香气上的感官效果，减少了杂气。
3、本发明中，通过浸提液的设计，提高了发酵物中总酚的提取率，进而改善了烟丝的霉情，并且使得李子精提物制备得到的烟支感官效果更好；采用异戊醇、乙酸乙酯协同作为浸提液，提高了发酵物中总酚的提取率，而李子中的总酚物质能与金属离子发生络合反应形成沉淀而破坏菌类的正常新陈代谢使微生物丧失生命活力，进而降低烟支中的霉菌数量。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。下述实施例中的汉逊德巴利酵母购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC2.1335；马克斯克鲁维酵母，CICC%201276，购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心；下述实施例中涉及的李子购自石家庄农贸市场；生烟丝购自云南中烟工业有限责任公司；李子培养基为洗净破碎后形成的李子浆液。
实施例1
一种发酵李子精提物的制备方法，将汉逊德巴利酵母、马克斯克鲁维酵母按照1：2.5的质量比接种至李子培养基进行发酵，发酵温度28℃，6d后，将得到的发酵物进行提取，在发酵物中加入浸提液，发酵物与浸提液的体积比为1：4.5，浸提3h，然后在9000rpm离心，取上清液得到发酵李子精提物；所述浸提液包括体积比为1：2.4的异戊醇、乙酸乙酯。
其中汉逊德巴利酵母的菌浓度为5×106CFU，马克斯克鲁维酵母的菌浓度为5×106CFU，汉逊德巴利酵母的接种量为李子培养基质量的1.5％。
实施例2
一种发酵李子精提物的制备方法，将汉逊德巴利酵母、马克斯克鲁维酵母按照1：2的质量比接种至李子培养基进行发酵，发酵温度30℃，5d后，将得到的发酵物进行提取，在发酵物中加入浸提液，发酵物与浸提液的体积比为1：5，浸提2h，然后在12000rpm离心，取上清液得到发酵李子精提物；所述李子培养基为洗净破碎后形成的李子浆液；所述浸提液包括体积比为1：2的异戊醇、乙酸乙酯。
其中汉逊德巴利酵母的菌浓度为1×107CFU，马克斯克鲁维酵母的菌浓度为1×106CFU，汉逊德巴利酵母的接种量为李子培养基质量的2％。
实施例3
一种发酵李子精提物的制备方法，将汉逊德巴利酵母、马克斯克鲁维酵母按照1：3的质量比接种至李子培养基进行发酵，发酵温度25℃，7d后，将得到的发酵物进行提取，在发酵物中加入浸提液，发酵物与浸提液的体积比为1：4，浸提4h，然后在8000rpm离心，取上清液得到发酵李子精提物；所述李子培养基为洗净破碎后形成的李子浆液；所述浸提液包括体积比为1：3的异戊醇、乙酸乙酯。
其中汉逊德巴利酵母的菌浓度为1×106CFU，马克斯克鲁维酵母的菌浓度为1×107CFU，汉逊德巴利酵母的接种量为李子培养基质量的1％。
实施例4
一种发酵李子精提物的制备方法，将汉逊德巴利酵母、马克斯克鲁维酵母按照1：2的质量比接种至李子培养基进行发酵，发酵温度28℃，7d后，将得到的发酵物进行提取，在发酵物中加入浸提液，发酵物与浸提液的体积比为1：4，浸提3.5h，然后在8500rpm离心，取上清液得到发酵李子精提物；所述李子培养基为洗净破碎后形成的李子浆液；所述浸提液包括体积比为1：2.8的异戊醇、乙酸乙酯。
其中汉逊德巴利酵母的菌浓度为2×106CFU，马克斯克鲁维酵母的菌浓度为4×106CFU，汉逊德巴利酵母的接种量为李子培养基质量的1.2％。
实施例5
一种发酵李子精提物的制备方法，将汉逊德巴利酵母、马克斯克鲁维酵母按照1：2.4的质量比接种至李子培养基进行发酵，发酵温度25℃，7d后，将得到的发酵物进行提取，在发酵物中加入浸提液，发酵物与浸提液的体积比为1：4，浸提4h，然后在10000rpm离心，取上清液得到发酵李子精提物；所述李子培养基为洗净破碎后形成的李子浆液；所述浸提液包括体积比为1：3的异戊醇、乙酸乙酯。
其中汉逊德巴利酵母的菌浓度为4×106CFU，马克斯克鲁维酵母的菌浓度为4×106CFU，汉逊德巴利酵母的接种量为李子培养基质量的1％。
实施例6
一种发酵李子精提物的制备方法，将汉逊德巴利酵母、马克斯克鲁维酵母按照1：2.5的质量比接种至李子培养基进行发酵，发酵温度30℃，6d后，将得到的发酵物进行提取，在发酵物中加入浸提液，发酵物与浸提液的体积比为1：5，浸提4h，然后在11000rpm离心，取上清液得到发酵李子精提物；所述李子培养基为洗净破碎后形成的李子浆液；所述浸提液包括体积比为1：2的异戊醇、乙酸乙酯。
其中汉逊德巴利酵母的菌浓度为6×106CFU，马克斯克鲁维酵母的菌浓度为4×106CFU，汉逊德巴利酵母的接种量为李子培养基质量的1.8％。
对比例1
一种发酵李子精提物的制备方法，将汉逊德巴利酵母接种至李子培养基进行发酵，发酵温度28℃，6d后，将得到的发酵物进行提取，在发酵物中加入浸提液，发酵物与浸提液的体积比为1：4.5，浸提3h，然后在9000rpm离心，取上清液得到发酵李子精提物；所述浸提液包括体积比为1：2.4的异戊醇、乙酸乙酯。
其中汉逊德巴利酵母的菌浓度为5×106CFU，汉逊德巴利酵母的接种量为李子培养基质量的1.5％。
对比例2
一种发酵李子精提物的制备方法，将马克斯克鲁维酵母接种至李子培养基进行发酵，发酵温度28℃，6d后，将得到的发酵物进行提取，在发酵物中加入浸提液，发酵物与浸提液的体积比为1：4.5，浸提3h，然后在9000rpm离心，取上清液得到发酵李子精提物；所述浸提液包括体积比为1：2.4的异戊醇、乙酸乙酯。
其中马克斯克鲁维酵母的菌浓度为5×106CFU，马克斯克鲁维酵母的接种量为李子培养基质量的3.75％。
对比例3
一种发酵李子精提物的制备方法，将汉逊德巴利酵母、马克斯克鲁维酵母按照1：2.5的质量比接种至李子培养基进行发酵，发酵温度28℃，6d后，将得到的发酵物进行提取，在发酵物中加入浸提液，发酵物与浸提液的体积比为1：4.5，浸提3h，然后在9000rpm离心，取上清液得到发酵李子精提物；所述浸提液为异戊醇。
其中汉逊德巴利酵母的菌浓度为5×106CFU，马克斯克鲁维酵母的菌浓度为5×106CFU，汉逊德巴利酵母的接种量为李子培养基质量的1.5％。
对比例4
一种发酵李子精提物的制备方法，将汉逊德巴利酵母、马克斯克鲁维酵母按照1：2.5的质量比接种至李子培养基进行发酵，发酵温度28℃，6d后，将得到的发酵物进行提取，在发酵物中加入浸提液，发酵物与浸提液的体积比为1：4.5，浸提3h，然后在9000rpm离心，取上清液得到发酵李子精提物；所述浸提液为乙酸乙酯。
其中汉逊德巴利酵母的菌浓度为5×106CFU，马克斯克鲁维酵母的菌浓度为5×106CFU，汉逊德巴利酵母的接种量为李子培养基质量的1.5％。
对比例5
一种发酵李子精提物的制备方法，将汉逊德巴利酵母、马克斯克鲁维酵母按照1：2.5的质量比接种至李子培养基进行发酵，发酵温度28℃，6d后，将得到的发酵物进行提取，在发酵物中加入浸提液，发酵物与浸提液的体积比为1：4.5，浸提3h，然后在9000rpm离心，取上清液得到发酵李子精提物；所述浸提液为体积分数为50％的乙醇。
其中汉逊德巴利酵母的菌浓度为5×106CFU，马克斯克鲁维酵母的菌浓度为5×106CFU，汉逊德巴利酵母的接种量为李子培养基质量的1.5％。
应用试验
1、烟支感官质量评价
各称取100克生烟丝，按烟丝重量的0.1％，分别称取发酵李子精提物0.1克，用5倍质量的水稀释后，分两次均匀喷洒在生烟丝上，室温放置4小时，再在120℃条件下烘烤至烟丝含水量13％为止，然后按常规卷制成烟支，再按YC/T29-1996标准平衡烟支水份，请专业人员评吸，评价方法参照国标GB5606.4-2005，评吸结果见表2。
空白样：取100克生烟丝，0.5g水用喷雾器分两次均匀喷洒在生烟丝上，室温放置4小时，再在120℃条件下烘烤至烟丝含水量13％为止，然后按常规卷制成烟支，再按YC/T29-1996标准平衡烟支水份，请专业人员评吸，评价方法参照国标GB5606.4-2005，见表1。
表1卷烟感官质量评判标准
表2
由上表1可知，本发明中对比例1和对比例2李子精提物的制备方法中，未采用汉逊德巴利酵母和马克斯克鲁维酵母共同发酵李子浆液，因而对比例1和对比例42制得的李子精提物进而制备的烟支，在香气上的感官效果相比较于实施例1均有所下降，并且略有杂气，可见本发明中通过采用汉逊德巴利酵母和马克斯克鲁维酵母共同发酵李子浆液，使得制备的李子精提物用作烟支香料的感官效果更好；而由对比例3和对比例4、对比例5可知，未采用异戊醇、乙酸乙酯协同作为浸提液得到的李子精提物，制备得到的烟支香气也较实施例1淡薄粗糙，杂气较实施例1更重，可见，本发明中通过采用异戊醇、乙酸乙酯协同作为浸提液，浸提得到的李子精提物制备得到的烟支感官效果更好。
2、总酚含量的测定
运用福林-酚比色法测定各实施例和对比例发酵物中总酚含量，以及李子精提物中总酚含量。
没食子酸标准曲线制作
称取25mg没食子酸，加入适量去离子水充分溶解，定容至25ml，得到1mg/ml的没食子酸溶液。取5ml 1mg/ml的没食子酸溶液，用去离子水定容至50ml容量瓶中，即得0.1mg/ml的没食子酸溶液，然后配成0、20、40、60、80、100、150、200、300、400μg/ml的没食子酸标准液。取200μl标准液加入试管中，再依次加入800μl去离子水、200μl福林-酚试剂，振摇试管使样品充分混合，避光保存6min，再加入2ml 7％Na2CO3溶液和1.6ml去离子水，在避光条件下放置90min后，在760nm处测定吸光值，根据吸光值的大小与没食子酸浓度的大小成正相关的关系，制作没食子酸标准曲线，没食子酸标准曲线回归方程：Y＝0.0043x+0.0168，R2＝0.9983，根据该回归方程计算待检测样品中总酚含量。
各实施例和对比例样品含量测定：取200μl李子精提物，用去离子水补至1ml，后续操作同标准曲线的制备，结果以每克样品中所含的没食子酸当量表示，检测结果见表3。
结果计算：
式中：M为李子精提物样品中总酚的含量，mg/g；X为在没食子酸标准曲线中根据所测吸光值得出的李子精提物中总酚溶液的质量浓度，μg/ml；m为李子精提物样品的质量，g；V为李子精提物样品定容的体积，ml；A为吸光值；1000为样品稀释倍数。
3、霉情及霉菌数量的测定
将上述实施例和对比例制备的烟支储存在空调仓库中，仓库温度控制在25℃以下，相对湿度控制在65％以下，按照YC/T 475-2013烟草及烟草制品霉变控制指南的要求进行贮存及取样，贮存30天后，按照YC/T 472-2013烟草及烟草制品微生物学检验霉菌计数中的方法检验霉菌数量，结果见表3。
表3
由上表3，通过分析对比例3和对比例4可知，未采用异戊醇、乙酸乙酯协同作为浸提液得到的李子精提物总酚含量较实施例1减少，霉情较实施例1更重，霉菌数量增多，由对比例5可知，采用乙醇作为浸提液得到的李子精提物总酚含量较实施例1减少，霉情也较实施例1更重，可见，本发明中通过采用异戊醇、乙酸乙酯协同作为浸提液，可以提高李子精提物中总酚的提取率，进而使得李子精提物制备得到的烟支霉情得到改善。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
