一种含鹿茸的抗衰老面膜及其制备方法
技术领域
本发明属于日用化妆品技术领域，具体涉及一种含鹿茸的抗衰老 面膜，本发明还涉及该抗衰老面膜的制备方法。
背景技术
保持面部皮肤的年轻状态，是大多数女性梦寐以求的目标，但是 衰老是生物有机体不可抗拒的自然法则，对于成年女性来说，自打 25岁起，面部皮肤就会出现逐渐老化的问题，到了中年以后，这种 衰老会有加速的现象，体现在面部皮肤厚度减少、含水率下降、皮肤 松弛、细密皱纹增多、黑眼圈、皮肤色素沉积、暗沉，其实质是皮肤 抗氧化能力下降、脂褐素堆积、胶原蛋白的合成能力下降、透明质酸 含量减少、皮肤含水率下降。
现代生物科学认为皮肤衰老的具有多种机制，一般认为自由基是 造成细胞和组织衰老最主要的原因，自由基普遍存在机体内，随着机 体的衰老，皮肤组织具有抗氧化功能的超氧化物歧化酶(SOD)等成 分含量下降，导致细胞代谢过程中产生的自由基大量积累，过量的自 由基会过氧化蛋白质、核酸、脂质等细胞成分，从而破坏细胞膜、线 粒体、染色体等细胞结构，引起蛋白质交联变性和DNA链断裂；而 皮肤成纤维细胞功能的衰退，会引起羟脯氨酸生成减少，胶原蛋白合 成减少，透明质酸含量下降。这些伤害在组织学方面表现为：表皮和 真皮层变薄，真皮内的胶原蛋白减少，透明质酸含量下降，皮肤含水 率下降，胶原纤维交联，脂褐素堆积；于是皮肤外观出现干燥、松弛、 皱纹、暗沉等衰老症状。此外光老化也是皮肤衰老的外在诱因，紫外 线中的UVA诱导活性氧(ROS)的产生，抑制胶原蛋白的产生和透 明质酸(HA)合成，促进金属基质蛋白酶(MMP)的表达，使细胞 外基质退化，使mtDNA发生突变造成细胞损伤，从而使皮肤衰老； UVB则造成皮肤角质细胞(KC)的DNA损伤，抑制朗汉斯细胞的 免疫功能，增加炎性细胞因子水平，抑制皮肤的免疫功能。此外， UVB可抑制成纤维细胞产生胶原蛋白，促进MMP1、3、9的表达， 基质降解出现异常，造成皮肤的特征性改变。
针对面部皮肤的抗衰老，一些研究发现很多植物药具有非常好的 抗皮肤衰老功效，可以延缓和改善皮肤衰老，现今很多国际知名化妆 品企业在护肤品产品配方中都应用了植物提取物，如熊果苷、果酸。 也有直接添加植物成分，如人参、玉竹、月见草等，以此来延缓皮肤 衰老。据调查，作为一个护肤品行业的细分产品，面膜行业在近几年 发展突飞猛进，市场规模约100亿元左右，并正以每年30％的速度增 长，2019年，中国的面膜市场预估计达到130亿元人民币，其中一 些面膜主打抗衰老功能，但是市面上现有抗衰老化妆品的效果良莠不 齐，有些甚至没有显著效果，通过问卷星平台发放了943份问卷表， 结果表明即使包含从没使用过抗衰老化妆品的消费者，仍然大约有 49.47％的消费者对现有抗衰老产品的效果不满意。我们在一些前期研 究中发现皮肤外用鹿茸制剂，可以有效改善皮肤衰老，因此开发以鹿 茸为主要成分的抗皮肤衰老面膜将会成为一种很好的市场前景。
纳米乳液是一种包含极小颗粒的乳状液，粒径在50～200nm之 间，常用油包水型(W/O)和水包油型(O/W)，可被用作对水敏感 药物以及脂溶性药物的载体。纳米乳与普通乳液相比具有很大的表面 积比和自由能，可以增加难溶性药物的溶解度，提高药物稳定性，提 高药物生物利用度高。一般来说，O/W型纳米乳可以增加亲脂性药 物的溶解度；W/O型纳米乳可以对水溶性药物起到延长释放时间的 作用，即为缓释作用。海藻酸钠为海藻多糖的主要成分，是从海带中 提取的一种多聚糖醛酸，用于乳液中可增强粘性，改善固体的悬浮，改善乳剂的稳定性，对药物活性也有一定的保护功能，海藻酸钠还有 一定的清除自由基的能力。根据海藻酸钠和纳米乳的特性，我们将以 制备海藻酸钠纳米乳作为我们研制的抗皮肤衰老面膜精华液的基质。
发明内容
本发明的目的是提供一种含鹿茸的抗衰老面膜，解决了现有抗衰 老面膜效果差的问题。
以海藻酸钠纳米乳作为面膜精华液的基质，可以增加药物成分的 溶解度，提高药物稳定性，提高药物生物利用度高。
本发明的另一目的是提供上述抗衰老面膜的制备方法。
本发明所采用的技术方案是，一种含鹿茸的抗衰老面膜，由如下 重量份的原料制成：海藻酸钠纳米乳94～98份，鹿茸1.8～2.2份、 生地0.3～0.5份、红花0.3～0.5份、黄芪0.3～0.5份、玉竹0.3～0.5 份、天山雪菊0.3～0.5份、黄原胶0.3～0.5份、甘油5～7份、黄原 胶0.18～0.22份、β-葡聚糖0.9～1.1份、维生素E 1.8～2.2份、维生 素A0.7～0.9份、辅酶Q10 0.09～0.11份、透明质酸0.4～0.6份、尼 泊金甲酯0.8～1.2份、尼泊金乙酯0.8～1.2份、BHT 0.09～0.11份、 香精适量；
海藻酸钠纳米乳由质量比为46：23：30：10的吐温-80、无水乙 醇、乙酸乙酯和海藻酸钠溶液混合而成；海藻酸钠溶液的质量浓度为 10g/ml。
本发明所采用的另一技术方案是，一种含鹿茸的抗衰老面膜的制 备方法，具体步骤如下：
步骤1，按以下重量份分别称取如下原料：海藻酸钠纳米乳94～ 98份，鹿茸1.8～2.2份、生地0.3～0.5份、红花0.3～0.5份、黄芪 0.3～0.5份、玉竹0.3～0.5份、天山雪菊0.3～0.5份、黄原胶0.3～ 0.5份、甘油5～7份、黄原胶0.18～0.22份、β-葡聚糖0.9～1.1份、 维生素E 1.8～2.2份、维生素A0.7～0.9份、辅酶Q10 0.09～0.11份、 透明质酸0.4～0.6份、尼泊金甲酯0.8～1.2份、尼泊金乙酯0.8～1.2 份、BHT 0.09～0.11份、香精适量；
步骤2，制备中药组分：先将鹿茸切片，放入烘箱中烘干，再将 黄芪、玉竹、生地、红花和天山雪菊放入烘箱中，烘干；再放入超微 粉碎机中粉碎，过筛，冷藏，得到中药组分；
步骤3，制备抗衰老面膜精华液：向海藻酸钠纳米乳中依次添加 中药组分、甘油、黄原胶、β-葡聚糖、维生素E、维生素A、辅酶 Q10、透明质酸、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、BHT、香精，在添加每 一种成分时，向着同一方向进行搅拌，待混合均匀后再添加下一成分， 待所有成分添加完成后，使用电磁搅拌机搅拌3min，得到抗衰老面 膜精华液；
步骤4，面膜的制备：将无纺面膜布浸入面膜精华液中，即可得 到抗衰老面膜。
步骤1中，海藻酸钠纳米乳的制备方法为：将海藻酸钠溶解在去 离子水中，搅拌均匀，放入离心机中进行离心，离心速率为3000r/min， 离心时间为5min，取其上清液作为水相备用，得到海藻酸钠溶液； 之后将吐温-80与无水乙醇混合均匀，加入乙酸乙酯，搅拌均匀后， 逐滴滴加海藻酸钠水溶液，并搅拌，随着溶液的增加，W/O纳米乳 发生了转相，直到形成澄清透明且出现丁达尔效应的O/W海藻酸钠 纳米乳。
吐温-80、无水乙醇、乙酸乙酯和海藻酸钠溶液的质量比为46： 23：30：10；海藻酸钠溶液的质量浓度为10g/ml。
本发明的有益效果是，
皮肤经使用该抗衰老面膜后，可以有效提高皮肤含水率、增加羟脯氨 酸(HYP)、透明质酸含量(HA)、SOD等成分的含量，降低丙二醛 (MDA)MDA含量。皮肤外观变得润泽，松弛、皱纹、暗沉等衰老 症状得以减退或者消除。
附图说明
图1为本发明中正常小鼠皮肤外观图；
图2为本发明中皮肤衰老模型小鼠皮肤外观图；
图3为本发明中空白对照组的小鼠皮肤皱褶图；
图4为本发明中10％浓度给药组的小鼠皮肤皱褶图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
本发明一种含鹿茸的抗衰老面膜，由如下重量份的原料制成： 海藻酸钠纳米乳94～98份，鹿茸1.8～2.2份、生地0.3～0.5份、红 花0.3～0.5份、黄芪0.3～0.5份、玉竹0.3～0.5份、天山雪菊0.3～ 0.5份、黄原胶0.3～0.5份、甘油5～7份、黄原胶0.18～0.22份、β-葡聚糖0.9～1.1份、维生素E 1.8～2.2份、维生素A0.7～0.9份、辅 酶Q10 0.09～0.11份、透明质酸0.4～0.6份、尼泊金甲酯0.8～1.2份、 尼泊金乙酯0.8～1.2份、BHT 0.09～0.11份、香精适量；
海藻酸钠纳米乳由质量比为46：23：30：10的吐温-80、无水乙 醇、乙酸乙酯和海藻酸钠溶液混合而成；海藻酸钠溶液的质量浓度为 10g/ml。
本发明的药物组合原则：
本发明人在近年来的研究中发现，鹿茸含有大量促进组织生长的 生物活性物质，成分包括蛋白多肽类、氨基酸、糖类、生物胺类、甾 体类、脂类和无机元素。蛋白多肽类是鹿茸最主要的活性成分，与抗 衰老有关的成分主要是其中的酶类和生长因子类。酶类包括超氧化物 歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、单胺氧化酶(MAO)等， 这些酶类具有抗氧化、抗衰老作用。胰岛素样生长因子、表皮生长因 子等能够促进皮肤成纤维细胞的功能，促进胶原蛋白和透明质酸的合 成。鹿茸中的糖类包括硫酸软骨素、酸性粘多糖、中性糖、半乳糖胺等，这些成分往往具有抗氧化或者保湿的作用。鹿茸多胺可以抗脂质 过氧化，促进核酸和蛋白质合成。鹿茸中的甾体类包括雌二醇、胆甾 醇、5a-雄甾烷-1,3-二酮、睾丸酮、胆甾-3,5-二烯，5a-胆甾-7-烯-3-酮 等成分，这些激素类成分能够抑制黑色素细胞酪氨酸酶活性、促进成 纤维细胞增生和增加胶原蛋白和透明纸酸合成、抑制炎症形成、延缓 皮肤衰老，本发明人所做的动物实验证明，外用鹿茸膏剂可以有效提 高皮肤含水率、增加羟脯氨酸、透明质酸含量、SOD等成分的含量， 降低MDA含量。皮肤外观变的润泽，松弛、皱纹等衰老症状得以减 退或者消除，有效改善皮肤衰老，鹿茸和一些具有较强抗氧化效应的 植物药相比，其抗氧化性能要强于大多数植物药，而且其抗皮肤衰老 是从多个机制来干预细胞和组织的衰老，综合抗衰老的效果更好。根 据鹿茸的上述抗皮肤衰老特性，我们又选用了一些其他中药材与鹿茸 配伍，以增强鹿茸在抗皮肤衰老的效果，也可以减少鹿茸的使用量， 降低产品成本，这些中药包括黄芪、生地、玉竹、红花、天山雪菊。
根据祖国传统医学理论，鹿茸和黄芪、生地、玉竹配伍，具有阴 阳双补，清热润燥，托毒生肌的功效，而红花、天山雪菊具有细胞保 护、抗氧化、加强血液抗凝和促进微循环等作用，也有助于药物成分 的吸收，因此上述组合从传统中医理论上来讲可以达到很好的抗衰老 效果。
上述含鹿茸的抗衰老面膜的制备方法，具体步骤如下：
步骤1，按以下重量份分别称取如下原料：海藻酸钠纳米乳94～98份，鹿茸1.8～2.2份、生地0.3～0.5份、红花0.3～0.5份、黄芪 0.3～0.5份、玉竹0.3～0.5份、天山雪菊0.3～0.5份、黄原胶0.3～ 0.5份、甘油5～7份、黄原胶0.18～0.22份、β-葡聚糖0.9～1.1份、 维生素E 1.8～2.2份、维生素A0.7～0.9份、辅酶Q10 0.09～0.11份、 透明质酸0.4～0.6份、尼泊金甲酯0.8～1.2份、尼泊金乙酯0.8～1.2 份、BHT 0.09～0.11份、香精适量；
海藻酸钠纳米乳由质量比为46：23：30：10的吐温-80、无水乙 醇、乙酸乙酯和海藻酸钠溶液混合而成；海藻酸钠溶液的质量浓度为 10g/ml；
海藻酸钠纳米乳的制备方法为：将海藻酸钠溶解在去离子水中， 搅拌均匀，放入离心机中进行离心，离心速率为3000r/min，离心时 间为5min，取其上清液作为水相备用，得到海藻酸钠溶液；之后将 吐温-80与无水乙醇混合均匀，加入乙酸乙酯，搅拌均匀后，逐滴滴 加海藻酸钠水溶液，并搅拌，随着溶液的增加，W/O纳米乳发生了 转相，直到形成澄清透明且出现丁达尔效应的O/W海藻酸钠纳米乳。
步骤2，制备中药组分：先将鲜鹿茸切片，放入烘箱中烘干，再 将黄芪、玉竹、生地、红花和天山雪菊放入烘箱中，烘干；再放入超 微粉碎机中粉碎，过筛，冷藏，得到中药组分；
烘干温度为40℃，烘干时间为8h；过筛时采用120目的筛网；
步骤3，制备抗衰老面膜精华液：向海藻酸钠纳米乳中依次添加 中药组分、甘油、黄原胶、β-葡聚糖、维生素E、维生素A、辅酶 Q10、透明质酸、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、BHT、香精，在添加每 一种成分时，向着同一方向进行搅拌，待混合均匀后再添加下一成分， 待所有成分混合均匀后，使用电磁搅拌机搅拌3min，得到抗衰老面 膜精华液；
步骤4，面膜的制备：将无纺面膜布浸入面膜精华液中，即可得 到抗衰老面膜。
实施例1
含鹿茸的抗衰老面膜的制备方法，具体步骤如下：
步骤1，按以下重量份分别称取如下原料：海藻酸钠纳米乳96 份，甘油6份、黄原胶0.2份、β-葡聚糖1份、维生素E 2份、维生 素A0.8份、辅酶Q10 0.1份、透明质酸0.5份、尼泊金甲酯1份、尼 泊金乙酯1份、BHT 0.1份、香精适量；海藻酸钠纳米乳由质量比为 46：23：30：10的吐温-80、无水乙醇、乙酸乙酯和海藻酸钠溶液混 合而成；海藻酸钠溶液的质量浓度为10g/ml；
海藻酸钠纳米乳的制备方法为：将海藻酸钠溶解在去离子水中， 搅拌均匀，放入离心机中进行离心，离心速率为3000r/min，离心时 间为5min，取其上清液作为水相备用，得到海藻酸钠溶液；之后将 吐温-80与无水乙醇混合均匀，加入乙酸乙酯，搅拌均匀后，逐滴滴 加海藻酸钠水溶液，并搅拌，随着溶液的增加，W/O纳米乳发生了 转相，直到形成澄清透明且出现丁达尔效应的O/W海藻酸钠纳米乳。
步骤2，制备中药组分：按以下重量份分别称取如下原料：鹿茸 2份、生地0.4份、红花0.4份、黄芪0.4份、玉竹0.4份、天山雪菊 0.4份，先将鹿茸切片，放入烘箱中烘干，再将黄芪、玉竹、生地黄、 红花和天山雪菊放入烘箱中，烘干；再放入超微粉碎机中粉碎，过筛， 冷藏，得到中药组分；
烘干温度为40℃，烘干时间为8h；过筛时采用120目的筛网；
步骤3，制备抗衰老面膜精华液：将海藻酸钠纳米乳方放入500ml 烧杯中，按顺序向烧杯中添加中药混合粉末、甘油、黄原胶、β-葡聚 糖、维生素E、维生素A、辅酶Q10、透明质酸、尼泊金甲酯、尼 泊金乙酯、BHT、香精，添加时注意用玻棒单向搅拌，待均匀后再添 加下一成分，所有成分混匀后，使用电磁搅拌机搅拌三分钟。
步骤4，面膜的制备：将无纺面膜布浸入面膜精华液中，即可得 到抗衰老面膜。
实施例2
上述含鹿茸的抗衰老面膜的制备方法，具体步骤如下：
步骤1，按以下重量份分别称取如下原料：海藻酸钠纳米乳94 份，甘油5份、黄原胶0.18份、β-葡聚糖0.9份、维生素E 1.8份、 维生素A0.7份、辅酶Q10 0.09份、透明质酸0.4份、尼泊金甲酯0.8 份、尼泊金乙酯0.8份、BHT 0.09份、香精适量；
海藻酸钠纳米乳由质量比为46：23：30：10的吐温-80、无水乙 醇、乙酸乙酯和海藻酸钠溶液混合而成；海藻酸钠溶液的质量浓度为 10g/ml；
步骤2，制备中药组分：按以下重量份分别称取如下原料：鹿茸 2份、生地0.3份、红花0.3份、黄芪0.3份、玉竹0.3份、天山雪菊 0.3份，先将鹿茸切片，放入烘箱中烘干，再将黄芪、玉竹、生地黄、 红花和天山雪菊放入烘箱中，烘干；再放入超微粉碎机中粉碎，过筛， 冷藏，得到中药组分；
烘干温度为40℃，烘干时间为8h；过筛时采用120目的筛网；
步骤3，制备抗衰老面膜精华液：将海藻酸钠纳米乳方放入500ml 烧杯中，按顺序向烧杯中添加中药混合粉末、甘油、黄原胶、β-葡聚 糖、维生素E、维生素A、辅酶Q10、透明质酸、尼泊金甲酯、尼 泊金乙酯、BHT、香精，添加时注意用玻棒单向搅拌，待均匀后再添 加下一成分，所有成分混匀后，使用电磁搅拌机搅拌三分钟。
步骤4，面膜的制备：将无纺面膜布浸入面膜精华液中，即可得 到抗衰老面膜。
实施例3
上述含鹿茸的抗衰老面膜的制备方法，具体步骤如下：
步骤1，按以下重量份分别称取如下原料：按以下重量份分别称 取如下原料：海藻酸钠纳米乳98份，甘油7份、黄原胶0.22份、β- 葡聚糖1.1份、维生素E 2.2份、维生素A0.9份、辅酶Q10 0.11份、 透明质酸0.6份、尼泊金甲酯1.2份、尼泊金乙酯1.2份、BHT0.11 份、香精适量；海藻酸钠纳米乳由质量比为46：23：30：10的吐温 -80、无水乙醇、乙酸乙酯和海藻酸钠溶液混合而成；海藻酸钠溶液 的质量浓度为10g/ml；
步骤2，制备中药组分：按以下重量份分别称取如下原料：鹿茸 2.2份、生地0.5份、红花0.5份、黄芪0.5份、玉竹0.5份、天山雪 菊0.5份，先将鹿茸切片，放入烘箱中烘干，再将黄芪、玉竹、生地 黄、红花和天山雪菊放入烘箱中，烘干；再放入超微粉碎机中粉碎， 过筛，冷藏，得到中药组分；
步骤3，制备抗衰老面膜精华液：将海藻酸钠纳米乳方放入500ml 烧杯中，按顺序向烧杯中添加中药混合粉末、甘油、黄原胶、β-葡聚 糖、维生素E、维生素A、辅酶Q10、透明质酸、尼泊金甲酯、尼 泊金乙酯、BHT、香精，添加时注意用玻棒单向搅拌，待均匀后再添 加下一成分，所有成分混匀后，使用电磁搅拌机搅拌三分钟。
步骤4，面膜的制备：将无纺面膜布浸入面膜精华液中，即可得 到抗衰老面膜。
本发明的抗衰老面膜，各组份的功效分别如下：
抗衰老有效成分的筛选：
(1)鹿茸：根据申请人在鹿茸膏剂抗皮肤衰老的实验研究中发 现，鹿茸含有大量促进组织生长的生物活性物质，成分包括蛋白多肽 类、氨基酸、糖类、生物胺类、甾体类、脂类和无机元素。蛋白多肽 类是鹿茸最主要的活性成分，与抗衰老有关的主要是酶类和生长因子 类。酶类包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、单胺 氧化酶(MAO)等，这些酶类具有抗氧化、抗衰老作用。胰岛素样 生长因子、表皮生长因子等能够促进皮肤成纤维细胞的功能，促进胶 原蛋白和透明质酸的合成。鹿茸中的糖类包括硫酸软骨素、酸性粘多糖、中性糖、半乳糖胺等，这些成分往往具有抗氧化或者保湿的作用。 鹿茸多胺可以抗脂质过氧化，促进核酸和蛋白质合成。鹿茸中的甾体 类包括雌二醇、胆甾醇、5a-雄甾烷-1,3-二酮、睾丸酮、胆甾-3,5-二烯，5a-胆甾-7-烯-3-酮等成分，这些激素类成分能够抑制黑色素细胞酪氨 酸酶活性、促进成纤维细胞增生和增加胶原蛋白和透明纸酸合成、抑 制炎症形成、延缓皮肤衰老；通过实验证明了外用鹿茸膏剂可以有效 改善皮肤衰老。
(2)黄芪：豆科多年生草本植物蒙古黄芪和膜荚黄芪的干燥根， 含有黄芪多糖(APS)还有人参总皂苷(TG)，黄芪具有抗氧化、抗炎、 抗细胞凋、抑制肿瘤等多种生物活性，使用APS或与TG联用均可 提高小鼠抗氧化酶活性，增加了小鼠免疫器官的质量,护肤方剂中使 用黄芪具有维持皮肤的正常组织形态、保养皮肤及抵抗衰老的作用。
(3)玉竹：百合科植物玉竹的干燥根茎，具有扶正固本，养阴 润燥和滋补强壮的功效，玉竹含有多糖、黄酮类等多种生物活性成分， 具有抗氧化、调节免疫等作用，应用于护肤品可以增强组织的SOD 活力，降低MDA以及皮肤保湿和抗衰老功效。
(4)生地：玄参科地黄属植物的块根干燥物，具有滋阴补血清 心滋肾等多重功效，生地含有梓醇具有降低血糖的能力，富含VA， 是一种抗氧化剂也可以消除代谢中产生的游离基。
(5)红花：菊科一年生草本生物，具有活血通络、改善微循环 和抑制血小板减少等药理作用。花中分离得到多种有效成分，其中黄 酮类化合物是最主要的有效成分，黄酮类化合物在生物体内有抗氧 化、防衰老、调节免疫、消炎抗过敏等功效，减少中老龄大鼠LPO的生成。
(6)天山雪菊：也被称为两色金鸡菊，一年生草本植物，含有 大量的黄酮类化合物，具有较高的生物活性，具有细胞保护、抗氧化、 加强血液抗凝和微循环等作用，对二苯基-三硝基苯肼(DPPH)自由 基均有较强的清除活性。
(7)其他抗衰老成分的筛选
维生素E对黑色素、总皱纹面积平均皱纹长度与平均皱纹深度均 有良好的降低作用，对皮肤水分含量、油脂、弹性均有良好的提高作 用，有清除自由基的能力；
透明质酸长期使用对细纹的改善效果明显，重建皮肤细胞外基 质；
辅酶Q10可以渗透表皮活性层，应用可提高了表皮抗氧化的能 力。添加少量VE、透明质酸、辅酶Q10，对抗衰老效果具有辅助效 果。
关于面膜液配方优化
对于配方的评价采用感官评价法，邀请有化妆品使用经验的受试者 10人，根据使用者的个人感受从以下几个方面进行评分，如表1所 示；
表1面膜使用感受的主观评价指标和分值
经过大量单因素实验，我们发现对于每百克海藻酸钠纳米乳，中 药最佳添加量是6g，黄原胶的最佳添加量是0.2g，甘油最佳添加量 是5g，β-葡聚糖的最佳添加量是1.2g，据此我们设计四因素三水平正 交试验，来对配方进行优化，如表2及表3所示；
表2面膜精华液主要成分正交试验因素水平表设计
表3面膜精华液主要成分正交试验表
由正交试验结果可知，四种主要成分对面膜的评价均有影响，其 影响顺序是：甘油＞中药粉末＞β-葡聚糖＞黄原胶。配方的最优方案 为：A1B2C3D1。
面膜最终配方的确定
在面膜的主要成分和配比确定后，我们对面膜的配方进行进一步 的完善，添加辅助抗衰老成分，主要是透明质酸、维生素E、维生素 A、辅酶Q10。还有其他成分包括：香精、防腐剂、抗氧剂(BHT)， 最终配方如表4所示；
表4面膜精华液成分表
本实验以海藻酸钠纳米乳作为基质，通过添加鹿茸、黄芪、生地、 红花、天山雪菊、玉竹等抗衰老中药材，再通过与其他辅料的复配， 制备出以鹿茸海藻多糖为主要基质的抗衰老面膜精华液。
药物有效性的动物实验
为了验证本发明方法制备的面膜具有抗衰老功效，进行如下动物 实验。
1.材料与方法
1.1实验动物
SPF级昆明种小鼠80只，体质量20±2g，雌雄各半；
1.2试验药物和主要试剂
本实验采用铜川鹿苑实业有限公司提供的二杠茸新鲜血片为材 料，鹿茸切片由顶端向下依次为蜡片、粉片、血片和骨片，血片靠近 鹿茸基部，品质中下，能够代表鹿茸的基本药效。
HA测定试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)；HYP测定试剂 盒(南京建成生物工程研究所)；SOD测定试剂盒(南京建成生物 工程研究所)；MDA测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)；BCA 蛋白浓度测定试剂盒(博士德生物工程有限公司)；D-半乳糖(上海 化学试剂二厂)；考马斯亮兰(南京建成生物工程研究所)；青春复 颜弹力乳液(北京同仁堂)；乙酸乙酯(天津富宇)；吐温80(天津富 宇)；EL-40(青岛优索)；RH-40(青岛优索)；EL-35(江苏海安)；海 藻酸钠(食品级，天津福晨)；去离子水(食品级，TIANGEN)；无水乙 醇(天津富宇)；丙三醇(天津富宇)；正丁醇(天津富宇)；PEG300(源叶 生物)；硅酮粉(食品级，东莞市山)；荷荷巴油(化妆品级，西安晶博)； 卡波姆(化妆品级，源叶生物)；黄原胶(食品级，源叶生物)；透明质 酸(源叶生物)；甘油(天津富宇)；丁二醇(天津福晨)；硫酸镁(天 津大茂)；辅酶q10(西安晶博生物)。
1.3主要仪器
超微量微孔板分光光度计(Epoch，美国Bio-Tek公司)；台式高速 离心机(SF-TGL-16GS，上海菲恰尔分析仪器有限公司)；冷冻干燥仪 (CTAL PH2-4/LSC，德国CHRIST公司)；远红外快速恒温干燥箱 (YHG-400-S，上海跃进医疗器械有限公司)；恒温水浴锅(SHHW21.420AⅡ，天津市泰斯特仪器有限公司)；超微粉碎机 (CLF-30B，温岭市创力药材器械厂)；电子天平(电子天平(BSM-1204, 上海卓精电子科技有限公司)；紫光灯T5-8W型(稷山县安壹启电 商商务有限公司)；剃毛器GEA-TM2型(创博环球(北京)生物科 技有限公司)；医用离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司 L530)。
1.4实验方法
1.4.1试验鹿茸抗衰乳液配方高中低三个浓度药物乳液的配制以 及10％鹿茸乳液的配制，如表5所示；
表5试验药物配方
1.4.2分组与造模
首先将80只小鼠适应性饲养7日，小鼠适应现环境后，按照随 机分组的方法将小鼠分成8组，每组雌雄各半。选取其中7组进行 D-半乳糖注射结合紫光灯照射诱导小鼠亚急性衰老模型，具体方法 为：小鼠按照每天120mg/kg注射2％D-半乳糖，再用剃毛器给背部剃毛后以波长365nm紫光灯照射40min，连续造模42天。剩下一组 小鼠作为空白组也予以剃毛，每天注射同体积生理盐水。每五天将正 常对照组和模型组皮肤外观比对拍照记录，42天后将模型组和空白 组皮肤外观比对，模型组明显皮肤松弛，出现细密皱纹，而空白组则相反，如图1及图2所示，比对两组小鼠外观可以发现，模型组小鼠 明显皮肤松弛，出现细密皱纹，而空白组则上述特征不明显，加上后 面的组化分析，都可证明衰老模型造模成功。
1.4.3皮肤外用药物
将7个衰老模型组中的1组作为模型对照组，其他6个分别设置 为5％低剂量抗衰老配方组、10％中剂量抗衰老配方组、15％高剂量 抗衰老配方组、10％鹿茸组、阳性对照组(青春复颜弹力乳液)、化 妆品基质组(除鹿茸、中药、透明质酸、维生素E、辅酶Q10等有效成分外)。具体方法为：除过正常对照组和模型对照组不予处理，其 余各组小鼠背部剃毛，在其裸露皮肤上进行对应的药物涂抹，涂抹剂 量为0.5g/d，涂抹面积为3cm×5cm，连续给药30天。
1.4.4小鼠皮肤的表观特征观察
比对各组小鼠用药部位皮肤的色泽、光滑程度、皱纹等表观特征 并拍照记录。然后脱颈法处死实验小鼠，迅速剥下用药部位皮肤，去 除皮下脂肪和其他结缔组织，铺平后用直径2cm打孔器在正中位置 切取小鼠皮肤用于含水率测定，余下的皮肤于-20℃冷冻保存，用于 测定HYP等成分。
1.4.5皮肤含水率的测定
精确称量打孔器切取的皮肤湿重，随即将其放入烘箱中，于50℃ 烘干12h，然后称取干重，计算出各实验组皮肤含水率。公式如下: 皮肤含水率＝(湿重―干重)/湿重×100％
1.4.6皮肤羟脯氨酸(HYP)含量测定
取涂药部位皮肤组织0.5g，用冰浴预冷的生理盐水进行漂洗，滤 纸擦干，加入冰浴预冷的生理盐水，使用玻璃匀浆器研磨成浓度为 10％的匀浆液。将得到的匀浆液在0℃下3000r/min离心10min，取上 清液。按照HYP试剂盒说明书所示方法，使用超微量微孔板分光光 度计测定OD值，计算各实验组小鼠皮肤HYP含量。
1.4.7皮肤透明质酸(HA)含量测定
取涂药部位皮肤组织0.5g，加入冰浴预冷的PBS缓冲溶液，使 用玻璃匀浆器研磨成浓度为10％的匀浆液。将得到的匀浆液在0℃下 1000r/min离心4min，取上清液。按照HA试剂盒说明书所示方法， 使用超微量微孔板分光光度计测定OD值，计算各实验组小鼠皮肤HA的含量。
1.4.8皮肤超氧化物歧化酶(SOD)活力的测定
取涂药部位皮肤组织0.5g，用冰浴预冷的生理盐水进行漂洗，之 后加入冰浴预冷后的生理盐水，使用玻璃匀浆器研磨成浓度为10％ 的匀浆液。将得到的匀浆液在0℃下3000r/min离心10min，取上清 液。按照SOD试剂盒说明书所示方法，使用超微量微孔板分光光度 计测定OD值，计算各实验组小鼠皮肤SOD活力。
1.4.9皮肤丙二醛(MDA)含量的测定
取脱毛后的皮肤组织0.1g左右,经预冷的生理盐水漂洗,用滤 纸拭干,用该组织的9倍量的预冷生理盐水进行匀浆，制备5％的组 织匀浆，严格按照MDA的试剂盒说明进行测定。
1.5统计学分析
运用SPSS18.0统计软件进行数据分析，计量数据采用均数±标准 差
2.实验结果
2.1皮肤外观比较
观察各组小鼠皮肤发现：与正常组动物比较，模型组小鼠皮肤松 弛，有大量褶皱，体毛再生较慢。涂抹了鹿茸乳液的三组小鼠与模型 组相比，在皮肤褶皱、光滑、松弛等方面都有较为明显的改善，结果 如图3及图4所示，可以看出，在涂抹了乳液一段时间后，在褶皱、 光滑、松弛等皮肤外观特征方面都有较为明显的改善。
2.2鹿茸对衰老小鼠皮肤含水率、HYP含量、HA含量、SOD活 力、MDA含量的测定
小鼠皮肤组织含水率、HYP含量、HA含量、SOD活力、MDA 含量测定结果见表6所示；
表6各实验组皮肤组织含水率、HYP含量、HA含量、SOD活 力、MDA含量的测定(
注：与模型组相比较，*P＜0.01，**P＜0.05；与阳性对照组比较， △P＜0.05，△△＜0.01；与10％鹿茸组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜ 0.01。
模型组小鼠皮肤组织含水率、HYP含量、HA含量、SOD活力 均显著低于空白组(P＜0.05或P＜0.01)，MDA含量极显著高于空 白组(P＜0.01)，说明小鼠的皮肤衰老模型造模成功。
皮肤含水率指标：5％、10％药物浓度对皮肤含水率的提高具有 显著效果，15％对皮肤含水率的提高具有极显著效果，5％、10％药物 浓度和阳性对照组、10％鹿茸组在改善皮肤含水率方面的效果相当， 无统计学差异，而15％浓度组则较阳性组效果显著。。
羟脯氨酸含量指标：5％、10％、15％三个浓度对羟脯氨酸含量的 提高均具有极显著作用，10％、15％两个浓度和阳性对照组比较在提 高羟脯氨酸含量方面效果相当，三个浓度组均比10％鹿茸有显著和极 显著提高羟脯氨酸含量的效果。
透明质酸指标：10％药物组可以显著提高透明质酸含量，15％具 有极显著效果。与阳性对照组比较，10％药物组与阳性组效果相当， 而15％浓度组则较阳性组效果显著。
SOD活力：5％组具有显著增加SOD活力的作用，10％、15％增 强SOD效果极显著。和阳性组比较，5％组显著优于阳性对照组，10％、 15％较阳性组的增强作用则极为显著。
MDA含量：5％浓度组MDA浓度显著低于模型组，10％、15％ 组则极显著低于模型组。说明三个浓度都可以显著降低MDA浓度， 10％浓度组MDA含量降低显著优于阳性组，15％组则效果极显著优 于阳性组。三组均在降低MDA含量的效果均优于10％鹿茸组，但差异不具有统计学意义。
基质组：通过表格内的数据比较，涂抹基质的小鼠皮肤和模型组 比较，在各个指标上均无明显改善，说明抗衰老的效果是由配方中的 药物来实现的。
3.讨论
通过以上实验说明，我们研制鹿茸抗衰老配方在高中低三个浓度 的在上述四个指标方面均具有显著的抗衰老效果，与10％鹿茸组相 比，10％配方组效果更优，说明通过药物复配，提升了药物抗衰老效 果，且降低了制药成本。与阳性对照组相比，在10％浓度下，前三个 指标虽然优于阳性对照组，但不具有显著差异，但是在改善SOD活 力、降低MDA含量方面，优于阳性对照药物，具有极显著的差异。 综上所述，本发明所制备的抗衰老面膜配方能够明显改善皮肤的外观 和组织内的有益于抗衰老的化学成分，减少代谢废物，是一个极具潜 力的配方，可以作为抗衰老化妆品推向市场。
面膜稳定性
本产品面膜液在48℃的干燥箱中恒温24h及4000r/min的 速度下离心30min油水不分层，在-20℃下保温24h后取出恢复室 温油水不分离，具有良好的稳定性。
