一种生物发酵的抑菌剂、其制备方法及应用
技术领域
本发明属于抑菌剂领域，具体涉及一种生物发酵的抑菌剂、其制备方法及应用。
背景技术
自然界的微生物数量巨大，分类广泛，有些微生物与植物具有共生作用，对植物的生长具有有益的微生物为有益菌，例如固氮菌、解磷细菌、解钾细菌等，有的微生物则对植物的生长是有害的，为有害微生物，例如各种病菌。有害菌会对农作物的生长产生不利的影响，一是容易导致病变部位有腐烂、斑点、枯萎、溃疡等现象，二是作物在遭受有害菌后期，病变部位有菌脓溢出，导致危害扩大。细菌病害症状主要有：腐烂，由于细菌分泌的果胶酶的分解作用而使受害植物的根、茎、块根、块茎、果实、穗等肥厚多汁器官的细胞解离、组织崩溃腐烂，如白菜软腐病。坏死，主要发生在叶片和茎杆上,出现各种不同的斑点或枯焦，前者如棉花角斑病,后者如水稻白叶枯病。萎蔫，因细菌寄生在维管束内堵塞导管或因细菌毒素而引起，如青枯病。肿瘤，由于细菌刺激，使寄主细胞增生、组织膨大而形成，如癌肿病。黄化矮缩，在木质部寄生的细菌使植株表现黄化、萎缩，如葡萄皮尔氏病、杏叶焦病、苜蓿矮化病、甘蔗矮化病和桃幼果病等。
为了抑制有害微生物对农作物的危害，农用的抑菌剂应运而生，但是现有技术中针对农作物病虫害以及微生物危害的现象通常采用喷洒农药的方式进行缓解，但是现有技术中的农药通常为化学合成的农药，一方面病虫及微生物会对化学合成的农药产生抗药性，因此导致农药的失效，另一方面化学合成的农药通常不易分解，会在农作物或者土壤中残留，危害人体抑或是环境。
发明内容
为了解决以上的技术问题，本发明提供一种以纯天然的材料为原料，经过多次发酵的方法得到对有害菌具有有效抑制作用的安全无毒的抑菌剂。
本发明的目的是提供一种生物发酵的抑菌剂。
本发明的另一目的是提供一种上述生物发酵抑菌剂的制备方法。
本发明的再一目地提供上述生物发酵抑菌剂的应用。
根据本发明的目的，本发明提供的生物发酵抑菌剂，包括以下重量份的原料：
大蒜3-6份，洋葱3-6份，苦瓜3-6份，柠檬3-6份，第一益生菌混合物0.8-1.2份和豆水18-22份；
所述第一益生菌混合物按照重量份包括：侧孢芽孢杆菌12-18份，苏云菌杆菌18-22份，酵母菌18-22份，地衣芽孢杆菌12-18份，枯草芽孢杆菌20-30份，氧化硫硫杆菌3-6份；
所述豆水包括以下重量份的原料制备得到：大豆8-12份，第二益生菌混合物0.5-0.8份，水85-95份；
所述第二益生菌混合物按照重量份包括：嗜酸链球菌12-18份，保加利亚乳杆菌12-18份，两歧双歧杆菌18-25份，嗜酸乳杆菌18-25份，干酪乳杆菌25-35份。
本发明提供的生物发酵的抑菌剂以纯植物作为原料，大蒜、洋葱具有强烈的刺激性气味，苦瓜中含有苦瓜甙、多种氨基酸等物质，柠檬含有柠檬酸、有浓郁的芳香气味，含有丰富的维生素C，豆水中含有多种营养物质，第一益生菌混合物中含有多种益生菌，一方面经过发酵，第一益生菌混合物中的益生菌能够将原料中的物质进行分解，另一方面，经过发酵之后，第一益生菌经过生长繁殖，抑菌剂中含有大量的益生菌。原料经过发酵之后，其中的抑菌物质得到充分的释放，在与有害菌进行接触的过程中，有害菌能够被有效杀灭，从而达到抑制农作物有害菌的功效，此外其中包含多种益生菌和营养物质，能够被植物吸收利用，提升农作物的品质和产量。
本发明提供的生物发酵抑菌剂以植物作为原料添加生产生态豆腐的残余物和益生菌混合物，得到的抑菌剂无毒副作用，不增加环境负担，原料来源广泛，成本低，且有害菌不易产生抗药性。
优选地，所述的生物发酵的抑菌剂，包括以下重量份的原料：
大蒜5份，洋葱5份，苦瓜5份，柠檬5份，第一益生菌混合物1份和豆水20份；
所述第一益生菌混合物按照重量份包括：侧孢芽孢杆菌12-18份，苏云菌杆菌18-22份，酵母菌18-22份，地衣芽孢杆菌12-18份，枯草芽孢杆菌20-30份，氧化硫硫杆菌3-6份；
所述豆水包括以下重量份的原料制备得到：大豆8-12份，第二益生菌混合物0.5-0.8份，水85-95份；
所述第二益生菌混合物按照重量份包括：嗜酸链球菌12-18份，保加利亚乳杆菌12-18份，两歧双歧杆菌18-25份，嗜酸乳杆菌18-25份，干酪乳杆菌25-35份。
优选地，上述的生物发酵的抑菌剂，包括以下重量份的原料：
大蒜5份，洋葱5份，苦瓜5份，柠檬5份，第一益生菌混合物1份和豆水20份；
所述第一益生菌混合物按照重量份包括：侧孢芽孢杆菌15份，苏云菌杆菌20份，酵母菌20份，地衣芽孢杆菌15份，枯草芽孢杆菌25份，氧化硫硫杆菌5份；
所述豆水包括以下重量份的原料制备得到：大豆10份，第二益生菌混合物0.6份，水90份；
所述第二益生菌混合物按照重量份包括：嗜酸链球菌15份，保加利亚乳杆菌15份，两歧双歧杆菌20份，嗜酸乳杆菌20份，干酪乳杆菌30份。
上述生物发酵的抑菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备豆水：
A.将大豆加入水中浸泡，打浆，得到豆浆；
B.将步骤A得到的豆浆经过60-120目精细磨浆，并煮沸，得到熟豆浆；
C.将步骤B中的熟豆浆降温至80-90℃，保温，并将第二益生菌混合物匀速加入到步骤B的熟豆浆中，持续搅拌至豆浆凝固成豆腐，取上部液体；
D.将步骤C中得到的上部液体过滤，取澄清液，得到所述豆水；
(2)将大蒜、洋葱、苦瓜和柠檬清洗干净，然后加入到步骤(1)得到的豆水中，混合均匀，打浆，得到混合浓浆；
(3)将步骤(2)得到的混合浓浆灭菌，得到灭菌混合浓浆；
(4)将步骤(3)得到的灭菌混合浓浆加入到灭菌发酵罐中，然后加入第一益生菌混合物，密封发酵，得到所述生物发酵的抑菌剂。
本发明提供的制备方法，首先进行制备豆水，在进行制备生态豆腐的过程中，通过发酵的方法解离大豆中的营养物质，残余的上清液中含有抑菌的物质，通过将残余物与原料进行发酵的方法，将原料中的营养物质充分的解离，抑菌有效成分得到充分的释放，其他的营养物质被分解为小分子，易被植物体吸收。本发明提供的方法，操作简单，得到的抑菌剂有含有大量的抑菌有效成分及微量元素、益生菌群等，在抑菌的同时，能够为农作物提供营养。
优选地，步骤(1)中，步骤A中浸泡的时间为8-10h。经过8-10小时的浸泡，大豆能够充分的吸收水分，有利于磨浆的顺利的进行，为后续精细磨浆做充分的准备。
优选地，步骤(1)中，步骤B中，将步骤A得到的豆浆依次经过60目、80目、100目和120目四次精细磨浆。本发明经过4次精细磨浆，大豆能够得到充分的研磨，得到的豆浆细腻均匀。
优选地，步骤(3)中，所述灭菌的温度为110-120℃，灭菌的时间为5-20min。
优选地，步骤(4)中，所述发酵的温度为35-40℃，发酵的时间为48-72h。
上述的生物发酵的抑菌剂能够应用于防治农作物有害菌中。本发明提供的生物发酵的抑菌剂中含有多种抑菌物质，能够有效抑制农作物上寄生附着的有害菌，驱杀有害菌，降低农作物的病虫害。
上述的生物发酵的抑菌剂能够应用于农作物叶面肥中。本发明提供的生物发酵的抑菌剂中，除了含有抑菌有效成分外还包括多种益生菌和营养物质，能够作为叶面肥，直接喷洒在农作物的叶面，为农作物补充营养，提高农作物的品质和产量。
本发明的有益效果为：
1.本发明提供的生物发酵的抑菌剂以食材为原料，原料来源丰富；添加益生菌混合物和生产生态豆腐的残余物，通过发酵的方式，充分释放原料中的抑菌有效物，同时将原料中的大分子的物质分解为易被植物吸收利用的小分子物质和无机盐类，能够有效抑制有害菌的生长和繁殖，同时其中的小分子物质和无机盐类能够作为生物肥为农作物提供生长所需的养分。
2.本发明提供的生物发酵的抑菌剂是以纯植物为原料，经过发酵得到，不添加化学物品，无毒无害，有害菌不易产生抗药性，可改善环境，平衡环境中微生物，不增加环境负担，原料来源丰富，成本低。本发明提供的生物发酵的抑菌剂能够充分发挥原料中的抑菌有效成分，抑菌效果突出。
3.本发明提供的生物发酵抑菌剂利用生产生态豆腐剩余的豆水为原料，实现制备豆腐生产过程中的资源的重复利用，减少豆腐生产过程中90％以上的耗水问题，解决豆腐生产过程中产生的废水，实现污水零排放，变废为宝，降低成本。
4.本发明提供的生物发酵抑菌剂中含有丰富的益生菌，能够抑制农作物表面的有害菌的滋生，同时经过发酵得到的抑菌剂中还有丰富的微量元素和氨基酸，为农作物提供有效的营养成分，有助于农作物的增产增收，提升农作物的品质。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
以下实施例中每1重量份对应10g。
实施例1
一种生物发酵的抑菌剂，包括以下重量份的原料：
大蒜3份，洋葱3份，苦瓜3份，柠檬3份，第一益生菌混合物0.8份和豆水18份；
所述第一益生菌混合物按照重量份包括：侧孢芽孢杆菌12份，苏云菌杆菌18份，酵母菌18份，地衣芽孢杆菌12份，枯草芽孢杆菌20份，氧化硫硫杆菌3份；
所述豆水包括以下重量份的原料制备得到：大豆8份，第二益生菌混合物0.5份，水95份；
所述第二益生菌混合物按照重量份包括：嗜酸链球菌12份，保加利亚乳杆菌12份，两歧双歧杆菌18份，嗜酸乳杆菌18份，干酪乳杆菌25份。
上述生物发酵的抑菌剂的制备方法，包括以下步骤：
A.将大豆加入水中浸泡8h，打浆，得到豆浆；
B.将步骤A得到的豆浆依次经过60目、80目、100目和120目4次精细磨浆，并煮沸，得到熟豆浆；
C.将步骤B中的熟豆浆降温至80-90℃，保温，并将第二益生菌混合物匀速加入到步骤B的熟豆浆中，持续搅拌至豆浆凝固成豆腐，取上部液体；
D.将步骤C中得到的上部液体过滤，取澄清液，得到所述豆水；
(2)将大蒜、洋葱、苦瓜和柠檬清洗干净，然后加入到步骤(1)得到的豆水中，混合均匀，打浆，得到混合浓浆；
(3)将步骤(2)得到的混合浓浆在110℃灭菌20min，得到灭菌混合浓浆；
(4)将步骤(3)得到的灭菌混合浓浆加入到灭菌发酵罐中，然后加入第一益生菌混合物，在35-37℃密封发酵72h，得到所述生物发酵的抑菌剂。
实施例2
一种生物发酵的抑菌剂，包括以下重量份的原料：
大蒜6份，洋葱6份，苦瓜6份，柠檬6份，第一益生菌混合物1.2份和豆水22份；
所述第一益生菌混合物按照重量份包括：侧孢芽孢杆菌18份，苏云菌杆菌22份，酵母菌22份，地衣芽孢杆菌18份，枯草芽孢杆菌30份，氧化硫硫杆菌6份；
所述豆水包括以下重量份的原料制备得到：大豆12份，第二益生菌混合物0.8份，水85份；
所述第二益生菌混合物按照重量份包括：嗜酸链球菌18份，保加利亚乳杆菌18份，两歧双歧杆菌25份，嗜酸乳杆菌25份，干酪乳杆菌35份。
上述生物发酵的抑菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备豆水：
A.将大豆加入水中浸泡10h，打浆，得到豆浆；
B.将步骤A得到的豆浆依次经过60目、80目、100目和120目4次精细磨浆，并煮沸，得到熟豆浆；
C.将步骤B中的熟豆浆降温至80-90℃，保温，并将第二益生菌混合物匀速加入到步骤B的熟豆浆中，持续搅拌至豆浆凝固成豆腐，取上部液体；
D.将步骤C中得到的上部液体过滤，取澄清液，得到所述豆水；
(2)将大蒜、洋葱、苦瓜和柠檬清洗干净，然后加入到步骤(1)得到的豆水中，混合均匀，打浆，得到混合浓浆；
(3)将步骤(2)得到的混合浓浆在120℃灭菌5min，得到灭菌混合浓浆；
(4)将步骤(3)得到的灭菌混合浓浆加入到灭菌发酵罐中，然后加入第一益生菌混合物，在38-40℃密封发酵48h，得到所述生物发酵的抑菌剂。
实施例3
一种生物发酵的抑菌剂，包括以下重量份的原料：
大蒜5份，洋葱5份，苦瓜5份，柠檬5份，第一益生菌混合物1份和豆水20份；
所述第一益生菌混合物按照重量份包括：侧孢芽孢杆菌12份，苏云菌杆菌18份，酵母菌18份，地衣芽孢杆菌12份，枯草芽孢杆菌20份，氧化硫硫杆菌3份；
所述豆水包括以下重量份的原料制备得到：大豆8份，第二益生菌混合物0.5份，水95份；
所述第二益生菌混合物按照重量份包括：嗜酸链球菌12份，保加利亚乳杆菌12份，两歧双歧杆菌18份，嗜酸乳杆菌18份，干酪乳杆菌25份。
上述的生物发酵的抑菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备豆水：
A.将大豆加入水中浸泡8h，打浆，得到豆浆；
B.将步骤A得到的豆浆依次经过60目、80目、100目和120目4次精细磨浆，并煮沸，得到熟豆浆；
C.将步骤B中的熟豆浆降温至80-90℃，保温，并将第二益生菌混合物匀速加入到步骤B的熟豆浆中，持续搅拌至豆浆凝固成豆腐，取上部液体；
D.将步骤C中得到的上部液体过滤，取澄清液，得到所述豆水；
(2)将大蒜、洋葱、苦瓜和柠檬清洗干净，然后加入到步骤(1)得到的豆水中，混合均匀，打浆，得到混合浓浆；
(3)将步骤(2)得到的混合浓浆在115℃灭菌15min，得到灭菌混合浓浆；
(4)将步骤(3)得到的灭菌混合浓浆加入到灭菌发酵罐中，然后加入第一益生菌混合物，在36-38℃密封发酵60h，得到所述生物发酵的抑菌剂。
实施例4
一种生物发酵的抑菌剂，包括以下重量份的原料：
大蒜5份，洋葱5份，苦瓜5份，柠檬5份，第一益生菌混合物1份和豆水20份；
所述第一益生菌混合物按照重量份包括：侧孢芽孢杆菌18份，苏云菌杆菌22份，酵母菌22份，地衣芽孢杆菌18份，枯草芽孢杆菌30份，氧化硫硫杆菌6份；
所述豆水包括以下重量份的原料制备得到：大豆12份，第二益生菌混合物0.8份，水85份；
所述第二益生菌混合物按照重量份包括：嗜酸链球菌18份，保加利亚乳杆菌18份，两歧双歧杆菌25份，嗜酸乳杆菌25份，干酪乳杆菌35份。
上述的生物发酵的抑菌剂的制备方法与实施例3相同。
实施例5
一种生物发酵的抑菌剂，包括以下重量份的原料：
大蒜5份，洋葱5份，苦瓜5份，柠檬5份，第一益生菌混合物1份和豆水20份；
所述第一益生菌混合物按照重量份包括：侧孢芽孢杆菌15份，苏云菌杆菌20份，酵母菌20份，地衣芽孢杆菌15份，枯草芽孢杆菌25份，氧化硫硫杆菌5份；
所述豆水包括以下重量份的原料制备得到：大豆10份，第二益生菌混合物0.6份，水90份；
所述第二益生菌混合物按照重量份包括：嗜酸链球菌15份，保加利亚乳杆菌15份，两歧双歧杆菌20份，嗜酸乳杆菌20份，干酪乳杆菌30份。
上述的生物发酵的抑菌剂的制备方法与实施例3相同。
对比例1
一种生物发酵的抑菌剂，包括以下重量份的原料：
大蒜1份，洋葱1份，苦瓜1份，柠檬7份，酵母菌1份和水20份。
上述的生物发酵的抑菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)大蒜、洋葱、苦瓜和柠檬清洗干净，混合均匀，加入水，打浆，得到混合浓浆；
(2)将步骤(1)得到的混合浓浆在115℃灭菌15min，得到灭菌混合浓浆；
(3)将步骤(2)得到的灭菌混合浓浆加入到灭菌发酵罐中，然后加入酵母菌，在36-38℃密封发酵60h，得到所述生物发酵的抑菌剂。
试验例
1.抑菌试验
取小麦蜜穗病菌和丁香假单胞杆菌，进行活化，得到试验菌种。然后取三组MH肉汤培养基，每组培养基为10个，第一组为试验组，试验组分为两个小组，每个小组5个培养基，第一小组接种小麦蜜穗病菌组，第二小组接种丁香假单胞杆菌；第二组为对照组，对照组分为两个小组，每个小组5个培养基，第一小组接种小麦蜜穗病菌组，第二小组接种丁香假单胞杆菌；第三组为空白组，空白组分为两个小组，每个小组5个培养基，第一小组接种小麦蜜穗病菌组，第二小组接种丁香假单胞杆菌。每个培养基灭菌后接种相同数量的菌种，每点菌数约为104CFU。试验组滴加实施例5得到的灭菌的生物发酵抑菌剂，对照组滴加对比例1得到的灭菌的生物发酵抑菌剂，空白组不做处理。
将培养基放置在35-37℃的恒温环境进行培养24h，然后取每个培养基中的培养液10μL，然后接种至琼脂固体培养基，在35-37℃培养24h，观察统计培养基上菌落，结果见表1。
抑菌率＝(空白组的平均菌落数-每组的平均菌落数)/空白组的平均菌落数×100％
表1%20抑菌试验结果
小麦蜜穗病菌为革兰氏阳性菌，小麦蜜穗病菌由线虫传播，对小麦的生长有危害作用，丁香假单胞杆菌为革兰氏阴性菌，它能危害多种植物，包括粮食作物、蔬菜、果树、花卉和药材。从表1的结果可以看出，本发明提供的生物发酵的抑菌剂，实验组对小麦蜜穗病菌有99％的抑制作用，对丁香假单胞杆菌有98％的抑制作用；对比组对小麦蜜穗病菌有70％的抑制作用，对丁香假单胞杆菌有76％的抑制作用，效果稍差，说明生物发酵的抑菌剂使用的原料本身具有一定的灭菌效果，但配比和发酵使得生物发酵的抑菌剂的抑菌效果更为突出。
2.肥力提升效果
试验对象：水稻、玉米、大豆
试验方法：取实施例5、对比例1和清水分别作为试验组、对比组和空白组；取三块水稻田，每块水稻田均为1亩；在水稻种植前分别采用试验组、对照组和空白组的制剂对叶面进行喷洒，平均每亩地均喷洒5kg；在水稻种植期间，三组均平均30天喷洒一次制剂，每次每亩地均喷洒1-2kg，等水稻成熟，统计三组水稻的产量。
其中玉米、大豆的试验同水稻相同，统计三种作为的产量，结果见表2。
表2 三种作物的产量统计结果
从表2的结果可以看出：本发明提供的生物发酵的抑菌剂对作物取到抑菌抗病害的作用，农作物得以茁壮成长，提高产量，抑菌剂喷洒后不仅对作物取到保护作用，其丰富的有益菌和营养元素能改善土壤，提高土壤肥力，有益作物的生长发育。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
