一种含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于医药化工领域，特别涉及一种含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
五元碳环化合物(环戊烯、环戊烷等)是一类重要的天然产物骨架及合成中间体，这类化合物在抗菌性、抗氧化性、抗炎、抗癌、抗肿瘤、酶的抑制剂等方面具有重要作用，因此在医药领域具有广泛的应用前景。研究表明，具有此五元环结构的天然产物(+)-Geniposide具有抗糖尿病，抗氧化，抗增殖和神经保护活性。具有此结构的(-)-NeplanocinA是腺甘酸的碳环类似物，具有抗肿瘤、抗病毒活性，特别是对人类急性髓细胞白血病移植瘤(HL-60)有着显著抑制作用。同样具有此结构的化合物(-)-Aristeromycin是一种腺苷类似物，是一种抗生素和有效的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(AHCY)抑制剂。
另一方面，氟原子具有原子半径小、电负性大、易形成氢键等特点。因此，向目标化合物中选择性的引入含氟基团通常可以显著地改变目标化合物的化学、物理、代谢稳定性以及生理活性。尤其是选择性地向目标化合物中引入三氟甲基成为近年来开发新药的一种有效手段。目前，通过合理的设计，已经开发出许多含三氟甲基的药物或先导化合物。比如Sodium channel inhibitor是新型的钠离子通道抑制剂，可降低外周和中枢感觉神经元的放电，用于疼痛治疗，包括急性、慢性、炎性和/或神经性疼痛。比如Modulator of kemokinereceptor作为一种趋化因子受体活性的调节器，可用于预防或治疗某些炎症免疫调节紊乱和疾病，过敏性鼻炎、皮炎等过敏性疾病。
综上可知，五元环化合物和三氟甲基这两类结构单元在药物研发中有着非常广泛的应用，但是选择性地构建三氟甲基修饰的五元碳环骨架的相关工作研究还很少。因此，发展高效的方法合成具有三氟甲基的五元环化合物，有助于快速、高效地发现一些药物先导化合物，进而推动新药研发。
发明内容
为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物。
本发明另一目的在于提供上述含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的制备方法。
本发明再一目的在于提供上述含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的应用。
本发明的目的通过下述方案实现：
一种含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物，其化学结构通式如下式I所示：
其中，R1相对独立的选自烷基、环烷基、苄基中的至少一种，优选为乙基、叔丁基、苄基、环己基中的一种；R2选自芳基、杂芳基、炔基、取代芳基、取代杂芳基中的至少一种，其中取代芳基以及取代杂芳基中的取代基可以为-COOMe、-CN、-S(＝O)2-CH3、-Cl、-CH3、-NO2、-F、-OCH3、-CH2CH(＝O)、-Ts、-Br中至少一种。
优选的，所述的含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物，其化学结构为如下所示结构中的一种：
一种上述的含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的制备方法，其包括以下步骤：
在氮气或惰性气体保护下，将催化剂、式Ⅱ所示化合物、式Ⅲ所示化合物和溶剂混合均匀，在室温下搅拌至其中至少一种原料反应完全，然后将所得反应液纯化即得所述的含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物，具体反应路线如下所示：
R1相对独立的选自烷基、环烷基、苄基中的至少一种；R2选自芳基、杂芳基、炔基、取代芳基、取代杂芳基中的至少一种，其中取代芳基以及取代杂芳基中的取代基可以为-COOMe、-CN、-S(＝O)2-CH3、-Cl、-CH3、-NO2、-F、-OCH3、-CH2CH(＝O)、-Ts、-Br中至少一种。
所述的式Ⅱ所示化合物、式Ⅲ所示化合物的用量满足：所述式Ⅲ所示化合物的物质的量为式Ⅱ所示化合物的物质的量的Y倍，Y＝2～4，优选Y＝2。
式Ⅱ所示化合物为不同取代基的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔，可按照以下文献方法中描述的Sonogashira偶联反应来合成[(a)J.Fluorine Chem.1993,64,1-4；(b)J.Am.Chem.Soc.2015,137,11606-11609]。式III所示化合物为不同取代基的2，3-丁二烯酸酯，可按照以下文献方法合成[(a)ACS Catal.2016,6,2482-2486；(b)Org.Lett.2015,17,1573-1576]。
式III所示化合物优选为2,3-丁二烯酸乙酯，2,3-丁二烯酸苄酯、2,3-丁二烯酸环己酯、2,3-丁二烯酸叔丁酯中的一种；
式Ⅱ所示化合物优选为对苯甲酸甲酯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、对苯甲腈取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、对苯乙酮取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、对甲苯磺酰基取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、对氯苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、苯基取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、对甲苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、间硝基苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、间氟苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、间甲苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、间甲氧基甲苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、邻苯甲醛取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、4-氯-3-氰基苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、2-萘基取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、噻吩取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、苯并呋喃基取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、N-对甲苯磺酰基咔唑取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、N-对甲苯苯磺酰基吲哚取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、对乙炔基甲苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、对溴苯乙炔基取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔、苯戊炔基取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔中的一种。
所述的催化剂为三苯基膦[PPh3]、二苯基甲基膦[PPh2Me]、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁[DPPF]、1,3-双(二苯膦)丙烷[DPPP]、三(2-甲氧基苯基)膦[(4-MeOC6H4)3P]、三乙烯二胺[DABCO]中的至少一种；所述的催化剂的用量满足催化剂的摩尔用量为式Ⅱ化合物的摩尔用量的x％，x＝1-200，优选为x＝10；
所述的溶剂为甲苯(Toluene)、二氯甲烷(DCM)、1,2-二氯乙烷(DCE)、氯仿(CHCl3)、四氯化碳(CCl4)、乙醚(Et2O)、四氢呋喃(THF)、乙酸乙酯(EtOAc)、硝基甲烷(MeNO2)、乙腈(MeCN)中的至少一种；所述的溶剂仅仅作为反应介质，因此可以不用限制溶剂的用量，若要限制的话，优选为每毫摩尔(mmol)的式Ⅱ所示化合物对应使用5mL至50mL的溶剂。
所述的纯化是指将所得反应液直接柱层析，淋洗剂为石油醚/乙酸乙酯＝30/1～20/1。
所述的含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物在制备抗菌药物、抗氧化性药物、抗炎药物、抗癌药物、抗肿瘤药物和酶的抑制剂中的应用。尤其是在制备抗腹水瘤药物中的应用。
本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：
本发明提供了一种含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物及其制备方法和应用，本发明所述含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物为一系列新的含三氟甲基的五元环化合物，所述含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物具有抗菌性、抗氧化性、抗炎、抗癌、抗肿瘤、酶的抑制等作用。因此有望开发成一类新型的抗菌药物、抗氧化性、抗炎药物、抗癌药物、抗肿瘤药物和酶的抑制剂。本发明所述含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的制备方法具有以下优点：原料和催化剂便宜易得；反应条件温和，操作简单方便，对环境友好，底物范围广，官能团兼容性好，对一系列的含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物均可取得中等到优秀的产率。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例中式Ⅱ-1～Ⅱ-21所示化合物若不能通过市售购买的可按照以下文献方法描述的Sonogashira偶联反应来合成[(a)J.Fluorine Chem.1993,64,1-4；(b)J.Am.Chem.Soc.2015,137,11606-11609]；实施例中式III-1～III-4所示化合物若不能通过市售购买的可按照以下文献方法合成[(a)ACS Catal.2016,6,2482-2486；(b)Org.Lett.2015,17,1573-1576]。
实施例1
式I-1所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入对苯甲酸甲酯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-1(51mg,0.20mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)，得产品I-1无色油65mg，产率89％。
式I-1所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.01-7.96(m,2H),7.51-7.47(m,2H),6.69(d,J＝2.2Hz,1H),4.23(q,J＝7.1Hz,2H),3.92(s,3H),3.30-3.02(m,4H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ166.37,163.71,138.63,133.81,131.76,130.01,129.42,126.68,126.26(q,J＝278.75Hz),90.19(d,J＝2.5Hz),82.92,60.72,52.21,46.66(q,J＝30Hz),42.93,41.38,14.18.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.98.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C19H17F3NaO4 389.0971,Found 389.0957.
实施例2
式I-2所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入对苯甲腈取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-2(44mg,0.20mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh2Me(4mg,0.02mmol)和溶剂THF(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)，得产品I-2无色油48.0mg，产率72％。
式I-2所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.63-7.59(m,2H),7.52(d,J＝8.5Hz,2H),6.69(s,1H),4.23(q,J＝7.1Hz,2H),3.31-3.02(m,4H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.65,138.50,133.82,132.39,131.99,126.91,126.15(q,J＝278.75Hz),118.23,112.21,91.69(d,J＝2.5Hz),82.08,60.78,46.71(q,J＝30Hz),42.84,41.31,14.20.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.86.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C18H14F3NNaO2 356.0869,Found 356.0861.
实施例3
式I-3所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入对苯乙酮取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-3(48mg,0.20mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂DPPF(15mg,0.02mmol)和溶剂Et2O(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得产品I-3无色油43.0mg，产率62％。
式I-3所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.90(d,J＝8.4Hz,2H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),6.70(d,J＝2.3Hz,1H),4.23(q,J＝7.1Hz,2H),3.35-3.01(m,4H),2.60(s,3H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ197.23,163.72,138.63,136.66,133.82,131.99,128.16,126.87,126.26(q,J＝278.75Hz),90.53(d,J＝2.5Hz),82.89,60.74,46.69(q,J＝30Hz),42.94,41.39,26.60,14.21.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.95.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd forC19H17F3NaO3373.1022,Found 373.1016.
实施例4
式I-4所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入对甲苯磺酰基取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-4(55mg,0.20mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂DPPP(8.2mg,0.02mmol)和溶剂DCM(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)，得产品I-4淡黄色油63.0mg，产率82％。
式I-4所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.90(d,J＝8.3Hz,2H),7.62(d,J＝8.3Hz,2H),6.70(s,1H),4.24(q,J＝7.1Hz,2H),3.30-3.07(m,4H),3.05(s,3H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.65,140.28,138.53,133.80,132.63,127.86,127.35,126.16(q,J＝278.75Hz),91.35,81.98,60.78,46.68(q,J＝30Hz),44.41,42.84,41.32,14.20.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.86.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C18H17F3NaO4S 409.0692,Found 409.0684.
实施例5
式I-5所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入对氯苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-5(46mg,0.20mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂(4-MeOC6H4)3P(7mg,0.02mmol)和溶剂DCE(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)，得产品I-5无色油59.0mg，产率87％。
式I-5所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.30-7.25(m,2H),7.22-7.18(m,2H),6.60(d,J＝2.0Hz,1H),4.15(q,J＝7.1Hz,2H),3.20-2.92(m,4H),1.23(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ162.75,137.65,133.79,132.82,132.05,127.62,125.31(q,J＝278.75Hz),119.56,87.30(d,J＝2.5Hz),81.55,59.70,45.60(q,J＝28.75Hz),41.97,40.42,13.20.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-76.04.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C17H14ClF3NaO2 365.0527,Found 365.0519.
实施例6
式I-6所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入苯基取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-7(39mg,0.20mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(68mg,0.6mmol)、催化剂DABCO(2.2mg,0.02mmol)和溶剂CHCl3(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌48h后，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝30/1～20/1)，得产品I-6无色油35.0mg，产率56％。
式I-6所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.45-7.40(m,2H),7.35-7.28(m,3H),6.68(s,1H),4.22(q,J＝7.1Hz,2H),3.28–3.02(m,4H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.83,138.78,133.84,131.82,128.68,128.28,126.43(q,J＝278.75Hz),122.10,87.34(d,J＝3.75Hz),83.65,60.68,46.59(q,J＝28.75Hz),43.09,41.52,14.22.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-76.12.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C17H15F3NaO2 331.0916,Found 331.0910.
实施例7
式I-7所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入对甲苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-7(42mg,0.20mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(68mg,0.6mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂CCl4(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌48h后，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝30/1～20/1)，得产品I-7无色油33.0mg，产率51％。
式I-7所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.31(d,J＝8.1Hz,2H),7.10(d,J＝7.9Hz,2H),6.68(s,1H),4.22(q,J＝7.1Hz,2H),3.30-2.98(m,4H),2.34(s,3H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.87,138.83,133.83,131.70,129.02,126.46(q,J＝278.75Hz),119.03,86.63(d,J＝2.5Hz),83.76,60.67,46.58(q,J＝28.75Hz),43.12,41.55,21.46,14.22.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-76.16.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C18H17F3NaO2 345.1073,Found 345.1084.
实施例8
式I-8所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入间硝基苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-8(48mg,0.20mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂甲苯(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)，得产品I-8无色油43.0mg，产率61％。
式I-8所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.30-8.26(m,1H),8.19(m,1H),7.75-7.72(m,1H),7.51(t,J＝8.0Hz,1H),6.70(s,1H),4.24(q,J＝7.1Hz,2H),3.31-3.05(m,4H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.65,148.06,138.52,137.51,133.83,129.39,126.72,123.85,123.46,126.17(q,J＝278.75Hz),90.02(d,J＝2.5Hz),81.32,60.79,46.66(q,J＝28.75Hz),42.84,41.31,14.20.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.83.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd forC17H14F3NNaO4376.0767,Found 376.0749.
实施例9
式I-9所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入间氟苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-9(43mg,0.20mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂MeNO2(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝30:1～20/1)，得产品I-9无色油41.0mg，产率64％。
式I-9所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.29-7.24(m,1H),7.22-7.18(m,1H),7.12(m,1H),7.06-7.00(m,1H),6.68(d,J＝2.2Hz,1H),4.23(q,J＝7.1Hz,2H),3.29-3.00(m,4H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.73,162.28(d,J＝245Hz),138.63,133.83,129.89(d,J＝7.5Hz),127.71(d,J＝2.5Hz),126.31(q,J＝278.75Hz),123.88(d,J＝10Hz),118.66(d,J＝22.5Hz),116.07(d,J＝21.25Hz),88.27(d,J＝2.5Hz),82.45(d,J＝3.75Hz),60.70,46.58(q,J＝28.75Hz),42.95,41.40,14.18.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-76.05,-112.83.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C17H14F4NaO2 349.0822,Found 349.0812.
实施例10
式I-10所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入间甲苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-10(42mg,0.2mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂MeCN(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌48h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝30:1～20/1)，得产品I-10无色油46.0mg，产率71％。
式I-10所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.25-7.16(m,3H),7.13(d,J＝7.4Hz,1H),6.68(s,1H),4.22(q,J＝7.1Hz,2H),3.27-3.01(m,4H),2.31(s,3H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.84,138.79,138.00,133.84,132.41,129.56,128.87,128.18,126.46(q,J＝278.75Hz),121.89,86.96(d,J＝2.5Hz),83.82,60.67,46.60(q,J＝28.75Hz),43.10,41.54,21.11,14.21.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-76.12.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C18H17F3NaO2 345.1073,Found 345.1063.
实施例11
式I-11所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入间甲氧基甲苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-11(45mg,0.2mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌48h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝30:1～20/1)，得产品I-11无色油43.0mg，产率64％。
式I-11所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.23-7.18(m,1H),7.03-7.00(m,1H),6.94(dd,J＝2.5,1.4Hz,1H),6.88(m,1H),6.68(s,1H),4.22(q,J＝7.1Hz,2H),3.79(s,3H),3.28-3.02(m,4H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.83,159.31,138.77,133.83,129.36,126.42(q,J＝278.75Hz),124.36,123.06,116.56,115.39,87.12(d,J＝2.5Hz),83.57,60.69,55.29,46.58(q,J＝30Hz),43.07,41.50,14.21.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-76.08.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C18H17F3NaO3 361.1027,Found 361.1022.
实施例12
式I-12所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入邻苯甲醛取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-12(45mg,0.2mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)，得产品I-12淡黄色油50.0mg，产率75％。
式I-12所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.44(d,J＝0.6Hz,1H),7.92(d,J＝7.9Hz,1H),7.58-7.54(m,2H),7.49-7.45(m,1H),6.71(s,1H),4.24(q,J＝7.1Hz,2H),3.32-3.20(m,2H),3.11(dd,J＝23.2,19.9Hz,2H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ191.06,163.62,138.52,136.29,133.86,133.71,133.48,129.18,127.37,126.21(q,J＝278.75Hz),125.32,94.27(d,J＝2.5Hz),79.55,60.78,46.86(q,J＝28.75Hz),42.83,41.30,14.19.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.85.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C18H15F3NaO3 359.0865,Found 359.0859.
实施例13
式I-13所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入4-氯-3-氰基苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-13(51mg,0.2mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)，得产品I-13无色油46.0mg，产率62％。
式I-13所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.72(d,J＝1.9Hz,1H),7.57(dd,J＝8.5,2.0Hz,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(s,1H),4.23(q,J＝7.1Hz,2H),3.29-3.01(m,4H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.61,138.45,136.94,136.86,136.73,133.81,130.18,126.08(q,J＝278.75Hz),121.90,115.00,113.88,90.76(d,J＝3.75Hz),80.45,60.81,46.67(q,J＝28.75Hz),42.79,41.26,14.21.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.81.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcdfor C18H13ClF3NNaO2 390.0479,Found 390.0473.
实施例14
式I-14所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入2-萘基取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-14(49mg,0.2mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)，得产品I-14无色油54.0mg，产率75％。
式I-14所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.95(s,1H),7.80-7.74(m,3H),7.50-7.43(m,3H),6.70(s,1H),4.23(q,J＝7.1Hz,2H),3.33-3.04(m,4H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.85,138.81,133.88,132.98,132.85,131.93,128.34,128.00,127.76,126.87,126.63,126.49(q,J＝278.75Hz),119.37,87.62(d,J＝2.5Hz),84.03,60.71,46.72(q,J＝28.75Hz),43.15,41.59,14.24.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.98.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd forC21H17F3NaO2381.1073,Found 381.1066.
实施例15
式I-15所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入噻吩取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-15(40mg,0.2mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)，得产品I-15淡黄色油44.0mg，产率70％。
式I-15所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.25(dd,J＝5.2,1.1Hz,1H),7.21(dd,J＝3.6,1.1Hz,1H),6.96(dd,J＝5.1,3.7Hz,1H),6.67(s,1H),4.22(q,J＝7.1Hz,2H),3.27-3.01(m,4H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.75,138.69,133.80,132.73,127.57,126.93,126.28(q,J＝278.75Hz),121.91,90.97(d,J＝3.75Hz),77.08,60.70,46.84(q,J＝28.75Hz),42.94,41.39,14.20.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.93.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd forC15H13F3NaO2S337.0481,Found 337.0472.
实施例16
式I-16所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
惰性气体保护下，在10mL反应管中依次加入苯并呋喃基取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-16(47mg,0.2mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝30/1～20:1)，得产品I-16无色油45mg，产率65％。
式I-16所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.56-7.53(m,1H),7.44(dd,J＝8.3,0.8Hz,1H),7.33(m,1H),7.26-7.22(m,1H),6.96(d,J＝0.9Hz,1H),6.69(s,1H),4.23(q,J＝7.1Hz,2H),3.31-3.07(m,4H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.63,154.84,138.52,137.52,133.82,127.28,126.08(q,J＝278.75Hz),125.90,123.39,121.35,112.43,111.26,93.22(d,J＝2.5Hz),74.47,60.78,46.88(q,J＝30Hz),42.76,41.23,14.21.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.63.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C19H15F3NaO3 371.0871,Found 371.0866.
实施例17
式I-17所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入N-对甲苯磺酰基咔唑取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-17(88mg,0.2mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)，得产品I-17无色油88mg，产率80％。
式I-17所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.33–8.25(m,2H),7.97(d,J＝1.1Hz,1H),7.87(d,J＝7.7Hz,1H),7.69-7.63(m,2H),7.56-7.47(m,2H),7.39-7.34(m,1H),7.09(d,J＝8.4Hz,2H),6.71(s,1H),4.26-4.21(m,2H),3.31-3.05(m,4H),2.25(s,3H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.84,145.15,138.78,138.17,134.74,133.86,130.93,129.73,127.93,126.48,126.45,126.44(q,J＝278.75Hz),125.62,124.20,123.65,120.16,117.62,115.22,115.12,87.17,83.51,60.73,46.68(q,J＝28.75Hz),43.11,41.55,21.49,14.24.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.94.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C30H24F3NNaO4S 574.1270,Found574.1276.
实施例18
式I-18所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
惰性气体保护下，在10mL反应管中依次加入N-对甲苯苯磺酰基吲哚取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-18(78mg,0.2mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(45mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝20/1～10:1)，得产品I-18淡黄色油66mg，产率66％。
式I-18所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.96(d,J＝8.3Hz,1H),7.79-7.72(m,3H),7.55(d,J＝7.8Hz,1H),7.38-7.32(m,1H),7.30-7.26(m,1H),7.22(d,J＝8.4Hz,2H),6.70(d,J＝1.5Hz,1H),4.23(q,J＝7.1Hz,2H),3.31-3.05(m,4H),2.33(s,3H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.78,145.44,138.70,134.86,134.09,133.85,130.67,130.04,129.25,126.95,126.36(q,J＝278.75Hz),125.59,123.83,120.34,113.58,103.96,91.83(d,J＝2.5Hz),75.04,60.74,46.91(q,J＝28.75Hz),43.14,41.60,21.56,14.23.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.94.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C26H22F3NNaO4S 524.1114,Found 524.1107.
实施例19
式I-19所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
惰性气体保护下，在10mL反应管中依次加入对乙炔基甲苯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-19(23mg,0.1mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(22mg,0.2mmol)、催化剂PPh3(2.6mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(1.0mL)。将反应液在25℃下搅拌48h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝40/1)，得产品I-19无色油32mg，产率92％。
式I-19所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.50(d,J＝8.5Hz,2H),7.39(d,J＝8.5Hz,2H),6.58(s,1H),4.07(q,J＝7.1Hz,2H),3.12-2.95(m,4H),1.15(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.61,140.00,138.47,133.83,132.58,129.28,126.01(q,J＝278.75Hz),118.04,79.92,78.82,72.42,68.85,60.77,47.07(q,J＝28.75Hz),42.77,41.24,21.62,14.23.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.52.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C20H17F3NaO2 369.1073,Found 369.1071.
实施例20
式I-20所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
氮气保护下，在10mL反应管中依次加入对溴苯乙炔基取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-20(30mg,0.1mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(22mg,0.2mmol)、催化剂PPh3(2.6mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(1.0mL)。将反应液在25℃下搅拌48h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝40/1)，得产品I-20淡黄色油31mg，产率75％。
式I-20所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,D6-Acetone)7.38(d,J＝8.1Hz,2H),7.12(d,J＝7.9Hz,2H),6.65(s,1H),4.22(q,J＝7.1Hz,2H),3.23-2.99(m,4H),2.35(s,3H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,D6-Acetone)δ162.87,138.54,134.25,133.30,132.03,126.11(q,J＝273.75Hz),123.95,119.83,80.89,77.26,73.39,68.01,60.32,47.00(q,J＝28.75Hz),42.37,40.94,13.57.19F NMR(470MHz,D6-Acetone)δ-76.04.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C19H14BrF3O2Na 433.0021,Found 433.0017.
实施例21
式I-21所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
惰性气体保护下，在10mL反应管中依次加入苯戊炔基取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-21(26mg,0.1mmol)、2,3-丁二烯酸乙酯III-1(22mg,0.2mmol)、催化剂PPh3(2.6mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(1.0mL)。将反应液在25℃下搅拌48h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝40/1)，得产品I-21无色油29mg，产率78％。
式I-21所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.23-7.19(m,2H),7.14-7.08(m,3H),6.56(s,1H),4.14(q,J＝7.1Hz,2H),3.12-2.87(m,4H),2.64(t,J＝7.5Hz,2H),2.20(t,J＝7.0Hz,2H),1.82-1.74(m,2H),1.22(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ162.60,140.04,137.46,132.77,127.48,127.41,125.05,125.02(q,J＝278.75Hz),80.13,72.58,67.95,63.73,59.70,45.72(q,J＝28.75Hz),41.73,40.19,33.66,28.56,17.56,13.19.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.66.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C22H21F3NaO2 397.1386,Found 397.1391.
实施例22
式I-22所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
惰性气体保护下，在10mL反应管中依次加入对苯甲酸甲酯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-1(51mg,0.20mmol)、2,3-丁二烯酸苄酯III-2(70mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝30/1～20:1)，得产品I-22无色油78mg，产率91％。
式I-22所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.99-7.96(m,2H),7.49-7.46(m,2H),7.39-7.34(m,5H),6.74(s,1H),5.21(s,2H),3.91(s,3H),3.31-3.03(m,4H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ166.39,163.46,139.37,135.72,133.51,131.80,130.06,129.45,128.62,128.37,128.26,126.66,126.26(q,J＝278.75Hz),90.13(d,J＝2.5Hz),83.03,66.50,52.25,46.70(q,J＝28.75Hz),43.02,41.40.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.91.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C24H19F3NaO4 451.1128,Found451.1119.
实施例23
式I-23所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
惰性气体保护下，在10mL反应管中依次加入对苯甲酸甲酯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-1(51mg,0.20mmol)、2,3-丁二烯酸环己酯III-3(66mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝30/1～20:1)，得产品I-23无色油78mg，产率93％。
式I-23所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.49(d,J＝8.5Hz,2H),6.67(d,J＝2.1Hz,1H),4.91-4.82(m,1H),3.91(s,3H),3.31-3.03(m,4H),1.91-1.71(m,4H),1.55-1.27(m,6H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ166.37,163.14,138.26,134.28,131.77,130.00,129.42,126.72,126.30(q,J＝278.75Hz),90.31(d,J＝2.5Hz),82.90,72.94,52.21,46.63(q,J＝30Hz),42.94,41.42,31.55,25.37,23.61.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.94.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcdfor C23H23F3NaO4 443.1441,Found 443.1426.
实施例24
式I-24所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的合成：
惰性气体保护下，在10mL反应管中依次加入对苯甲酸甲酯取代的2-三氟甲基-1，3-共轭烯炔Ⅱ-1(51mg,0.20mmol)、2,3-丁二烯酸叔丁酯III-4(56mg,0.4mmol)、催化剂PPh3(5.2mg,0.02mmol)和溶剂EtOAc(2.0mL)。将反应液在25℃下搅拌24h后，TLC检测原料基本已反应完，停止反应。反应液浓缩后直接柱层析，淋洗剂(石油醚/乙酸乙酯＝30/1～20:1)，得产品I-23无色油68mg，产率86％。
式I-24所示含三氟甲基的炔基环戊烯衍生物的分析数据：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.89(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),6.50(s,1H),3.83(s,3H),3.07(m,4H),1.42(s,9H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ166.37,163.06,137.59,135.28,131.76,129.98,129.41,126.76,126.33(q,J＝278.75Hz),90.42(d,J＝2.5Hz),82.84,81.08,52.20,46.59(q,J＝28.75Hz),42.86,41.46,28.07.19F NMR(470MHz,CDCl3)δ-75.96.HRMS(ESI-TOF)m/z[M+Na]+calcd for C21H21F3NaO4 417.1284,Found 417.1268.
实施例25
三氟甲基的五元环类化合物的抗肿瘤活性测试：
鉴于我们所合成的三氟甲基的五元环类化合物具有五元环和三氟甲基两个药物开发的重要元素，我们接下来对以上实施例中所提及的化合物进行了抗肿瘤活性测试。如背景介绍中所述，(-)-Neplanocin A具有明显的抗肿瘤活性，而利用本发明方法合成的化合物与其结构具有一定的相似性，因此本实施例以(-)-Neplanocin A为参照物，测试了下表中所示化合物的抗肿瘤活性。采用体外培养的方法，具体的实施过程如下：在含培养液(DMEM高糖培养基90％；胎牛血清10％，Procell)的96孔板中接种EAC-E2G8小鼠腹水瘤细胞悬液(上海复祥生物科技有限公司)，每个孔板中细胞的浓度为106/mL，100μL/孔，37℃，5％的二氧化碳，95％空气条件下培养24h，静置，去掉上清液。将用含二甲亚砜(含量<1％)的培养液(DMEM高糖培养基90％；胎牛血清10％，Procell))稀释后的实施例I-1～24中的化合物(浓度为：10-6mol/L)分别以80μL的量加入培养孔板中。然后，将96孔板置于37℃及5％的二氧化碳条件下培养72h。能生育的细胞数量采用细胞增殖试剂WST-1进行评估，同时使用GraphPad Prism软件对数据进行分析，测试结果见表1。
表1 Neplanocin A和实施例I-1～24所述三氟甲基的五元环类化合物的抗肿瘤活性测试数据
a表中数据为三次测试的平均值；bIC50表示测试化合物产生最大抑制作用的一半的浓度。
从表1中的数据可以看出，化合物I-1～24都具有抑制肿瘤细胞增殖的能力，其抑制能力因各化合物中取代基的不同而有所差异，其中化合物I-17和I-18抑制肿瘤细胞增殖的能力略优于(-)-Neplanocin A。总体上来说，表1中的活性测试数据表明本发明所述三氟甲基的五元环类化合物具有一定抗肿瘤活性，有望发展成为一类新型的抗肿瘤药物。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
