一种可用于改良盐碱土壤的微生物、微生物菌剂及盐碱地土壤微生物改良剂
技术领域
本发明涉及微生物菌肥技术领域，特别是涉及一种可用于改良盐碱土壤的微生物、微生物菌剂及盐碱地土壤微生物改良剂。
背景技术
土地盐碱化是指在特定气候、水文、地质及土壤等自然因素综合作用下，以及人为引水灌溉不当引起土壤盐化与碱化的土地质量退化过程。通常情况下，土壤地下水与表层土壤水维持一定的动态平衡，地下水位恒定，表层土壤中的离子含量相对稳定。气候干旱时，土壤蒸发量增大，土壤中的水分含量下降，引起地下水沿土壤毛细管上移，土壤中的盐分也随着水分同时运动。水分蒸发以后，盐分在土壤表层积累，盐分离子达到一定高的浓度时，就发生土壤盐渍化。另外，当发生洪涝时，水分较长时间覆盖在土壤上面，土壤毛细管被水分填充，使地下水与表层水连通，地下水位提高。洪水退去后，表层水蒸发时，地下水中的盐分就会在土壤表层过量积累，从而引起土壤盐渍化。
土壤发生盐渍化以后，其物理化学性状发生很大变化。物理性状方面，春季干旱时，土壤表层出现白色的盐结皮，土壤的团粒结构和孔隙度也有变化，一般情况微粒比重加大，土壤易于板结，孔隙度减小，透气透水性变差，易发生地表径流和水土流失。土壤的物理性质的改变会直接影响土壤的化学性状，比如土壤溶液中离子浓度增大，pH值升高，电导率与可交换性Na+比率提高，C、N的矿化度下降，土壤中酶的活性受到抑制，影响土壤微生物的活动和有机质的转化，因而使土壤养分利用率下降，有机质含量下降，土壤肥力下降。盐碱土还会造成植物不良，难以吸收水分等问题。
由于黄河河口位于山东省内，并且黄河河口以年平均2.2km的速度向浅海推进，滩涂面积和滨海盐土则不断增加。滨海盐碱土向海岸线方向延伸，逐渐由非盐碱土变为弱盐碱土、中盐碱土和强盐碱土，含盐量和盐碱化程度越来越高，盐碱荒地广泛分布。通过对第二次土地普查的数据资料收集，得出以下统计结果。山东省共有盐碱地5926.73km2，占山东总面积3.78％。其面积和所占盐碱地总面积的比例分别为：东营市2263.33km2，占比38.19％，滨州市1619.33km2，占比27.32％，潍坊市688.67km2，占比11.62％，三市盐碱地的全省占比超过75％，且对盐碱地的利用率都相对较低。
为推进山东省盐碱地治理利用，亟需对山东地区盐碱地进行有效改良。生物方式对土壤的改良以其成本较低、无二次污染及有害物质产生等优势，目前已成为研究热点及应用推广的目标。
公开号为CN108633368A的发明专利申请公开了一种滨海盐碱地土壤改良剂，包括如下重量份数的原料：脱硫石膏20-35份、硫磺10-15份、腐殖酸15-25份、发酵后的松针叶5-15份、复合微生物菌剂0.2-1份、碳源5-10份。所述复合微生物菌剂由如下微生物制成：枯草芽孢杆菌、光合作用细菌、地衣芽孢杆菌和侧芽孢杆菌。该技术方案中，滨海盐碱地土壤改良剂在使用时需要将滨海盐碱地土壤改良剂混合在盐碱地土壤表层5cm一下，翻耕后在2-4个月内用淡水冲水泡田2-5次，每次冲水泡田后排掉田间水。然而，滨海盐碱地本身就缺乏淡水资源，该技术方案适用性较差。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的技术问题，提供了一种可用于改良盐碱土壤的微生物、微生物菌剂及盐碱地土壤微生物改良剂。
一种可用于改良盐碱土壤的微生物，命名为海水芽孢杆菌(Bacillusaquimaris)，株号QR-1，保藏号为CGMCC%20NO.18407。
一种可用于改良盐碱土壤的微生物菌剂，包含株号QR-1、保藏号为CGMCCNO.18407的海水芽孢杆菌(Bacillus%20aquimaris)，以及株号QR-2、保藏号为CGMCCNO.18408的坚强芽孢杆菌(Bacillus%20firmus)。
上述海水芽孢杆菌QR-1(Bacillus%20aquimaris)和坚强芽孢杆菌QR-2(Bacillusfirmus)均筛选来自于山东省滨州市利津县协胜村盐碱土壤，且均具有耐盐耐碱的能力，可用于对盐碱地土壤进行改良。两个菌株于2019年8月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号分别为：CGMCCNO.18407、CGMCC%20NO.18408。
优选的，所述的微生物菌剂，菌株QR-1与菌株QR-2的质量比例为1/3～3∶1。更优选的，所述的微生物菌剂，菌株QR-1与菌株QR-2的质量比例为2～3∶1。最更优选的，所述的微生物菌剂，菌株QR-1与菌株QR-2的质量比例为3∶1。混合生长中发现，QR-1与QR-2的比例为2～3∶1时，两种菌株生长量均较好，且总的量较多；QR-1与QR-2的比例为3∶1时，两种菌株的生长量达到较好的效果，说明两种菌株混合培养时不仅不存在拮抗作用，还具有相互促进生长繁殖的作用。使用两种菌株配合的情况下比单独使用一种菌株时，对盐碱地土壤改良效果更好。
本发明又提供了所述微生物菌剂在改良盐碱地土壤中的应用。
本发明还提供了一种盐碱地土壤微生物改良剂，包含所述微生物菌剂。
优选的，所述的盐碱地土壤微生物改良剂，还包括生物炭和高分子吸水树脂。微生物菌肥具有改善土壤盐度及pH，维持土壤生物多样性，提高农作物质量的作用；生物炭具有增加土壤有机质含量、改善土壤结构、提高土壤肥力的作用；高分子吸水树脂具有保肥保水作用。最优选的，所述微生物菌剂、生物炭和高分子吸水树脂的混合比例按质量计为1∶10∶2。
只加入菌种后的盐碱土壤pH及含盐量下降较为明显，但是对土壤质量的提升效果并不显著，在菌种中加入生物炭和高分子吸水树脂后，土壤有机质、全氮、总磷等养分含量明显增加，土壤含水量也有大幅度提升，玉米出苗率也随之提高。因此在菌种中加入生物炭和高分子吸水树脂可有效改善土壤结构、提高土壤肥力、保水保肥的作用。
优选的，所述生物炭由农作物秸秆制备，将秸秆烘干并粉碎，压实后在惰性气体保护下高温碳化获得。其中农作物秸秆使用玉米秸秆时，生物炭产率最高，比使用小麦秸秆、水稻秸秆以及苜蓿等时都要高，且在相同条件下，制备的生物炭中的碳含量也最高。更优选的，高温碳化的温度为300～700℃。最合适的碳化温度为500℃，此时生物炭产率和生物炭中的碳含量均相对较高。
本发明盐碱地土壤微生物改良剂施用的量一般为25～100kg/亩，更优的施用量为50～75kg/亩。施用后再种植玉米，比不施用直接种植玉米，在耕层土壤有机质、全氮、总磷、含水量、玉米出苗率均有不同程度的提高。
本发明可用于改良盐碱土壤的微生物以及微生物菌剂制成盐碱地土壤微生物改良剂后，施用在盐碱地中，可提高土壤肥力，保肥保水，减轻病虫害，降低土壤盐分及酸碱度，对盐碱地土壤改良起到积极作用。本发明利用土壤微生物具有高比表面积、繁殖迅速、种类的繁多、代谢类型多样、易变异、适应能力强等特点，结合新型土壤改良剂对盐碱地进行有效改良。
具体实施方式
实施例1
菌种筛选。
(1)在山东省滨州市利津县协胜村选择了10个采样点，在每个采样点50cm的半径范围内取3个土样，仔细挑去石块、根茎及各种侵入体后，把土样混合均匀，并用孔径2mm的筛过筛，用以土壤微生物培养并检测土壤的pH、电导率等基础理化性质。配置固体培养基：胰蛋白胨，10g；酵母提取物，5g；H2O，1000mL；琼脂，15g；NaCl浓度梯度分别为2％、3％、4％、5％、6％(质量体积比)；利用1M%20HCl或2M%20NaOH调节pH值分别到7、7.5、8、8.5和9。将过筛土样各取10g分别放入90mL无菌水的三角瓶中，摇床震荡30min，然后用无菌水连续稀释至10-2、10-3、10-4、10-5，取10-3、10-4、10-5的稀释梯度各0.1mL分别涂布在固体培养基平皿中，重复三次。倒置于恒温培养箱中28℃培养一周，筛选菌种。
(2)待菌落长出后，观察菌落生长情况，形态观察和计数，并淘汰重复菌株。将形态不同的菌落用灭菌的接种环挑取菌落至新鲜固体培养基平板上，划单克隆，待到有单克隆菌落长出来后，在挑取单菌落划单克隆，以确保得到的单菌落为单克隆为止，获得细菌纯培养物，选取两株在碱性条件下生长较好，且在接近中性条件下长势较差的菌株进行形态学及遗传学鉴定。
(3)选择两株在pH为碱性条件下长势较好且在中性条件下不生长的菌株命名为QR-1和QR-2，并鉴定。菌株QR-1形态学特征为：橙黄色圆形菌落、凸起、边缘光滑、不透明、粘稠易挑起；菌株QR-2形态学特征为：乳白色圆形菌落、凸起、边缘不整齐、表面不光滑、不透明、粘稠易挑起。
(4)对菌种生理生化性质鉴定结果如表1所示。
表1
(5)16S rDNA基因鉴定：分别将两株菌接种于LB液体培养基中，恒温震荡箱30℃、160r/min培养至对数期收集菌体，使用细菌基因组DNA抽提试剂盒(Ezup Column BacteriaGenomic DNA Purification Kit)提取基因组DNA，分别以QR-1、QR-2基因组为模板，引物为：
上游引物(27F)：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’、
下游引物(1492R)：5’-TACGGYTACCTGTTACGACTT-3’，
扩增体系及程序见表2，采用PCR方法扩增16S rDNA基因。PCR扩增反应结束后，使用1.0％琼脂糖凝胶电泳进行检测，随后将PCR扩增产物进行DNA测序。
表2
经16S rDNA鉴定，测得QR-1序列片段长度为1463bp(核苷酸序列如SEQ ID No.1所示)，在NCBI的GenBank上进行Blast比对，对比基因库中菌株的基因序列，结果显示，菌株QR-1与海水芽孢杆菌(Bacillus aquimaris)的16S rDNA序列的同源性最高，同源性为：99％。测得QR-2序列片段长度为1456bp(核苷酸序列如SEQ ID No.2所示)，在NCBI的GenBank上进行Blast比对，对比基因库中菌株的基因序列，结果显示，菌株QR-2与坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)的16S rDNA序列的同源性最高，同源性为：99.65％。两种菌株分别命名为海水芽孢杆菌QR-1(Bacillus aquimaris)和坚强芽孢杆菌QR-2(Bacillusfirmus)。
(6)该微生物菌剂应用的两种筛选于山东省滨州市利津县协胜村盐碱土壤菌株：海水芽孢杆菌QR-1(Bacillus aquimaris)、坚强芽孢杆菌QR-2(Bacillus firmus)于2019年8月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号分别为：CGMCC NO.18407、CGMCC NO.18408。
实施例2
生物炭的制备方法采用无氧控温碳化法，试验原材料为玉米秸秆、小麦秸秆、水稻秸秆、苜蓿。将收集来的原料清洗干净，去除表面杂物穗、叶等，然后用去离子水反复清洗除灰，静置晾干水分后转移至80℃烘箱中烘干。使用粉碎机将干燥的在25000rpm转速下进行破碎处理至粉末，均匀装入石英舟中压实，置于管式炉中，通入氮气，以5℃·min-1的速率升温至设定温度(300℃、500℃、700℃)，恒温4h，程序自然降温至室温后取出，在干燥的环境中冷藏备用。
生物炭产率＝(m1-m2)/m×100％
m1：产出生物炭和石英舟质量(g)；
m2：石英舟质量(g)；
m：原材料质量(g)。
实验时，每组原材料100g。结果如表3所示，优选500℃下制备的玉米秸秆为原料的生物炭，根据公式可得生物炭产率，结合C含量(生物炭中的碳含量)分析可知，随着裂解温度上升，生物炭产率减少，C含量升高。则选用在500℃时生物炭产率及含C量都相对较高的情况，玉米秸秆的生物炭产率最高，且根据山东省当地情况，玉米的种植相对较多。
表3
实施例3
选择QR-1、QR-2两种菌株分别将两种菌株进行种子培养，以NaCl浓度梯度分别为2％、3％、4％、5％、6％(质量体积比)，pH值分别到7、7.5、8、8.5和9的条件分别对两株菌进行种子培养，以600nm处吸光值代表菌体生长量，置于30℃，接种量为3％条件下，初始OD值调节至0.1，培养48h后对比不同培养条件下的菌体生长量，选择最适生长条件。
结果如表4(QR-1)和表5(QR-2)所示，盐分的含量会影响菌种生长，当盐分较高时会对菌株生长有抑制作用，在实验之中发现，培养基含盐量为4％，pH为8时是其最适生长盐量。
表4
表5
菌株一级培养培养条件：培养基为：蛋白胨，10g；酵母提取物，5g；H2O，1000mL；NaCl，4％(质量体积比)；利用1M HCl，2M NaOH调节pH值到8，培养条件为30℃，180rpm，摇床培养培养至对数生长期末期。将处于对数生长期的菌种接种于50L的发酵罐中进行二级扩大培养，在扩大培养时，在培养基中加入0.7％的制备好的生物炭，有利于菌株生长和菌株的吸附，扩大培养后将培养基液8000rpm离心，固液分离保留菌体部分，得到菌剂部分。
将QR-1与QR-2两种菌株分别按照不同比例混合，并转接到同一个平板和同一培养基摇瓶中培养，观察平板上菌落生长情况、菌落数目及表面形态，检测摇瓶内各菌的含量。将QR-1与QR-2两种菌株分别单独培养，在最适条件下，24h活菌数量分别是：7.14×107cfu/mL、6.31×107cfu/mL。混合生长中发现(表6)，QR-1与QR-2的比例为2～3∶1时，两种菌株生长量均较好，且总的量较多；QR-1与QR-2的比例为3∶1时，两种菌株的生长量达到较好的效果，说明两种菌株混合培养时不仅不存在拮抗作用，还具有相互促进生长繁殖的作用。
表6
实施例4
将菌种、生物炭、高分子吸水树脂(SAP，上海臣启化工科技有限公司)按质量比例1∶10∶2混合，均匀撒入土壤，土壤混合均匀后播种施用于盐碱地土壤中，菌种的比例为QR-1∶QR-2＝3∶1。微生物菌肥具有改善土壤盐度及pH，维持土壤生物多样性，提高农作物质量的作用；生物炭具有增加土壤有机质含量、改善土壤结构、提高土壤肥力的作用；高分子吸水树脂具有保肥保水作用。
设置实验组(盆栽实验)具体如下：C0(对照，按照QR-1∶QR-2＝3∶1的比例单独施用菌种)、E0(菌种、生物炭、高分子吸水树脂按比例1∶10∶2混合施用)，施加微生物菌肥后不可额外施加杀虫剂杀菌剂。
结果如表7所示，只加入菌种后的盐碱土壤pH及含盐量下降较为明显，但是对土壤质量的提升效果并不显著，在菌种中加入生物炭和高分子吸水树脂后，土壤有机质、全氮、总磷等养分含量明显增加，土壤含水量也有大幅度提升，玉米出苗率也随之提高。因此在菌种中加入生物炭和高分子吸水树脂可有效改善土壤结构、提高土壤肥力、保水保肥的作用。
表7
实施例5
一、第一种盐碱地土壤微生物改良剂，其采用的原料包括以下的原料：微生物发酵菌剂、玉米秸秆制备生物炭、高分子吸水树脂，所述的微生物菌剂为海水芽孢杆菌QR-1(Bacillus aquimaris)。
主要实施环节如下：
(1)微生物菌肥微生物菌种制备：挑取保藏在试管中的菌种海水芽孢杆菌QR-1接种到液体培养基中，培养基成分为：蛋白胨，10g；酵母提取物，5g；H2O，1000mL；NaCl，4％；利用1M HCl，2M NaOH调节pH值到8，培养条件为30℃，180rpm，培养至对数生长期，取100μL涂布在固体培养基中，30℃培养箱中倒置培养24h后，挑取长势较好的菌落接种于液体培养基，培养24h后即取3mL的活化菌种接入装有250mL培养基的三角瓶中摇床培养进行一级种子发酵。将处于对数生长期末期的菌种QR-1接种于50L的发酵罐中进行二级扩大培养，扩大培养时，在培养基中加入0.7％的已制备的生物炭，扩大培养后将培养基液8000rpm离心，固液分离保留菌体部分，得到菌剂部分，活菌数大于25亿cfu/g。
(2)生物炭的制备：优选玉米秸秆作为原料，清洗干净，去除表面杂物穗、叶等，然后用去离子水反复清洗除灰，静置晾干水分后转移至80℃烘箱中烘干。使用粉碎机将干燥的在25000rpm转速下进行破碎处理至粉末，均匀装入石英舟中压实，置于管式炉中，通入氮气，以5℃·min-1的速率升温至设定为500℃，恒温4h，程序自然降温至室温后取出，在干燥的环境中冷藏备用。
(3)微生物菌肥的制备与施用：取微生物发酵菌剂、玉米秸秆制备生物炭、高分子吸水树脂按照1∶10∶2的质量比例进行混合，混合均匀后，放置干燥、低温处备用。对盐碱化的土壤深度进行调查，0-20cm土壤含盐量为8.528g/kg，20-40cm土壤含盐量为3.393g/kg，40-60cm土壤含盐量为1.674g/kg，可见深层土的含盐量较表层土低很多，含盐量不会很多，不需要将微生物菌剂施用到更深的土壤中，不需要选择深翻耕。旋耕机疏松0-20cm土壤混合均匀后播种，选择玉米作为样地种植农作物。
(4)设置微生物菌肥4个用量水平，共计6个处理，具体如下：C1(对照，枯草芽孢杆菌菌肥，用量依照说明书指示，购自潍坊市信得生物科技有限公司，微生物肥(2018)准字(4074)号)、C2(对照，氮磷钾复合肥，用量依照说明书指示，购自天津撒可富化肥出品复合肥料)、E1(用量25kg/亩)、E2(用量50kg/亩)、E3(用量75kg/亩)和E4(用量100kg/亩)，施加微生物菌肥后不可额外施加杀虫剂杀菌剂。
(5)试验开始前和种植期测定土壤有机质、盐分、pH、全氮、全磷同时测定玉米种子出苗率、根长等指标。样地土壤试验前指标数据为：
有机质：11.8g/kg、全氮：0.388g/kg、总磷：0.876g/kg、pH：7.96、含盐量：8.528g/kg、含水量：8.82％。
二、第二种盐碱地土壤微生物改良剂，其采用的原料包括以下的原料：微生物发酵菌剂、玉米秸秆制备生物炭、高分子吸水树脂，所述的微生物菌剂为坚强芽孢杆菌QR-2(Bacillus firmus)。
微生物菌肥微生物菌种制备方法同第一种盐碱地土壤微生物改良剂，仅将微生物菌剂由海水芽孢杆菌QR-1替换为坚强芽孢杆菌QR-2。
设置微生物菌肥4个用量水平：E5(用量25kg/亩)、E6(用量50kg/亩)、E7(用量75kg/亩)和E8(用量100kg/亩)，施加微生物菌肥后不可额外施加杀虫剂杀菌剂。
三、第三种盐碱地土壤微生物改良剂，其采用的原料包括以下的原料：微生物发酵菌剂、玉米秸秆制备生物炭、高分子吸水树脂，所述的微生物菌剂为海水芽孢杆菌QR-1(Bacillus aquimaris)及坚强芽孢杆菌QR-2(Bacillus firmus)。
微生物菌肥微生物菌种制备方法同第一种盐碱地土壤微生物改良剂，仅在进行二级扩大培养时，使用对数生长期末期的菌种QR-1及QR-2按照3∶1的质量比例混合来替换单一菌种QR-1。
设置微生物菌肥4个用量水平：E9(用量25kg/亩)、E10(用量50kg/亩)、E11(用量75kg/亩)和E12(用量100kg/亩)，施加微生物菌肥后不可额外施加杀虫剂杀菌剂。
表8
种植后土壤性质见表8。对比种植前后土壤性质和玉米产量看出，施用盐碱地土壤微生物改良剂及对照处理的耕层土壤有机质、全氮、总磷、含水量、玉米出苗率均有不同程度的提高。
其中，在玉米种植时，施用第一种盐碱地土壤微生物改良剂的量为75kg/亩时，盐分及土壤酸碱度降低至适合玉米生长，此时玉米种子出苗率可达80.22％；综合比较来看，适合盐碱地玉米种植的微生物菌剂用量为75kg/亩。
施用第二种盐碱地土壤微生物改良剂的量为75kg/亩时，盐分及土壤酸碱度降低至适合玉米生长，此时玉米种子出苗率可达73.62％；综合比较来看，适合盐碱地玉米种植的微生物菌剂用量为75kg/亩。
施用第三种盐碱地土壤微生物改良剂的量为75kg/亩时，盐分及土壤酸碱度降低至适合玉米生长，此时玉米种子出苗率可达85.17％；综合比较来看，适合盐碱地玉米种植的微生物菌剂用量50kg/亩。
序列表
<110> 山东省土地综合整治服务中心
浙江大学
<120> 一种可用于改良盐碱土壤的微生物、微生物菌剂及盐碱地土壤微生物改良剂
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1463
<212> DNA
<213> 海水芽孢杆菌(Bacillus aquimaris)
<400> 1
cacatatctg gtccacctta gggcggctgg ctccaaaggt tacctcaccg acttcgggtg 60
ttacaaactc tcgtggtgtg acgggcggtg tgtacaaggc ccgggaacgt attcaccgcg 120
gcatgctgat ccgcgattac tagcgattcc agcttcatgt aggcgagttg cagcctacaa 180
tccgaactga gaacggtttt atgggattgg ctaaacctcg cggtcttgct gccctttgta 240
ccgtccattg tagcacgtgt gtagcccagg tcataagggg catgatgatt tgacgtcatc 300
cccaccttcc tccggtttgt caccggcagt catcttagag tgcccaactg aatgctggca 360
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acgacaacca tgcaccacct gtcactctgt cccccgaagg ggaaagccct atctctaggg 480
ttgtcagagg atgtcaagac ctggtaaggt tcttcgcgtt gcttcgaatt aaaccacatg 540
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cccaggcgga gtgcttaatg cgttagctgc agcactaagg ggcggaaacc ccctaacact 660
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gttactcacc cgtccgccgc tgatatcagg gagcaagctc ccatcaatcc gctcgactgc 1440
atgtatagca tccgcactgc ccc 1463
<210> 2
<211> 1456
<212> DNA
<213> 坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)
<400> 2
ccactctctg gtcaccttag gcggctggct ccaaaggtta ccccaccgac ttcgggtgtt 60
acaaactctc gtggtgtgac gggcggtgtg tacaaggccc gggaacgtat tcaccgcggc 120
atgctgatcc gcgattacta gcgattccgg cttcatgcag gcgagttgca gcctgcaatc 180
cgaactgaga atggttttat gggattcgct taacctcgcg gtctcgcagc cctttgtacc 240
atccattgta gcacgtgtgt agcccaggtc ataaggggca tgatgatttg acgtcatccc 300
caccttcctc cggtttgtca ccggcagtca ccttagagtg cccaactgaa tgctggcaac 360
taagatcaag ggttgcgctc gttgcgggac ttaacccaac atctcacgac acgagctgac 420
gacaaccatg caccacctgt catcctgtcc cccgaagggg aacgccctat ctctagggtt 480
gtcaggagat gtcaagacct ggtaaggttc ttcgcgttgc ttcgaattaa accacatgct 540
ccaccgcttg tgcgggcccc cgtcaattcc tttgagtttc agccttgcgg ccgtactccc 600
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tctctacgca tttcaccgct acacgtggaa ttccactctt ctcttctgca ctcaagttcc 840
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tgtaagtgat agccgaaacc atctttcagc tttccctcat gtgagggaaa gaattatccg 1320
gtattagctc cggtttcccg aagttatccc agtcttacag gcaggttgcc cacgtgttac 1380
tcacccgtcc gccgctgact tccgggagca agctcccatc cgtccgctcg actgcatgta 1440
tagcacgcgc actgcc 1456
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tacggytacc tgttacgact t 21
