抗密蛋白18.2抗体及其用途
背景技术
密蛋白(claudin)是形成紧密细胞连接的重要组分的蛋白质家族。它们建立了控制细胞之间的分子流的细胞旁屏障。该蛋白质在细胞质中具有N末端和C末端。不同的密蛋白在不同的组织上表达，其功能改变与相应组织的癌症形成有关。密蛋白-1在结肠癌中表达，密蛋白-18在胃癌中表达，并且密蛋白-10在肝细胞癌中表达。
密蛋白-18具有两种亚型，亚型1和亚型2。亚型2(密蛋白18.2或CLDN18.2)是高度选择性的细胞谱系标记物。密蛋白18.2在正常组织中的表达严格限于胃粘膜的分化的上皮细胞，但在胃干细胞区却不存在。密蛋白18.2在恶性转化中保留，并且在大部分原发性胃癌及其转移中表达。在胰腺肿瘤、食道肿瘤、卵巢肿瘤和肺肿瘤中也经常发现密蛋白18.2的异位激活。这些数据表明，CLDN18.2在正常组织中具有高度受限的表达模式，并且在多种人类癌症中具有频繁的异位激活。
发明内容
本文发现了抗密蛋白18.2抗体，其与野生型密蛋白18.2和常见突变体M149L都具有高亲和力。因此，这种抗体具有能够靶向野生型和M149L突变型密蛋白18.2蛋白的独特优势。这个优势很重要，这是因为相当一部分癌症患者具有这种常见突变。此外，本公开的抗体不与其他密蛋白18亚型密蛋白18.1结合，因此是高度选择性的。
根据本公开的一个实施方式，提供了一种对野生型人密蛋白18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或该抗体的片段，其中，该抗体或片段还以与野生型CLDN18.2蛋白的亲和力的至少约1％的亲和力与CLDN18.2蛋白的M149L突变体结合，并且其中，抗体或片段还不以比与野生型CLDN18.2蛋白的亲和力的约1％大的亲和力与人野生型密蛋白18.1(CLDN18.1)蛋白结合。在一些实施方式中，抗体或该抗体的片段不结合CLDN18.1蛋白。
在一个实施方式中，还提供了一种对野生型人密蛋白18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或该抗体的片段，其中，抗体或该抗体的片段与野生型CLDN18.2蛋白之间的结合涉及包含以下的氨基酸残基:选自由野生型CLDN18.2蛋白的Y46、G48、L49、W50、C53、V54、R55、E56和S58组成的组的至少一个氨基酸残基；以及选自由野生型CLDN18.2蛋白的Y169和G172组成的组的至少一个氨基酸残基。在一些实施方式中，结合还涉及CLDN18.2蛋白的W30。
在一些实施方式中，结合涉及包含以下的氨基酸残基:野生型CLDN18.2蛋白的W30；选自由野生型CLDN18.2蛋白的G48、L49、W50、C53和E56组成的组的两个或更多个氨基酸残基；以及选自由野生型CLDN18.2蛋白的Y169和G172组成的组的至少一个氨基酸残基。在一些实施方式中，结合涉及包含野生型CLDN18.2蛋白的W30、G48、L49、W50、C53、E56和Y169的氨基酸残基。
还提供了用于治疗疾病和病症的方法和用途。在一个实施方式中，提供了一种在需要治疗癌症的患者中治疗癌症的方法，该方法包括向患者施用本公开的抗体或该抗体的片段。在另一个实施方式中，提供了一种在需要治疗癌症的患者中治疗癌症的方法，该方法包括:(a)用本公开的抗体或抗体的片段在体外处理细胞；以及(b)将处理的细胞施用于患者。
附图说明
图1示出了通过流式细胞术，DNA免疫后的所有小鼠的小鼠血清与用CLD 18A2转染的HEK293细胞具有高滴定反应，CLD 18A1作为阴性对照。
图2示出了通过细胞ELISA或流式细胞术，杂交瘤上清液可以结合用人CLD18A2转染的HEK293细胞。
图3示出了通过流式细胞术，与阳性参考抗体相比，纯化的鼠抗体可以以高EC 50结合用人CLD18A2转染的MKN45细胞。
图4示出了通过流式细胞术，纯化的鼠抗体可以以高EC50结合内源性表达携带M149L突变的人CLD18A2的SU620细胞，而参考抗体则不可以。
图5示出了通过流式细胞术，纯化的鼠抗体可以以高EC50结合用小鼠CLD18A2转染的HEK293细胞。
图6示出了通过流式细胞术，纯化的鼠抗体可以以高EC50结合用猕猴CLD18A2转染的HEK293细胞。
图7示出了通过流式细胞术，纯化的鼠抗体可以以高EC50结合用人CLD18A2转染的HEK293细胞。
图8示出了通过流式细胞术，与阳性参考抗体相比，嵌合抗体可以以高EC50结合用人CLD18A2转染的MKN45细胞。
图9示出了通过流式细胞术，嵌合抗体不能结合至用人CLD18A1转染的MKN45细胞。
图10示出了通过流式细胞术，与阳性参考抗体相比，人源化抗体可以以高EC50结合用人CLD18A2转染的MKN45细胞。
图11示出了通过流式细胞术，人源化抗体不能结合用人CLD18A1转染的MKN45细胞。
图12示出了通过流式细胞术，与阳性参考抗体相比，具有CDR突变的人源化抗体可以以高EC50结合用人CLD18A2转染的MKN45细胞。
图13示出了通过流式细胞术，具有CDR突变的人源化抗体不能结合用人CLD18A1转染的MKN45细胞。
图14示出了去风险变体与细胞表面CLD18A2具有有效的结合。
图15示出了CLD18A2的某些突变对与转染了这些突变体的HEK293细胞结合的所示抗体具有显著影响，表明这些氨基酸残基构成表位的至少一部分。
图16示出了与175D10相比，抗体4F11E2、抗体72C1B6A3和抗体120B7B2在密蛋白18.2高和低CHO-K1细胞中都具有优异的结合。
图17示出了使用175D10抗体作为参考，4F11E2、72C1B6A3和120B7B2的有效ADCC测试结果。
图18示出了在ADCC测定中，4F11E2、72C1B6A3和120B7B2的S239D/I332E版本优于175D10副本。
图19示出了4F11E2、72C1B6A3和120B7B2也具有比175D10更好的ADCP效果。
具体实施方式
定义
应当注意的是，术语“一个(a)”或“一种(an)”实体是指一个或多个该实体；例如，“一个(种)抗体”应当理解为代表一个(种)或多个(种)抗体。因此，术语“一个”(或“一种”)、“一个(种)或多个(种)”和“至少一个(种)”在本文中可以互换使用。
如本文中所使用的，术语“多肽”旨在涵盖单数的“多肽”以及复数的“多肽”，并且是指由通过酰胺键(也称为肽键)线性连接的单体(氨基酸)构成的分子。术语“多肽”是指两个或更多个氨基酸的任何一个链或多个链，并且不是指产物的特定长度。因此，在“多肽”的定义中包括肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或任何其他用于指代两个或更多个氨基酸的一个链或多个链的术语，并且术语“多肽”可以代替这些术语中的任何术语使用或者与这些术语中的任何术语互换使用。术语“多肽”还指多肽表达后修饰的产物，包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解切割或通过非天然存在的氨基酸修饰。多肽可以源自天然生物来源或者通过重组技术产生，而不一定从指定的核酸序列翻译而来。多肽可以以任何方式(包括通过化学合成)而产生。
如本文中所使用的关于细胞、核酸比如DNA或RNA的术语“分离的”是指分别与存在于大分子的天然来源中的其他DNA或RNA分离的分子。如本文中所使用的术语“分离的”还指当通过重组DNA技术产生时基本上不含细胞物质、病毒物质或培养基，或者当化学合成时基本上不含化学前体或其他化学品的核酸或肽。此外，“分离的核酸”意指包括并非作为片段天然存在的并且在天然状态下不存在的核酸片段。术语“分离的”在本文中还用于指从其他细胞蛋白质或组织分离的细胞或多肽。分离的多肽意指涵盖纯化的和重组的多肽。
如本文中所使用的，术语“重组”在涉及多肽或多核苷酸时意指天然不存在的多肽或多核苷酸的形式，其非限制性实例可以通过将通常不会一起出现的多核苷酸或多肽组合而产生。
“同源性”或“同一性”或“相似性”是指两个肽之间或两个核酸分子之间的序列相似性。同源性可以通过比较每个序列中的位置来确定，所述位置可以为了比较的目的而比对。当比较序列中的位置被相同的碱基或氨基酸占据时，则分子在该位置处是同源的。序列之间的同源性程度是序列共享的匹配或同源位置数目的函数。“不相关”或“非同源”序列与本公开的序列中的一个序列共享小于40％的同一性，但优选地小于25％的同一性。
多核苷酸或多核苷酸区(或多肽或多肽区)与另一序列具有一定百分比(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)的“序列同一性”是指，比对后，比较两个序列时相同碱基(或氨基酸)的百分比。这种比对和同源性或序列同一性百分比可以使用本领域已知的软件程序来确定，例如Ausubel等人编辑的(2007)分子生物学中的现有方案(Current Protocols in Molecular Biology)中所描述的那些软件程序。优选地，使用默认参数比对。一种比对程序是使用默认参数的BLAST。特别地，程序是使用以下默认参数的BLASTN和BLASTP：遗传密码＝标准；过滤器＝无；链＝两者；临界值＝60；期望值＝10；矩阵＝BLOSUM62；描述＝50序列；排序方式＝高分；数据库＝非冗余，GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBank CDS翻译+SwissProtein+SPupdate+PIR。生物等效多核苷酸是具有上述指定百分比同源性并编码具有相同或相似生物活性的多肽的多核苷酸。
术语“等效核酸或多核苷酸”是指具有与核酸或其互补物的核苷酸序列具有一定程度的同源性或序列同一性的核苷酸序列的核酸。双链核酸的同源物旨在包括具有与其互补物具有一定程度同源性的核苷酸序列的核酸。一方面，核酸的同源物能够与核酸或其互补物杂交。同样地，“等效多肽”是指与参考多肽的氨基酸序列具有一定程度的同源性或序列同一性的多肽。在一些方面，序列同一性为至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％。在一些方面，与参考多肽或多核苷酸相比，等效多肽或多核苷酸具有一个、两个、三个、四个或五个添加、缺失、取代及其组合。在一些方面，等效序列保留参考序列的活性(例如，表位结合)或结构(例如，盐桥)。
杂交反应可以在不同“严格性”的条件下进行。通常，低严格性杂交反应是在约40℃下在约10×SSC或等离子强度/温度的溶液中进行的。中度严格性杂交通常在约50℃下在约6×SSC中进行，并且高严格性杂交反应通常在约60℃下在约1×SSC中进行。杂交反应也可以在本领域技术人员公知的“生理条件”下进行。生理条件的非限制性实例是通常在细胞中发现的温度、离子强度、pH和Mg2+浓度。
多核苷酸由四个核苷酸碱基的特定序列构成：腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)和胸腺嘧啶(T)，以及当多核苷酸为RNA时用于胸腺嘧啶的尿嘧啶(U)。因此，术语“多核苷酸序列”是多核苷酸分子的字母表示。该字母表示可以输入到具有中央处理单元的计算机中的数据库中，并且用于生物信息学应用，比如功能基因组学和同源性搜索。术语“多态性”是指一种以上形式的基因或其部分并存。具有至少两种不同形式，即，两种不同核苷酸序列的基因的一部分被称为“基因的多态性区”。多态性区可以是单个核苷酸，其同一性在不同等位基因中不同。
术语“多核苷酸”和“寡核苷酸”可以互换使用，并且是指任何长度的核苷酸的聚合形式，即，脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。多核苷酸可以具有任何三维结构，并且可以执行任何已知或未知的功能。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段(例如，探针、引物、EST或SAGE标签)、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA、核糖体RNA、核酶、cDNA、dsRNA、siRNA、miRNA、重组多核苷酸、分支多核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离的DNA、任何序列的分离的RNA、核酸探针和引物。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，比如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。如果存在，可以在多核苷酸组装之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰。核苷酸序列可以被非核苷酸组分中断。多核苷酸可以在聚合后进一步修饰，比如通过与标记组分缀合。该术语还指双链分子和单链分子。除非另有说明或要求，否则作为多核苷酸的本公开的任何实施方式既涵盖双链形式，也涵盖已知或预测构成双链形式的两个互补单链形式中的每个单链形式。
当应用于多核苷酸时，术语“编码”是指如果在其天然状态下或者当通过本领域技术人员公知的方法操作时，其可以被转录和/或翻译以产生多肽和/或其片段的mRNA，则被称为“编码”多肽的多核苷酸。反义链是这种核酸的互补物，并且可以从其推导编码序列。
如本文中所使用的，“抗体”或“抗原结合多肽”是指特异性识别并结合抗原的多肽或多肽复合物。抗体可以是完整抗体及其任何抗原结合片段或单链。因此，术语“抗体”包括含有分子的任何蛋白质或肽，所述分子包含具有与抗原结合的生物学活性的免疫球蛋白分子的至少一部分。这样的实例包括但不限于重链或轻链的互补决定区(CDR)或其配体结合部分、重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、框架(FR)区或其任何部分、或结合蛋白的至少一部分。
如本文中所使用的术语“抗体片段”或“抗原结合片段”是抗体的一部分，比如F(ab')2，F(ab)2、Fab'、Fab、Fv、scFv等。无论结构如何，抗体片段都与完整抗体识别的相同抗原结合。术语“抗体片段”包括适体、镜像异构体和双抗体。术语“抗体片段”还包括通过与特定抗原结合形成复合物而像抗体一样起作用的任何合成或遗传工程化的蛋白质。
“单链可变片段”或“scFv”是指免疫球蛋白的重链(VH)和轻链(VL)的可变区的融合蛋白。在一些方面，所述区与10个至约25个氨基酸的短接头肽连接。接头可以富含甘氨酸以提高柔韧性，并且富含丝氨酸或苏氨酸以提高溶解度，并且可以将VH的N末端与VL的C末端相连，反之亦然。尽管去除了恒定区并引入了接头，该蛋白仍保留了原始免疫球蛋白的特异性。ScFv分子是本领域已知的，并且描述于例如美国专利5,892,019中。
术语抗体包括可以生化区分的各种广泛类别的多肽。本领域技术人员将理解的是，重链被分类为γ、μ、α、δ或ε，其中，有一些亚类(例如，γ1-γ4)。该链的性质决定了抗体的“类别”分别为IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋白亚类(同种型)例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5等已被很好地表征并且已知赋予功能专一性。鉴于本公开，这些类别和同种型中的每个的修饰形式对于本领域技术人员而言是容易辨别的，并且因此在本公开的范围内。所有免疫球蛋白类别显然都在本公开的范围内，以下讨论通常将针对免疫球蛋白分子的IgG类别。关于IgG，标准免疫球蛋白分子包含两个相同的分子量约为23,000道尔顿的轻链多肽和两个相同的分子量为53,000-70,000的重链多肽。四个链通常以“Y”构型通过二硫键连结，其中，轻链包围重链，始于“Y”的口部并且持续穿过可变区。
本公开的抗体、抗原结合多肽、变体或其衍生物包括但不限于多克隆、单克隆、多特异性、人、人源化、灵长动物化或嵌合抗体、单链抗体、表位结合片段例如Fab、Fab'和F(ab')2、Fd、Fvs、单链Fvs(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fvs(sdFv)、包括VK或VH结构域的片段、由Fab表达文库产生的片段、以及抗独特型(抗-Id)抗体(例如包括针对本文公开的LIGHT抗体的抗-Id抗体)。本公开的免疫球蛋白或抗体分子可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。
轻链被分类为κ或λ(κ、λ)。每个重链类别可以与κ或λ轻链结合。通常，轻链和重链彼此共价键合，并且当免疫球蛋白由杂交瘤、B细胞或遗传工程化的宿主细胞产生时，两条重链的“尾巴”部分通过共价二硫连接或非共价连接彼此结合。在重链中，氨基酸序列从Y构型的叉状末端的N末端延伸至每个链的底部的C末端。
轻链和重链均被分成结构和功能同源的区。术语“恒定”和“可变”在功能上使用。在这方面，应当理解的是，轻链部分的可变结构域(VK)和重链部分的可变结构域(VH)决定了抗原识别和特异性。相反，轻链的恒定结构域(CK)和重链的恒定结构域(CH1、CH2或CH3)赋予重要的生物学特性，比如分泌、经胎盘的移动性、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区结构域的编号随着它们变得更远离抗体的抗原结合位点或氨基端而增加。N末端部分是可变区，而C末端部分是恒定区；CH3和CK结构域实际上分别包含重链和轻链的羧基端。
如上所述，可变区允许抗体选择性地识别并特异性结合抗原上的表位。即，抗体的VK结构域和VH结构域或者互补决定区(CDR)的子集组合以形成限定三维抗原结合位点的可变区。这种四级抗体结构形成了Y的每个臂的端部处的抗原结合位点。更具体地，抗原结合位点由VH链和VK链中的每一者上的三个CDR(即，CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)限定。在一些情况下，例如某些衍生自骆驼科动物物种或基于骆驼科动物免疫球蛋白设计的免疫球蛋白分子、完整的免疫球蛋白分子可以仅由重链构成，而没有轻链。参见例如Hamers-Casterman等，Nature 363:446-448(1993)。
在天然存在的抗体中，存在于每个抗原结合结构域中的六个“互补决定区”或“CDR”是短的、非连续的氨基酸序列，当抗体在水性环境中呈现其三维构型时，其被特异性地定位以形成抗原结合结构域。抗原结合结构域中的其余氨基酸(称为“框架”区)显示出较小的分子间变异性。构架区在很大程度上采用β-折叠构象，并且CDR形成环，所述环连接β-折叠结构并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。因此，框架区用于形成支架，该支架通过链间非共价相互作用将CDR以正确取向定位。由定位的CDR形成的抗原结合结构域限定了与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。该互补表面促进抗体与其同源表位的非共价结合。本领域普通技术人员可以容易地针对任何给定的重链可变区或轻链可变区鉴定出分别包含CDR和框架区的氨基酸，因为它们已经被精确地定义(参见“Sequences of Proteinsof Immunological Interest”，Kabat，E.等，美国卫生与公共服务部，(1983)；和Chothia和Lesk，J.MoI.Biol.，196:901-917(1987))。
在本领域内使用和/或接受的术语有两个或更多个定义的情况下，除非明确相反地指出，否则本文所用术语的定义旨在包括所有这些含义。具体实例是使用术语“互补决定区”(“CDR”)来描述在重链多肽和轻链多肽的可变区内发现的非连续抗原结合位点。该特定区已经在Kabat等，美国卫生与公共服务部，“Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest”(1983)和Chothia等，J.MoI.Biol.196:901-917(1987)中描述，其全部内容通过参引并入本文。当彼此比较时，根据Kabat和Chothia的CDR定义包括氨基酸残基的重叠或子集。然而，任何一种定义的应用指代抗体或其变体的CDR都意图在如本文所定义和使用的术语的范围内。下表中列出了涵盖由上述引用的参考文献中的每个参考文献所定义的CDR的合适的氨基酸残基作为比较。涵盖特定CDR的确切残基数目将根据CDR的序列和大小而变化。鉴于抗体的可变区氨基酸序列，本领域技术人员可以常规地确定哪些残基包含特定的CDR。
Kabat等还定义了适用于任何抗体的可变结构域序列的编号系统。本领域普通技术人员可以明确地将该“Kabat编号”系统分配给任何可变结构域序列，而无需依赖序列本身以外的任何实验数据。如本文中所使用的，“Kabat编号”是指由Kabat等，美国卫生和公共服务部，“Sequences of Proteins of Immunological Interest”(1983)提出的编号系统。
除了上表之外，Kabat编号系统如下描述了CDR区：CDR-H1始于大约第31个氨基酸(即，在第一半胱氨酸残基之后的大约9个残基)，包括大约5-7个氨基酸，并且终止于下一个色氨酸残基。CDR-H2始于CDR-H1末端之后的第十五个残基，包括大约16-19个氨基酸，并且终止于下一个精氨酸或赖氨酸残基。CDR-H3始于CDR-H2末端之后的大约第三十三个氨基酸残基，包括3-25个氨基酸，并且终止于序列W-G-X-G，其中，X是任何氨基酸。CDR-L1始于大约第24个残基(即，在半胱氨酸残基之后)，包括大约10-17个残基，并且终止于下一个色氨酸残基。CDR-L2始于CDR-L1末端之后的大约第十六个残基并且包括大约7个残基。CDR-L3始于在CDR-L2的末端之后(即，在半胱氨酸残基之后)的大约第三十三个残基，包括大约7-11个残基，并且终止于序列F或W-G-X-G，其中，X是任何氨基酸。
本文公开的抗体可以来自任何动物来源，包括鸟类和哺乳动物。优选地，抗体是人、鼠、驴、兔、山羊、豚鼠、骆驼、美洲驼、马或鸡的抗体。在另一个实施方式中，可变区可以来源于condricthoid(例如，来自鲨鱼)。
如本文中所使用的，术语“重链恒定区”包括衍生自免疫球蛋白重链的氨基酸序列。包含重链恒定区的多肽包含下述中的至少一者：CH1结构域、铰链(例如，上部铰链区、中间铰链区和/或下部铰链区)结构域、CH2结构域、CH3结构域、或其变体或片段。例如，用于本公开的抗原结合多肽可以包含：包含CH1结构域的多肽链；包含CH1结构域、铰链结构域的至少一部分和CH2结构域的多肽链；包含CH1结构域和CH3结构域的多肽链；包含CH1结构域、铰链结构域的至少一部分和CH3结构域的多肽链；或者包含CH1结构域、铰链结构域的至少一部分、CH2结构域和CH3结构域的多肽链。在另一个实施方式中，本公开的多肽包含含有CH3结构域的多肽链。此外，用于本公开的抗体可以缺少CH2结构域的至少一部分(例如，CH2结构域的全部或部分)。如上所述，本领域普通技术人员将理解的是，可以修饰重链恒定区，使得其在氨基酸序列上与天然存在的免疫球蛋白分子不同。
本文公开的抗体的重链恒定区可以衍生自不同的免疫球蛋白分子。例如，多肽的重链恒定区可以包含衍生自IgG1分子的CH1结构域和衍生自IgG3分子的铰链区。在另一个实例中，重链恒定区可以包含部分衍生自IgG1分子并且部分衍生自IgG3分子的铰链区。在另一个实例中，重链部分可以包含部分衍生自IgG1分子并且部分衍生自IgG4分子的嵌合铰链。
如本文中所使用的，术语“轻链恒定区”包括衍生自抗体轻链的氨基酸序列。优选地，轻链恒定区包括恒定κ结构域或恒定λ结构域中的至少一者。
“轻链-重链对”是指轻链和重链的集合，其可以通过轻链的CL结构域与重链的CH1结构域之间的二硫键形成二聚体。
如前所述，各种免疫球蛋白类别的恒定区的亚基结构和三维构型是公知的。如本文中所使用的，术语“VH结构域”包括免疫球蛋白重链的氨基末端可变结构域，并且术语“CH1结构域”包括免疫球蛋白重链的第一(最氨基末端)恒定区结构域。CH1结构域与VH结构域相邻，并且在免疫球蛋白重链分子的铰链区的氨基末端。
如本文中所使用的，术语“CH2结构域”包括重链分子的部分，例如使用常规编号方案该部分从抗体的大约残基244延伸至残基360(残基244-360，Kabat编号系统；以及残基231-340，EU编号系统；参见Kabat等，美国卫生与公共服务部，“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”(1983年)。CH2结构域的独特之处在于它与另一结构域不紧密配对。相反，在完整的天然IgG分子的两个CH2结构域之间插入有两个N-链接的分支糖链。还充分证明CH3结构域从CH2结构域延伸至IgG分子的C末端，并且包含约108个残基。
如本文中所使用的，术语“铰链区”包括重链分子的将CH1结构域连结至CH2结构域的部分。该铰链区包含大约25个残基并且是柔性的，因此允许两个N末端抗原结合区独立移动。铰链区可以细分为三个不同的结构域:上部铰链结构域、中间铰链结构域和下部铰链结构域(Roux等，J.Immunol 161:4083(1998))。
如本文中所使用的，术语“二硫键”包括在两个硫原子之间形成的共价键。氨基酸半胱氨酸包含可以与第二巯基形成二硫键或者与第二巯基桥连的巯基。在大多数天然存在的IgG分子中，CH1区和CK区通过二硫键连接，并且两个重链通过与使用Kabat编号系统239和242对应的位置处(位置226或229，EU编号系统)的两个二硫键连接。
如本文中所使用的，术语“嵌合抗体”将被保持为意指其中免疫反应性区域或位点获自或衍生自第一物种并且恒定区(其可以是根据本公开的完整的、部分的或经修饰的)获自第二物种的任何抗体。在某些实施方式中，靶结合区域或位点将来自非人类来源(例如小鼠或灵长类)，而恒定区是人类。
如本文中所使用的，“人源化百分比”是通过确定人源化结构域与种系结构域之间的框架氨基酸差异(即，非CDR差异)的数目，从氨基酸总数中减去该数目，然后将其除以氨基酸总数再乘以100而计算出的。
所谓“特异性结合”或“对……具有特异性”通常是指抗体通过其抗原结合结构域与表位结合，并且该结合需要在抗原结合结构域与表位之间具有一些互补性。根据该定义，当抗体通过其抗原结合结构域结合该表位比其结合随机的无关表位更容易时，该抗体被称为"特异性结合"表位。术语“特异性”在本文中用于限定某种抗体与某种表位结合的相对亲和力。例如，抗体“A”可以被认为对给定表位具有比抗体“B”更高的特异性，或者抗体“A”可以说以比其对相关表位“D”更高的特异性结合表位“C”。
如本文中所使用的，术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”是指治疗性治疗和预防性或防预性措施，其中，目的是预防或减缓(减轻)不希望的生理变化或病症，比如癌症的进展。有益的或期望的临床结果包括但不限于症状减轻、疾病程度减轻、疾病状态稳定(即，不恶化)、疾病进展延迟或减慢、疾病状态改善或减轻、以及缓解(无论是部分的还是完全的)，无论是可检测的还是不可检测的。“治疗”还可能意味着与未接受治疗的预期生存期相比生存期延长。需要治疗的那些对象包括已经患有该疾病或病症的那些对象、以及倾向于患有该疾病或病症的那些对象、或其中要预防该疾病或病症的那些对象。
“受试者”或“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”是指对其来说期望进行诊断、预后或治疗的任何受试者，特别是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括人、家畜、农场动物，以及动物园、运动或宠物动物，比如狗、猫、豚鼠、兔子、大鼠、小鼠、马、牛、奶牛等。
如本文中所使用的，短语诸如“给予需要治疗的患者”或“需要治疗的受试者”包括将受益于施用本公开的抗体或组合物的受试者(比如哺乳动物受试者)，所述抗体或组合物用于例如检测、诊断程序和/或治疗。
抗密蛋白18.2抗体
本公开提供了对野生型密蛋白18.2和常见突变体M149L(内源性表达该突变的SU620细胞)都具有高亲和力的抗密蛋白18.2抗体。据发明人所知，所有当前已知的抗密蛋白18.2蛋白均不与该突变体结合。因此，本公开的抗体具有能够靶向野生型和M149L突变型密蛋白18.2蛋白的独特优势。该优势是重要的，这是因为很大一部分癌症患者都带有这种常见突变。还值得注意的是，本公开的抗体不与另一密蛋白18亚型密蛋白18.1结合(或以低得多的亲和力结合密蛋白18.1)。
实施例中的实验表明，密蛋白18.2蛋白的第一胞外片段和第二胞外片段中的某些氨基酸参与或以其他方式影响了目前公开的抗体与该蛋白的结合。更具体地，示出了氨基酸残基的三个簇代表抗体的表位。第一簇包括W30，其在密蛋白18.2蛋白的第一细胞外结构域的第一部分中。包括N45、Y46、G48、L49、W50、C53、V54、R55、E56、S58、F60、E62和C63在内的第二簇也位于第一细胞外结构域中。另一方面，包括Y169和G172的第三簇位于第二细胞外结构域处或附近。
即使当使用临床候选物作为参考时，本公开的抗体和片段也显示出优异的特性。175D10(IMAB362)目前正在进行III期临床试验，用于治疗胃和胃食管交界处的腺癌。与175D10相比，本公开的抗体和片段不仅显示出更强的结合活性，而且在各种不同条件下还表现出更高的ADCC和ADCP活性。
预期这些新抗体和片段的改进的特性归因于这些抗体和片段与正在开发的那些抗体和片段(比如175D10)相比具有更高的结合特异性。例如，175D10与密蛋白18.2的相互作用在图15的光谱中是强的，其包括与D28、Q33、N38和V43以及与G59和V79的强结合。相比之下，新抗体4F11E2、72C1B6A3和120B7B2对第一细胞外结构域的前半部分内的W30具有更高的特异性，并且对第一细胞外结构域的后半部分内的G48至E56具有更高的特异性。新抗体还具有与Y46和S58的稍微更强的结合，Y46和S58也在后半部分中。它们与D28、Q33、N38、V43、G59和V79的结合相当弱(或无功能)，这可能有助于新抗体的改善的ADCC和ADCP。
人密蛋白18.2序列
根据本公开的一个实施方式，提供了对野生型人密蛋白18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中，该抗体或片段进一步与CLDN18.2蛋白的M149L突变体结合。在一些实施方式中，该抗体或片段不结合人野生型密蛋白18.1(CLDN18.1)蛋白，或者不以比与野生型CLDN18.2蛋白的亲和力的约1％大的亲和力结合CLDN18.1。
抗体或片段对蛋白质的结合亲和力可以通过本领域已知的许多方法来测量。例如，可以使用独立的CLDN18.1或CLDN18.2蛋白进行无细胞实验来测定。然而，优选地，使用模拟实际结合环境的细胞表面上的CLDN18.1或CLDN18.2蛋白进行测量。在实验实施例中充分例示了这种结合测定。
在一些实施方式中，抗体或其片段对M149L突变体的结合亲和力为对野生型CLDN18.2蛋白的亲和力的至少1％，或至少0.001％、0.01％、0.1％、0.5％、2％、3％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％。
在一些实施方式中，抗体或其片段不结合人CLDN18.1。在一些实施方式中，与结合CLDN18.2相比，抗体或其片段与人CLDN18.1的结合弱得多，例如不大于10％、5％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、0.01％、0.005％或0.001％，但不限于此。
如上所述，本公开的抗体及其片段在与已知抗体不同的表位上结合密蛋白18.2蛋白(参见图4，至少参考抗体与M149相互作用，而目前公开的抗体不与M149相互作用)。因此，在一个实施方式中，提供了对野生型人密蛋白18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中，抗体或其片段与野生型CLDN18.2蛋白之间的结合涉及氨基酸残基，所述氨基酸残基包含选自由野生型CLDN18.2蛋白的Y46、G48、L49、W50、C53、V54、R55、E56和S58组成的组的至少一个氨基酸残基；以及选自由野生型CLDN18.2蛋白的Y169和G172组成的组的至少一个氨基酸残基。在一些实施方式中，结合还涉及CLDN18.2蛋白的一个或多个W30。
在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的N45。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的Y46。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的G48。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的L49。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的W50。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的C53。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的V54。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的R55。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的E56。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的E58。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的F60。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的E62。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的C63。
在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合选自G48、L49、W50、C53、V54、R55和E56的至少两个氨基酸残基。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合选自G48、L49、W50、C53、V54、R55和E56的至少三个氨基酸残基。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合选自G48、L49、W50、C53、V54、R55和E56的至少四个氨基酸残基。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合选自G48、L49、W50、C53、V54、R55和E56的至少五个氨基酸残基。
在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合选自Y46、G48、L49、W50、C53、V54、R55、E56和S58的至少两个氨基酸残基。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合选自Y46、G48、L49、W50、C53、V54、R55、E56和S58的至少三个氨基酸残基。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合选自Y46、G48、L49、W50、C53、V54、R55、E56和S58的至少四个氨基酸残基。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合选自Y46、G48、L49、W50、C53、V54、R55、E56和S58的至少五个氨基酸残基。
在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的至少Y169。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合CLDN18.2的至少G172。在一些实施方式中，所述抗体或其片段结合选自CLDN18.2的Y169和G172的至少两个氨基酸残基。
在一些实施方式中，结合涉及包含野生型CLDN18.2蛋白中的W 30的氨基酸残基；选自由野生型CLDN18.2蛋白中的G48、L49、W50、C53和E56组成的组的两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸残基；以及选自由野生型CLDN18.2蛋白的Y169和G172组成的组的至少一个氨基酸残基。在一些实施方式中，结合涉及包含野生型CLDN18.2蛋白的W30、G48、L49、W50、C53、E56和Y169的氨基酸残基。
在一些实施方式中，抗体或其片段与野生型CLDN18.2蛋白之间的结合至少涉及Y46和/或S58。在一些实施方式中，抗体或其片段与野生型CLDN18.2蛋白之间的结合不涉及N38或V43。在一些实施方式中，抗体或其片段与野生型CLDN18.2蛋白之间的结合不涉及D28、Q33、N38、V43、G59和V79，或者具有与D28、Q33、N38、V43、G59和V79中的一者、两者、三者、四者或全部较弱的结合。
与其他氨基酸比如G48、L49、W50、C53、V54、R55、E56相比，在CLDN18.2上与这些氨基酸的结合较弱。在一些实施方式中，比较是针对在相同氨基酸处与175D10的结合。例如，本公开的抗体或片段与D28、Q33、N38、V43、G59和V79中的至少一者、两者、三者、四者、五者或全部的结合弱于175D10(IMGT/2D结构-DB卡号:10473)的结合。
在一些实施方式中，抗体或其片段不结合CLDN18.2蛋白的M149L。在一些实施方式中，抗体或其片段结合CLDN18.2蛋白的M149L突变体。
根据本公开的一个实施方式，提供了一种抗体或其片段，该抗体或其片段包括重链可变结构域和轻链可变结构域，重链可变结构域和轻链可变结构域具有如表A和表A'的CDR组合中所示的CDR区。
表A.被测抗体的CDR组合
表A’.被测抗体的CDR组合(Kabat编号)
表B.120B7B2的CDR
表C.72C1B6A3的CDR
表D.4F11E2的CDR
表B’.120B7B2的CDR(Kabat编号)
表C’.72C1B6A3的CDR(Kabat编号)
表D’.4F11E2的CDR(Kabat编号)
包含这些CDR区的抗体，无论是小鼠的、人源化的、还是嵌合的都具有有效的密蛋白18.2结合和抑制活性。如实施例11和12所示，可以修饰CDR内的某些残基，以保留或改善性质或者降低其具有翻译后修饰(PTM)的可能性。这种修饰的CDR可以称为亲和力成熟的或去风险的CDR。
在表B-表D和表B’-表D’的第三列中提供了去风险CDR的非限制性实例。亲和力成熟的CDR可以包括具有一个、两个或三个氨基酸添加、缺失和/或取代的CDR。在一些实施方式中，取代可以是保守取代。
“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代的取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义，包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，免疫球蛋白多肽中的非必需氨基酸残基优选地被来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基取代。在另一个实施方式中，氨基酸串可以用结构上相似的串替换，所述结构上相似的串在侧链家族成员的顺序和/或组成上不同。
下表中提供了保守氨基酸取代的非限制性实例，其中，相似性得分为0或更高指示两个氨基酸之间的保守取代。
表E.氨基酸相似度矩阵
表F.保守氨基酸取代
因此，在一个实施方式中，提供了一种与野生型人claudin 18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中，该抗体或其片段包含含有轻链互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区以及含有重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，并且其中，CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3选自表A或表A’的组合1-33，或者选自其中CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3中的一者或更多者各自包括一个、两个或三个氨基酸添加、缺失、保守氨基酸取代或其组合的组合1-33中的每一者。
在一些实施方式中，提供了抗CLDN18.2抗体或片段，该抗CLDN18.2抗体或片段包括CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3，其各自选自表A或者表B-表D。例如，提供了对野生型人密蛋白18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中，该抗体或其片段包含含有轻链互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区以及含有重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，并且其中，CDRL1包含选自由SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:12和SEQ ID NO:31-38组成的组的氨基酸序列，或者包含通过一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失、氨基酸取代而衍生自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:31-38中的任一者的氨基酸序列；CDRL2包含选自由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:39-41组成的组的氨基酸序列，或者包含通过氨基酸的添加、缺失、氨基酸取代而衍生自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:39-41中的任一者的氨基酸序列；CDRL3包含选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:42-58的组的氨基酸序列，或者包含通过一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失、氨基酸取代而衍生自SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:42-58中的任一者的氨基酸序列；CDRH1包含选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:59-76的组的氨基酸序列，或者包含通过一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失、氨基酸取代而衍生自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:59-76中的任一者的氨基酸序列；CDRH2包含选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:77-95的组的氨基酸序列，或者包含通过一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失、氨基酸取代而衍生自SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:77-95中的任一者的氨基酸序列；并且CDRH3包含选自SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:96-116的组的氨基酸序列，或者包含通过一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失、氨基酸取代而衍生自SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:96-116中的任一者的氨基酸序列。
在一些实施方式中，CDRL1包含选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:17-18、SEQ ID NO:23-24和SEQ ID NO:31-38的组的氨基酸序列；CDRL2包含选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:39-41的组的氨基酸序列；CDRL3包含选自SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:19-20和SEQ ID NO:42-58的组的氨基酸序列；CDRH1包含选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:59-76的组的氨基酸序列；CDRH2包含选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:25-26和SEQ ID NO:77-95的组的氨基酸序列；并且CDRH3包含选自SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:27-29和SEQ ID NO:96-116的组的氨基酸序列。
在一些实施方式中，提供了抗CLDN18.2抗体或片段，该抗CLDN18.2抗体或片段包括CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3，其各自选自表A’或者表B’-表D’。例如，提供了对野生型人密蛋白18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中，该抗体或其片段包含含有轻链互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区以及含有重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，并且其中，CDRL1包含选自SEQ ID NO:208-226的组的氨基酸序列，或者包含通过一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失、氨基酸取代而衍生自SEQ ID NO:208-226中的任一者的氨基酸序列；CDRL2包含选自SEQ ID NO:227-233的组的氨基酸序列，或者包含通过氨基酸的添加、缺失、氨基酸取代而衍生自SEQ ID NO:227-233中的任一者的氨基酸序列；CDRL3包含选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:42-58的组的氨基酸序列，或者包含通过一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失、氨基酸取代而衍生自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:13、SEQ IDNO:19和SEQ ID NO:42-58中的任一者的氨基酸序列；CDRH1包含选自SEQ ID NO:234-254的组的氨基酸序列，或者包含通过一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失、氨基酸取代而衍生自SEQ ID NO:234-254中的任一者的氨基酸序列；CDRH2包含选自SEQ ID NO:255-280的组的氨基酸序列，或者包含通过一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失、氨基酸取代而衍生自SEQ ID NO:255-280中的任一者的氨基酸序列；并且CDRH3包含选自SEQ ID NO:281-303的组的氨基酸序列，或者包含通过一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失、氨基酸取代而衍生自SEQ ID NO:281-303中的任一者的氨基酸序列。
在一些实施方式中，CDRL1包含选自SEQ ID NO:208-226、SEQ ID NO:304-305和SEQ ID NO:308-309的组的氨基酸序列；CDRL2包含选自SEQ ID NO:227-233的组的氨基酸序列；CDRL3包含选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:19、SEQ IDNO:20和SEQ ID NO:42-58的组的氨基酸序列；CDRH1包含选自SEQ ID NO:234-254的组的氨基酸序列；CDRH2包含选自SEQ ID NO:255-280、SEQ ID NO:306、SEQ ID NO:310和SEQ IDNO:311的组的氨基酸序列；并且CDRH3包含选自SEQ ID NO:281-303、SEQ ID NO:307和SEQID NO:312-314的组的氨基酸序列。
已经证明抗体120B7B2是密蛋白18.2的有效抑制剂。在表B中提供了其CDR序列以及一些去风险版本。在一个实施方式中，本公开提供了对野生型人密蛋白18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中，该抗体或其片段包含含有轻链互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区以及含有重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，并且其中，CDRL1包含QSLLNSGNQKNY(SEQ ID NO:1)、QSLLNAGNQKNY(SEQ ID NO:17)或QSLLESGNQKNY(SEQ ID NO:18)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:17、SEQ ID NO:18的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列；CDRL2包含WAS(SEQ IDNO:2)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:2的一个或两个氨基酸取代的氨基酸序列；CDRL3包含CQNGYYFPFT(SEQ ID NO:3)、QNAYYFPFT(SEQ ID NO:19)或QEGYYFPFT(SEQ IDNO:20)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列；CDRH1包含GYTFTGYI(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:4的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列；CDRH2包含INPYNDGT(SEQ ID NO:5)或INPYNDDT(SEQ ID NO:21)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:21的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列；并且CDRH3包含ARAYFGNSFAY(SEQ ID NO:6)或ARAYFGNAFAY(SEQ ID NO:22)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:22的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列。
有趣的是注意到(参见表A)来自不同抗体的CDR具有很大的同源性。然后考虑到每个对应的CDR可以互换，而不会极大地影响抗体或片段的结合亲和力或活性。替代性地，CDR中的每个特定氨基酸可以被在来自不同抗体的对应的CDR中存在的另一氨基酸取代。因此，在一些实施方式中，下表基于序列比对总结了一些可行的取代。
表G1.SEQ ID NO:1中氨基酸残基的示例取代
表G2.SEQ ID NO:2中氨基酸残基的示例取代
表G3.SEQ ID NO:3中氨基酸残基的示例取代
表G4.SEQ ID NO:4中氨基酸残基的示例取代
表G5.SEQ ID NO:5中氨基酸残基的示例取代
表G6.SEQ ID NO:6中氨基酸残基的示例取代
在抗体或其片段的一些实施方式中，CDRL1包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:17或SEQID NO:18的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:21的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:6或SEQ IDNO:22的氨基酸序列。
轻链可变区的非限制性实例包括选自由SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:192-195和SEQ ID NO:206-207组成的组的氨基酸序列，或者包括生物等价物，例如与选自由SEQ IDNO:141、SEQ ID NO:192-195和SEQ ID NO:206-207组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
重链可变区的非限制性实例包括选自由SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:188-191和SEQ ID NO:205组成的组的氨基酸序列，或者包括生物等价物，例如与选自由SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:188-191和SEQ ID NO:205组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
在一些实施方式中，CDRL1包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述抗体或其片段包含含有SEQ ID NO:206的氨基酸序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:205的氨基酸序列的重链可变区，或其生物等价物。
表A’-表D’提供了根据Kabat编号的CDR序列。对于技术人员而言明显的是，以上所公开的取代可以根据不同的编号方案容易地翻译成CDR。
在一些实施方式中，提供了对野生型人密蛋白18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体或其片段包含含有轻链互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区以及含有重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，并且其中，CDRL1包含SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:305的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:305的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ IDNO:227的一个或两个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:253的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:253的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:278或SEQ ID NO:306的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:278或SEQID NO:306的一个、两个、三个氨基酸取代的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:307的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:307的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些实施方式中，CDRL1包含SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:305的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:19或SEQ ID NO:20的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:253的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:278或SEQ ID NO:306的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:303或SEQ IDNO:307的氨基酸序列。
轻链可变区的非限制性实例包括选自由SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:192-195和SEQ ID NO:206-207组成的组的氨基酸序列，或者包括生物等价物，比如与选自由SEQ IDNO:141、SEQ ID NO:192-195和SEQ ID NO:206-207组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
重链可变区的非限制性实例包括选自由SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:188-191和SEQ ID NO:205组成的组的氨基酸序列，或者包括生物等价物，比如与选自由SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:188-191和SEQ ID NO:205组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
在一些实施方式中，CDRL1包含SEQ ID NO:304的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ IDNO:227的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:253的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:306的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:307的氨基酸序列。抗体或片段的非限制性实例包含含有SEQ ID NO:206的氨基酸序列的轻链可变区和含有SEQ ID NO:205的氨基酸序列的重链可变区。
同样地，已经显示72C1B6A3是好的抗体。因此，在另一个实施方式中，提供了对野生型人密蛋白18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中，该抗体或其片段包含含有轻链互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区以及含有重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，并且其中，CDRL1包含QSLLNSGNQKNY(SEQ ID NO:1)、QSLLNAGNQKNY(SEQ ID NO:17)或QSLLESGNQKNY(SEQ ID NO:18)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRL2包含RAS(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:7的一个或两个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRL3包含QNDYIYPYT(SEQ ID NO:8)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:8的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRH1包含GYTFTTYP(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:9的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRH2包含FHPYNDDT(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:10的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，并且CDRH3包含ARRAYGYPYAMDY(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:11的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列。
同样地，CDR中的每个特定氨基酸可以被在来自不同抗体的对应的CDR中存在的另一个氨基酸取代。因此，在一些实施方式中，下表基于序列比对总结了一些可行的取代。表H1.SEQ ID NO:1中氨基酸残基的示例取代
表H2.SEQ ID NO:7中氨基酸残基的示例取代
表H3.SEQ ID NO:8中氨基酸残基的示例取代
表H4.SEQ ID NO:9中氨基酸残基的示例取代
表H5.SEQ ID NO:10中氨基酸残基的示例取代
表H6.SEQ ID NO:11中氨基酸残基的示例取代
在23的抗体或其片段的一些实施方式中，CDRL1包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ IDNO:8的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列。
轻链可变区的非限制性实例包括选自由SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:185-187和SEQ ID NO:203-204组成的组的氨基酸序列，或者包括生物等价物，例如与选自由SEQ IDNO:124、SEQ ID NO:185-187和SEQ ID NO:203-204组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
重链可变区的非限制性实例包括选自由SEQ ID NO:153和SEQ ID NO:181-184组成的组的氨基酸序列，或者包括生物等价物，例如与选自由SEQ ID NO:153和SEQ ID NO:181-184组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
在一些实施方式中，在所述抗体或其片段中，CDRL1包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQID NO:11的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述抗体或其片段包含含有SEQ ID NO:203的氨基酸序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:181的氨基酸序列的重链可变区，或其对应的生物等价物。
表A’-表D’提供了根据Kabat编号的CDR序列。对于技术人员而言明显的是，以上所公开的取代可以根据不同的编号方案容易地翻译成CDR。
在一些实施方式中，提供了对野生型人密蛋白18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段包含含有轻链互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区以及含有重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，并且其中，CDRL1包含SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:305的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:305的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ ID NO:229的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:229的一个或两个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:8的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:242的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:242的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:263的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:263的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:289的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:289的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些实施方式中，CDRL1包含SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:305的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ ID NO:229的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:242的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:263的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:289的氨基酸序列。
轻链可变区的非限制性实例包括选自由SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:185-187和SEQ ID NO:203-204组成的组的氨基酸序列，或者包括生物等价物，比如与选自由SEQ IDNO:124、SEQ ID NO:185-187和SEQ ID NO:203-204组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
重链可变区的非限制性实例包括选自由SEQ ID NO:153和SEQ ID NO:181-184组成的组的氨基酸序列，或者包括生物等价物，比如与选自由SEQ ID NO:153和SEQ ID NO:181-184组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
在一些实施方式中，CDRL1包含SEQ ID NO:304的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ IDNO:229的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:242的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:263的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:289的氨基酸序列。非限制性实例抗体或其片段包含含有SEQ ID NO:203的氨基酸序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:181的氨基酸序列的重链可变区。
此外，已经显示4F11E2是好的抗体。因此，在另一个实施方式中，提供了对野生型人密蛋白18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段包含含有轻链互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区以及含有重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，并且其中，CDRL1包含QSLLNSGNRKNY(SEQ ID NO:12)、QSLLESGNRKNY(SEQ ID NO:23)或QSLLNAGNRKNY(SEQ ID NO:24)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRL2包含WAS(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:2的一个或两个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRL3包含QNAYSYPFT(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:13的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRH1包含GFTFSTFG(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:14的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRH2包含ITSGNSPI(SEQ ID NO:15)、ITSGQSPI(SEQID NO:25)或ITSGESPI(SEQ ID NO:26)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，并且CDRH3包含ARSSYYGNSMDY(SEQ ID NO:16)、ARSSYYGQSMDY(SEQ ID NO:27)、ARSSYYGESMDYDY(SEQ IDNO:28)或ARSSYYGNAMDY(SEQ ID NO:29)的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:29的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列。
同样地，CDR中的每个特定氨基酸可以被在来自不同抗体的对应的CDR中存在的另一个氨基酸取代。因此，在一些实施方式中，下表基于序列比对总结了一些可行的取代。表I1.SEQ ID NO:12中氨基酸残基的示例取代
表I2.SEQ ID NO:2中氨基酸残基的示例取代
表I3.SEQ ID NO:13中氨基酸残基的示例取代
表I4.SEQ ID NO:14中氨基酸残基的示例取代
表I5.SEQ ID NO:15中氨基酸残基的示例取代
表I6.SEQ ID NO:16中氨基酸残基的示例取代
在一些实施方式中，在所述抗体或其片段中，CDRL1包含SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:23或SEQ ID NO:24的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，CDRL3包含SEQID NO:13的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:29的氨基酸序列。
轻链可变区的非限制性实例包括选自由SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:178-180和SEQ ID NO:201-202组成的组的氨基酸序列，或者包括其生物等价物，例如与选自由SEQ IDNO:129、SEQ ID NO:178-180和SEQ ID NO:201-202组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
重链可变区的非限制性实例包括选自由SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:175-177和SEQ ID NO:196-200组成的组的氨基酸序列，或者包括其生物等价物，例如与选自由SEQ IDNO:159、SEQ ID NO:175-177和SEQ ID NO:196-200组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
在一些实施方式中，CDRL1包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述抗体或其片段包含含有SEQ ID NO:202的氨基酸序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:197的氨基酸序列的重链可变区，或其对应的生物等价物。
表A’-表D’提供了根据Kabat编号的CDR序列。对于技术人员而言明显的是，以上所公开的取代可以根据不同的编号方案容易地翻译成CDR。
本公开的一些实施方式提供了对野生型人密蛋白18.2(CLDN18.2)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段包含含有轻链互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区以及含有重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，并且其中，CDRL1包含SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:308或SEQ ID NO:309的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:308或SEQ ID NO:309的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:227的一个或两个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:13的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:246的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:246的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:310或SEQ ID NO:311的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:310或SEQ ID NO:311的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:294、SEQ ID NO:312、SEQ ID NO:313或SEQID NO:314的氨基酸序列，或者包含具有来自SEQ ID NO:294、SEQ ID NO:312、SEQ ID NO:313或SEQ ID NO:314的一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些实施方式中，CDRL1包含SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:308或SEQ ID NO:309的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:246的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:310或SEQ ID NO:311的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:294、SEQ ID NO:312、SEQ IDNO:313或SEQ ID NO:314的氨基酸序列。
轻链可变区的非限制性实例包括选自由SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:178-180和SEQ ID NO:201-202组成的组的氨基酸序列，或者包括生物等价物，比如与选自由SEQ IDNO:129、SEQ ID NO:178-180和SEQ ID NO:201-202组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
重链可变区的非限制性实例包括选自由SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:175-177和SEQ ID NO:196-200组成的组的氨基酸序列，或者包括生物等价物，比如与选自由SEQ IDNO:159、SEQ ID NO:175-177和SEQ ID NO:196-200组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
在一些实施方式中，CDRL1包含SEQ ID NO:309的氨基酸序列，CDRL2包含SEQ IDNO:227的氨基酸序列，CDRL3包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，CDRH1包含SEQ ID NO:246的氨基酸序列，CDRH2包含SEQ ID NO:311的氨基酸序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:294的氨基酸序列。抗体或片段的非限制性实例包含含有SEQ ID NO:202的氨基酸序列的轻链可变区和含有SEQ ID NO:197的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方式中，所述抗体是人源化抗体。如实施例9中所示，人源化抗体可以包括向小鼠对应物的一个或多个回复突变。这样的回复突变的实例在表3中示出。在一些实施方式中，所述抗体或片段可以包括一个、两个、三个、四个、五个或更多个回复突变。
在一些实施方式中，本公开的抗密蛋白18.2抗体包括SEQ ID NO:117-144、SEQ IDNO:178-180、SEQ ID NO:185-187、SEQ ID NO:192-195、SEQ ID NO:201-202、SEQ ID NO:203-204或SEQ ID NO:206-207的任意一种的VL以及SEQ ID NO:145-174、SEQ ID NO:175-177、SEQ ID NO:181-184、SEQ ID NO:188-191、SEQ ID NO:196-200或SEQ ID NO:205的任意一种的VH，或其相应的生物等价物。VH或VL的生物等价物是包含指定氨基酸同时具有总体80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性的序列。因此，SEQ ID NO:145的生物等价物可以是与SEQ ID NO:145具有总体80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性但保留CDR的VH，并且任选地保留一个或多个或所有回复突变。
本领域普通技术人员还将理解的是，可以修饰如本文所公开的抗体，使得其氨基酸序列与其衍生自的天然存在的结合多肽不同。例如，衍生自指定蛋白质的多肽或氨基酸序列可以相似，例如与起始序列具有一定百分比的同一性，例如其可以与起始序列60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％相同。
在某些实施方式中，所述抗体包含通常不与抗体结合的氨基酸序列或一个或多个部分。示例性修饰在下面更详细地描述。例如，本公开的抗体可以包含柔性接头序列，或者可以被修饰以添加功能性部分(例如，PEG、药物、毒素或标记)。
本公开的抗体、其变体或其衍生物包括被修饰的衍生物，即，通过任何类型的分子与抗体的共价附接而被修饰，使得共价附接不会阻止抗体与表位结合。例如，但不限于，抗体可以例如通过糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解切割、与细胞配体或其他蛋白质的连接等而被修饰。可以通过已知技术进行许多化学修饰中的任何一种化学修饰，包括但不限于特异性化学切割、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。另外，抗体可以包含一个或多个非经典氨基酸。
在一些实施方式中，所述抗体可以与治疗剂、前药、肽、蛋白质、酶、病毒、脂质、生物反应修饰剂、药剂或PEG缀合。
所述抗体可以与治疗剂缀合或融合，所述治疗剂可以包括可检测标记比如放射性标记、免疫调节剂、激素、酶、寡核苷酸、光活性治疗剂或诊断剂、细胞毒性剂，它们可以是“药物”或“毒素”、超声增强剂、非放射性标记、其组合以及本领域中已知的其他此类试剂。
抗体可以通过将其偶联至化学发光化合物而被可检测地标记。然后通过检测在化学反应过程期间产生的发光的存在来确定化学发光标记的抗原结合多肽的存在。特别有用的化学发光标记化合物的实例是鲁米诺、异鲁米诺、热吖啶鎓酯(theromatic acridiniumester)、咪唑、吖啶盐和草酸酯。
所述抗体也可以使用发射荧光的金属比如镧系元素中的152Eu或其他金属来可检测地标记。这些金属可以使用诸如二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)的金属螯合基团而附接至抗体。将各种部分与抗体缀合的技术是公知的，参见例如Arnon等的“Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”，在Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy中，Reisfeld等(编辑)，第243-56页(AlanR.Liss,Inc.(1985)；Hellstrom等的“Antibodies For Drug Delivery”，在ControlledDrug Delivery(第2版)，Robinson等(编辑)，Marcel Dekker，Inc.，第623-53页(1987)；Thorpe的“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review”，在Monoclonal Antibodies’84:Biological And Clinical Applications，Pinchera等(编辑)，第475-506页(1985)；“Analysis,Results,And Future Prospective Of TheTherapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”，在MonoclonalAntibodies For Cancer Detection And Therapy中，Baldwin等(编辑)，学术出版社，第303-16页(1985)；以及Thorpe等的“The Preparation And Cytotoxic Properties OfAntibody-Toxin Conjugates”，Immunol.Rev.(52:119-58(1982))。
双功能分子
作为肿瘤抗原靶向分子，对密蛋白18.2具有特异性的抗体或抗原结合片段可以与对免疫细胞具有特异性的第二片段组合以产生双特异性抗体。
在一些实施方式中，所述免疫细胞选自由T细胞、B细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、吞噬细胞、自然杀伤细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞组成的组。
在一些实施方式中，第二特异性是针对CD3、CD47、PD1、PD-L1、LAG3、TIM3、CTLA4、VISTA、CSFR1、A2AR、CD73、CD39、CD40、CEA、HER2、CMET、4-1BB、OX40、SIRPA CD16、CD28、ICOS、CTLA4、BTLA、TIGIT、HVEM、CD27、VEGFR或VEGF。
还提供了不同形式的双特异性抗体。在一些实施方式中，抗密蛋白18.2片段和第二片段各自独立地选自Fab片段、单链可变片段(scFv)或单域抗体。在一些实施方式中，所述双特异性抗体还包含Fc片段。
还提供了不仅包括抗体或抗原结合片段的双功能分子。作为肿瘤抗原靶向分子，对密蛋白18.2具有特异性的抗体或抗原结合片段，例如本文所描述的那些，可以任选地通过肽接头与免疫细胞因子或配体组合。连接的免疫细胞因子或配体包括但不限于IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、GM-CSF、TNF-α、CD40L、OX40L、CD27L、CD30L、4-1BBL、LIGHT和GITRL。这种双功能分子可以将免疫检查点阻断作用与肿瘤部位局部免疫调节结合起来。
编码抗体的多核苷酸及制备抗体的方法
本公开还提供编码本公开的抗体、其变体或其衍生物的分离的多核苷酸或核酸分子。本公开的多核苷酸可以在相同多核苷酸分子上或者在分开的多核苷酸分子上编码抗原结合多肽、其变体或其衍生物的整个重链可变区和轻链可变区。另外，本公开的多核苷酸可以在相同的多核苷酸分子上或在分开的多核苷酸分子上编码抗原结合多肽、其变体或其衍生物的重链可变区和轻链可变区的部分。
制备抗体的方法是本领域公知的，并且在本文中进行了描述。在某些实施方式中，本公开的抗原结合多肽的可变区和恒定区都是完全人的。可以使用本领域描述的和本文中描述的技术来制备完全人抗体。例如，可以通过向转基因动物施用抗原来制备针对特定抗原的完全人抗体，该转基因动物已经被修饰以响应于抗原攻击而产生这种抗体，但是其内源基因座已经失去能力。可以用于制备此类抗体的示例性技术在美国专利6,150,584、6,458,592、6,420,140中描述，这些美国专利的全部内容通过参引并入本文。
治疗方法
如本文所述，本公开的抗体、变体或衍生物可以用于某些治疗和诊断方法。
本公开还涉及基于抗体的疗法，其涉及向患者比如动物、哺乳动物和人施用本公开的抗体以治疗本文所述的一种或多种病症或病状。本公开的治疗性化合物包括但不限于本公开的抗体(包括如本文所述的其变体和衍生物)和编码本公开的抗体(包括如本文所述的其变体和衍生物)的核酸或多核苷酸。
本公开的抗体也可以用于治疗或抑制癌症。如上所述，密蛋白18.2可以在肿瘤细胞，特别是胃、胰腺、食道、卵巢和肺肿瘤中过表达。已显示密蛋白18.2的抑制可用于治疗肿瘤。
因此，在一些实施方式中，提供了用于在需要治疗癌症的患者中治疗癌症的方法。在一个实施方式中，所述方法需要向患者施用有效量的本公开的抗体。在一些实施方式中，患者中的癌细胞中的至少一种(例如，基质细胞)过表达密蛋白18.2。
在本公开中还提供细胞疗法，比如嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法。可以使用合适的细胞，使该合适的细胞与本公开的抗密蛋白18.2抗体接触(或替代性地被工程化以表达本公开的抗密蛋白18.2抗体)。经过这样的接触或工程化，然后可以将细胞引入需要治疗的癌症患者。癌症患者可以患有本文公开的任何类型的癌症。细胞(例如，T细胞)可以是例如肿瘤浸润性T淋巴细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞或其组合，但不限于此。
在一些实施方式中，所述细胞从癌症患者本人分离。在一些实施方式中，所述细胞由供体或细胞库提供。当所述细胞从癌症患者分离时，不期望的免疫反应可以降至最低。
癌症的非限制性实例包括膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、头颈癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑素瘤、胰腺癌、前列腺癌和甲状腺癌。在一些实施方式中，癌症是胃癌、胰腺癌、食道癌、卵巢癌和肺癌中的一者或多者。
可以用本公开的抗体或其变体或其衍生物治疗、预防、诊断和/或预后的与细胞存活增加有关的其他疾病或病状包括但不限于恶性肿瘤和相关疾病的进展和/或转移，所述相关疾病比如为白血病(包括急性白血病(例如，急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病(包括成髓细胞性、早幼粒细胞性、髓单核细胞性、单核细胞性和红白血病))和慢性白血病(例如，慢性髓细胞(粒细胞)白血病和慢性淋巴细胞白血病))、真性红细胞增多症、淋巴瘤(例如霍奇金病和非霍奇金病)、多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症、重链疾病和实体瘤，包括但不限于肉瘤和癌，比如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏肿瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、维尔姆斯瘤、子宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、menangioma、黑色素瘤、神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤。
用于任何特定患者的特定剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所使用的特定抗体及其变体或衍生物；患者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；给药时间；排泄率；药物组合；以及所治疗特定疾病的严重程度。医学护理人员对这些因素的判断在本领域普通技术范围内。该量还取决于待治疗的个体患者、给药途径、制剂类型、所用化合物的特性、疾病的严重程度以及所需效果。所使用的量可以通过本领域公知的药理学和药代动力学原理来确定。
抗体、变体的施用方法包括但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。抗原结合多肽或组合物可以通过任何方便的途径施用，例如通过输注或团注、通过上皮或粘膜皮肤衬里(例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，并且可以与其他生物活性剂一起施用。因此，含有本公开的抗原结合多肽的药物组合物可以口服、经直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过粉末、软膏、滴剂或透皮贴剂)、经口(bucally)或作为口或鼻喷雾给药。
如本文中所使用的，术语“肠胃外”是指包括静脉内、肌内、腹膜内、胸骨内、皮下和关节内注射和输注的给药方式。
给药可以是全身性的或局部的。另外，可能期望通过任何合适的途径将本公开的抗体引入中枢神经系统，所述任何合适的途径包括脑室内注射和鞘内注射；脑室内注射可以通过脑室内导管来协助，例如该脑室内导管附接至贮器比如奥马耶贮器。也可以例如通过使用吸入器或喷雾器来进行肺部给药，并且与雾化剂一起配制。
可能期望将本公开的抗原结合多肽或组合物局部施用于需要治疗的区域；这可以通过例如但不限于手术期间的局部输注、局部施用例如与手术后的伤口敷料结合、通过注射、通过导管的方式、通过栓剂的方式或通过植入物的方式来实现，所述植入物是多孔的、无孔的或凝胶状材料，所述多孔的、无孔的或凝胶状材料包括膜(例如硅橡胶膜)或纤维。优选地，当施用本公开的蛋白质(包括抗体)时，必须注意使用蛋白质不吸收的材料。
本公开的抗体的有效治疗、抑制和预防炎性、免疫或恶性疾病、病症或病状的量可以通过标准临床技术来确定。另外，可以任选地采用体外测定法以帮助鉴定最佳剂量范围。制剂中使用的精确剂量还取决于给药途径以及疾病、病症或病状的严重性，并且应当根据从业者的判断和每个患者的情况来决定。有效剂量可以从体外或动物模型测试系统得出的剂量-响应曲线中推断出。
作为一般性建议，向患者施用本公开的抗原结合多肽的剂量通常为患者体重的0.1mg/kg至100mg/kg，患者体重的0.1mg/kg至20mg/kg之间，或者患者体重的1mg/kg至10mg/kg之间。通常，由于对外源多肽的免疫应答，人抗体在人体内的半衰期比来自其他物种的抗体长。因此，较低剂量的人抗体和较低频率的施用通常是可能的。此外，本公开的抗体的施用剂量和频率可以通过修饰(例如，脂质化)增强抗体的摄取和组织渗透(例如，进入脑内)来降低。
在另一个实施方式中，本公开的组合物与细胞因子组合施用。可以与本公开的组合物一起施用的细胞因子包括但不限于IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、抗CD40、CD40L和TNF-α。
在另外的实施方式中，本公开的组合物与其他治疗或预防方案(比方说例如放射疗法)组合施用。
组合疗法和抗体药物缀合物
还提供了组合疗法，该组合疗法包括使用本公开的一种或多种抗密蛋白18.2抗体或其片段以及使用第二抗癌剂(化疗剂)。在一些实施方式中，所述化疗剂与所述抗体或片段缀合。
化疗剂可以根据其作用机制分类为例如以下组:
-抗代谢物/抗癌剂，比如嘧啶类似物氟尿苷、卡培他滨和阿糖胞苷；
-嘌呤类似物、叶酸拮抗剂和相关抑制剂；
-抗增殖/抗有丝分裂剂，包括天然产物比如长春花生物碱(长春花碱、长春新碱)和微管比如紫杉烷(紫杉醇、多西他赛)、长春碱、诺考达唑、埃博霉素、长春瑞滨
-DNA破坏剂，比如放线菌素、安丫啶、白消安、卡铂、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺
-抗生素，比如放线菌素D、柔红霉素、阿霉素、伊达比星、蒽环类、米托蒽醌、博来霉素、普卡霉素(光神霉素)和丝裂霉素；
-酶，比如L-天冬酰胺酶，该酶可以全身性地代谢L-天冬酰胺并剥夺不具有合成其自身天冬酰胺的能力的细胞；
-抗血小板剂；
-抗增殖/抗有丝分裂的烷基化剂，比如氮芥类环磷酰胺和类似物(美法仑、苯丁酸氮芥、六甲蜜胺和噻替派)、烷基亚硝基脲(卡莫司汀)和类似物、链脲菌素和三氮烯(达卡巴嗪)；
-抗增殖/抗有丝分裂抗代谢物比如叶酸类似物(甲氨蝶呤)；
-铂配位配合物(顺铂、oxiloplatinim和卡铂)、甲基苄肼、羟基脲、米托坦和氨鲁米特；
-激素、激素类似物(雌激素、它莫西芬、戈舍瑞林、比卡鲁胺和尼鲁米特)和芳香酶抑制剂(来曲唑和阿那曲唑)；
-抗凝剂，比如肝素、合成肝素盐和其他凝血酶抑制剂；
-纤溶剂，比如组织纤溶酶原激活剂、链激酶、尿激酶、阿司匹林、双嘧达莫、噻氯匹定和氯吡格雷；
-抗迁移剂；
-抗分泌剂(breveldin)；
-免疫抑制剂他克莫司、西罗莫司、硫唑嘌呤和霉酚酸酯；
-化合物(TNP-470，染料木黄酮)和生长因子抑制剂(血管内皮生长因子抑制剂和成纤维细胞生长因子抑制剂)；
-血管紧张素受体阻滞剂、一氧化氮供体；
-反义寡核苷酸；
-抗体，比如曲妥珠单抗和利妥昔单抗；
-细胞周期抑制剂和分化诱导剂比如维甲酸；
-抑制剂、拓扑异构酶抑制剂(阿霉素、柔红霉素、放线菌素D、eniposide、表柔比星、依托泊苷、伊达比星、伊立替康、米托蒽醌、拓扑替康和伊立替康)以及皮质类固醇(可的松、地塞米松、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松和泼尼松龙)；
-生长因子信号转导激酶抑制剂；
-功能障碍诱导剂；
-毒素，比如霍乱毒素、蓖麻毒蛋白、假单胞菌外毒素、百日咳博德特氏菌腺苷酸环化酶毒素、白喉毒素和胱天蛋白酶激活剂；以及
-染色质。
化疗剂的其他实例包括:
-烷基化剂，比如噻替派和环磷酰胺
-烷基磺酸盐，比如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；
-氮丙啶，比如苯佐替派、卡巴醌、美妥替派和乌瑞替派；
-emylerumine和memylamelamine，包括alfretamine、triemylenemelamine、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和trimemylolomelamine；
-番荔枝内酯，尤其是布拉它辛和布拉它辛酮；
-喜树碱，包括合成的类似物拓扑替康；
-苔藓抑素；
-凯利他汀(callystatin)；
-CC-1065，包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物；
-念珠藻素，尤其是念珠藻素1和念珠藻素8；
-海兔毒素；
-倍癌霉素，包括合成类似物KW-2189和CBI-TMI；
-五加素；
-水鬼蕉碱；
-匍枝珊瑚醇；
-海绵抑素；
-氮芥类，比如苯丁酸氮芥、萘氮芥、环磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、盐酸氧二氯甲基二乙胺、美法仑、新恩比兴、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲洛磷胺和尿嘧啶氮芥；
-亚硝基尿素类，比如卡莫司汀、氯脲霉素、foremustine、洛莫司丁、尼莫司汀和雷莫司汀；
-抗生素类，比如烯二炔抗生素类(例如加利车霉素，尤其是加利车霉素γII和加利车霉素phiI1)、包括达内霉素A的达内霉素、双膦酸盐比如氯膦酸盐、埃斯培拉霉素、新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团、阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、氮杂丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡拉比星、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素(包括吗啉代-阿霉素、氰基吗啉代-阿霉素、2-吡咯代-阿霉素和脱氧阿霉素)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素类比如丝裂霉素C、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素类、培洛霉素、紫菜霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、新制癌菌素和佐柔比星，
-抗代谢物，比如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；
-叶酸类似物，比如去甲蝶呤(demopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤和三甲曲沙；
-嘌呤类似物，比如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤和硫鸟嘌呤；
-嘧啶类似物，比如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、多西氟尿啶、依诺他滨和氟尿苷；
-雄激素类，比如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷和睾内酯；
-抗肾上腺素类，比如氨鲁米特、米托坦和曲洛司坦；
-叶酸补充剂类，比如叶酸；
-单端孢霉烯毒素类，尤其是T-2毒素、维拉库林A、漆斑菌素A和蛇形菌素(anguidine)；
-紫杉醇类，比如紫杉醇
-铂类似物，比如顺铂和卡铂；
-乙酰葡醛酯、醛磷酰胺糖苷、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶、安吖啶、hestrabucil、比生群、依达曲沙、地磷酰胺、秋水仙胺、亚丝醌、elformthine、依利醋铵、埃坡霉素、依托格鲁、硝酸镓、羟基脲、香菇多糖、甲酰四氢叶酸、氯尼达明、美登素类比如美登素和安丝菌素、米托胍腙、米托蒽醌、单哌潘生丁、硝化吖啶(nitracrine)、喷司他丁、蛋氨氮芥、吡柔比星、洛索蒽醌、氟嘧啶、亚叶酸、鬼臼酸、2-乙基酰肼、丙卡巴肼、多糖-K(PSK)、雷佐生、根霉素、西佐喃、锗螺胺、细交链孢菌酮酸、三亚胺醌、2,2’,2”-tricUorotriemylamine、尿烷、长春地辛、达卡巴嗪、甘露莫司汀、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、哌泊溴烷、加西托星、阿拉伯糖苷(“Ara-C”)、环磷酰胺、噻替派、苯丁酸氮芥、吉西他滨
-上述任何一种药学上可接受的盐、酸或衍生物。
在“化疗剂”的定义中还包括抗激素剂比如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)、芳香酶抑制剂、抗雄激素以及上述任何一种用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
抗雌激素和SERM的实例包括例如他莫昔芬(包括NOLVADEXTM)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬
芳香酶抑制剂调节肾上腺中雌激素的产生。实例包括4(5)-咪唑、氨鲁米特、醋酸甲地孕酮
抗雄激素的实例包括氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、leuprohde和戈舍瑞林。
化疗剂的实例还包括抗血管生成剂，包括但不限于视黄酸及其衍生物、2-甲氧基雌二醇、
化疗剂的实例还包括抗纤维化剂，包括但不限于诸如β-氨基丙腈(BAPN)之类的化合物，以及美国专利号4,965,288(Palfreyman等)和美国专利号4,997,854(Kagan等)中公开的化合物，其中，美国专利号4,965,288涉及赖氨酰氧化酶抑制剂及其在治疗与胶原蛋白异常沉积有关的疾病和病症中的用途，美国专利号4,997,854涉及抑制LOX以用于治疗各种病理性纤维变性疾病的化合物，这两项专利通过参引并入本文。其他示例性抑制剂描述于涉及化合物比如2-异丁基-3-氟-，氯-或溴-烯丙胺的美国专利号4,943,593(Palfreyman等)、涉及2-(1-萘氧基氧甲基)-3-氟烯丙胺的美国专利号5,021,456(Palfreyman等)、5,059,714(Palfreyman等)、5,120,764(Mccarthy等)、5,182,297(Palfreyman等)、5,252,608(Palfreyman等)以及美国公开号2004/0248871(Farjanel等)，这些美国专利通过参引并入本文。
示例性抗纤维化剂还包括与赖氨酰氧化酶的活性位点的羰基反应的伯胺类，更特别地是那些在与羰基结合后产生通过共振稳定的产物的伯胺，例如以下伯胺：emylenemamine、肼、苯肼及其衍生物；氨基脲和脲衍生物；氨基腈比如BAPN或2-硝基乙胺；不饱和或饱和的卤胺比如2-溴-乙胺、2-氯乙胺、2-三氟乙胺、3-溴丙胺和对卤苄胺；以及硒高半胱氨酸内酯。
其他抗纤维化剂是穿透或不穿透细胞的铜螯合剂。示例性的化合物包括间接抑制剂，所述抑制剂阻止由赖氨酰氧化酶对赖氨酰和羟基赖氨酰残基的氧化脱氨基而产生的醛衍生物。实例包括硫羟胺(thiolamine)类，特别是D-青霉胺，及其类似物比如2-氨基-5-巯基-5-甲基己酸、D-2-氨基-3-甲基-3-((2-乙酰胺乙基)二硫)丁酸、p-2-氨基-3-甲基-3-((2-氨基乙基)二硫)丁酸、4-((p-1-二甲基-2-氨基-2-羧基乙基)二硫)丁烷磺酸钠、2-乙酰胺基乙基-2-乙酰胺基乙硫醇硫酸酯和4-巯基丁烷亚磺酸钠三水合物。
化疗剂的实例还包括免疫治疗剂，包括但不限于适合于治疗患者的治疗性抗体。治疗性抗体的一些实例包括辛妥珠单抗(simtuzumab)、阿巴伏单抗、阿德木单抗(adecatumumab)、阿托珠单抗(afutuzumab)、阿仑单抗、阿妥莫单抗、阿麦妥昔单抗(amatuximab)、anatumomab、阿西莫单抗、维昔单抗(bavituximab)、贝妥莫单抗、贝伐单抗、bivatuzumab、博纳吐单抗、本妥昔单抗、坎妥单抗、卡妥索单抗、西妥昔单抗、西他土珠(citatuzumab)、西妥木单抗、克立瓦妥珠单抗(clivatuzumab)、可那木单抗(conatumumab)、达雷木单抗、多兹图单抗(drozitumab)、杜里土单抗(duligotumab)、杜昔单抗(dusigitumab)、地莫单抗、达西珠单抗(dacetuzumab)、达妥珠单抗(dalotuzumab)、伊克麦昔单抗(ecromeximab)、艾洛珠单抗、恩司昔单抗(ensituximab)、厄妥索单抗(ertumaxomab)、伊瑞西珠、伐尔妥珠单抗(farletuzumab)、非卡妥珠单抗(ficlatuzumab)、菲妥木单抗(figitumumab)、弗兰单抗(flanvotumab)、富图希单抗(futuximab)、盖尼塔单抗(ganitumab)、吉妥珠单抗、吉瑞妥昔单抗(girentuximab)、glembatumumab、替伊莫单抗、伊戈伏单抗、英加妥珠单抗(imgatuzumab)、英达西单抗(indatuximab)、伊珠单抗(inotuzumab)、英妥木单抗(intetumumab)、伊匹单抗、伊妥木单抗(iratumumab)、拉贝珠单抗(labetuzumab)、来沙木单抗、林妥珠单抗、洛伏珠单抗(lorvotuzumab)、鲁卡木单抗(lucatumumab)、马帕木单抗(mapatumumab)、马妥珠单抗、milatuzumab、明瑞莫单抗(minretumomab)、米妥莫单抗(mitumomab)、moxetumomab、纳那妥单抗(narnatumab)、naptumomab、耐西妥珠单抗(necitumumab)、尼妥珠单抗、nofetumomab、奥卡拉妥珠单抗(ocaratuzumab)、奥法木单抗、奥拉木单抗(olaratumab)、onartuzumab、oportuzumab、奥戈伏单抗、帕尼单抗、巴萨妥珠单抗(parsatuzumab)、patritumab、培妥木单抗(pemtumomab)、帕妥珠单抗、平妥莫单抗(pintumomab)、普托木单抗、雷妥莫单抗(racotumomab)、雷德珠单抗(radretumab)、rilotumumab、利妥昔单抗、罗妥木单抗(robatumumab)、沙妥莫单抗、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、司妥昔单抗(siltuximab)、solitomab、tacatuzumab、他莫单抗(taplitumomab)、替妥莫单抗(tenatumomab)、teprotumumab、替加珠单抗(tigatuzumab)、托西莫单抗、曲妥单抗、tucotuzumab、乌妥昔单抗(ublituximab)、维妥珠单抗(veltuzumab)、vorsetuzumab、伏妥莫单抗、扎鲁木单抗(zalutumumab)、CC49和3F8。利妥昔单抗可以用于治疗惰性B细胞癌，包括边缘区淋巴瘤、WM、CLL和小淋巴细胞淋巴瘤。利妥昔单抗和化疗剂的组合是特别有效的。
示例性的治疗性抗体可以被进一步标记或者与放射性同位素颗粒比如铟111、钇90或碘131组合。
在一个实施方式中，另外的治疗剂是氮芥烷化剂。氮芥烷化剂的非限制性实例包括苯丁酸氮芥。
在一个实施方式中，本文所述的化合物和组合物可以与一种或多种另外的治疗剂一起使用或组合。所述一种或多种治疗剂包括但不限于Abl的抑制剂、活化的CDC激酶(ACK)、腺苷A2B受体(A2B)、细胞凋亡信号调节激酶(ASK)、极光激酶、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)、BET溴结构域(BRD)比如BRD4、c-Kit、c-Met、CDK激活激酶(CAK)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMK)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)、酪蛋白激酶(CK)、盘状结构域受体(DDR)、表皮生长因子受体(EGFR)、黏着斑激酶(FAK)、Flt-3、FYN、糖原合酶激酶(GSK)、HCK、组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)、IKK比如IKKβε、异柠檬酸脱氢酶(IDH)比如IDH1、Janus激酶(JAK)、KDR、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)、赖氨酰氧化酶蛋白、赖氨酰氧化酶样蛋白(LOXL)、LYN、基质金属蛋白酶(MMP)、MEK、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)、NEK9、NPM-ALK、p38激酶、血小板衍生生长因子(PDGF)、磷酸化酶激酶(PK)、polo样激酶(PLK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶(PK)比如蛋白激酶A、B和/或C、PYK、脾酪氨酸激酶(SYK)、丝氨酸/苏氨酸激酶TPL2、丝氨酸/苏氨酸激酶STK、信号转导和转录(STAT)、SRC、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(TBK)比如TBK1、TIE、酪氨酸激酶(TK)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、YES或其任意组合。
ASK抑制剂包括ASK1抑制剂。ASK1抑制剂的实例包括但不限于WO 2011/008709(Gilead Sciences)和WO 2013/112741(Gilead Sciences)中描述的那些抑制剂。
BTK抑制剂的实例包括但不限于依鲁替尼、HM71224、ONO-4059和CC-292。
DDR抑制剂包括DDR1的抑制剂和/或DDR2的抑制剂。DDR抑制剂的实例包括但不限于WO 2014/047624(Gilead Sciences)、US 2009/0142345(Takeda Pharmaceutical)、US2011/0287011(Oncomed Pharmaceuticals)、WO 2013/027802(Chugai Pharmaceutical)和WO 2013/034933(Imperial Innovations)中公开的那些抑制剂。
HDAC抑制剂的实例包括但不限于pracinostat和帕比司他。
JAK抑制剂抑制JAK1、JAK2和/或JAK3。JAK抑制剂的实例包括但不限于非洛替尼(filgotinib)、鲁索利替尼、菲卓替尼(fedratinib)、托法替尼、巴瑞替尼、来他替尼、帕克替尼(pacritinib)、XL019、AZD1480、INCB039110、LY2784544、BMS911543和NS018。
LOXL抑制剂包括LOXL1、LOXL2、LOXL3、LOXL4和/或LOXL5的抑制剂。LOXL抑制剂的实例包括但不限于WO 2009/017833(Arresto Biosciences)中描述的抗体。
LOXL2抑制剂的实例包括但不限于WO 2009/017833(Arresto Biosciences)、WO2009/035791(Arresto Biosciences)和WO 2011/097513(Gilead Biologics)中描述的抗体。
MMP抑制剂包括MMP 1至MMP 10的抑制剂。MMP9抑制剂的实例包括但不限于马立马司他(BB-2516)、cipemastat(Ro 32-3555)和WO 2012/027721(Gilead Biologics)中描述的那些抑制剂。
PI3K抑制剂包括PI3Kγ、PI3Kδ、PI3Kβ、PI3Kα和/或泛PI3K(pan-PI3K)的抑制剂。PI3K抑制剂的实例包括但不限于渥曼青霉素、BKM120、CH5132799、XL756和GDC-0980。
PI3Kγ抑制剂的实例包括但不限于ZSTK474、AS252424、LY294002和TG100115。
PI3Kδ抑制剂的实例包括但不限于PI3K II、TGR-1202、AMG-319、GSK2269557、X-339、X-414、RP5090、KAR4141、XL499、OXY111A、IPI-145、IPI-443以及在WO 2005/113556(ICOS)、WO 2013/052699(Gilead Calistoga)、WO 2013/116562(Gilead Calistoga)、WO2014/100765(Gilead Calistoga)、WO 2014/100767(Gilead Calistoga)和WO 2014/201409(Gilead Sciences)中描述的化合物。
PI3Kβ抑制剂的实例包括但不限于GSK2636771、BAY 10824391和TGX221。
PI3Kα抑制剂的实例包括但不限于布帕利司、BAY 80-6946、BYL719、PX-866、RG7604、MLN1117、WX-037、AEZA-129和PA799。
泛PI3K抑制剂的实例包括但不限于LY294002、BEZ235、XL147(SAR245408)和GDC-0941。
SYK抑制剂的实例包括但不限于tamatinib(R406)、福他替尼(R788)、PRT062607、BAY-61-3606、NVP-QAB 205AA、R112、R343以及美国专利号8,450,321(GileadConnecticut)中所描述的抑制剂。
TKI可以靶向表皮生长因子受体(EGFR)和成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)和血管内皮生长因子(VEGF)的受体。靶向EGFR的TKI的实例包括但不限于吉非替尼和厄洛替尼。舒尼替尼是靶向FGF、PDGF和VEGF受体的TKI的非限制性实例。
诊断方法
在某些肿瘤样品中观察到密蛋白18.2的过表达，并且具有密蛋白18.2过表达的细胞的患者可能对用本公开的抗密蛋白18.2抗体的治疗有响应。因此，本公开的抗体也可以用于诊断和预后目的。
优选地包括细胞的样品可以从患者获得，该患者可以是癌症患者或期望诊断的患者。细胞是肿瘤组织或肿瘤块的细胞、血液样品、尿液样品或任何来自患者的样品。在对样品进行任选的预处理之后，可以在允许抗体与样品中可能存在的密蛋白18.2蛋白相互作用的条件下，将样品与本公开的抗体一起孵育。可以使用比如ELISA的方法，利用抗密蛋白18.2抗体来检测样品中密蛋白18.2蛋白的存在。
样品中密蛋白18.2蛋白的存在(任选地以量或浓度)可以用于诊断癌症，作为患者适合用抗体治疗的指示，或者作为患者对癌症治疗有(或没有)应答的指示。对于预后方法，可以在开始癌症治疗后的某些阶段一次、两次或更多次进行检测以指示治疗的进展。
组合物
本公开还提供药物组合物。这样的组合物包含有效量的抗体和可接受的载体。在一些实施方式中，所述组合物还包含第二抗癌剂(例如，免疫检查点抑制剂)。
在一个具体的实施方式中，术语“药学上可接受的”意指由联邦或州政府的监管机构批准的或在美国药典或其他普遍认可的药典中列出的用于动物尤其是人类的。此外，“药学上可接受的载体”通常会是任何类型的无毒的固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、封装材料或制剂助剂。
术语“载体”是指与治疗剂一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。这样的药物载体可以是无菌液体比如水和油，所述药物载体包括石油、动物、植物或合成来源的药物载体，比如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当药物组合物静脉内施用时，水是优选的载体。盐溶液以及葡萄糖水溶液和甘油水溶液也可以用作液体载体，特别是用于注射溶液。合适的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如果需要，该组合物还可以含有少量的湿润剂或乳化剂、或者pH缓冲剂比如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐。抗菌剂比如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂比如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂比如乙二胺四乙酸；和调节张力的试剂比如氯化钠或右旋糖也是可以考虑的。这些组合物可以采取溶液剂、混悬剂、乳剂、片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、缓释制剂等形式。该组合物可以与传统的粘合剂和载体比如甘油三酯一起配制成栓剂。口服制剂可以包括标准载体比如药用级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。合适的药物载体的实例在E.W.Martin的《Remington's Pharmaceutical Sciences》中有描述，其通过参引并入本文。这样的组合物将包含优选地呈纯化的形式的治疗有效量的抗原结合多肽以及适量的载体，以提供用于向患者适当施用的形式。该制剂应当适合给药方式。肠胃外制剂可以封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。
在实施方式中，根据常规程序将组合物配制成适于静脉内施用给人的药物组合物。通常，用于静脉内施用的组合物是在无菌等渗水性缓冲液中的溶液。必要时，该组合物还可以包括增溶剂和局部麻醉剂比如利多卡因，用以减轻注射部位的疼痛。通常，成分以单位剂型单独或混合在一起提供，例如作为在密闭容器比如安瓿或小药囊中的冻干粉末或无水浓缩物的形式提供，用以指示活性剂的量。当组合物通过输注施用时，可以用装有无菌药用级水或盐水的输液瓶分配。当通过注射施用组合物时，可以提供安瓿瓶的无菌注射用水或盐水，使得可以在施用之前将成分混合。
本公开的化合物可以被配制为中性或盐形式。药学上可接受的盐包括与阴离子形成的盐，比如衍生自盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的盐以及与阳离子形成的盐，比如衍生自钠、钾、铵、钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙基氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等的盐。
实施例
实施例1：产生针对人密蛋白18亚型2(CLD 18A2)的鼠单克隆抗体
a.免疫：
用编码人密蛋白18.2(CLD 18A2)片段的真核表达载体免疫Balb/c和C57/BL6小鼠。在第1天和第10天，将50μg质粒DNA注射入四头肌(肌肉内，i.m.)。在第20天，使用编码人CLD 18A2的核酸瞬时转染的HEK 293细胞，通过流式细胞术来监测小鼠血清中针对人CLD18A2的抗体的存在。通过腹膜内注射用编码人CLD 18A2的核酸瞬时转染的5×107HEK293细胞，在融合前三天和两天加强具有可检测的免疫应答的小鼠(图1)。
b.产生抗CLD18A2的人单克隆抗体的杂交瘤的产生：
基于标准方案，分离小鼠脾细胞并用PEG融合至小鼠骨髓瘤细胞系。然后通过细胞ELISA使用编码人CLD18的核酸转染的HEK293细胞筛选所得杂交瘤中具有CLD 18A2特异性的免疫球蛋白的产生。
使用50％PEG(Roche Diagnostics，CRL 738641)以2:1的比例将来自免疫小鼠的脾淋巴细胞的单细胞悬液与P3X63Ag8U.1非分泌性小鼠骨髓瘤细胞(ATCC，CRL 1597)融合。将细胞以约3×104/孔铺板在平底微量滴定板中，然后在含有10％胎牛血清、2％杂交瘤融合和克隆补充剂(HFCS，Roche Diagnostics，CRL 1 363 735)加上10mM HEPES、0.055mM2-巯基乙醇、50μg/ml庆大霉素和1×HAT(Sigma，CRL H0262)的选择性培养基中孵育约两周。10天至14天之后，通过细胞ELISA筛选各个孔的抗CLD 18A2单克隆抗体(图2)。将分泌抗体的杂交瘤重新铺板，通过FACS再次用表达CLD 18A2或CLD 18A1的HEK293进行筛选，并且如果对于CLD18A2仍然是阳性而对于CLD18A1是阴性，则通过有限稀释进行亚克隆。然后在体外培养稳定的亚克隆，以在组织培养基中产生少量抗体进行表征。从每个杂交瘤中选择至少一个保留亲本细胞反应性的克隆(通过FACS)。每个克隆产生三个小瓶细胞库并储存在液氮中。
c.选择结合CLD 18A2而不结合CLD18A1的单克隆抗体:
为了确定抗体的亚型，进行了亚型ELISA。小鼠monoAB ID试剂盒(Zymed，CRL90-6550)用于确定已鉴定的CLD18A2反应性单克隆抗体的Ig亚类。生成了三十二个杂交瘤细胞系：64G11B4、65G8B8、56E8F10F4、54A2C4、44F6B11、15C2B7、20F1E10、72C1B6A3、58G2C2、101C4F12、103A10B2、40C10E3、78E8G9G6、4F11E2、10G7G11、12F1F4、78C10B6G4、119G11D9、113G12E5E6、116A8B7、105F7G12、84E9E12、103F4D4、110C12B6、85H12E8、103H2B4、103F6D3、113E12F7、120B7B2、111B12D11、111E7E2和100F4G12，其详细信息如下所示：
64G11B4，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
65G8B8，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
56E8F10F4，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
54A2C4，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
44F6B11，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
15C2B7，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
20F1E10，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
72C1B6A3，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
58G2C2，小鼠单克隆IgG2a，κ抗体
101C4F12，小鼠单克隆IgG2b，κ抗体
103A10B2，小鼠单克隆IgG2b，κ抗体
40C10E3，小鼠单克隆IgG1，λ抗体
78E8G9G6，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
4F11E2，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
10G7G11，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
12F1F4，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
78C10B6G4，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
119G11D9，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
113G12E5E6，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
116A8B7，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
105F7G12，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
84E9E12，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
103F4D4，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
110C12B6，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
85H12E8，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
103H2B4，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
103F6D3，小鼠单克隆IgG1，κ抗体
113E12F7，小鼠单克隆IgG2a，κ抗体
120B7B2，小鼠单克隆IgG2a，κ抗体
111B12D11，小鼠单克隆IgG2a，κ抗体
111E7E2，小鼠单克隆IgG2a，κ抗体
100F4G12，小鼠单克隆IgG3，κ抗体。
实施例2.杂交瘤测序
收获杂交瘤细胞(1×107)，并使用上述针对脾脏组织的Tri试剂提取总RNA。如上所述，使用SuperScript III试剂盒根据制造商的说明书制备cDNA。将所得的cDNA产物用作以VhRevU和VhForU为引物的PCR模板，使用PCR纯化试剂盒纯化所得的300bp PCR产物，并且用相同的引物测序。还使用轻链V区特异性引物VkRev7和VkFor(仅针对可变区)或KappaFor引物(针对整个kappa轻链)进行PCR反应。对纯化的PCR产物进行测序反应，以获得下述抗体的DNA序列：64G11B4、65G8B8、56E8F10F4、54A2C4、44F6B11、15C2B7、20F1E10、72C1B6A3、58G2C2、101C4F12、103A10B2、40C10E3、78E8G9G6、4F11E2、10G7G11、12F1F4、78C10B6G4、119G11D9、113G12E5E6、116A8B7、105F7G12、84E9E12、103F4D4、110C12B6、85H12E8、103H2B4、103F6D3、113E12F7、120B7B2、111B12D11、111E7E2和100F4G12。它们的可变序列(VH和VL)显示在下表1中。
表1.抗体的可变区的序列
实施例3.与CLD18A2反应的单克隆抗体的生产和纯化
为了产生mg量的抗体用于功能表征，将杂交瘤细胞以2×106细胞/ml的量接种在基于透析的生物反应器(CELLine CL1000，Integra，Chur，CH)中。每周收集一次含有抗体的上清液。使用甜瓜凝胶(Pierce，罗克福德，美国)纯化小鼠单克隆抗体，并且通过硫酸铵沉淀进行浓缩。通过十二烷基硫酸钠凝胶电泳和考马斯亮蓝染色来估计抗体浓度和纯度。
实施例4.与CLD18A2反应的鼠单克隆抗体的结合
从烧瓶中收获过表达CLD18A2的MKN45细胞。将100μl的1×106个细胞/ml的细胞与如图3所示的一级抗体在冰上以100nM至0.003nM的3倍连续稀释液孵育30分钟。用200μl的FACS缓冲液洗涤两次之后，将细胞与二级抗体在冰上孵育30分钟。将细胞用200μl的FACS缓冲液洗涤两次，然后转移至BD Falcon 5ml管中，并且通过FACS分析。研究结果表明，与阳性参考抗体相比，纯化的鼠抗体可以通过流式细胞术具有高EC50的与人CLD18A2转染的MKN45细胞结合。
实施例5.与CLD18A2突变体反应的鼠单克隆抗体的结合
从烧瓶中收获内源性表达携带M149L突变的CLD18A2的SU620细胞。将100μl的1×106个细胞/ml的细胞与如图4所示的一级抗体在冰上以100nM至0.003nM的3倍连续稀释液孵育30分钟。用200μl的FACS缓冲液洗涤两次之后，将细胞与二级抗体在冰上孵育30分钟。将细胞用200μl的FACS缓冲液洗涤两次，然后转移至BD Falcon 5ml管中，并且通过FACS分析。研究结果表明，纯化的鼠抗体可以通过流式细胞术以高EC50结合内源性表达携带M149L突变的人CLD18A2的SU620细胞，而参考抗体则不能结合SU620细胞(图4)。
实施例6.与小鼠和猕猴CLD18A2反应的鼠单克隆抗体的结合
为了评估这些抗体与小鼠和猕猴CLD18A2的交叉反应性，从烧瓶中收获过表达小鼠、猕猴或人CLD18A2的HEK293细胞。将100μl的1×106个细胞/ml的细胞与如图3a所示的一级抗体在冰上以100nM至0.003nM的3倍连续稀释液孵育30分钟。用200μl的FACS缓冲液洗涤两次之后，将细胞与二级抗体在冰上孵育30分钟。将细胞用200μl的FACS缓冲液洗涤两次，然后转移至BD Falcon 5ml管中，并且通过FACS分析。研究结果表明，纯化的鼠抗体可以通过流式细胞术以高EC50结合小鼠和猕猴CLD18A2，至少与参考抗体相似(图5、图6和图7)。
实施例7.与CLD18A2反应的嵌合抗体的结合
合成产生鼠VH和VK基因，然后分别克隆到含有人γ1和人κ恒定结构域的载体中。纯化的嵌合抗体由转染的CHO细胞产生。
从烧瓶中收获稳定表达人CLD18A2或CLD18A1的MKN45细胞。将100μl的1×106个细胞/ml的细胞与如图4所示的一级嵌合抗体在冰上以100nM至0.003nM的3倍连续稀释液孵育30分钟。用200μl的FACS缓冲液洗涤两次后，将细胞与二级抗体在冰上孵育30分钟。将细胞用200μl的FACS缓冲液洗涤两次，然后转移至BD Falcon 5ml管中，并且通过FACS分析。研究结果表明，嵌合抗体可以以高EC50结合人CLD18A2，而不能结合CLD18A1(图8和图9)。
实施例8.嵌合抗体的抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)
ADCC报道基因生物测定在ADCC MOA途径激活的早期点使用替代读数：通过效应细胞中NFAT(活化T细胞的核因子)途径的基因转录激活。另外，ADCC报道基因生物测定使用稳定表达FcγRIIIa受体、V158(高亲和力)变体和驱动萤火虫荧光素酶表达的NFAT应答元件的工程化Jurkat细胞作为效应细胞。ADCC MOA中的抗体生物活性通过由NFAT途径激活产生的萤光素酶进行定量；效应细胞中的荧光素酶活性通过发光读数定量(图1)。信号高，测定背景低。
密蛋白18.2嵌合单克隆抗体或Ref.Ab的系列稀释液与工程化的Jurkat效应细胞(ADCC生物测定效应细胞)在37℃下诱导孵育6小时，在有或没有ADCC生物测定靶细胞(表达密蛋白18.2)的情况下。使用Bio-GloTM试剂定量萤光素酶活性(表2)。结果表明，这些嵌合抗体具有非常强的ADCC活性。
表2.被测抗体的EC50
实施例9.4F11E2、72C1B6A3和120B7B2小鼠单克隆抗体的人源化
使用单克隆抗体4F11E2、72C1B6A3和120B7B2可变区基因来创建人源化单克隆抗体。在该过程的第一步中，将单克隆抗体的VH和VL的氨基酸序列与人Ig基因序列的可用数据库进行比较，以找到总体上最佳匹配的人种系Ig基因序列。
人源化抗体的氨基酸序列在下面表3中列出。
表3.人源化序列
合成产生人源化的VH和VL基因，然后分别克隆到含有人γ1和人κ恒定结构域的载体中。人VH和人VL的配对产生了人源化抗体(参见表4)。
表4.具有其VH和VL区的人源化抗体4F11E2
72C1B6A3
120B7B2
实施例10.与CLD18A2反应的人源化抗体的结合
从烧瓶中收获稳定表达人CLD18A2或CLD18A1的MKN45细胞。将100μl的1×106个细胞/ml的细胞与如图4所示的一级抗体在冰上以100nM至0.003nM的3倍连续稀释液孵育30分钟。用200μl的FACS缓冲液洗涤两次后，将细胞与二级抗体在冰上孵育30分钟。将细胞用200μl的FACS缓冲液洗涤两次，然后转移至BD Falcon 5ml管中，并且通过FACS分析。研究结果表明，所示的人源化抗体可以以高EC50结合人CLD18A2，而不能结合CLD18A1(图10和图11)。
实施例11.与CLD18A2反应的PTM(翻译后修饰)去风险人源化抗体的结合
翻译后修饰(PTM)可能在治疗性蛋白质的开发过程中引起问题，例如增加的异质性、降低的生物活性、降低的稳定性、免疫原性、片段化和聚集。PTM的潜在影响取决于其位置，并且在一些情况下还取决于溶剂的暴露。分析了序列的CDR的以下潜在PTM：天冬酰胺脱酰胺、天冬氨酸异构化、游离半胱氨酸巯基、N-糖基化、氧化、潜在水解位点的片段化等。
为了降低在4F11E2、72C1B6A3和120B7B2中发生PTM的风险，对VH和VL中的一些相关氨基酸进行了突变。然后生成了九种抗体:
*氨基酸位置(例如，N55)是根据对应的VH或VL氨基酸序列(而不是Kabat或Chothia)中的氨基酸残基编号。
从烧瓶中收获稳定表达人CLD18A2或CLD18A1的MKN45细胞。将100μl的1×106个细胞/ml的细胞与如图4所示的一级突变的人源化抗体在冰上以100nM至0.003nM的3倍连续稀释液孵育30分钟。用200μl的FACS缓冲液洗涤两次后，将细胞与二级抗体在冰上孵育30分钟。将细胞用200μl的FACS缓冲液洗涤两次，然后转移至BD Falcon 5ml管中，并且通过FACS分析。研究结果表明，所示抗体可以以高EC50结合人CLD18A2，而不能结合CLD18A1(图12和图13)。
为了评估4F11E2d(HC N55E/LC S32A)和4F11E2d(H N55E N104Q/LC S32A)抗原结合效力的去风险变体，在基于细胞的结合测定中测试了这些变体。从100nM开始的连续稀释的抗CLDN18.2抗体与105个细胞在冰上孵育30分钟。用FACS缓冲液洗涤后，然后将细胞与APC标记的二级抗体在冰上再孵育30分钟。通过FACS分析与抗体结合的细胞。变体显示出与细胞表面密蛋白18.2的有效结合(图14)。
实施例12.PTM去风险人源化抗体的抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)
密蛋白18.2PTM去风险人源化抗体或Ref.Ab的系列稀释液与工程化的Jurkat效应细胞(ADCC生物测定效应细胞)在37℃下诱导孵育6小时，在有或没有ADCC生物测定靶细胞(表达密蛋白18.2)的情况下。使用Bio-GloTM试剂定量萤光素酶活性(表5)。结果表明，这些人源化抗体具有非常强的ADCC活性。
实施例13.表位作图
将密蛋白18.2的细胞外结构域的所有氨基酸单突变为A。将每种突变或野生型密蛋白18.2转染到Hek293细胞中。通过指定的抗体评估密蛋白18.2的表达。结果示出在图14中(仅示出突变减少结合的氨基酸残基)。
如图15所示，氨基酸W30、N45、Y46、G48、L49、W50、C53、V54、R55、E56、S58、F60、E62、C63、R80、Y169和G172参与三种被测抗体，即，4F11E2(H4F)、72C186A3(H72C1)和120B7B2(120)或者参考抗体175D10(IMAB362)的结合。W30似乎在密蛋白18.2蛋白的第一细胞外结构域的前半部分形成了残基簇。N45、Y46、G48、L49、W50、C53、V54、R55、E56、S58、F60、E62和C63似乎是同一细胞外结构域内的第二残基簇。另一方面，Y169和G172位于第二细胞外结构域处或附近。
实施例14.人源化4F11E2、72C1B6A3和120B7B2抗体与基准175D10密蛋白18.2抗体的比较
基于细胞的结合
为了比较人源化抗密蛋白18.2抗体：4F11E2(HC N55E/LC S32A)、72C1B6A3(HCWT/LC S32A)和120B7B2(HC G57D S104A/LC S32A G97A)与基准抗体175D10(IMAB362)，该实施例确定了人密蛋白18.2表达的细胞中基于细胞的结合。基于人CLDN18.2表达水平将稳定表达人CLD18A2的CHO-K1细胞分选为高表达子和低表达子。从100nM开始的连续稀释的抗CLDN18.2抗体与105个细胞在冰上孵育30分钟。用FACS缓冲液洗涤后，然后将细胞与APC标记的二级抗体在冰上再孵育30分钟。通过FACS对与抗体结合的细胞进行分析。
如图16所示，4F11E2、72C1B6A3和120B7B2在密蛋白18.2高和低CHO-K1细胞中都显示出比175D10的优异结合。
ADCC测定
为了进一步比较人源化抗密蛋白18.2抗体4F11E2(HC N55E/LC S32A)、72C1B6A3(HC WT/LC S32A)和120B7B2(HC G57D S104A/LC S32A G97A)与基准抗体175D10(IMAB362)的ADCC效果，该实施例执行了基于细胞的ADCC测定。简而言之，将NK92细胞与密蛋白18.2过表达的293细胞在存在不同剂量的抗密蛋白18.2抗体的情况下共培养。如图17所示，4F11E2、72C1B6A3和120B7B2显示出优于175D10抗体的ADCC效力。
对于某些治疗性抗体，增强的ADCC可以增加基于抗体的靶治疗的治疗窗口。增强的ADCC可以通过工程化Fc区来实现，例如具有S239D/I332E突变。在基于NK92细胞的ADCC测定中，与具有相同S239D/I332E突变的对照抗体175D10相比，在Fc区中具有S239D/I332E突变的4H11E2、72C1B6A3和120B7B2抗体介导了更强的NK92介导的对密蛋白18.2过表达的293细胞的细胞杀伤(图18)。
抗体依赖的细胞介导的吞噬作用(ADCP)
在体外测定中评估了抗CLDN 18.2单克隆抗体对巨噬细胞吞噬肿瘤细胞的作用，其中，将CLDN18.2阳性NUG-C4细胞与人类分化的巨噬细胞在存在不同浓度的抗CLDN 18.2单克隆抗体的情况下共培养。简而言之，从人外周血单核细胞(PBMC)中纯化出CD14+单核细胞，并且在体外分化为成熟的巨噬细胞持续6天。收集单核细胞衍生的巨噬细胞(MDM)，并且将其重新铺板在24孔培养皿中过夜作为效应细胞。在存在不同浓度的抗CLDN18.2单克隆抗体的情况下，以5个肿瘤细胞/吞噬细胞的比例将表达CLDN18.2-eGFP的NUG-C4作为靶细胞添加到MDM中。孵育3小时后，将未吞噬的靶细胞用PBS冲洗掉，收集剩余的吞噬细胞，并且用巨噬细胞标志物CD14染色，然后进行流式细胞术分析。通过定量CD14+细胞中GFP+细胞的百分比来计算吞噬指数，将其对IgG对照归一化。
如图19所示，所有C18.2单克隆抗体以浓度依赖性方式显著增强了NUG-C4细胞的吞噬作用。在野生型IgG1和S239D/I332E突变的IgG1形式中，4H11E2、72C1B6A3和120B7B2抗体比参考抗体175D10表现出更强的ADCP效果。
综上所述，该实施例表明，新开发的4F11E2、72C1B6A3和120B7B2抗体具有比参考抗体175D10更强的基于细胞的结合和ADCC/ADCP效力。可以预期的是，这些新抗体的改善的性质可归因于与参考抗体175D10相比的这些抗体的更高结合特异性。例如，175D10与密蛋白18.2的相互作用在图15中的光谱中是很强的，其包括与D28、Q33、N38和V43以及G59和V79的强结合。相比之下，新抗体4F11E2、72C1B6A3和120B7B2在第一细胞外结构域的前半部分内对W30具有更高的特异性，并且在第一细胞外结构域的后半部分内对G48至E56具有更高的特异性。新抗体与后半部分中的Y46结合也稍强。它们与D28、Q33、N38、V43、G59和V79的结合相当弱，这可能有助于新抗体的改善的ADCC和ADCP。
***
本公开的范围不受限于所描述的具体实施方式，所述具体实施方式旨在作为本公开的各个方面的单一说明，并且功能上等同的任何组合物或方法都在本公开的范围内。对于本领域技术人员将明显的是，在不脱离本公开的精神或范围的情况下，可以对本公开的方法和组合物进行各种修改和变化。因此，本公开旨在覆盖本公开的修改和变型，只要这些修改和变型落入所附权利要求及其等同物的范围内即可。
在本说明书中提到的所有出版物和专利申请都以相同的程度通过参引并入本文，就好像每个单独的出版物或专利申请被具体地和单独地表明通过引用并入一样。
序列表
<110> 礼新医药科技（上海）有限公司
<120> 抗密蛋白18.2抗体及其用途
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<222> (4)..(4)
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<223> 合成的
<400> 3
Gln Asn Gly Tyr Tyr Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 4
Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Ile
1 5
<210> 5
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 5
Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr
1 5
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 6
Ala Arg Ala Tyr Phe Gly Asn Ser Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 7
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> 空的
<400> 7
Arg Ala Ser Xaa
1
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 8
Gln Asn Asp Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 9
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 9
Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Pro
1 5
<210> 10
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 10
Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr
1 5
<210> 11
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 11
Ala Arg Arg Ala Tyr Gly Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 12
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 12
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Arg Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 13
Gln Asn Ala Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 14
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 14
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Phe Gly
1 5
<210> 15
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 15
Ile Thr Ser Gly Asn Ser Pro Ile
1 5
<210> 16
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 16
Ala Arg Ser Ser Tyr Tyr Gly Asn Ser Met Asp Tyr
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 17
Gln Ser Leu Leu Asn Ala Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 18
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 18
Gln Ser Leu Leu Glu Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 19
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 19
Gln Asn Ala Tyr Tyr Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 20
Gln Glu Gly Tyr Tyr Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 21
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1 5
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 22
Ala Arg Ala Tyr Phe Gly Asn Ala Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 23
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 23
Gln Ser Leu Leu Glu Ser Gly Asn Arg Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 24
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 24
Gln Ser Leu Leu Asn Ala Gly Asn Arg Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 25
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 25
Ile Thr Ser Gly Gln Ser Pro Ile
1 5
<210> 26
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 26
Ile Thr Ser Gly Glu Ser Pro Ile
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 27
Ala Arg Ser Ser Tyr Tyr Gly Gln Ser Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 28
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 28
Ala Arg Ser Ser Tyr Tyr Gly Glu Ser Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 29
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 29
Ala Arg Ser Ser Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 30
<211> 261
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 30
Met Ala Val Thr Ala Cys Gln Gly Leu Gly Phe Val Val Ser Leu Ile
1 5 1015
Gly Ile Ala Gly Ile Ile Ala Ala Thr Cys Met Asp Gln Trp Ser Thr
202530
Gln Asp Leu Tyr Asn Asn Pro Val Thr Ala Val Phe Asn Tyr Gln Gly
354045
Leu Trp Arg Ser Cys Val Arg Glu Ser Ser Gly Phe Thr Glu Cys Arg
505560
Gly Tyr Phe Thr Leu Leu Gly Leu Pro Ala Met Leu Gln Ala Val Arg
65707580
Ala Leu Met Ile Val Gly Ile Val Leu Gly Ala Ile Gly Leu Leu Val
859095
Ser Ile Phe Ala Leu Lys Cys Ile Arg Ile Gly Ser Met Glu Asp Ser
100 105 110
Ala Lys Ala Asn Met Thr Leu Thr Ser Gly Ile Met Phe Ile Val Ser
115 120 125
Gly Leu Cys Ala Ile Ala Gly Val Ser Val Phe Ala Asn Met Leu Val
130 135 140
Thr Asn Phe Trp Met Ser Thr Ala Asn Met Tyr Thr Gly Met Gly Gly
145 150 155 160
Met Val Gln Thr Val Gln Thr Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ala Leu Phe
165 170 175
Val Gly Trp Val Ala Gly Gly Leu Thr Leu Ile Gly Gly Val Met Met
180 185 190
Cys Ile Ala Cys Arg Gly Leu Ala Pro Glu Glu Thr Asn Tyr Lys Ala
195 200 205
Val Ser Tyr His Ala Ser Gly His Ser Val Ala Tyr Lys Pro Gly Gly
210 215 220
Phe Lys Ala Ser Thr Gly Phe Gly Ser Asn Thr Lys Asn Lys Lys Ile
225 230 235 240
Tyr Asp Gly Gly Ala Arg Thr Glu Asp Glu Val Gln Ser Tyr Pro Ser
245 250 255
Lys His Asp Tyr Val
260
<210> 31
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 31
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr
1 5 10
<210> 32
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 32
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Leu Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 33
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 33
Gln Ser Leu Leu Asn Gly Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 34
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 34
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Lys Tyr
1 5 10
<210> 35
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 35
Gln Ser Leu Phe Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr
1 5 10
<210> 36
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 36
Met Ser Leu Phe Asn Ser Gly Asn Gln Lys Ser Tyr
1 5 10
<210> 37
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 37
Gln Ser Leu Phe Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 38
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 38
Gln Ser Val Phe Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 39
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> 空的
<400> 39
Gly Ala Ser Xaa
1
<210> 40
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> 空的
<400> 40
Trp Ala Phe Xaa
1
<210> 41
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> 空的
<400> 41
Trp Ser Ser Xaa
1
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 42
Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 43
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 43
Gln Asn Val Tyr Ile Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 44
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 44
Gln Asn Asp Tyr Tyr Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 45
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 45
Gln Asn Asp Leu Tyr Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 46
Gln Asn Gly Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 47
Gln Asn Asn Tyr Tyr Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 48
Gln Asn Val Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 49
Gln Asn Ser Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 50
Gln Asn Asn Phe Ile Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 51
His Asn Asp Tyr Ile Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 52
Gln Asn Asn Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 53
Gln Asn Ala Tyr Tyr Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 54
Gln Asn Ala Tyr Phe Tyr Pro Cys Thr
1 5
<210> 55
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 55
Gln Asn Asp Tyr Tyr Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 56
Gln Asn Ala Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 57
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 57
Gln Asn Asn Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 58
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 58
Gln Asn Asn Tyr Ile Tyr Pro Leu Ala
1 5
<210> 59
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 59
Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr Leu
1 5
<210> 60
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 60
Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly
1 5
<210> 61
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 61
Gly Phe Thr Phe Asn Ser Phe Gly
1 5
<210> 62
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 62
Gly Phe Thr Phe Asn Thr Asn Ala
1 5
<210> 63
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 63
Gly Tyr Thr Phe Pro Thr Tyr Ser
1 5
<210> 64
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 64
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly
1 5
<210> 65
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 65
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly
1 5
<210> 66
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 66
Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr Gly
1 5
<210> 67
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 67
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 68
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 68
Gly Leu Ser Leu Thr Ser Phe Gly
1 5
<210> 69
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 69
Gly Phe Ser Leu Ile Ser Tyr Gly
1 5
<210> 70
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 70
Gly Phe Ser Leu Asn Thr Tyr Gly
1 5
<210> 71
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 71
Gly Phe Ser Leu Ile Asn Tyr Gly
1 5
<210> 72
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 72
Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Phe Leu
1 5
<210> 73
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 73
Asp Phe Ser Leu Thr Lys Tyr Gly
1 5
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 74
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Phe
1 5
<210> 75
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 75
Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Gly
1 5
<210> 76
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 76
Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Phe Leu
1 5
<210> 77
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 77
Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Ser
1 5
<210> 78
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 78
Ile Trp Gly Asp Gly Asn Thr
1 5
<210> 79
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 79
Ile Ser Gly Gly Ser Asn Thr Ile
1 5
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 80
Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr
1 5 10
<210> 81
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 81
Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Ser Asn
1 5
<210> 82
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 82
Ile Asn Pro Ser Thr Ile Tyr Thr
1 5
<210> 83
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 83
Phe Ser Tyr Gly Asp Ser His Asn
1 5
<210> 84
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 84
Ile Asn Ala Asn Thr Gly Glu Pro
1 5
<210> 85
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 85
Ile Ser Thr Asn Thr Gly Glu Pro
1 5
<210> 86
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 86
Ile Asn Pro Gly Arg Ser Gly Thr
1 5
<210> 87
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 87
Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 88
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 88
Ile Trp Ala Gly Gly Arg Thr
1 5
<210> 89
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 89
Met Leu Ser Asp Gly Asn Thr
1 5
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 90
Ile Arg Gly Asp Gly Asn Thr
1 5
<210> 91
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 91
Ile Trp Thr Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 92
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 92
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn
1 5
<210> 93
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 93
Ile Trp Ala Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 94
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 94
Ile Asn Pro Thr Asn Gly Arg Thr
1 5
<210> 95
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 95
Ile Asn Pro Asn Thr Ile Tyr Thr
1 5
<210> 96
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 96
Ala Arg Ile Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 97
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 97
Ala Lys Gln Gly Leu Tyr Gly His Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 98
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 98
Thr Arg Leu Ala Leu Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 99
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1 5 10
<210> 100
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 100
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1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 101
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1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 102
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1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 103
Ala Arg Leu Val Arg Gly Asn Ser Phe Asp Phe
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 104
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1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 105
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<211> 11
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 106
Ala Arg Ser Leu Tyr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 107
Ala Arg Asp Arg Tyr Gly Gly Asn Ser Leu Asp Tyr
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 108
Ala Arg His Lys Ala Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 109
Ala Lys Val Gly Arg Gly Asn Ala Met Asp His
1 5 10
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 110
Ala Arg Leu Asp Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 111
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 111
Ala Arg Asn Gly Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 112
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 112
Gly Arg Leu Asp Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 113
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 113
Ala Ser Phe Arg Phe Phe Ala Tyr
1 5
<210> 114
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 114
Ala Arg His Gly Tyr Gly Lys Gly Asn Ala Met Asp Asn
1 5 10
<210> 115
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 115
Ala Arg Ile Tyr Tyr Gly Asn Ser Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 116
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 116
Ala Arg Ser Leu Tyr Gly Asn Ser Phe Asp His
1 5 10
<210> 117
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 117
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Asp Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Asp Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 118
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 118
Asp Ile Met Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Thr Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Leu Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Leu Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly His
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Val Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Thr Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Val Tyr Ile Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Met
100 105 110
Arg
<210> 119
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 119
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Ala Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Asp Tyr Tyr Phe Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 120
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 120
Asp Thr Val Met Thr Gln Phe Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Asp Leu Tyr Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Phe
100 105 110
Lys
<210> 121
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 121
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Ile Met Ser Cys Lys Ser Asn Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Lys Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Arg Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Gly Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Met
100 105 110
Lys
<210> 122
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 122
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Gly Lys Val Thr Val Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Thr Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Asn Tyr Tyr Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 123
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 123
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Thr
65707580
Ile Thr Lys Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Val Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 124
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 124
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Val Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Asp Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met
100 105 110
Asn
<210> 125
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 125
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Thr Leu Leu Ile Phe Trp Ala Phe Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Asn Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Ser Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 126
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 126
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ser Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Asn Phe Ile Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 127
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 127
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Pro Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Arg Ser Ser Met Ser Leu Phe Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
505560
Pro Val Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys His Asn
859095
Asp Tyr Ile Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 128
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 128
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Asn Cys Arg Ser Ile Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Arg Ser Val Leu Asp Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Ser Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Met
100 105 110
Lys
<210> 129
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 129
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Arg Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Ala Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Lys
100 105 110
Lys
<210> 130
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 130
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr
65707580
Val Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Ala Tyr Tyr Phe Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Lys
100 105 110
Lys
<210> 131
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 131
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Arg
1 5 1015
Glu Arg Val Ser Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ser Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Phe Cys Gln Asn
859095
Asn Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 132
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 132
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Arg Val Thr Met Arg Cys Arg Ser Thr Gln Ser Leu Phe Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Ala Tyr Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Arg
100 105 110
Lys
<210> 133
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 133
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Pro Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Ala Tyr Phe Tyr Pro Cys Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met
100 105 110
Lys
<210> 134
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 134
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Arg Cys Arg Ser Thr Gln Ser Leu Phe Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Ala Tyr Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Val Gly Thr Lys Leu Glu Arg
100 105 110
Lys
<210> 135
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 135
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Ala Tyr Phe Tyr Pro Cys Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met
100 105 110
Lys
<210> 136
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 136
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Thr Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Val Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Ala Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr Leu Thr
65707580
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859095
Asp Tyr Tyr Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Arg Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 137
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 137
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Gln Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Phe Thr
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Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Ala Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 138
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 138
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Glu Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Ile Ser Asn Ile Gln Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Phe Cys Gln Asn
859095
Ala Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 139
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 139
Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Asn Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Val Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 140
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 140
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Thr Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Asn Tyr Ile Tyr Pro Leu Ala Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 141
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Met Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Gly Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Phe Cys Gln Asn
859095
Gly Tyr Tyr Phe Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Thr
100 105 110
Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 142
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Arg Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Asn Tyr Ile Tyr Pro Leu Ala Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 143
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
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Asn Tyr Ile Tyr Pro Leu Ala Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 144
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 1015
Glu Lys Val Thr Met Arg Cys Lys Ser Thr Gln Ser Leu Leu Asn Ser
202530
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Glu Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Ala Tyr Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Arg
100 105 110
Lys
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 145
Gln Val Gln Leu His Gln Ser Gly Thr Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr
1 5 1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr
202530
Leu Leu Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
354045
Gly Glu Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Ser Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
505560
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65707580
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
859095
Ala Arg Ile Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
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<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 146
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 1015
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
202530
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
354045
Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Asn Thr Ile Tyr His Ser Ala Leu Lys
505560
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Arg Gln Val Phe Leu
65707580
Lys Val Asn Ser Leu Gln Ile Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
859095
Lys Gln Gly Leu Tyr Gly His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Ile Val Ser Ser
115
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<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 147
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 1015
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ser Phe
202530
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
354045
Ala Phe Ile Ser Gly Gly Ser Asn Thr Ile His Tyr Leu Asp Thr Val
505560
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe
65707580
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Leu Ala Leu Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Ile Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 148
Glu Val Gln His Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 1015
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Asn
202530
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
354045
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
505560
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Met
65707580
Leu Tyr Val Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
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100 105 110
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 149
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 1015
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Pro Thr Tyr
202530
Ser Ile His Trp Leu Lys Gln Gly Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
354045
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Thr Ile Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
505560
Lys Tyr Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65707580
Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Glu Gly Tyr Gly Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 150
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 1015
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
202530
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
354045
Ala Thr Phe Ser Tyr Gly Asp Ser His Asn Tyr Tyr Ser Asp Ser Val
505560
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ala Lys Asp Ala Leu Tyr
65707580
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Phe Gly Arg Gly Asn Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Leu
115
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<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 151
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Arg Lys Pro Gly Glu
1 5 1015
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
202530
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
354045
Ala Trp Ile Asn Ala Asn Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
505560
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Arg Ser Ala Tyr
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Leu Gln Ile Asn Ser Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
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Ala Arg Leu Thr Arg Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 152
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 152
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 1015
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr
202530
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
354045
Gly Trp Ile Ser Thr Asn Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
505560
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe
65707580
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
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Ala Arg Leu Val Arg Gly Asn Ser Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Ile
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 153
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 153
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Gly Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 1015
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
202530
Pro Ile Glu Trp Met Lys Gln Asn His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
354045
Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
505560
Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Val Glu Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr
65707580
Leu Glu Val Ser Arg Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Arg Ala Tyr Gly Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 154
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 154
Gln Val His Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Arg Pro Gly Thr
1 5 1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr
202530
Leu Ile Glu Trp Ile Lys Lys Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val
354045
Gly Val Ile Asn Pro Gly Arg Ser Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
505560
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65707580
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
859095
Ala Arg Thr Arg Tyr Gly Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 155
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 155
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Gln Val Ala Pro Ser Gln
1 5 1015
Ser Leu Ser Ile Ala Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
202530
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
354045
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asp Ser Ala Leu Met
505560
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Arg Thr Arg Val Phe Leu
65707580
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Ser Leu Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Ser Trp Gly Pro Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 156
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 156
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 1015
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Ser Leu Thr Ser Phe
202530
Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
354045
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
505560
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Tyr Leu
65707580
Lys Met His Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
859095
Arg Ser Leu Tyr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 157
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 157
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 1015
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
202530
Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
354045
Ala Ala Ile Arg Ser Asp Gly Ile Ile Thr Tyr Asn Ser Val Leu Lys
505560
Ser Arg Leu Arg Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65707580
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Phe Tyr Cys Ala
859095
Arg Trp Phe Arg Gly Asn Val Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 158
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 158
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 1015
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ile Ser Tyr
202530
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
354045
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
505560
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65707580
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Asp Arg Tyr Gly Gly Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 159
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 159
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 1015
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Phe
202530
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
354045
Ala Tyr Ile Thr Ser Gly Asn Ser Pro Ile Tyr Phe Thr Asp Thr Val
505560
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe
65707580
Leu Gln Met Thr Ser Leu Gly Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Ser Ser Tyr Tyr Gly Asn Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 160
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 160
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 1015
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Ile Ser Gly Phe Ser Leu Asn Thr Tyr
202530
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
354045
Val Val Met Leu Ser Asp Gly Asn Thr Val Tyr Asn Ser Ser Leu Lys
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Ser Arg Leu Ser Leu Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Leu Leu Leu
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115
<210> 161
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 161
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 1015
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ile Asn Tyr
202530
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Asn Thr Asn Tyr Gln Ser Ala Leu Arg
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Ser Arg Leu Ser Ile Arg Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
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Lys Val Gly Arg Gly Asn Ala Met Asp His Trp Gly Gln Gly Ile Ser
100 105 110
Val Ile Val Ser Ser
115
<210> 162
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 162
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 1015
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ile Asn Tyr
202530
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
354045
Gly Val Ile Arg Gly Asp Gly Asn Thr Asn Tyr Gln Ser Ala Leu Arg
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Ser Arg Leu Ser Ile Arg Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
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Lys Val Gly Arg Gly Asn Ala Met Asp His Trp Gly Gln Gly Ile Ser
100 105 110
Val Ile Val Ser Ser
115
<210> 163
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 163
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 1015
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Phe
202530
Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
354045
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
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Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Leu Asp Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 164
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 164
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 1015
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Asp Phe Ser Leu Thr Lys Tyr
202530
Gly Val His Trp Phe Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Val Ile Trp Thr Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Pro Ala Leu Ile
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Pro Arg Leu Ser Phe Arg Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
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Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Ser Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Ser Val Thr Val Ser Ser
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<210> 165
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 165
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 1015
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Phe
202530
Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Gly Arg Leu Asp Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 166
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 166
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 1015
Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
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Val Ser Ala
115
<210> 167
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 167
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 1015
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr
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Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
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Ser Arg Leu Arg Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
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Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala
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202530
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100 105 110
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202530
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<223> 合成的
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202530
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202530
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202530
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202530
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<223> 合成的
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<223> 合成的
<400> 181
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<400> 196
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<210> 197
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 197
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 1015
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Phe
202530
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
354045
Ser Tyr Ile Thr Ser Gly Glu Ser Pro Ile Tyr Phe Thr Asp Thr Val
505560
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65707580
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
859095
Ala Arg Ser Ser Tyr Tyr Gly Asn Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 198
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 198
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 1015
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Phe
202530
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
354045
Ser Tyr Ile Thr Ser Gly Glu Ser Pro Ile Tyr Phe Thr Asp Thr Val
505560
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65707580
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
859095
Ala Arg Ser Ser Tyr Tyr Gly Gln Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 199
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 1015
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Phe
202530
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
354045
Ser Tyr Ile Thr Ser Gly Glu Ser Pro Ile Tyr Phe Thr Asp Thr Val
505560
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65707580
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
859095
Ala Arg Ser Ser Tyr Tyr Gly Glu Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 200
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 1015
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Phe
202530
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
354045
Ser Tyr Ile Thr Ser Gly Glu Ser Pro Ile Tyr Phe Thr Asp Thr Val
505560
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65707580
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
859095
Ala Arg Ser Ser Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 201
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 1015
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser
202530
Gly Asn Arg Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Ala Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 202
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 1015
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
202530
Gly Asn Arg Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
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100 105 110
Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 203
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 1015
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Asp Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 204
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 1015
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
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Asp Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 205
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
202530
Ile Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
354045
Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Gln Phe
505560
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65707580
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Ala Tyr Phe Gly Asn Ala Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 206
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 1015
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
859095
Ala Tyr Tyr Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 207
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 1015
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser
202530
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
354045
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
505560
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65707580
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Glu
859095
Gly Tyr Tyr Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
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1 5 1015
Thr
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<211> 17
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 209
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Leu Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
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Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 211
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Ala
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 212
Lys Ser Asn Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Lys Tyr Leu
1 5 1015
Thr
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 213
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 214
Arg Ser Ser Met Ser Leu Phe Asn Ser Gly Asn Gln Lys Ser Tyr Leu
1 5 1015
Ser
<210> 215
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 215
Arg Ser Ile Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Ser
<210> 216
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 216
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 217
Arg Ser Thr Gln Ser Leu Phe Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
<210> 218
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 218
Lys Pro Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Ala
<210> 219
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 219
Arg Ser Thr Gln Ser Leu Phe Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
<210> 220
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 220
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Ala
<210> 221
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 221
Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
<210> 222
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 222
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 223
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu
1 5 1015
Ser
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 224
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
<210> 225
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 225
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
<210> 226
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 226
Lys Ser Thr Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 227
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 228
Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 229
Arg Ala Ser Ser Arg Glu Ser
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 230
Trp Ala Phe Thr Arg Glu Ser
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 231
Trp Ser Ser Thr Arg Asp Ser
1 5
<210> 232
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 232
Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser
1 5
<210> 233
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 233
Trp Ser Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 234
Asn Tyr Leu Leu Glu
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 235
Ser Tyr Gly Val Ser
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 236
Ser Phe Gly Met Asn
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 237
Thr Asn Ala Met Asn
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 238
Thr Tyr Ser Ile His
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 239
Asn Tyr Gly Met Ser
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 240
Asn Tyr Gly Met Asn
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 241
Lys Tyr Gly Met Asn
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 242
Thr Tyr Pro Ile Glu
1 5
<210> 243
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 243
Asn Tyr Leu Ile Glu
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 244
Ser Tyr Gly Val His
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 245
Ser Phe Gly Val His
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 246
Thr Phe Gly Met His
1 5
<210> 247
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 247
Thr Tyr Gly Val His
1 5
<210> 248
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 248
Asn Tyr Gly Val Ser
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 249
Gly Phe Leu Met His
1 5
<210> 250
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 250
Lys Tyr Gly Val His
1 5
<210> 251
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 251
Ser Gly Tyr Phe Trp
1 5
<210> 252
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 252
Asn Phe Leu Thr His
1 5
<210> 253
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 253
Gly Tyr Ile Ile Gln
1 5
<210> 254
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 254
Ser Tyr Gly Ala His
1 5
<210> 255
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 255
Glu Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Ser Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 1015
Gly
<210> 256
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 256
Val Ile Trp Gly Asp Gly Asn Thr Ile Tyr His Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 1015
<210> 257
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 257
Phe Ile Ser Gly Gly Ser Asn Thr Ile His Tyr Leu Asp Thr Val Lys
1 5 1015
Gly
<210> 258
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 258
Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
1 5 1015
Val Lys Asp
<210> 259
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 259
Tyr Ile Asn Pro Ser Thr Ile Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 1015
Tyr
<210> 260
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 260
Thr Phe Ser Tyr Gly Asp Ser His Asn Tyr Tyr Ser Asp Ser Val Lys
1 5 1015
Gly
<210> 261
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 261
Trp Ile Asn Ala Asn Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe Lys
1 5 1015
Gly
<210> 262
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 262
Trp Ile Ser Thr Asn Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe Lys
1 5 1015
Gly
<210> 263
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 263
Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 1015
Gly
<210> 264
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 264
Val Ile Asn Pro Gly Arg Ser Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 1015
Gly
<210> 265
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 265
Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asp Ser Ala Leu Met Ser
1 5 1015
<210> 266
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 266
Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser
1 5 1015
<210> 267
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 267
Val Ile Trp Ala Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser
1 5 1015
<210> 268
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 268
Tyr Ile Thr Ser Gly Asn Ser Pro Ile Tyr Phe Thr Asp Thr Val Lys
1 5 1015
Gly
<210> 269
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 269
Val Met Leu Ser Asp Gly Asn Thr Val Tyr Asn Ser Ser Leu Lys Ser
1 5 1015
<210> 270
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 270
Val Ile Trp Gly Asp Gly Asn Thr Asn Tyr Gln Ser Ala Leu Arg Ser
1 5 1015
<210> 271
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 271
Val Ile Arg Gly Asp Gly Asn Thr Asn Tyr Gln Ser Ala Leu Arg Ser
1 5 1015
<210> 272
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 272
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe Lys
1 5 1015
Gly
<210> 273
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 273
Val Ile Trp Thr Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Pro Ala Leu Ile Pro
1 5 1015
<210> 274
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 274
Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn
1 5 1015
<210> 275
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 275
Val Ile Trp Ala Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser
1 5 1015
<210> 276
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 276
Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 1015
Arg
<210> 277
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 277
Tyr Ile Asn Pro Asn Thr Ile Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 1015
Tyr
<210> 278
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 278
Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Gln Phe Lys
1 5 1015
Gly
<210> 279
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 279
Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asp Ser Thr Leu Met Ser
1 5 1015
<210> 280
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 280
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Ser Glu Arg Phe Lys
1 5 1015
Gly
<210> 281
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 281
Ile Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Tyr
1 5
<210> 282
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 282
Gln Gly Leu Tyr Gly His Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 283
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 283
Leu Ala Leu Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 284
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 284
Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ser Lys Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 285
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 285
Glu Gly Tyr Gly Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 286
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 286
Phe Gly Arg Gly Asn Thr Met Asp Tyr
1 5
<210> 287
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 287
Leu Thr Arg Gly Asn Ser Phe Asp Tyr
1 5
<210> 288
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 288
Leu Val Arg Gly Asn Ser Phe Asp Phe
1 5
<210> 289
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 289
Arg Ala Tyr Gly Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 290
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 290
Thr Arg Tyr Gly Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 291
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 291
Ser Leu Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Ser
1 5
<210> 292
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 292
Ser Leu Tyr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr
1 5
<210> 293
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 293
Asp Arg Tyr Gly Gly Asn Ser Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 294
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 294
Ser Ser Tyr Tyr Gly Asn Ser Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 295
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 295
His Lys Ala Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 296
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 296
Val Gly Arg Gly Asn Ala Met Asp His
1 5
<210> 297
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 297
Leu Asp Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 298
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 298
Asn Gly Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 299
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 299
Phe Arg Phe Phe Ala Tyr
1 5
<210> 300
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 300
His Gly Tyr Gly Lys Gly Asn Ala Met Asp Asn
1 5 10
<210> 301
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 301
Ile Tyr Tyr Gly Asn Ser Met Asp Tyr
1 5
<210> 302
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 302
Ser Leu Tyr Gly Asn Ser Phe Asp His
1 5
<210> 303
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 303
Ala Tyr Phe Gly Asn Ser Phe Ala Tyr
1 5
<210> 304
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 304
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
<210> 305
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 305
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
<210> 306
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 306
Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Gln Phe Lys
1 5 1015
Gly
<210> 307
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 307
Ala Tyr Phe Gly Asn Ala Phe Ala Tyr
1 5
<210> 308
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 308
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser Gly Asn Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
<210> 309
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 309
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala Gly Asn Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 1015
Thr
<210> 310
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 310
Tyr Ile Thr Ser Gly Gln Ser Pro Ile Tyr Phe Thr Asp Thr Val Lys
1 5 1015
Gly
<210> 311
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 311
Tyr Ile Thr Ser Gly Glu Ser Pro Ile Tyr Phe Thr Asp Thr Val Lys
1 5 1015
Gly
<210> 312
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 312
Ser Ser Tyr Tyr Gly Gln Ser Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 313
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 313
Ser Ser Tyr Tyr Gly Glu Ser Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 314
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的
<400> 314
Ser Ser Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
