一种提高黄皮果实总黄酮含量和抗氧化活性的种植方法
技术领域
本发明属于果树栽培技术领域，具体涉及一种提高黄皮果实总黄酮含量和抗氧化活性的种植方法。
背景技术
黄皮(Clausena%20lansium)，又称王坛子、黄批、黄段、黄淡，为芸香科黄皮属植物、热带亚热带常绿果树。黄皮原产于我国华南地区，至今已有1500多年栽培历史，主要分布在广东、广西、海南、福建、云南、贵州南部、四川的金沙江河谷地区以及我国台湾等地。黄皮果实外观诱人，风味独特、酸甜可口，且富含糖分、有机酸、膳食纤维以及多种维生素和微量元素，营养丰富。此外，黄皮果还具有重要的药用价值，传统中医用于治疗咳嗽痰喘、感冒发烧、小便不利、疟疾等病症。因此，作为一种功能型保健水果，黄皮果越来越受到消费者的青睐；在当前我国大宗水果价格出现大幅波动的形势下，黄皮鲜果销售价格却逐年稳步上涨，其中精品果销售价格高达30～60元/千克，成为水果产业难见的亮点。在高额经济效益的驱动下，我国黄皮生产已经由过去的屋前房后零星种植转向规模化商业种植，栽培面积一路攀升，发展前景广阔。
总黄酮是黄皮果实中重要的营养保健成分，由于其结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团而拥有较强的抗氧化活性，对氧自由基和脂质过氧化具有极大的清除能力。近年来，从黄皮中提取的黄酮类物质并证实具有延缓衰老、抑制肿瘤细胞增殖、预防神经退行性疾病等功能。因此，发明一种提高黄皮果实中总黄酮含量的方法能够有效的提升黄皮的营养保健功能和食用价值，对提高果农收入、促进产业的进一步发展具有重要意义。
发明内容
针对上述问题，本发明旨在提供一种提高黄皮果实总黄酮含量和抗氧化活性的种植方法。
为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：
一种提高黄皮果实总黄酮含量和抗氧化活性的种植方法，包括以下步骤：在黄皮果实生长发育过程中，对黄皮树喷施亚硫酸氢钠水溶液。
优选，所述的亚硫酸氢钠水溶液的质量浓度为600～1000mg·L-1。
优选，所述的亚硫酸氢钠水溶液的质量浓度为800mg·L-1。
优选，一种提高黄皮果实总黄酮含量和抗氧化活性的种植方法，包括以下步骤：在黄皮谢花后30天起，对黄皮树喷施调配好浓度的亚硫酸氢钠水溶液，喷施3～4次，每次喷施间隔7～10天，每次喷施以叶面湿润为度。
优选，所述的黄皮品种为鸡心黄皮或无核黄皮。
本发明的技术效果为：本发明在黄皮果实生长发育过程中，通过对黄皮树喷施亚硫酸氢钠药剂处理，从而达到明显提高黄皮果实中总黄酮含量和抗氧化活性的目的，使得黄皮果实的营养保健功能和药用价值得到极大的提升。本方法操作简便，且不产生任何副作用，实施成本低廉，市场前景广阔，值得推广应用。
具体实施方式
为了使本发明的上述目的能够更加明显易懂，下面结合具体实施例来对本发明的具体实施方式做进一步的详细说明，但本发明的保护范围并不限于下列实施例。
1、测试方法
后续各实施例中的具体实施效果采用以下测试方法进行检验。
1.1样品提取液的制备：在果实成熟期采集果实样品，去核后切碎混匀。准确称取25g待测样品，加入300mL预冷的70％v/v乙醇溶液高速匀浆，过夜浸提后真空抽滤，滤液在45℃下进行真空旋蒸浓缩直至总体积小于10mL，最后用70％v/v乙醇将其定容至25mL，分装后储存于-40℃冰箱中备用。
1.2总黄酮含量的测定：采用AlCl3比色法进行测定。取300μL样品提取液，加入1.2mLH2O和120μL%205wt％的NaNO2溶液，反应5min后加入90μL%2010wt％AlCl3·6H2O溶液，6min后加入600μL%201mol/L的NaOH溶液，加蒸馏水补足总体积为3mL，于510nm处测定吸光值,以70％v/v的乙醇溶液代替样品作空白对照。以儿茶素(Catechin)为标准物质绘制标准曲线，最终结果以每100g鲜样相当于儿茶素当量(Catechin%20equivalent,CE)表示，单位为mg%20CE/100g%20FW。
1.3抗氧化活性的测定：分别采用DPPH自由基清除能力和FRAP抗氧化能力2种方法综合评价抗氧化活性。
DPPH自由基清除能力的测定：取100μL样品提取液，加入900μL%2080μmol·L-1的DPPH甲醇溶液，充分混匀后，置于暗室反应30min，于517nm波长下测定其吸光值，以70％v/v的甲醇溶液代替样品作空白，按照公式清除率(％)＝(A0-A1)/A0×100％计算样品对DPPH的清除率，其中A1加入样品后的吸光值，A0为空白对照的吸光值。以抗坏血酸(Ascorbic%20acid,AsA)为标准物质，用同样方法测定其对DPPH的清除率，制作标准曲线，最终结果以每100g鲜样相当于抗坏血酸当量(Ascorbic%20acid%20equivalent,AsA%20equiv.)表示，单位为mg%20AsAequiv./100g%20FW。
FRAP抗氧化能力的测定：取100μL样品提取液，加入FRAP工作液900μL(FRAP工作液包括300mmol·L-1pH%203.6醋酸盐缓冲液25mL、10mmol·L-1%202,4,6-三吡啶三吖嗪(2,4,6-trispyridyl-s-triazine，TPTZ)溶液2.5mL、20mmol·L-1FeC13·6H2O溶液2.5mL，现配现用)，充分混匀后37℃水浴锅中避光反应40min，于593nm波长下测定其吸光值，以70％v/v的甲醇溶液代替样品作空白。以FeSO4为标准物质，用同样的方法制作标准曲线，最终结果以每100g鲜样相当于Fe2+当量(Fe2+equivalent,Fe2+equiv.)表示，单位为mmol%20Fe2+equiv./100g%20FW。
实施例1
试验于2017年在广东省云浮市郁南县都城镇鑑标祥顺无核黄皮专业合作社果园进行，供试黄皮品种(系)为‘郁南无核黄皮’，8年树龄，种植规格为3米×4米。在谢花后30天起，利用喷雾器对黄皮试验树和对照树进行树冠喷施处理，试验树喷施质量浓度为600mg·L-1的亚硫酸氢钠水溶液，对照树喷施清水，每次喷施以黄皮叶片湿润为为度，每7天喷施一次，共喷施4次，其他生产管理按照黄皮园的日常管理进行即可。
在果实成熟时分别从每株树的东、南、西、北四个方向采集随机采集4穗成熟果实，每穗果随机取5个果混合，测定其果实的总黄酮含量、DPPH自由基清除能力和FRAP抗氧化能力，结果如下表1所示：
表1
注：同列不同小写字母代表在0.05水平差异显著。
由表1可见，采用600mg·L-1的亚硫酸氢钠水溶液喷施处理后黄皮成熟果实的总黄酮含量、DPPH清除能力和FRAP抗氧化含量与对照相比分别提高了8.3％、10.5％和11.8％，差异达到显著水平。
实施例2
试验于2017年在广东省云浮市郁南县都城镇鑑标祥顺无核黄皮专业合作社果园进行，供试黄皮品种(系)为‘郁南无核黄皮’，8年树龄，种植规格为3米×4米。在黄皮谢花后30天起，利用喷雾器对黄皮试验树和对照树进行树冠喷施处理，试验树喷施质量浓度为800mg·L-1的亚硫酸氢钠水溶液，对照树喷施清水，每次喷施以黄皮叶片湿润为为度，每7天喷施一次，共喷施3次，其他生产管理按照黄皮园的日常管理进行即可。
在果实成熟时分别从每株树的东、南、西、北四个方向采集随机采集4穗成熟果实，每穗果随机取5个果混合，测定其果实的总黄酮含量、DPPH自由基清除能力和FRAP抗氧化能力，结果如下表2所示：
表2
注：同列不同小写字母代表在0.05水平差异显著。
由表2可见，采用800mg·L-1的亚硫酸氢钠水溶液喷施处理后成熟果实的总黄酮含量、DPPH清除能力和FRAP抗氧化含量与对照相比分别提高了17.0％、20.9％和21.7％，差异达到显著水平。
实施例3
试验于2017年在广东省云浮市郁南县都城镇鑑标祥顺无核黄皮专业合作社果园进行，供试黄皮品种(系)为‘郁南无核黄皮’，8年树龄，种植规格为3米×4米。在黄皮谢花后30天起，利用喷雾器对黄皮试验树和对照树进行树冠喷施处理，试验树喷施质量浓度为1000mg·L-1的亚硫酸氢钠水溶液，对照树喷施清水，每次喷施以黄皮叶片湿润为为度，每10天喷施一次，共喷施4次，其他生产管理按照黄皮园的日常管理进行即可。
在果实成熟时分别从每株树的东、南、西、北四个方向采集随机采集4穗成熟果实，每穗果随机取5个果混合，测定其果实的总黄酮含量、DPPH自由基清除能力和FRAP抗氧化能力，结果如下表3所示：
表3
注：同列不同小写字母代表在0.05水平差异显著。
由表3可见，采用1000mg·L-1的亚硫酸氢钠水溶液喷施处理后成熟果实的总黄酮含量、DPPH清除能力和FRAP抗氧化含量与对照相比分别提高了10.6％、14.5％和17.8％，差异达到显著水平。
实施例4
试验于2018年在广东省广州市从化区蓝园黄皮专业合作社果园进行，供试黄皮品种(系)为‘鸡心黄皮’，7年树龄，种植规格为3米×4米。在黄皮谢花后30天起，利用喷雾器对黄皮试验树和对照树进行树冠喷施处理，试验树喷施质量浓度为800mg·L-1的亚硫酸氢钠水溶液，对照树喷施清水，每次喷施以黄皮叶片湿润为为度，每10天喷施一次，共喷施3次，其他生产管理按照黄皮园的日常管理进行即可。
在果实成熟时分别从每株树的东、南、西、北四个方向采集随机采集4穗成熟果实，每穗果随机取5个果混合，测定其果实的总黄酮含量、DPPH自由基清除能力和FRAP抗氧化能力，结果如下表4所示：
表4
注：同列不同小写字母代表在0.05水平差异显著。
由表4可见，采用800mg·L-1的亚硫酸氢钠水溶液喷施处理后成熟果实的总黄酮含量、DPPH清除能力和FRAP抗氧化含量与对照相比分别提高了14.2％、19.0％和18.2％，差异达到显著水平。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
