可用于被动流感免疫的抗体
相关申请案
本申请案要求2011年12月5日提交的美国申请案第61/567,046号的权益，该案以tt全文引用的方式并入本文中。tt
技术领域tt
本发明涉及被动免疫以对抗流感的领域。更具体说来，描述结合于流感血球凝集素ttA的HA0成熟裂解位点共有序列附近的特异性抗体，包括由人类细胞分泌的抗体。tt
背景技术tt
流感病毒的血球凝集素蛋白(HA)具有在流感病毒株之间高度异质的球状头部结构tt域，和含有进入细胞中所需的融合位点的茎区。HA以三聚体形式存在于病毒包膜上。tt血球凝集素蛋白的未裂解形式(HA0)通过由胰蛋白酶裂解成HA1和HA2部分以允许融合tt位点影响毒性来活化。这两个裂解的部分保持使用二硫键偶合，但在低pH环境中经历tt宿主细胞内体小室的构象变化，导致病毒和宿主细胞膜的融合。tt
裂解位点含有A型流感和B型流感以及A型和B型流感的各种病毒株所共有的共tt有序列。未裂解的血球凝集素蛋白三聚体(HA0)是称为不活化形式，而当裂解成HA1和ttHA2部分时，血球凝集素蛋白是称为呈活化形式。tt
比安奇(Bianchi，E.)等人，病毒学杂志(J.Virol.)(2005)79：7380-7388描述基于这一裂tt解位点的共有序列的“通用”B型流感疫苗，其中包含这一位点的肽当结合于脑膜炎双tt球菌(Neisseria meningitidis)的外膜蛋白复合物时能够在小鼠中产生抗体。还描述了看来tt结合于所述共有序列的单克隆抗体。此外，在小鼠中观察到抗血清的成功被动转移。包tt含衍生自流感的M2和/或HA蛋白的肽的其它现有技术疫苗，诸如WO2004/080403中tt所述的那些，诱导具有微弱功效或在病毒株间无效的抗体。tt
所属领域中描述的结合HA茎区的抗体包括由库赛尔(Crucell)开发的那些，即在以tt下文献中描述的CR6261和CR8020：思罗斯比(Throsby，M.)等人，公共科学图书馆-综合tt(PLoS One)(2008)3：e3942；爱可尔特(Ekiert，D.C.)等人，科学(Science)(2011)tttttt333：843-850；和隋(Sui，J.)等人，自然结构和分子生物学(Nat.Struct.Mol.Biol.)(2009)tt16：265-273。也已经针对保守M2E抗原开发MAB，如格兰迪(Grandea，A.G.)等人，美国tt国家科学院院刊(PNAS USA)(2010)107：12658-12663所述。M2E在受感染细胞的表面上tt且也是金刚胺和金刚乙胺的靶标。针对这些抗生素已产生抗药性，暗示这一靶标并未满tt足基本功能。tt
额外抗体已经由兰泽瓦西亚小组(Lanzavecchia Group)描述：柯蒂(Corti，D.)等人，科tt学(Science)(2011)333：850-856，其结合并中和A型流感的第1组和第2组病毒株，但效tt力不如以下实例中所示的本文所述的那些抗体高。此外，如德莱弗斯(Dreyfus，C.)等人，tt科学(Science)(2012)337：1343-1348所述的针对A型和B型流感具有免疫反应性的MABtt具有比下文所述的那些抗体低的效力。tt
PCT申请公开案第WO2011/160083号以引用的方式并入本文中，描述源自人类细tt胞且适用于被动疫苗的单克隆抗体。所述抗体展示结合于流感病毒进化枝H1的高亲和tt力，所述进化枝在第1组中，且一些抗体还展示与也在第1组中的H9和/或与在第2组tt中的H7和/或在第1组中的H2的高亲和力。一些所揭示的抗体仅结合不活化三聚体形tt式，大概在共有裂解区域处，而其他抗体能够结合已经裂解的活化的血球凝集素蛋白。tt
仍需要结合额外进化枝且展示增强的与所述进化枝的亲和力的抗体。tt
发明内容tt
本发明提供以增强的亲和力结合代表A型流感的第1组和第2组中任一者或两者的tt三聚体的抗体。所述抗体能够在由例如先前未鉴别的流感病毒株或目前可获得的季节性tt疫苗无法赋予保护作用的病毒株引起的大范围流行事件中赋予被动免疫性。因为至少一tt些抗体结合多种病毒株，指示靶向基本位点，所以其可能结合先前甚至未遇到过的病毒tt株。所述抗体还可用于改善或预防疫苗接种无法产生完全保护反应或因弱免疫系统而处tt于高风险的个体(例如，非常年幼者、老年人、移植患者、经癌症或HIV化学疗法治疗tt的患者)的感染。tt
因此，在一个方面，本发明针对与作为模式标本的第1组(包括H1、H2、H5、H6、ttH8、H9、H11、H13、H16)或第2组(包括H3和H7)的A型流感病毒具有广泛交叉反应tt性或展示跨组反应性的结合部分，特别是单克隆抗体或其免疫反应性片段。一些下文说tt明的抗体特异性结合于HA0蛋白中所含的表位且识别HA的原生三聚体形式以及活化形tt式。tt
特别重要的是双特异性抗体和其片段，其能够放大可特异性结合的病毒进化枝的范tttttt围。tt
所属领域中应充分了解，基于非免疫球蛋白的蛋白质可具有与抗体类似的表位识别tt特性且也可提供合适的实施例，包括基于纤维连接蛋白、转铁蛋白或脂质运载蛋白的结tt合剂。基于核酸的部分，诸如适体也具有这些结合特性。tt
在其它方面，本发明针对使用本发明的结合部分来被动抑制已经暴露于病毒或已经tt受感染的个体的病毒感染的方法。本发明还针对重组物质和产生抗体或片段的方法。tt
附图说明tt
图1展示所属领域中已知的流感病毒的分类，分为有效进化枝的各组。tt
图2展示活体外MAB579结合于各种H7和H3病毒株的结果，这两种病毒株都表tt示第2组。tt
图3A和3B展示两种核心mAb，MAB53(第1组)和MAB579(第2组)，其对跨越tt各别组的进化枝具有亚nM亲和力。tt
图4A和4B对比MAB486和MAB579的中和活性。如图4A中所展示，MAB486tt以及来自兔免疫的多克隆制剂在胰蛋白酶不存在下有效地仅中和H1N1。相比之下，图tt4B展示MAB579在胰蛋白酶存在和不存在下都有效。tt
图5为包含MAB579和MAB53的可变区的双特异性抗体的图解。tt
图6A-6E展示MAB53、MAB579、其混合物和图5中展示的双特异性抗体的活体tt内功效。tt
具体实施方式tt
本发明提供可用结合部分，包括抗体和其片段，以及提供鉴别分泌所述抗体的细胞tt的有效方式，使得可获取并存储相关编码序列用于后续容易地进行所述抗体的重组产tt生。tt
本发明的抗体或类似结合部分适用于预防和治疗。因此，其可用于保护个体免受病tt毒攻击以及治疗已经暴露于流感或受到流感感染的个体。最密切关注的个体为人类个体tt且对于在人类个体中的使用，是传统天然抗体或其免疫反应性片段的结合部分的人类形tt式或人类化形式是优选的。然而，含有如当用于实验动物研究时由CDR区所指示的适tt当结合特征的抗体可保留非人类特征。用于以下实例的研究(尽管在小鼠中进行)中的抗tt体仍然含有人类可变区和恒定区二者。tt
除人类以外，可使用包括本发明抗体的结合部分进行治疗和预防的个体还包括易受tttttt流感感染的任何个体。因此，各种哺乳动物，诸如牛、猪、绵羊和其它哺乳动物个体(包tt括马和家庭宠物)将受益于这些结合部分的预防和治疗用途。此外，已知流感会感染鸟类tt物种，鸟类物种也将受益于含有本发明抗体的组合物。tt
用于预防和治疗的方法为常规方法且一般众所周知。抗体或其它结合部分通常通过tt注射提供，但口服疫苗也可认为有效。剂量水平和投药时间安排容易优化且在所属领域tt的技能范围内。tt
分泌适用抗体的人类细胞可尤其使用在美国专利7,413,868中描述的细胞斑点tt(CellSpot)TM方法来鉴别，这一专利的内容以引用的方式并入本文中。简而言之，所述方tt法能够在利用以微粒标记作标记和显微镜观察的高通量分析中筛选从人类(或其它)个体tt获得的个别细胞。在一个说明性实施例中，通过使所分泌的抗体吸附或偶合到表面上且tt接着用各自偶合到独特微粒标记的所需抗原处理所述表面，甚至可分析单一细胞所分泌tt的抗体。因此可借助于显微镜鉴别细胞印迹。使用这种技术，可针对所需抗体分泌筛选tt数百万个细胞，且甚至可回收罕见的抗体，诸如本文中在病毒株间进行被动流感免疫所tt需的那些抗体。由于人类个体具有针对至少一些流感病毒株的现有抗体，且由于通过本tt发明方法获得的抗体结合保守序列，因此这些抗体用于对新病毒株以及人类群体已经历tt的病毒株进行定址的目的。tt
获得合适抗体的方法不限于细胞斑点TM技术，它们也不限于人类个体。产生合适抗tt体的细胞可通过各种方式鉴别且所述细胞可为诸如小鼠或其它啮齿动物的实验动物的tt那些细胞。编码这些抗体的核酸序列可为分离的且产生多种形式的抗体，包括由非人类tt细胞产生的嵌合和人类化形式的抗体。此外，重组产生的抗体或片段包括单链抗体或其ttFab或Fab2区域。人类抗体也可使用诸如具有人类化免疫系统的的宿主获tt得。用于产生供针对合适结合特征进行筛选的抗体的方法为所属领域中众所周知的。tt
类似地，以所需结合模式构建适体的方法也为所属领域中已知的。tt
如上文所注，抗体或其它结合部分可结合血球凝集素蛋白的活化形式、不活化形式tt或两者。在一些情况下有利的是，表位处于这种蛋白质的裂解位点处，因为其在病毒株tt之间相对保守，但优选所述结合部分结合三聚体和活化形式两者。tt
A型流感和B型流感的各种病毒株的裂解位点为已知的。举例来说，上文所引用的tt比安奇(Bianchi)等人的文章在表1中展示数种所述病毒株的裂解位点周围的序列：tt
表1 A型和B型流感病毒成熟裂解位点的溶剂暴露区域的共有序列tt
aHA1与HA2之间的裂解位置由箭头指示。tt
b对于维多利亚(Victoria)和山形(Yamagata)谱系两者，共有序列是相同的。tt
如所指示，严格共有序列开始于裂解位点上游的精氨酸残基，且因此包括于本发明tt的测试肽中的优选共有序列具有序列RGI/L/F FGAIAGFLE(SEQ ID NO：57)。在测试肽tt中可使用这一序列的仅一部分。tt
如上文所注，一旦已经鉴别分泌所需抗体的细胞，就直接获取编码这些抗体的核苷tt酸序列且以大规模重组方式产生所需抗体。此举还能够实现抗体的操纵，使得其可例如tt作为单链抗体或仅其可变区产生。tt
可将获取的核酸物理存储且回收用于以后的重组产生，和/或可获取关于抗体的编码tt序列的序列信息并存储以允许后续合成适当的核酸。编码序列中所含信息的可利用性和tt快速合成和克隆技术以及已知的重组产生方法允许在大范围流行或其它紧急情况事件tt中快速产生所需要的抗体。tt
举例来说，重链和轻链两者的人类恒定区的序列已有描述且在本文中陈述为SEQ ID ttNO：1-3。在上文提及的WO2011/160083中，已回收多种以不同程度的亲和力与流感的tt多种病毒株的HA蛋白结合的单克隆抗体，其具有确定的氨基酸序列和核苷酸编码序列tt的可变区。本文中特别关注的那些抗体的可变区(轻链和重链两者)的结构在本文中为简tt便起见陈述为SEQ ID NO：22-25。这些抗体包括MAB8和MAB53。MAB53和MAB8以tt特定亲和力结合于H1；此外，MAB53紧密地结合于H5、H7和H9。MAB8也结合H7tt和H2。这些抗体中任一者都无法强烈地结合于H3，但MAB579确实结合本文所述的ttH3。H7和H3为尤其有吸引力的靶标。tt
更详细地说，这些MAB中的任一者都以合理的或高的亲和力结合于至少三种不同tt进化枝。MAB53结合于来自H1、H9和H7进化枝的HA0，且MAB8结合于来自H1、ttH7进化枝的HA0，且不太强烈地结合于H3，如由ELISA分析针对HA0蛋白所证实。tt亲和力在纳摩尔范围内。对来自所有第1组进化枝的HA的原生三聚体的反应性是使用tttttt在HEK293细胞中表达的HA利用通过流式细胞术测量的抗体结合来验证。tt
这些结果是使用替代的分析系统来证实的，所述系统为基于生物水平干涉测量的结tt合分析，称为福特生物生物传感器。如通过这种更准确的分析所测量，亲和tt力如F：tt
MAB53/H1＝60pM，H5＝6nM，H7＝70pM，H9＝30pM；tt
MAB8/H1＝9nM，H3＝16nM，H5＝0.2nM。tt
本申请案中所鉴别的额外特异性抗体MAB383、MAB486、MAB579、MAB699、ttMAB700、MAB708、MAB710、MAB711和MAB723根据其可变重链和轻链的氨基酸tt序列由SEQ ID NOS：4-21表示。这些抗体以增强的亲和力结合于流感病毒株的额外进化tt枝。举例来说，MAB579以高亲和力结合于H3和H7两者。因此，这些抗体加入可用tt于预防和治疗流感的抗体谱。tt
现有多种技术用于制造并有来自两种各别抗体的抗原特异性结构域的单一抗体样tt分子(双特异性抗体)。因此，具有非常广泛的病毒株反应性的单一抗体可使用分别对第tt1组和第2组具有广泛反应性的个别抗体的Fab结构域来构建。合适技术已经由宏观基tt因(Macrogenics)(罗克维尔(Rockville)，马里兰州(MD))、微麦特(Micromet)(贝塞斯达tt(Bethesda)，马里兰州(MD))和梅里麦克(Merrimac)(剑桥市(Cambridge)，玛莎诸塞州tt(MA))描述。(参见例如奥卡特(Orcutt KD)，阿克曼(Ackerman ME)，西埃里维兹tt(Cieslewicz M)，奎罗兹(Quiroz E)，史拉萨斯基(Slusarczyk AL)，弗兰焦尼(Frangioni JV)，tt维特如普(Wittrup KD).模块化IgG-scFv双特异性抗体拓扑学(A modular IgG-scFv ttbispecific antibody topology)，蛋白质工程设计与选择(Protein Eng Des Sel.)(2010)tt23：221-228；菲兹杰拉德(Fitzgerald J)，鲁格夫斯基(Lugovskoy A).靶向多种致癌基因途tt径的抗体治疗剂的合理工程改造(Rational engineering of antibody therapeutics targeting ttmultiple oncogene pathways).单克隆抗体(MAbs).(2011)1：3(3)；贝耶乐(Baeuerle PA)，tt莱因霍尔德(Reinhardt C).用于癌症疗法的双特异性T细胞结合抗体(Bispecific T-cell ttengaging antibodies for cancer therapy).癌症研究(Cancer Res.)(2009)69：4941-4944。)tt
因此，特别有用的是通过构建双特异性抗体来提供结合于多种类型的血球凝集素蛋tt白的抗体或其它结合部分。特别有用的组合是组合MAB53(H1，H5，H9)与MAB579(H3，ttH7)的结合特异性的那些。tt
所有的本发明抗体都包括上述新近揭示的抗体的至少一种结合特异性。这些抗体可tt与多种其它抗体组合，包括上文提及的WO2011/160083中所述的那些以及本文所揭示的tt抗体的新群组中的其它成员。所述结合特异性的所有可能组合都在本发明的范畴内。tt
虽然MAB53以高亲和力结合于HA0，但其不结合HA1，意味着其结合于互补的HA2片段，所述结合得到确认。由于通过蛋白质印迹法(Western blot)测试时MAB53不结合tt于HA0，因此假定优势表位至少部分是构象表位。已发现，MAB8和MAB53结合于相tt同或邻近的表位，可由其彼此竞争结合于H1进化枝的HA0蛋白的能力证实。tt
所有本文所揭示的抗体，包括上文提及的WO2011/160083中先前揭示的那些，都结tt合于在HA转染的细胞的表面上表达的原生HA三聚体。这使用由埃默里大学(Emory ttUniversity)的加洛韦(S.Galloway)和史坦霍尔(D.Steinhauer)提供的HA编码质粒来验证。tt也就是说，在由本发明的多种MAB识别的进化枝的细胞表面上呈现的三聚体是由这些ttMAB识别的。tt
经证实，MAB53与MAB8的不同之处在于，MAB8是在pH降低到6时从HA0蛋tt白释放，而MAB53不是。这种差异是重要的，因为其似乎预示中和能力。在针对中和ttH1N1病毒感染的能力的测试中，在噬斑减少分析中，在MDCK靶细胞中，1-5μg/mltt的低剂量的MAB53中和H1N1、H7N3、H5N1和H9N2的感染。然而，MAB8未中和tt这些病毒株的感染。因此，可通过以下优先选择中和病毒株：在初级筛选期间在pH6tt下洗涤结合的MAB或片段，由此从HA0移除在抗体-病毒复合物经由内体小室进入细胞tt中时不可能保持结合的MAB，且预期具有降低的中和病毒的能力。例如，在细胞斑点tt方法中，HA0可结合于固体载体(荧光珠粒)且由MAB或MAB的混合物捕获，随后在pHtt6下洗涤。tt
另外经证实，用分级剂量的MAB53预处理的小鼠可耐受原本致死效价的H1N1和ttH5N1病毒的攻击，其中存在100％的对抗H1N1攻击的保护。效力与库赛尔(Crucell)描tt述的现有技术抗体相当，所述现有技术抗体未展示对抗第2组病毒株的活性。思罗斯比tt(Throsby，M.)，(同上)3：e3942。库赛尔抗体是从人类IgM+记忆B细胞回收的对抗H5N1tt和H1N1具有交叉保护性的异源亚型中和单克隆抗体。MAB53在10mg/kg下也提供完tt全保护；在2mg/kg下存活90％且在0.4mg/kg下存活50％。当H5N1攻击取代H1N1tt攻击时，对于MAB53，10mg/kg达成80％存活；2mg/kg达成60％存活且0.4mg/kg达tt成50％存活。tt
MAB53和在相同条件下结合于相同表位的抗体(即在pH降低到6时保持结合)可有tt效地作为被动疫苗，适于保护群体对抗流行和大范围流行，以及预防性或治疗性地用于tt为具有减弱的免疫系统的患者对抗季节性流感。MAB53的表位结合区与本发明抗体的tt高亲和力结合表位的组合尤其可用于构建双特异性抗体。这清楚地允许例如当抗体中包tt括MAB579结合区时，H7、H3和H1同一抗体中的有效结合。这展示于表2中，表2tttttt提供由MAB579展示的对流感血球凝集素蛋白的多种病毒株的IC50。tt
表2 MAB579对多种流感病毒株的IC50值tt
这些值是在MDCK单层微量中和分析中获得的。MAB579对多种病毒株的亲和力tt的图示也展示于图2中。如所展示，虽然H3和H7紧密地结合，但关于H1发现可忽略tt的结合亲和力。因此，尤其有利的是组合MAB579的结合区与高度结合于H1的MABtt的结合区。在这种情况下，因此，表示第1组和第2组两者。本发明的一个实施例包括tt结合由MAB53结合的表位和由MAB579结合的表位两者的双特异性抗体。tt
除双特异性抗体本身以外，本发明还涵盖在用于中和病毒感染的构建体中仅使用重tt链；所述抗体也可以是双特异性的。所属领域中应了解，特异性主要由重链可变区赋予，tt且在一些情况下，单独的重链已经成功作为疫苗中的活性成分。或者，适当特异性的重tt链可与多种形式的轻链缔合以增强亲和力或中和病毒的能力。tt
尤其应注意，本文所述抗体的重链的CDR3区经扩展且含有多个酪氨酸残基。应了tt解，所述酪氨酸残基可经磺化，作为翻译后事件。因此，包含MAB579、MAB699、MAB700、ttMAB708、MAB710、MAB711或MAB723的重链的CDR3区的疫苗也是本发明的一部tt分，其中所述区中的一或多个酪氨酸残基任选地经磺化。经磺化或未经磺化的这些区也tt可单独用作被动疫苗。CDR3区的磺化符合如莫尼咖迪(Monigatti，F.)等人所著《生物信tttttt息学(Bioinformatics)》(2002)18：769-770所述的磺化准则。其中重链的CDR3区已经成tt功地单独用于中和病毒感染的其它情况描述于佩哈尔(Pejchal，R.)等人《美国国家科学院tt院刊(PNAS)》(2010)107：11483-11488和刘(Liu，L.)等人《病毒学杂志(J.Virol.)》(2011)tt85：8467-8476中。tt
即使有时过多地提到“片段”，但如本文所用的术语“抗体”包括传统抗体的免疫tt反应性片段。因此，抗体包括Fab片段、实质上仅含有可变区的Fv单链抗体、双特异性tt抗体和其仍保持免疫特异性的多种片段化形式，以及通过包含接近更多种传统天然抗体tt的可变区活性的氨基酸序列或经修饰氨基酸序列(即，伪肽)来模拟“天然”抗体活性的tt一般蛋白质。tt
抗体结构
这些结构按以下顺序呈现：tt
1.人类IgG1重链恒定区、人类恒定区κ和人类恒定区λ的氨基酸序列；tt
2.MAB383、486、579、699、700、708、710、711和723的重链和轻链可变区的tt重链和轻链氨基酸序列(MAB579、699、700、708、710、711和723中的CDR区加下tt划线。)；tt
3.描述于WO2011/160083中的MAB8和MAB53的重链和轻链可变区氨基酸序列tt(′083中展示的LC序列也含有恒定区且其已经删除。)；tt
4.编码人类IgG1重链恒定区、人类恒定区κ和人类恒定区λ的核苷酸序列；tt
5.编码MAB383、486、579、699、700，708、710、711和723的重链和轻链可变tt区的重链和轻链氨基酸序列的核苷酸序列；tt
6.编码MAB8和MAB53的重链和轻链可变区氨基酸序列的核苷酸序列。tt
关于所指示的CDR区，应注意存在一种以上用于鉴别CDR的系统。最经常使用最tt初在吴(Wu，T.T.)等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.)(1970)132：211-250中陈述的卡百特tt(Kabat)系统。卡百特是广泛采用的系统，其鉴别与CDR有关的特异性位置。额外系统tt柯西亚(Chothia)编号方案提供略微不同的结果。其描述于Al-拉兹卡尼(Al-Lazikani，B.)tt等人，分子生物学杂志(J.Molec.Biol.)(1997)273：927-948中。视使用何种系统而定，关tt于CDR指示略微不同的结果。举例来说，在MAB53中，根据卡百特的重链CDR为ttKYAIN，而柯西亚系统指定GGIIRKYAIN。重链CDR2区在N端具有额外G，且CDR3tt在N端具有额外AR。对于轻链，这两种系统中的CDR指定是相同的。tt
多名工作者已经针对这两种系统提出批评意见；因此，应理解如本文和权利要求书tt中所指定的CDR区可能略微不同。只要所得可变区保持其结合能力，CDR区的准确位tttttt置就不重要，且权利要求书中指定的那些区域应被视为包括由任何认可的系统所鉴别的ttCDR。tt
人类IgG1HC恒定区氨基酸序列(SEQ ID NO：1)
ASTKGPSVFPLVPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLttQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAttPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKttTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREttPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGttSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKtt
人类LC恒定区κ氨基酸序列(SEQ ID NO：2)
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTttEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECtt
人类LC恒定区λ氨基酸序列(SEQ ID NO：3)
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTttPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVVPAECStt
MAB383HC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：4)
QVQLVQSGAEVKRPGASVKVSCRASGYTFTSFGFSWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGDttTKSPQKLQGRVTMTTDTSTNTAYMELRSLISDDTAVYYCARAPPLYYSSWSSDYWGQttGTLLTVSStt
MAB383LC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：5)
DIQMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKHGQAPRPLIYGASRRATttDVPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPRTFGQGTKLEIKtt
MAB486HC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：6)
QVQLVESGGGMVQPGGSRRLSCAASGFSFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGEKttQYYLDSVKGRFTISRDNSKDTLYLQMNSLTAEDTAVYYCVKESARRLLRYFEWLLSSttPFDNWGQGALVTVSStt
MAB486LC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：7)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQTVLYTSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWAttSTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYTSPYTFGQGTKLEIKtt
MAB579HC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：8)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFTAYTIHWVRQAPGQRLEWMGWINAGNGHTKYSQRFKGRVTITRDTSARTTYMELRSLTSEDTALYFCARGPETYYYDKTNWLNSHPDEYFQHWGHGTQVTVSStt
MAB579LC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：9)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQTINNYLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGttVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQEYNNDSPLTFGGGTKVEIKtt
MAB699HC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：10)
QLQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYTFTSYTLHWVRQAPGQTLEWMGWINAGNGKTKYPPKFRGRVTITRDTSATTVDMHLSSLTSEDTAVYFCARGPESYYYDRSDWLNSHPDEYFQYWGQGTLVIVSStt
MAB699LC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：11)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTIACRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASQLESGttVPSRFSGSGSGTEFTLTINSLQPDDFATYYCQLYNVYSPLTFGGGTRVDIKtt
MAB700HC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：12)
QVQLVESGADVKKPGASVTVSCKASGYTFRSFTMHWVRQVPGQRLEWMGWINAGNGKTKYSQKFQGRVIVTRDTSASTAYMELSSLTSEDTAVYYCARGPETYYYDSSNWLNSHPDEYLQYWGQGTPVTVSStt
MAB700LC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：13)
DIVLTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASTLESGttVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQEYNNNSPLTFGGGTKVEIKtt
MAB708HC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：14)
QVQLVQSGADVKRPGASVTVSCKASGYTFRSFTMHWVRQVPGQRLEWMGWINAGNGKTKYSQKFQGRVIVTRDTSANTAYMELSSLTSEDTAVYYCARGPETYYYDSSNWLNSHPDEYFQHWGQGTPVTVSStt
MAB708LC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：15)
DIQMTQSPSTLPASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGttVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQEYNNNSPLTFGGGTKVEIKtt
MAB710HC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：16)
QVQLQESGAEVKKPGASVQVSCKASGYTFTSYSVHWVRQAPGQRPEWMGWINAGNGKTKYPQKFKGRVTITRDTLARTVNIHLSSLTSEDTAVYFCARGPDSYYYDRNDWLNSHPDEYFQHWGQGTVVIVSStt
MAB710LC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：17)
DIVMTQSPSTLSASVGDRVTISCRASQSIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASNLESGttVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQLYNVHLITFGGGTRVDIKtt
MAB711HC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：18)
QVQLVESGAEVKKPGASVKITCEASGYTFNTYTIHWLRQAPGQRLEWMGWINAANGHTKYSRKLRSRVTIKRDTSARTSYMELSSLGSEDTAVYYCARGPETYYFDKTNWLNSHPDEYFQHWGQGTLVTVSStt
MAB711LC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：19)
DIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISTWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASNLESGttVPARFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQEYNNDSPLILGGGTTVEIKtt
MAB723HC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：20)
QVQLVQSGAAVNKPGASVKVSCKASGYSFTSYTLHWVRQAPGQRPEWIGWINAGNGKVKYPRKLQGRITITRDVSATTVHMELRSLTSEDTGLYYCARGPESYFFDTSNHLNSHPDEYFQFWGQGTLVTVSStt
MAB723LC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：21)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYKASNLESGttVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQEYNNNSPLTFGAGTKVEIKtt
MAB8HC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：22)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSTYTMSWVRQAPGQGLEWVSSITRTSSNttIYYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMHSLRVEDTAVYYCARISGVVGPVPFDYWGQGttTLITVSStt
MAB8LC氨基酸序列(SEQ ID NO：23)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTISKYLNWYQQKPGRAPKLLIYSASSLQSGttVPSRFTGSGSGTDFTLTITSLQPEDFATYYCQQSYRPSQITFGPGTKVDIKtt
MAB53HC可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：24)
QVQLVQSGAEVRKPGSSVKVSCKVSGGIIRKYAINWVRQAPGQGLEWMGGIIAIFNTttANYAQKFQGRVTITADESTSTVYMELSSLRSEDTALYYCARGMNYYSDYFDYWGQGSttLVTVSPtt
MAB53LC氨基酸序列(SEQ ID NO：25)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSNNLAWYQHKPGQAPRLLIFGASSRATttGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPALTFGGGTKVEIKtt
人类IgG1HC恒定区核苷酸序列(内含子加下划线)(SEQ ID NO：26)
GCCTCCACCAAGGGCCCATCAGTCTTCCCCCTGGCACCCTCTACCAAGAGCACCTCTttGGGGGCACAACGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGttGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTAttCAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGttGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACttAAGAGAGTTGGTGAGAGGCCAGCACAGGGAGGGAGGGTGTCTGCTGGAAGCCAGGCTCAGCGCTCCTGCCTGGACGCATCCCGGCTATGCAGTCCCAGTCCAGGGCAGCAAGGCAGGCCCCGTCTGCCTCTTCACCCGGAGGCCTCTGCCCGCCCCACTCATGCTCAGGGAGAGGGTCTTCTGGCTTTTTCCCCAGGCTCTGGGCAGGCACAGGCTAGGTGCCCCTAACCCAGGCCCTGCACACAAAGGGGCAGGTGCTGGGCTCAGACCTGCCAAGAGCCATATCCGGGAGGACCCTGCCCCTGACCTAAGCCCACCCCAAAGGCCAAACTCTCCACTCCCTCAGCTCGGACACCTTCTCTCCTCCCAGATTCCAGTAACTCCCAATCTTCTCTCTGCAGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGGTAAGCCAGCCCAGGCCTCGCCCTCCAGCTCAAGGCGGGACAGGTGCCCTAGAGTAGCCTGCATCCAGGGACAGGCCCCAGCCGGGTGCTGACACGTCCACCTCCATCTCTTCCTCAGCACCTGttAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCAttTGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCttCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAttAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCttTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCttTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGTGGGACCCGTGGGGTGCttGAGGGCCACATGGACAGAGGCCGGCTCGGCCCACCCTCTGCCCTGAGAGTGACCGCTGTACCAACCTCTGTCCCTACAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCttCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCttTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACttTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGttCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGttCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAAttTGAtt
人类LC恒定区κ核苷酸序列(SEQ ID NO：27)
CGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAAttTCTGGAACTGCTAGCGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAttGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAttGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAttGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCttTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAGtt
人类LC恒定区λ核苷酸序列(SEQ ID NO：28)
GGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCTAGCGAGGAGCTTttCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGttACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACAttCCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTttGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCttGTGGAGAAGACAGTGGTCCCTGCAGAATGCTCTtt
MAB383HC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：29)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAGGCCTGGGGCCTCAGTGAAGttGTCTCCTGCAGGGCTTCTGGTTACACCTTTACTAGCTTCGGTTTCAGCTGGGTGCGAttCAGGCCCCAGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGGTGGATCAGCGCTTACAATGGTGACttACAAAGTCTCCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACTACAGACACATCCACGttAACACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTCATATCTGACGACACGGCCGTGTATTATttTGTGCGAGAGCCCCCCCCCTGTATTACAGTAGCTGGTCCTCAGACTACTGGGGCCAGttGGAACCCTGCTCACCGTCTCCTCAtt
MAB383LC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：30)
GATATCCAGATGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCttACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTCAGTAGCAACTACTTAGCCTGGTACCAGttCAGAAACATGGCCAGGCTCCCAGGCCCCTCATCTACGGTGCATCCAGAAGGGCCACTttGACGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCttAGCAGACTGGAACCTGAAGATTTTGCAGTGTATTATTGTCAGCAGTATGGTAGTTCAttCCTCGAACTTTTGGCCAGGGGACCAAACTGGAAATCAAACtt
MAB486HC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：31)
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCATGGTCCAGCCGGGGGGGTCCCGGAGAttCTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGCTTCAGTACCTATGGCATGCACTGGGTCCGCttCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATTTCATATGATGGAGAAAAGttCAATATTATCTAGACTCCGTGAAGGGACGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGttGACACCCTCTATCTGCAAATGAACAGTCTGACAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACttTGTGTGAAGGAATCAGCGCGTCGATTATTACGATATTTTGAGTGGTTATTAAGTTCGttCCTTTTGACAACTGGGGCCAGGGAGCCCTAGTCACCGTCTCCTCAtt
MAB486LC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：32)
GATATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTTTGGGCGAGAGGGCCttACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGACTGTTTTATACACCTCCAACAAGAAAAATTACttTTAGCCTGGTACCAACAGAAGCCAGGGCAGCCTCCTAAACTGCTCATTTACTGGGCAttTCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATttTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAGGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGttCAATATTATACGTCTCCCTACACATTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAAtt
MAB579HC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：33)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGttGTTTCCTGCAAGACTTCTGGATACACCTTCACAGCCTATACTATACACTGGGTGCGCttCAGGCCCCCGGACAAAGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACGCTGGCAATGGTCACttACGAAATATTCACAGAGGTTCAAGGGCAGAGTCACCATTACCAGGGACACATCCGCGttAGGACAACCTACATGGAGCTGCGCAGTCTGACATCTGAGGACACGGCTCTATATTTCttTGTGCGAGAGGGCCCGAGACATATTATTATGATAAAACCAATTGGCTGAACTCCCATttCCAGATGAATACTTCCAGCACTGGGGCCACGGCACCCAGGTCACCGTCTCCTCAtt
MAB579LC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：34)
GATATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCttACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGACTATTAATAACTACTTGGCCTGGTATCAGCAGttAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGGttGTCCCATCAAGATTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCttAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAAGAATATAATAATGATTCTttCCCCTAACTTTCGGCGGAGGGACCAAAGTGGAGATCAAAtt
MAB699HC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：35)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGttCTTTCCTGCAAGGCTTCTGGGTACACCTTCACTTCCTATACTCTACATTGGGTGCGCttCAGGCCCCCGGACAGACACTTGAGTGGATGGGATGGATCAACGCTGGCAACGGTAAAttACAAAATATCCACCGAAGTTCAGGGGCAGAGTCACCATTACCAGGGACACGTCCGCGttACCACAGTCGACATGCATCTAAGCAGCCTGACATCTGAAGACACGGCTGTGTATTTCttTGTGCGAGAGGGCCCGAAAGTTATTACTATGATAGAAGTGATTGGCTGAACTCCCATttCCAGATGAATACTTCCAGTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCATCGTCTCCTCAtt
MAB699LC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：36)
GATATCGTGCTGACGCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGGGACAGAGTCttACCATCGCTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGttAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACAAGGCGTCTCAGTTAGAAAGTGGGttGTCCCATCAAGATTCAGCGGCAGCGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAACttAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACTTTATAATGTTTATTCTttCCGCTCACTTTCGGCGGGGGGACCAGGGTGGACATCAAAtt
MAB700HC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：37)
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGCTGACGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGACGttGTTTCCTGCAAGGCCTCAGGATACACCTTCAGGAGTTTTACTATGCATTGGGTGCGCttCAGGTCCCCGGACAAAGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACGCTGGCAATGGTAAAttACAAAGTATTCTCAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCATCGTTACCAGGGACACATCCGCGttAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTAACATCTGAAGACACGGCTGTTTATTACttTGTGCGAGAGGGCCCGAAACATATTACTATGATAGTAGTAATTGGCTGAATTCCCATttCCAGATGAATATCTCCAGTACTGGGGCCAGGGCACCCCGGTCACCGTCTCCTCAtt
MAB700LC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：38)
GATATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCGTCTGTAGGAGACAGAGTCttACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGttAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATAAGGCGTCTACTTTAGAAAGTGGGttGTCCCATCCAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCttAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAAGAGTATAATAATAATTCTttCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAAtt
MAB708HC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：39)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGACGTGAAGAGGCCTGGGGCCTCAGTGACGttGTTTCCTGCAAGGCTTCAGGATACACCTTCAGGAGCTTTACTATGCATTGGGTGCGCttCAGGTCCCCGGACAAAGGCTGGAGTGGATGGGATGGATCAACGCTGGCAATGGTAAAttACAAAATATTCCCAGAAGTTTCAGGGCAGAGTCATCGTTACCAGGGACACATCCGCGttAACACGGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGACATCTGAAGACACGGCTGTTTATTACttTGTGCGAGAGGGCCCGAAACATATTATTATGATAGTAGTAATTGGCTGAACTCCCATttCCAGATGAATATTTCCAGCACTGGtt
MAB708LC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：40)
GATATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGCCTGCGTCTGTAGGAGACAGAGTCttACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGttAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTTCTGATCTATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGGttGTCCCATCCAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCttAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAGGAGTATAATAATAATTCTttCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAAtt
MAB710HC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：41)
CAAGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGCAGttGTTTCCTGCAAGGCTTCTGGGTACACCTTCACGTCCTATAGCGTACATTGGGTGCGCttCAGGCCCCCGGACAAAGGCCTGAGTGGATGGGATGGATCAACGCTGGCAACGGAAAGttACAAAATATCCACAGAAGTTCAAGGGCAGAGTCACCATAACCAGAGACACATTAGCGttCGCACTGTCAACATACATCTAAGCAGCCTGACATCCGAAGACACGGCTGTGTATTTCttTGTGCGAGAGGGCCCGATAGTTATTACTATGATAGAAATGATTGGCTGAACTCCCATttCCAGATGAATACTTCCAGCACTGGGGCCAGGGCACCGTGGTCATCGTCTCCTCAtt
MAB710LC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：42)
GATATCGTGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCttACCATCTCTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTGACAGTTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGttAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATAAGGCGTCTAATTTAGAAAGTGGGttGTCCCATCAAGATTCAGCGGCAGCGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCttAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCGACTTATTACTGCCAACTCTATAATGTTCATTTGttATCACTTTCGGCGGAGGGACCAGGGTGGACATCAAAtt
MAB711HC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：43)
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGttATCACCTGCGAGGCTTCTGGATACACTTTCAATACCTATACTATACATTGGCTGCGCttCAGGCCCCCGGACAAAGACTTGAGTGGATGGGGTGGATCAACGCTGCCAATGGTCATttACAAAATATTCACGGAAGCTCAGGTCCAGAGTCACCATTAAGAGGGACACATCCGCGttAGGACAAGTTACATGGAGCTGAGCAGCCTGGGATCTGAAGACACGGCTGTCTATTACttTGTGCGAGAGGGCCCGAAACATATTACTTTGATAAGACGAATTGGCTGAACTCCCATttCCAGATGAATACTTCCAGCACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAtt
MAB711LC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：44)
GATATCGTGATGACGCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCttACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTTCTACCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGttAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCGTCCAATTTAGAAAGTGGGttGTCCCAGCAAGATTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCttAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAAGAATATAATAATGATTCTttCCGCTGATTTTAGGCGGAGGGACCACGGTGGAGATCAAAtt
MAB723HC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：45)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGCGGTGAACAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGttGTTTCCTGCAAGGCTTCTGGATACAGCTTCACTAGTTACACTTTGCATTGGGTGCGCttCAGGCCCCCGGACAAAGGCCTGAGTGGATAGGGTGGATCAACGCTGGCAATGGTAAAttGTAAAATATCCACGGAAGTTGCAGGGCAGAATCACCATAACCAGGGACGTATCCGCTttACGACAGTTCACATGGAACTGAGGAGCCTGACATCTGAGGACACGGGTCTATATTACttTGTGCGAGAGGGCCCGAAAGTTACTTCTTTGATACTTCTAATCATCTGAACTCCCATttCCAGATGAATACTTCCAGTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAtt
MAB723LC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：46)
GATATCGTGCTGACGCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCttACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGTTACTTGGCCTGGTATCAACAGttAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATAAGGCGTCTAATTTAGAAAGTGGGttGTCCCATCAAGATTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCttAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTATTGCCAAGAATATAATAATAACTCTttCCGCTCACTTTCGGCGCAGGGACCAAGGTGGAGATCAAAtt
MAB8HC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：47)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGAttCTCTCCTGTGCAGCCTCTGGTTTCACTTTCAGTACCTATACTATGAGTTGGGTCCGCttCAGGCTCCAGGGCAGGGGCTAGAGTGGGTCTCGTCCATTACTAGGACTAGTAGTAATttATATACTACGCAGACTCAGTGGAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGttAACTCACTGTATCTGCAGATGCATAGCCTGAGAGTCGAAGACACGGCTGTGTATTACttTGTGCGAGAATCAGCGGGGTAGTGGGACCTGTCCCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAttACCCTGATCACCGTCTCCTCTtt
MAB8LC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：48)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCttACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGACCATTAGCAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGttAAGCCAGGGAGAGCCCCTAAACTCCTGATCTACTCTGCGTCCAGTTTGCAAAGTGGGttGTCCCATCAAGGTTCACTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCACCttAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGACCCTCCttCAGATCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAAtt
MAB53HC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：49)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAGGAAGCCGGGGTCCTCGGTGAAGttGTCTCCTGCAAGGTTTCTGGAGGCATCATTAGGAAATATGCTATCAACTGGGTGCGAttCAGGCCCCCGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCGCTATCTTTAATACAttGCAAACTATGCACAGAAATTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAGTCCACGttAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAAGACACGGCCCTTTATTACttTGTGCGAGAGGAATGAATTACTACAGTGACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAAGCttCTTGTCACCGTCTCCCCAtt
MAB53LC可变结构域核苷酸序列(SEQ ID NO：50)
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCttACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGAAGCAACAACTTAGCCTGGTACCAGttCACAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTTTGGTGCATCCAGCAGGGCCACTttGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCttAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTATATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCAttCCTGCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAAtt
提供以下实例来说明但不限制本发明。tt
实例1
MAB53和MAB579的亲和力
上文引用的PCT公开案中报告MAB53的亲和力。这种抗体强烈地结合来自进化枝ttH5、H7、H1和H9的HA，以较少亲和力结合H2和H3。MAB579关于H7和H3以高tt亲和力结合HA。图3A和3B展示使用标准福特生物TM分析关于各抗体的典型结果。tt
实例2
由MAB486和MAB579中和感染
在MDCK细胞单层中，在胰蛋白酶存在或不存在下，在初始感染期中，针对H1N1tt和H3N2(A/珀斯/16/2009)感染和噬斑形成的抑制来测试MAB486和579。MAB486和ttpAb xCP(针对裂解位点共有序列产生的兔多克隆抗体)仅在胰蛋白酶不存在下中和ttH1N1(A/加利福尼亚/04/2009)，如图4A中所展示，且如果病毒首先用胰蛋白酶活化，tt则不能抑制感染和噬斑形成。这展示，针对具有依赖于完整融合肽(即，蛋白酶易影响)tt的表位的融合区的抗体无法有效控制病毒感染。如图4B所展示，MAB579在胰蛋白酶tt存在和不存在下都抑制感染。tt
MAB53中和感染的能力先前已有报告，但关于活体外中和的亲和力和EC50的比较tt与下表3中库赛尔单克隆抗体CR6261的那些相比较。tt
表3 特雷利斯(Trellis)mAb对从库赛尔专利克隆的mAb的活体外效力tt
如上文所述获得EC50值。tt
实例3测定表位
使用肽扫描(Pepscan)CLIPSTM技术来定位MAB53和MAB579的结合位点。关于H1tt和H3合成约6,000种独特的肽，其具有不同长度且具有不同长度的连接物来限制各肽tt的末端以便模拟原生结构。MAB53和MAB579结合于茎区是通过对球状头部或茎部使tt用兔血清作为竞争物且通过直接结合于来自茎区的肽来确认的。如上文所注，MAB486tt结合第1组和第2组两者，但仅在HA0蛋白酶裂解为二硫键联的HA1和HA2之前的预tt活化状态下结合。推断出，用于跨进化枝结合的表位是跨越原生三聚体HA0的两种单体tt的不连续表位。tt
实例4
活体外效力(MAB53)和药物动力学(MAB53和MAB579)
这些实验中所用的病毒株是：tt
H1N1：A/加利福尼亚州/04/09；tt
H5N1：A/越南(Vietnam)/1203/04/HPAI；tt
H3N2：A/珀斯(Perth)/16/09；tt
H7N3：A/红腹滨鹬(Red Knot)/NJ/1523470/06。tt
为测试预防作用，在第-1天向小鼠提供10mg/kg的单一腹膜内剂量的MAB53，接tt着在第0天经鼻内递送LD50的10倍的病毒剂量。测定MAB53的效力，展现0.4mg/kgtt的EC50，如与库赛尔抗体CR6261相比较，所述库赛尔抗体据报告展现1-1.5mg/kg的ttEC50(寇兹达尔(Koudstaal，W.)等人，传染病杂志(J.Infect.Dis.)(2009)200：1870-1873)。tt
为测试治疗有效性，对于大多数病毒株在第+3天或对于H7N3在第+1天，给予10ttmg/kg的单一腹膜内剂量的MAB。MAB53关于H1N1和H5N1完全有效，而基本上所tt有对照小鼠都在第10天死亡。MAB579针对H3N2和H7N3基本上完全有效，而实际上tt所有对照小鼠都在第10天之前死亡。tt
还测量重量损失且下降情况低于经处理小鼠中的20％。tt
与用达菲(磷酸奥司他韦(oseltamivir phosphate))处理相比较，小鼠(每组tt10只)经麻醉且用病毒(H1N1A型流感/Ca/04/09)LD50剂量的10倍经鼻内感染。在感染tt后第+1天腹膜内给予MAB53(或对照同型匹配的人类IgG)。在感染后第+1天开始，达tt通过经口强饲每天给予两次，持续4天。与MAB53群组相比，达群组的死亡率tt和发病率(通过重量损失来分析)都严重得多。tt
对于对照组，所有小鼠都在感染后第8天死亡。对于用达处理的那些，除了两tt只小鼠以外的所有小鼠都在感染后第8天之前死亡；这两只小鼠至少存活到第14天。tt在用MAB53处理的组中，十只小鼠中的八只存活超过第8天到第14天。tt
关于重量损失，对照组的重量在8天之后下降到其初始重量的70％。对于用MAB53tt处理的小鼠，重量下降在第4天逆转，且到第14天超过初始重量。在用达处理的小tt鼠中，重量损失在第6天逆转，但在第14天仅获得初始重量的92％。tt
还在小鼠中检查MAB53和MAB579的药物动力学。这些结果展示，小鼠中的半衰tt期为约7-14天，对应于人类中3-4周的半衰期。这对应于IgG1κMAB所特有的结果。tt双特异性抗体MAB579/53Bi(参见实例5)展示类似半衰期。tt
实例5
构建MAB579/53Bi
MAB579/53Bi的构建提供偶合于MAB579恒定区的MAB53scFv部分，如图5中所tt展示。所述双特异性抗体的构建在所属领域中为众所周知的(马文(Marvin，J.S.)，中国药tt理学报(Acta Pharmacologica Sinica)(2005)26：649-658)。因此，MAB579/53Bi提供在所tt述分子的两端连同完整Fc区的二价结合。表4展示，所述双特异性抗体保持独立抗体tt的亲和力，如由福特生物TM以nM所测量。所述双特异性抗体进一步保持构成所述抗体tt的个别抗体的中和能力，且针对H1N1具有3.5μg/ml的EC50；针对H5N1具有6.0μg/mltttttt的EC50，且针对H3N2具有2.2μg/ml的EC50。tt
表4 由福特生物TM测量的亲和力(nM)tt
实例6
MAB579/53Bi的活体内效力
如实例4中一般所述来测量活体内功效，结果如图6A-6E中所展示。tt
如图6A和6C中所展示，小鼠在第0天感染A/Ca/04/09(H1N1)(表示流感第1组)，tt且在第2天通过腹膜内注射单独10mg/ml MAB53、单独10mg/ml MAB579或MAB53tt和MAB579的混合物(图6A)或所述双特异性抗体(图6C)来处理，(图6C还展示重量损tt失曲线)。对照组接受20mg/kg的IgG。MAB的混合物各以10mg/kg投与且所述双特异tt性抗体以10mg/kg投与。如图6A中所展示，MAB53和MAB579的混合物以及单独ttMAB53具有保护性，而MAB579和对照组导致在10天后无存活者。如图6C中所展示，tt所述双特异性抗体与所述混合物同样有效。tt
在针对感染第2组代表性菲律宾(Philippines)2/82(H2N3)的小鼠的类似方案中获得tt类似结果，如图6B和6D中所展示。(图6D还展示重量损失曲线。)如图6B中所展示，tt所述混合物对抗这种病毒有效，与MAB579一样，但单独MAB53和对照组导致10天tt后死亡。在图6D中，证实所述双特异性抗体与所述混合物同样有效。tt
图6E展示使用类似方案的感染的处理结果，在所述方案中，用第1组和第2组代tt表H1N1和H2N3进行攻击，这两种病毒感染同一只小鼠。MAB579和MAB53各为3ttmg/kg的组合具有完全保护性且各为1mg/kg的组合保护80％的小鼠。这是显著的，因tt为实际上发生共感染，导致组合病毒，其可能引起大范围流行。tt
