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丁苯酞衍生物在制备治疗心梗或其相关疾病药物中的应用

2021-01-30 13:53:38

丁苯酞衍生物在制备治疗心梗或其相关疾病药物中的应用

　　技术领域

　　本发明属于药物应用领域，涉及(-)-(S)-3-(3′-羟基)-丁基苯酞及其加成产物的新用途。实验证明该类化合物对心肌缺血再灌注后的心肌损伤有显著的保护作用，可以用于治疗心肌梗塞，临床可用于保护心肌。

　　背景技术

　　(-)-(S)-3-(3′-羟基)-丁基苯酞为式Ⅶ所示化合物：

　　(-)-(S)-3-(3′-羟基)-丁基苯酞是丁苯酞的衍生物，其作用效果与丁苯酞相比更好，且能够形成固体结晶，而丁苯酞为油状物，不易溶于水，存在存储、制剂等诸多问题，该衍生物及其加成产物很好的解决了上述问题，中国专利CN102503919A公开了该衍生物及其加成产物，并未公开该类化合物具有治疗心肌梗塞的效果。

　　发明内容

　　本发明的目的是提供(-)-(S)-3-(3’-羟基)-丁基苯酞及其加成产物在制备治疗心肌梗塞或其相关疾病的药物中的应用。

　　本发明为实现其目的采用的技术方案是：

　　(-)-(S)-3-(3’-羟基)-丁基苯酞及其加成产物在制备治疗心肌梗塞或其相关疾病的药物中的应用。

　　所述的加成产物包括(-)-(S)-3-(3’-羟基)-丁基苯酞与酸加成所得的酯，所述的酸选自药学上可接受的无机酸或有机酸。

　　所述的加成产物包括(-)-(S)-3-(3’-羟基)-丁基苯酞与氨基酸反应得到的酯再与硫酸、磷酸、磺酸或盐酸加成所得的盐。

　　所述的加成产物包括(-)-(S)-3-(3’-羟基)-丁基苯酞与二元酸加成所得到的酯再与钠、钾、镁、氨丁三醇、二乙醇胺、三乙醇胺、甘氨酸、赖氨酸或精氨酸加成所得到的盐。

　　所述的无机酸为选自硝酸、硫酸或磷酸；所述的有机酸选自氨基酸或二元酸，其中氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、赖氨酸、精氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、焦谷氨酸、色氨酸或缬氨酸；二元酸包括樟脑酸、苹果酸、柠檬酸、马来酸、琥珀酸、草酸、戊二酸、乙二酸、乳酸或丙二酸；双羟萘酸、羟基萘酸、龙胆酸、水杨酸、羟基乙酸、扁桃酸、乳酸、4-乙酰胺基苯甲酸或烟酸。

　　所述的加成产物如式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ、式V或式VI所示：

　　所述相关疾病为心梗后再灌注导致的心肌损伤。

　　本发明的有益效果是：

　　本发明将(-)-(S)-3-(3’-羟基)-丁基苯酞及其加成产物用在了制备治疗心肌梗塞或其相关疾病的药物中，开拓了丁苯酞衍生物的新用途。所述将(-)-(S)-3-(3’-羟基)-丁基苯酞及其加成产物可以保护心梗后的心肌不受损伤，同时还具有减小心梗面积的作用。

　　具体实施方式

　　下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

　　一、具体实施例

　　实施例1：注射用(-)-(S)-3-(3′-磷酸酯二钠)丁基苯酞(式VI所示化合物)冻干粉的制备

　　取制备的(S)-3-(3′-磷酸酯)丁基苯酞钠盐(化合物VI)10g，加入1000ml注射用水，溶解，再加入甘露醇60g，充分溶解后，补加注射用水至1200ml，活性炭脱碳后过微孔滤膜，分装于7ml西林瓶中，每瓶3ml，加塞，冻干，压盖，即得。规格：20mg/瓶。

　　实施例2：(-)-(S)-3-(3′-羟基)-丁基苯酞(式Ⅶ所示化合物)胶囊的制备

　　准确称取恒重的(-)-(S)-3-(3′-羟基)-丁基苯酞60g，过100目筛，加入于80℃烘干并过80目筛的105g乳糖，混匀，检测含量，合格后装入1号胶囊即得。

　　实施例3：(s)-3-(3’-甘氨酸酯)丁基苯肽盐酸盐(式Ⅳ所示化合物)注射液的制备

　　准确称取(s)-3-(3’-甘氨酸酯)丁基苯肽盐酸盐50g置于容器中，加适量注射用水，在调节pH至6.5-7.2，加注射用水至4000ml，加入2g针用活性炭，煮沸15min，抽滤脱碳，溶液经0.22μm微孔滤膜过滤，溶液灌封于玻璃安瓿内，制剂经115℃加压灭菌30min即可。

　　二、试验研究

　　实验例1：各个化合物对缺血再灌注大鼠离体心脏的心肌保护作用

　　1材料与方法

　　1.1动物、试剂及仪器

　　清洁级健康成年SD大鼠，♀♂不拘，体质量(260～320)g(北京维通利华)，化合物Ⅵ(自制)，化合物Ⅱ(自制)，乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(南京建成生物工程研究所)，Caspase-3活性检测试剂盒(碧云天生物技术研究所)，TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Roche公司)，Langendorff灌注装置(美国Radnoti)，MP150多导生理记录仪(美国BIOPAC)，Model680型酶标仪(美国BIO-RAD)。

　　1.2大鼠离体心脏Langendorff灌流模型制备

　　大鼠腹腔注射乌拉坦1g/kg麻醉，肝素钠(500IU/kg)抗凝，开胸取心脏，置于4℃预冷的Krebs-Henseleit(K-H)液中，迅速经主动脉逆行插管固定于Langendorff灌流装置，以K-H液恒压灌流，剪开肺动脉根部以保证冠脉回流通畅，控制冠脉流量为8～10ml/min。灌流液以混合气体(氧气：二氧化碳＝5：95)饱和，维持灌流液温度37℃。左心耳处剪一小口，将带有小乳胶水囊的测压管经二尖瓣口插入左心室，调节左室舒张末压(LVEDP)为0.53～1.33kPa，经MP150生理记录仪实时观测并分析左心室心功能参数。

　　1.3实验分组

　　离体大鼠心脏随机分为7组(n＝8)：①正常对照组(Nor)，K-H液持续灌流155min，灌注压恒定为7.84kPa；②缺血/再灌注组(I/R)，K-H液平衡灌流30min后，全心停灌35min，K-H液再灌90min，灌注压恒定为7.84kPa；③化合物Ⅱ组(S2)，K-H液平衡灌流10min后改用含10mmol/L化合物Ⅱ的K-H液灌流20min，之后停灌再灌注处理同I/R；④化合物Ⅲ组(S3)，处理同S2，受试药物浓度为15mmol/L；⑤化合物Ⅳ组(S4)，处理同S2，受试药物浓度为30mmol/L；⑥化合物Ⅴ组(S5)，处理同S2，受试药物浓度为10mmol/L；⑦化合物Ⅵ组(S6)，处理同S2，受试药物浓度为10mmol/L。

　　1.4观察指标

　　1.4.1心功能

　　记录平衡30min和再灌注90min的左室发展压(LVDP)、左室内压上升最大速度(+dp/dtmax)、左室内压下降最大速度(－dp/dtmax)及冠脉流量(CF)。

　　1.4.2 LDH活性

　　留取灌流末1min的冠脉流出液，置于-20℃冰箱保存，酶标法检测LDH的活性。

　　1.4.3心肌梗死面积

　　灌注结束后迅速取下心脏，-20℃冷冻30min，将心脏从心尖部向心底部切成1mm厚薄片，置于1％TTC磷酸盐缓冲溶液中(pH＝7.4)，37℃孵育20min，存活心肌呈砖红色，梗死心肌呈灰白色。10％福尔马林溶液固定后，分离两种心肌组织，电子天平分别称重，计算梗死区与心肌总重量的比值。心肌梗死面积/％＝(梗死区重/心肌总重)×100％。

　　1.4.4心肌Caspase-3活性

　　灌流结束后，取心脏左心室前壁心肌组织置于-80℃冰箱保存，酶标法检测Caspase-3活性。一个酶活力单位的定义为当底物饱和时，在37℃可以剪切1nmolAc-DEVD-pNA产生1nmolpNA的Caspase-3的酶量。即可计算出样品中含有多少个酶活力单位的Caspase-3。

　　1.4.5TUNEL法检测心肌细胞凋亡

　　灌注结束后取左心室心尖部心肌标本于中性福尔马林中固定，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，常规石蜡包埋，切片，按TUNEL试剂盒说明书进行染色，凋亡阳性细胞核被染成棕黄色或棕褐色，正常细胞被苏木精复染成蓝色。高倍镜(×400倍)下每张切片随机取10个视野，计数凋亡阳性细胞，凋亡指数(apoptosisin-dex，AI)＝(凋亡阳性细胞数/总细胞数)×100％。

　　1.5统计学方法结果以x±s表示，采用SPSS15.0进行统计学分析，多组间均数比较采用单因素方差分析。

　　2结果

　　2.1心功能

　　表1显示各组平衡末心功能指标间差异无统计学意义(P＞0.05)，再灌注90min时，I/R组LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax及CF均较Nor明显降低(P＜0.01)；与I/R组比较，S2组、S3组、S4组、S5组、S6组各指标恢复良好，见表2。

　　表1大鼠离体心脏心功能(平衡30min，N＝8)