一种提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶及其制备方法
技术领域
本发明涉及食品技术领域，尤其涉及一种提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶及其 制备方法。
背景技术
每年秋冬季节是疾病多发的时节，包括流感等多种流行病开始肆虐，而免疫力较低的 儿童和老人更是疾病的重灾区。正所谓“免疫力是最好的医生”。佩戴口罩、勤洗手等措施只 能防止外部病毒入侵，一旦受感染而没有特效药的情况下，自身的免疫力是患者唯一可以依 靠的力量。
牛乳营养全面，且含有多种能调节免疫功能的独特成分，如免疫球蛋白、乳铁蛋白及 多种氨基酸。乳制品中所含的溶菌酶、乳过氧化物酶更能在肠内发挥抗感染作用，激活免疫 系统，增强免疫细胞活力或提高机体对致病菌的抵抗力，保护身体的免疫功能。
目前，已有大量文献报道益生菌可以提高人体免疫力，如罗伊氏乳杆菌可以在肠道中 定植，改善肠道菌群分布，拮抗有害菌，生长，提高宿主免疫力。同时，罗伊氏乳杆菌能够 产生“罗伊氏菌素”，能够广泛抑制革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、酵母、真菌、和病原虫等 的生长；鼠李糖乳杆菌LGG可以增加肠粘膜IgA的分泌量，组织病原菌感染上皮细胞，增强 免疫力；植物乳杆菌Lp9和Lp91可以在LPS诱导的HT-29细胞中分泌抗炎细胞因子，调节免疫功能。德国一项研究也显示，乳酸菌发酵产生的D-苯乳酸能够激活人体免疫系统的G蛋白受体HCA3，引起中性粒细胞的趋化作用，提升免疫力。巴西的研究者发现，乳酸菌发酵 产生的乙酸盐可以激发人体GPR43-1型干扰素响应，对抗呼吸道合胞体病毒。
蜂胶、灵芝提取物、破壁灵芝孢子粉、β-葡聚糖、铁皮石斛提取物、接骨木莓、针叶樱桃等食物原料，通常被认为富含对免疫功能有帮助的物质，如黄酮、多酚、灵芝酸、菌类多糖、黏多糖、花青素、维生素C等。
当能够提高人体免疫力的牛乳，经能够提高人体免疫力的益生菌发酵，再辅以能够提 高人体免疫力的功效成分，三强联合，协同增效，可以起到很好的增强免疫力效果。
目前，市面上宣称可增强免疫力的酸奶如图2所示，其使用的益生菌只有在存活状态 下才具备调节免疫功能，因此只能采用冷藏方式存储，保质期较短(一般为15-21天)，且需 要添加白砂糖等糖类物质作为碳源，维持菌种活性。冷藏存储代表着产品对仓储、物流、销 售的环境要求苛刻，中间成本较高；短保质期导致产品容易过期，造成浪费；而需要白砂糖 作为本世纪导致肥胖的元凶之一，目前已广受消费者和业界的诟病。而能够提高免疫力的常 温长保质期(3-6个月)无蔗糖酸奶目前还是市场空白。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶及 其制备方法。该酸奶能有效提高免疫力，并能在常温条件下正常保存，无需冷藏，且保质期 长。
本发明的具体技术方案为：
一种提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶，包括原料奶或乳粉、提高免疫力功效成分；所 述提高免疫力功效成分至少包括瑞士乳杆菌和/或其突变体；
所述瑞士乳杆菌命名为WHH2580，于2019年10月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心保藏，其微生物保藏编号为：CGMCC No.18730，微生物分类命名为瑞士乳 杆菌Lactobacillus helveticus；所述瑞士乳杆菌具有如SEQ ID NO.1所示的16s rRNA基因序 列；所述突变体为对所述瑞士乳杆菌进行诱变、驯化、基因重组或者经自然突变而获得的突 变体。
本发明中所用的瑞士乳杆菌WHH2580是一种从新疆那拉提红山沟采集的酸奶中筛选 得到的益生菌菌株，经过动物实验验证，其具有优良的黏附性能，能顺利到达肠道，与肠道 上皮细胞发生黏附，发挥益生功效；该菌株能提高体外脾淋巴细胞增殖和脾淋巴细胞分泌白 细胞介素IL-12，促进人结肠癌上皮细胞HT-29分泌白细胞介素IL-8；此外，在免疫低下动物 模型中，该菌株还可显著提高小鼠脏器指数、促进脾淋巴细胞增殖和提高NK细胞活性。因 此，该瑞士乳杆菌WHH2580具有良好的增强免疫的功效。更重要的是，该菌株在灭活后仍 具有较好的增强免疫功能。此外，在动物实验过程中，未发现实验动物死亡、精神不振、食 欲不振等不良状态，说明该菌种具有较高的安全性。
具体而言，上述瑞士乳杆菌WHH2580具有以下优点：
(1)活体和非活体均具备优良的黏附特性：在人结肠癌上皮细胞HT-29细胞模型试验中表现 出优良的黏附能力，单细胞黏附活体菌数达15.69±5.94个，单细胞黏附非活体菌数达11.59 ±4.02个，显著优于阳性对照菌株鼠李糖乳杆菌LGG和代田株LcS的黏附性能。该菌株可 与肠道上皮细胞发生黏附，发挥生理功效。虽然粘附不是菌株具备益生菌性质的先决条件， 但因为许多原因，益生菌与肠粘膜的相互作用被认为至关重要。与肠粘膜的结合可以延长益 生菌菌株存在于肠内的时间。这种与粘膜的相互作用使益生菌与肠免疫系统紧密接触，使其 有更好机会调节免疫应答。它还可以通过限制其在肠内留驻的能力来抵御肠道病原体。
(2)具备良好的耐酸耐胆盐特性：在pH＝3.0环境下，孵育2h对该菌的存活性没有显著的影响，3h活菌数降低0.9个数量级；胃蛋白酶在2h对该菌的存活性没有显著的影响，3h活菌数降低0.7个数量级；0.5％胆盐体系中3h降低3.6个数量级。良好的耐酸耐胆盐特性， 使其能更好的通过胃部、十二指肠，顺利到达肠道，从而更好的发挥益生作用；良好的耐酸 性使其在制备酸奶的发酵过程中，能适应更宽的pH范围。
(3)在体外细胞试验中，可促进体外脾淋巴细胞增殖，不加诱导剂的增值倍数为1.912 ±0.087，加诱导剂的增值倍数为1.533±0.109。可促进体外脾淋巴细胞分泌白细胞介素IL-12； IL-12/IL-10比值与鼠李糖乳杆菌LGG无显差。在体外细胞试验中，可促进人结肠癌上皮细胞 HT-29分泌白细胞介素IL-8；刺激分泌的IL-8显著高于商业菌株LGG。
(4)具有对金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、福氏志贺氏菌、藤黄微球菌良好的抑制效果，这使其在肠道中可以良好的抑制肠道中的致病菌，调节肠道菌 群，发挥益生作用。
(5)活体和非活体均具有增强免疫功能：活菌株服用浓度2×108CFU/d、灭火菌株服用浓度2×108CFU/d能够显著提高小鼠脏器指数、促进脾淋巴细胞增殖和提高NK细胞活性。这能使本发明的酸奶中益生菌可以以非活体的形式存在，从而使酸奶可在常温条件下具 有较长的保质期，无需冷藏。
作为优选，所述酸奶还包括糖醇、淀粉、稳定剂、甜味剂。
作为优选，所述酸奶按质量百分数包括原料奶40％-85％或乳粉5-15％，瑞士乳杆菌和 /或其突变体0.001-0.020％，除瑞士乳杆菌和/或其突变体外的提高免疫力功效成分0.01-10.00％，糖醇0.5-5.0％，淀粉0.1-5.0％，稳定剂0.01-1.00％，甜味剂0.001-0.050％，余 量为水；上述所有原料总和为100％。
上述质量百分比是指占所述酸奶总质量的百分比。
作为优选，所述乳粉为全脂乳粉、脱脂乳粉、乳清蛋白粉及全乳蛋白粉中的一种或几 种。
作为优选，所述提高免疫力功效成分还包括蜂胶、灵芝提取物、破壁灵芝孢子粉、β-葡聚糖、铁皮石斛提取物、接骨木莓、针叶樱桃中的一种或几种。
作为优选，所述糖醇为木糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇、山梨糖醇、异麦芽酮糖醇、乳糖醇中的一种或几种。
作为优选，所述淀粉为物理淀粉、醋酸酯淀粉、辛烯基琥珀酸淀粉钠、羟丙基二淀粉 磷酸酯、磷酸酯双淀粉、酸处理淀粉、氧化淀粉、氧化羟丙基淀粉、乙酰化二淀粉磷酸酯、乙酰化双淀粉己二酸酯中的一种或几种。
作为优选，所述稳定剂为羧甲基纤维素钠、果胶、大豆多糖、琼脂、酪蛋白酸钠、海藻酸丙二醇酯、明胶、结冷胶、瓜尔胶、黄原胶中的一种或几种。
作为优选，所述甜味剂为安赛蜜、阿斯巴甜、三氯蔗糖、甜菊糖苷、罗汉果糖苷、异麦芽酮糖、爱德万甜、纽甜中的一种或几种。
一种制备上述提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶的方法，包括以下步骤：
方案A：
(1)均质及杀菌：对原料奶预热后，进行均质、杀菌、冷却，得杀菌冷却料液；
(2)接种发酵：向步骤(1)中所得的杀菌冷却料液中加入瑞士乳杆菌和/或其突变体，搅拌 混匀，恒温静置发酵，得酸奶基料；
(3)胶液制备：对水进行预热，取配方量用量的稳定剂加入水中，剪切或搅拌后，冷却，得 胶液；
(4)二次配料：将步骤(2)中所得的酸奶基料冷却，随后搅拌破乳；加入步骤(3)中所得的胶液，加入配方用量的除瑞士乳杆菌和/或其突变体外的提高免疫力功效成分、糖醇、甜味 剂、淀粉，混合搅拌，用水定容，得料液；
(5)二次均质：对步骤(4)中所得的料液进行均质；
(6)灌装及杀菌：将步骤(5)中均质后的料液灌装、封口、巴氏杀菌、冷却，得到提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶；或将步骤(5)中均质后的料液经UHT杀菌后，热灌装或 无菌冷灌装，封口，得到提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶；
方案B：
1)奶液制备：对水进行加热，取配方量用量的乳粉，加入水中，搅拌或剪切后，静置水合， 得奶液；
2)均质及杀菌：对步骤1)中所得的奶液预热后，进行均质、杀菌、冷却，得杀菌冷却料液；
3)接种发酵：向步骤2)中所得的杀菌冷却料液中加入瑞士乳杆菌和/或其突变体，搅拌混匀， 恒温静置发酵，得酸奶基料；
4)胶液制备：对水进行预热，取配方量用量的稳定剂加入水中，剪切或搅拌后，冷却，得胶 液；
5)二次配料：将步骤3)中所得的酸奶基料冷却，随后搅拌破乳。加入步骤4)中所得的胶液，加入配方用量的除瑞士乳杆菌和/或其突变体外的提高免疫力功效成分、糖醇、甜味剂、淀粉，混合搅拌，用水定容，得料液；
6)二次均质：对步骤5)中所得的料液进行均质；
7)灌装及杀菌：将步骤6)中均质后的料液灌装、封口、巴氏杀菌、冷却，得到提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶；或将步骤6)中均质后的料液经UHT杀菌后，热灌装或无菌冷灌装，封口，得到提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶。
本发明通过对原料乳或奶粉及各种原辅料的预处理、均质、灭菌、发酵、再杀菌和灌 装制成的酸奶，可在常温条件下正常保存，无需冷藏，且保质期可长达150-180天；同时最 大限度保留了功效成分在加工过程中不被破坏，从而保证了产品的功能性。
作为优选，步骤1)中，所述水的质量为200-400g。
作为优选，步骤1)中，水加热至温度为45-60℃。
作为优选，步骤1)中，搅拌或剪切时间为15-30min。
作为优选，步骤1)中，静置水合时间为20-40min。
作为优选，步骤(1)或步骤2)中，预热至温度为60-65℃。
作为优选，步骤(1)或步骤2)中，均质压力为0-8/5-30MPa。
作为优选，步骤(1)或步骤2)中，杀菌温度为90-97℃，时间为3-10min。
作为优选，步骤(1)或步骤2)中，冷却至温度为35-45℃。
作为优选，步骤(2)或步骤3)中，发酵温度为35-45℃，时间为4-16h。
作为优选，步骤(2)或步骤3)中，发酵过程中，活菌数≥1×108cfu/mL。
作为优选，步骤(3)或步骤4)中，所述水的质量为200-400g。
作为优选，步骤(3)或步骤4)中，水预热至温度为50-60℃。
作为优选，步骤(3)或步骤4)中，剪切或搅拌时间为20-40min。
作为优选，步骤(3)或步骤4)中，冷却至温度为30℃以下。
作为优选，步骤(4)或步骤5)中，冷却至温度为15℃以下。
作为优选，步骤(4)或步骤5)中，用水定容至1000mL。
作为优选，步骤(5)或步骤6)中，均质压力为0-8/5-30MPa。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明的酸奶由牛乳或复原乳经瑞士乳杆菌WHH2580和/或其突变体发酵而成，复配 多种提高免疫力的天然功效成分，长期食用可提高人体免疫力；
(2)本发明的酸奶配方中所用的瑞士乳杆菌WHH-2580是一株具有提高免疫力功能的益生 菌，其特点为在灭活状态下仍然具有增强免疫作用，因此本发明的酸奶可经过巴氏杀菌或 UHT杀菌，具有可常温保存的特性；
(3)本发明的酸奶，通过对原料乳或奶粉及各种原辅料的预处理、均质、灭菌、发酵、再杀 菌和灌装制成，可在常温条件下正常保存，无需冷藏，且保质期可长达150-180天；同时最 大限度保留了功效成分在加工过程中不被破坏，从而保证了产品的功能性；
(4)本发明的酸奶不添加蔗糖，可供各类人群日常饮用，特别是针对自身免疫力较低又限制 糖分摄取的人群(糖尿病、肥胖等)和不喜冷食的人群，具有可接受度高、安全性高、无副 作用的优势，具有重要的功效价值和社会价值。
附图说明
图1为本发明的提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶的制备方法的流程图；
图2为现有技术中的可增强免疫力的酸奶的制备流程简图；
图3为本发明的提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶的制备流程简图；
图4为实施例4中各组小鼠的胸腺指数图；
图5为实施例4中各组小鼠脾淋巴细胞转化实验结果图；
图6为实施例4中各组小鼠的NK细胞活性图；
图7为瑞士乳杆菌WHH2580在显微镜下观察到的形态；
图8为瑞士乳杆菌WHH2580活体菌、非活体菌、商业菌株LGG和Lcs与HT-29细胞黏附效果图；
图9为实施例15动物试验中各组BALB/c小鼠的体重变化图；
图10为实施例15动物试验中各组BALB/c小鼠的脏器比值图；
图11为实施例15动物试验中各组BALB/c小鼠的脾淋巴细胞转化数值图；
图12为实施例15中各组BALB/c小鼠的NK细胞活性图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
总实施例
一种提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶，按质量百分数包括原料奶40％-85％或乳粉 5-15％，瑞士乳杆菌和/或其突变体0.001-0.020％，除瑞士乳杆菌和/或其突变体外的提高免疫 力功效成分0.01-10.00％，糖醇0.5-5.0％，淀粉0.1-5.0％，稳定剂0.01-1.00％，甜味剂 0.001-0.050％，余量为水；上述所有原料总和为100％。
通过以下步骤制备上述提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶(制备流程如图1所示， 简图如图3所示)：
方案A：
(1)均质及杀菌：对原料奶预热至60-65℃后，进行均质，均质压力为0-8/5-30MPa；90-97℃ 下杀菌3-10min，冷却至35-45℃，得杀菌冷却料液；
所述的杀菌同本领域常规的杀菌条件，如巴氏杀菌处理；
(2)接种发酵：向步骤(1)中所得的杀菌冷却料液中加入瑞士乳杆菌和/或其突变体，搅拌 混匀，置于恒温培养箱中35-45℃静置发酵4-16h，活菌数要求≥1×108cfu/mL，得酸奶基料；
(3)胶液制备：称取200g-400g的超纯水预热至50-60℃，取配方量用量的稳定剂加入超纯 水中，剪切或搅拌20-40min后，冷却至30℃以下，得胶液；
(4)二次配料：将步骤(2)中所得的酸奶基料冷却至15℃以下，随后搅拌破乳；加入步骤
(3)中所得的胶液，加入配方用量的除瑞士乳杆菌和/或其突变体外的提高免疫力功效成分、 糖醇、甜味剂、淀粉，混合搅拌，用超纯水定容至1000mL，得料液；
(5)二次均质：对步骤(4)中所得的料液进行均质，均质压力为0-8/5-30MPa；
(6)灌装及杀菌：将步骤(5)中均质后的料液灌装至HDPE材质包装容器中并封口，通过巴氏杀菌并冷却，得到提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶；或将步骤(5)中均质后的料液经UHT杀菌后，热灌装或无菌冷灌装至PET材质包装容器中并封口，得到提高免疫力的 常温长保质期无蔗糖酸奶；
所述巴氏杀菌和UHT杀菌同本领域常规的杀菌条件。
方案B：
1)奶液制备：称取200-400g超纯水加热至45-60℃，取配方量用量的乳粉，加入超纯水中， 搅拌或剪切15-30min后，静置水合20-40min；
2)均质及杀菌：对步骤1)中所得的奶液预热至60-65℃后，进行均质，均质压力为0-8/5-30MPa； 然后在90-97℃下杀菌3-10min，冷却至35-45℃，得杀菌冷却料液；
所述的杀菌同本领域常规的杀菌条件，如巴氏杀菌处理；
3)接种发酵：向步骤2)中所得的杀菌冷却料液中加入瑞士乳杆菌和/或其突变体，搅拌混匀， 置于恒温培养箱中35-45℃静置发酵4-16h，活菌数要求≥1×108cfu/mL，得酸奶基料；
4)胶液制备：称取200g-400g的超纯水预热至50-60℃，取配方量用量的稳定剂加入超纯水 中，剪切或搅拌20-40min后，冷却至30℃以下，得胶液；
5)二次配料：将步骤3)中所得的酸奶基料冷却至15℃以下，随后搅拌破乳；加入步骤4)中所得的胶液，加入配方用量的除瑞士乳杆菌和/或其突变体外的提高免疫力功效成分、糖醇、 甜味剂、淀粉，混合搅拌，用超纯水定容至1000mL，得料液；
6)二次均质：对步骤5)中所得的料液进行均质，均质压力为0-8/5-30MPa；
7)灌装及杀菌：将步骤6)中均质后的料液灌装至HDPE材质包装容器中并封口，通过巴氏 杀菌并冷却，得到提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶；或将步骤6)中均质后的料液经 UHT杀菌后，热灌装或无菌冷灌装至PET材质包装容器中并封口，得到提高免疫力的常温长 保质期无蔗糖酸奶；
所述巴氏杀菌和UHT杀菌同本领域常规的杀菌条件。
实施例1
本实施例的成分由全脂奶粉、木糖醇、接骨木莓浓缩汁、羟丙基二淀粉磷酸酯、羧甲基纤维 素钠、结冷胶、三氯蔗糖、瑞士乳杆菌WHH-2580和纯净水组成，其中所述各成分的重量以 总量1000毫升计为：全脂奶粉100克、木糖醇20克、三氯蔗糖0.1克、接骨木莓浓缩汁5克、羟丙基二淀粉磷酸酯5克、羧甲基纤维素钠5克、结冷胶0.2克、瑞士乳杆菌WHH-25800.02克，余量为水。
本实施例的制备步骤如下：
1)奶液制备：称取300g超纯水预热至55℃，取配方量用量的全脂奶粉，加入超纯水中，中 速剪切15min后，静置水合20min；
2)均质及杀菌：对步骤1)中所得的奶液预热至65℃后，进行均质，均质压力为5/20Mpa；然后在95-96℃下杀菌5min，冷却至42±1℃，得杀菌冷却料液；
3)接种发酵：向步骤2)中所得的杀菌冷却料液中加入瑞士乳杆菌WHH-2580，搅拌混匀，置于恒温培养箱中42℃静置发酵6h，活菌数≥1×108cfu/mL，得酸奶基料；
4)胶液制备：称取300g的超纯水加热至55℃，取配方量用量的稳定剂，加入超纯水中，中 速剪切20min后，冷却至30℃以下，得胶液；
5)二次配料：将步骤3)中所得的酸奶基料冷却至15℃以下，随后搅拌破乳；加入步骤4)中所得的胶液，加入配方用量的糖醇、甜味剂、淀粉和除瑞士乳杆菌和/或其突变体外的提高 免疫力功效成分，混合搅拌，用超纯水定容至1000mL，得料液；
6)二次均质：对步骤5)中所得的酸奶基料进行均质，均质压力为0/5MPa；
7)灌装及杀菌：将步骤6)中均质后的料液灌装至HDPE材质包装容器中并封口，通过87℃、 18min的巴氏杀菌并冷却，得到能提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶。
实施例2
本实施例的成分由全脂奶粉、木糖醇、接骨木莓浓缩汁、羟丙基二淀粉磷酸酯、羧甲基纤维 素钠、结冷胶、安赛蜜、阿斯巴甜、灵芝提取物、铁皮石斛提取物、瑞士乳杆菌WHH-2580和纯净水组成，其中所述各成分的重量以总量1000毫升计为：全脂奶粉105克、木糖醇15克、接骨木莓浓缩汁1克、羟丙基二淀粉磷酸酯10克、羧甲基纤维素钠6克、结冷胶0.25 克、安赛蜜0.1克、阿斯巴甜0.1克、灵芝提取物2克、铁皮石斛提取物2克、瑞士乳杆菌 WHH-25800.05克，余量为水。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例3
本实施例的成分由全脂奶粉、麦芽糖醇、乙酰化二淀粉磷酸酯、果胶、大豆多糖、甜菊糖苷、 蜂胶、破壁灵芝孢子粉、瑞士乳杆菌WHH-2580和纯净水组成，其中所述各成分的重量以总 量1000毫升计为：奶粉105克、麦芽糖醇40克、乙酰化二淀粉磷酸酯5克、果胶5克、大 豆多糖2克、甜菊糖苷0.2克、蜂胶2克、破壁灵芝孢子粉2克、瑞士乳杆菌WHH-2580 0.07 克，余量为水。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例4
本实施例的成分由全脂奶粉、木糖醇、接骨木莓浓缩汁、羟丙基二淀粉磷酸酯、羧甲基纤维 素钠、结冷胶、安赛蜜、阿斯巴甜、灵芝提取物、铁皮石斛提取物、瑞士乳杆菌WHH-2580和纯净水组成，其中所述各成分的重量以总量1000毫升计为：全脂奶粉105克、木糖醇15克、接骨木莓浓缩汁1克、羟丙基二淀粉磷酸酯10克、羧甲基纤维素钠6克、结冷胶0.25 克、安赛蜜0.1克、阿斯巴甜0.1克、灵芝提取物2克、铁皮石斛提取物2克、瑞士乳杆菌 WHH-25800.05克，余量为水。
本实施例的制备步骤如下：
1)奶液制备：称取300g超纯水预热至50℃，取配方量用量的全脂奶粉，加入超纯水中，中 速剪切15min后，静置水合20min；
2)均质及杀菌：对步骤1)中所得的奶液预热至60℃后，进行均质，均质压力为5/20MPa；然后在95-96℃下杀菌5min，冷却至37±1℃，得杀菌冷却料液；
3)接种发酵：向步骤2)中所得的杀菌冷却料液中加入瑞士乳杆菌WHH-2580，搅拌混匀，置于恒温培养箱中37℃静置发酵16h，活菌数≥1×108cfu/mL，得酸奶基料；
4)胶液制备：称取300g的超纯水加热至55℃，取配方量用量的稳定剂，加入超纯水中，中 速剪切20min后，冷却至30℃以下，得胶液；
5)二次配料：将步骤3)中所得的酸奶基料冷却至15℃以下，随后搅拌破乳；加入冷却后的 稳定剂，加入配方用量的糖醇、甜味剂、淀粉和除瑞士乳杆菌和/或其突变体外的提高免疫力 功效成分混合搅拌，用超纯水定容至1000mL，得料液；
6)二次均质：对步骤5)中所得的酸奶基料进行均质，均质压力为0/5Mpa；
7)灌装及杀菌：将步骤6)中均质后的料液通过121℃、15s的UHT杀菌，灌装至PET材质包装容器中并封口，得到能提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶。
实施例5
本实施例的成分由全脂奶粉、麦芽糖醇、乙酰化二淀粉磷酸酯、果胶、大豆多糖、甜菊糖苷、 蜂胶、破壁灵芝孢子粉、瑞士乳杆菌WHH-2580和纯净水组成，其中所述各成分的重量以总 量1000毫升计为：奶粉105克、麦芽糖醇40克、乙酰化二淀粉磷酸酯5克、果胶5克、大 豆多糖2克、甜菊糖苷0.2克、蜂胶2克、破壁灵芝孢子粉2克、瑞士乳杆菌WHH-2580 0.07 克，余量为水。
本实施例的制备方法与实施例4相同。
实施例6
本实施例的成分由全脂奶粉、木糖醇、接骨木莓浓缩汁、羟丙基二淀粉磷酸酯、羧甲基纤维 素钠、结冷胶、三氯蔗糖、瑞士乳杆菌WHH-2580和纯净水组成，其中所述各成分的重量以 总量1000毫升计为：全脂奶粉100克、木糖醇20克、三氯蔗糖0.1克、接骨木莓浓缩汁5克、羟丙基二淀粉磷酸酯5克、羧甲基纤维素钠5克、结冷胶0.2克、瑞士乳杆菌WHH-25800.02克，余量为水。
本实施例的制备方法与实施例4相同。
实施例7
本实施例的成分由生牛乳、木糖醇、接骨木莓浓缩汁、羟丙基二淀粉磷酸酯、羧甲基纤维素 钠、结冷胶、三氯蔗糖、瑞士乳杆菌WHH-2580和纯净水组成，其中所述各成分的重量以总 量1000毫升计为：生牛乳700克、木糖醇20克、三氯蔗糖0.1克、接骨木莓浓缩汁5克、 羟丙基二淀粉磷酸酯5克、羧甲基纤维素钠5克、结冷胶0.2克、瑞士乳杆菌WHH-2580 0.02 克，余量为水。
本实施例的制备步骤如下：
1)收奶：将检验合格的原料奶冷却至4℃收入储奶罐中；
2)均质及杀菌：对步骤1)中所得的奶液预热至65℃，进行均质，均质压力为5/20MPa； 然后在95-96℃下杀菌8min，冷却至40±1℃，得杀菌冷却料液；
3)接种发酵：向步骤2)中所得的杀菌冷却料液中加入瑞士乳杆菌WHH-2580，搅拌混匀，置于恒温培养箱中40℃静置发酵8h，活菌数≥1×108cfu/mL，得酸奶基料；
4)胶液制备：称取250g的超纯水加热至55℃，取配方量用量的稳定剂，加入超纯水中，中 速剪切20min后，冷却至30℃以下，得胶液；
5)二次配料：将步骤3)中所得的酸奶基料冷却至15℃以下，随后搅拌破乳；加入冷却后的 稳定剂，加入配方用量的糖醇、甜味剂、淀粉和除瑞士乳杆菌和/或其突变体外的提高免疫力 功效成分混合搅拌，用超纯水定容至1000mL，得料液；
6)二次均质：对步骤5)中所得的酸奶基料进行均质，均质压力为0/5Mpa；
7)灌装及杀菌：将步骤6)中均质后的料液灌装至HDPE材质包装容器中并封口，通过87℃、 18min的巴氏杀菌并冷却，得到能提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶。
实施例8：本发明得到的酸奶的功能性测试
对小鼠喂养本发明实施例1得到的酸奶，一段时间后，注射环磷酰胺作为免疫抑制剂，来观 察该产品对小鼠免疫力的提升作用。本发明得到的酸奶在未经杀菌前，瑞士乳杆菌WHH-2580 的数量可达1×108cfu/mL。
采取随机分组设计，将近交系BALB/C雄性小鼠(6-8周龄，16-20g)44只，适应期 5天，随机分为4组：空白对照组(CK)、模型组(M)、造模+酸奶5倍组(Y5)和造模+酸 奶10倍(Y10)组各11只。5倍酸奶组和10倍酸奶组分别模拟正常人(60kg体重)每日摄 入200g和400g本发明涉及的能提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶。
动物饲养保持环境温度为21±2℃，湿℃为30-70％，12h光照交替，自由饮水，自由摄入饲料。每三天换一次垫料，及时添水和饲料。连续给予受试物33天。所用造模药物为环磷酰胺(50mg/kg，腹腔注射，连续两天)，造模后5天处死小鼠，进行胸腺/体重比值测定， 小鼠脾淋巴细胞转化(MTT法)实验和NK细胞活性测定。
分组情况：
组1空白对照组(n＝11)：灌胃水；
组2模型组(n＝11)：灌胃水，环磷酰胺造模；
组3造模+酸奶5倍组(n＝11)：灌胃5倍酸奶0.2ml/只/d，环磷酰胺造模；
组4造模+酸奶10倍组(n＝11)：灌胃10倍酸奶0.2ml/只/d，环磷酰胺造模。
胸腺指数：如图4所示，模型组的胸腺/体重比显著低于空白对照组(P<0.05)，其余造模的各组与模型组相比没有显著差异。
小鼠脾淋巴细胞转化实验：如图5所示，造模的各组与模型组相比均有显差(P<0.05)， 表明各实验组均可促进免疫低下小鼠脾淋巴细胞的增殖。
NK细胞活性测定：如图6所示，模型组的NK细胞活性显著低于空白对照组(P<0.05)。 5倍酸奶和10倍酸奶的NK细胞活性显著高于模型组(P<0.05)。
根据保健品功能评价方法中结果的判定方法，在免疫功能低下模型成立条件下，血液 白细胞总数，细胞免疫功能(小鼠脾淋巴细胞转化实验，迟发型变态反应实验)，体液免疫功 能(抗体生成细胞检测，血清溶血素测定)，单核－巨噬细胞功能(小鼠碳廓清实验，小鼠腹 腔巨噬细胞吞噬荧光微球实验)，NK细胞活性，任两个方面试验结果为阳性，判定该受试样 品对免疫功能低下者具有增强免疫力作用。本次动物实验，小鼠脾淋巴细胞转化实验中，5 倍酸奶组和10倍酸奶组OD值显著高于模型组，表明结果阳性。NK细胞活性指标中，5倍 酸奶组和10倍酸奶组的NK细胞活性显著高于模型组，表明结果阳性。因此判定5倍酸奶和 10倍酸奶均具有增强免疫低下小鼠免疫力的功能。
实施例9
本发明所提供的菌株经鉴定属于瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)，命名为WHH2580， 于2019年10月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其微生物保藏 编号为：CGMCC No.18730。
本发明所提供的菌株是发明人从新疆那拉提红山沟采集的酸奶中筛选得到。
本发明瑞士乳杆菌2580的生物学性质如下：
形态学特征：在MRS琼脂培养基中生长状态为：在MRS琼脂培养基中生长形态为浅乳白色 菌落，半透明、圆形、表面粗糙、边缘不整齐、平展。革兰氏染色呈典型阳性，显微镜下观察细胞呈长杆状，无鞭毛，不产芽孢，不运动(图7所示)。
培养特征：最适生长温度为37度，兼性厌氧，生长于MRS培养基中。
生理特征：使用API 50CHL系统，WHH2580菌株可利用6种碳源：D-葡萄糖、D- 果糖、D-甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺、D-乳糖和D-海藻糖。
生物学鉴定：针对16s rRNA基因序列测序，所得结果与NCBI GenBank数据库中进行同源性比对分析，结果显示该菌株为瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)。
基因序列如SEQ ID NO.1所示：
CCTTCCCGAAGGTTAGGCCACCGGCTTTGGGCATTGCAGACTTCCATGGTGTGACGGGC GGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCGTTCTGATCCGCGATTACTAGCG ATTCCAGCTTCGTGCAGTCGAGTTGCAGACTGCAGTCCGAACTGAGAACAGCTTTCAGA GATTCGCTTGCCTTCGCAGGCTCGCTTCTCGTTGTACTGTCCATTGTAGCACGTGTGTAG CCCAGGTCATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTATCACCGGCAGTCTCATTAGAGTGCCCAACTTAATGCTGGCAACTAATAACAAGGGTTGCGCTCG TTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCACCACCTGT CTTAGCGTCCCCGAAGGGAACTCCTAATCTCTTAGGATGGCACTAGATGTCAAGACCTG GTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCC GTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGT TAGCTGCAGCACTGAGAGGCGGAAACCTCCCAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCAT GGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTG CAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTCCACCGCT ACACATGGAGTTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGAAAAACAGTTTCCGATGCAGTTC CTCGGTTAAGCCGAGGGCTTTCACATCAGACTTATTCTTCCGCCTGCGCTCGCTTTACGC CCAATAAATCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTA GCCGTGACTTTCTGGTTGATTACCGTCAAATAAAGGCCAGTTACTACCTCTATCCTTCTTC ACCAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCTTCACTCACGCGGCGTTGCTCCATC AGACTTGCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGGCCGT GTCTCAGTCCCAATGTGGCCGATCAGTCTCTCAACTCGGCTATGCATCATTGCCTTGGTA AGCCGTTACCTTACCAACTAGCTAATGCACCGCGGGGCCATCCCATAGCGACAGCTTACG CCGCCTTTTATAAGCTGATCATGCGATCTGCTTTCTTATCCGGTATTAGCACCTGTTTCCA AGTGGTATCCCAGACTATGGGGCAGGTTCCCCACGTGTTACTCACCCATCCGCCGCTCGC GTCCCCAGCGTCATTACCGAAGTAAATCTGCTGGTTCTGCTCGCTCGACTTGC
实施例10：菌株耐受性
瑞士乳杆菌WHH2580菌株的耐酸耐胆盐性能：
1耐酸性能：WHH2580菌株二代活化后的菌液20mL/管离心，pH7.2 PBS洗两次。分别将菌泥置于20mL无菌PBS pH3.0、PBS+0.3％pepsin pH3.0和PBS pH7.2中，每一个体系进行两个重复。置于37℃，分别于0h、1h、2h、3h取样，进行活菌计数。
耐酸性实验结果显示：pH3.0在2h对该菌的存活性没有显著的影响，3h活菌数降低0.9个数量级。胃蛋白酶pH3.0在2h对该菌的存活性没有显著的影响，3h活菌数降低0.7个数量级。上述结果表明该菌有优良的耐酸性。
2耐胆盐性能：WHH2580菌株二代活化后的菌液20mL/管离心，pH7.2PBS洗两次。 分别将菌泥置于20mL无菌PBS+0.1％Trypsin pH8.0、PBS+0.3％BS pH8.0、PBS+0.5％BSpH8.0 和PBS pH7.2中，每一个体系进行两个重复。置于37℃，分别于0h、1h、2h、3h取样，进行活菌计数。
耐胆盐性实验结果显示：0.1％Trypsin体系中3h降低0.8个数量级，0.3％BS体系中 3h降低2.8个数量级，0.5％BS体系中3h降低3.6个数量级。上述结果表明该菌有良好的耐 胆盐性。
实施例11：菌株黏附性
益生菌通过黏附作用定殖于宿主肠上皮细胞，逐步形成生物膜并产生多种代谢产物，从而构 成一层天然的保护屏障，对宿主产生多种生理功效。因此，益生菌黏附并定殖于宿主肠上皮 细胞上是发挥其益生作用的前提。
采用HT-29细胞作为黏附性试验的细胞株，具体实验方法如下：
HT-29细胞传至第三代，采用0.25％的胰酶消化后1000rpm离心5min，加入5mL含10％胎牛 血清的DMEM培养基(含青霉素100U/mL，链霉素100mg/mL)进行重悬，直至细胞呈单细 胞悬液。取适量细胞用血球细胞计数板计数，用含10％胎牛血清的DMEM培养基(含青霉 素100U/mL，链霉素100mg/mL)将细胞稀释至细胞悬液浓度为到1×106cells/mL，取1mL 接种于已放置细胞爬片的12孔细胞培养板中，于37℃，5％CO2培养2天。
WHH2580菌株(鼠李糖乳杆菌LGG和代田株LcS为阳性对照菌株)二代活化后，取10mL菌液室温下4200g离心10min收集菌体，用10mL含10％胎牛血清的DMEM完全培养 基中培养(不加双抗)重悬，调整菌浓度至2×108CFU/mL。取5mL菌株调整液95℃灭活 5min。菌株调整液和灭活菌株调整液各取1mL接种于已放置细胞爬片的12孔细胞培养板中， 各3个平行，于CO2培养箱中37℃孵育2h。
孵育结束后，缓慢吸去培养液，用PBS洗涤3次，用100％甲醇固定8min。取出细胞爬片静置20min，经革兰氏染色后，用中性树脂封片。于光学显微镜下进行观察。
黏附实验结果如下表。
瑞士乳杆菌WHH2580活体菌、非活体菌、商业菌株LGG和Lcs与HT-29细胞黏附效 果如图8所示。
瑞士乳杆菌WHH2580活体菌和非活体菌的黏附能力显著高于阳性对照菌株鼠李糖乳 杆菌LGG和代田株LcS。瑞士乳杆菌WHH2580非活体菌的黏附率稍低于其活体菌的黏附率， 但非活体菌的黏附效果比活体菌好，HT-29细胞间的菌体较少，绝大部分非活体菌紧紧黏附 在细胞上。
实施例12：菌株耐药性
瑞士乳杆菌WHH2580菌株抗生素的敏感性：
益生菌对抗生素的敏感性是检测菌株安全性的重要指标。为了检测WHH2580菌株的安全性， 选取下列9种抗生素进行测试，检测WHH2580菌株对9种抗生素的敏感性，具体实验设计 如下。
抗生素配制浓度是0.5ug/mL、1ug/mL、2ug/mL、4ug/mL、8ug/mL、16ug/mL、32ug/mL、64ug/mL、128ug/mL、256ug/mL，实际作用浓度是0.125ug/mL、0.25ug/mL、0.5ug/mL、1ug/mL、2ug/mL、4ug/mL、8ug/mL、16ug/mL、32ug/mL、64ug/mL。
无菌的96孔聚苯乙烯板中每个孔加入100μL培养基，2-11列按下表浓度标示每孔加 50μL抗生素稀释液(ug/mL)，1-11列每孔加入菌悬液50μL(菌液终浓度在105-106CFU/mL)， 密封后置37℃培养箱中24-48h，肉眼观察和测OD625。其中鼠李糖乳杆菌LGG和代田株LcS 为阳性对照菌株。
实验结果如下表，MIC值ug/mL。
根据CLSI M4菌株对抗生素的敏感性的判断标准，得到下列结论。WHH2580菌株对达托霉素Daptomycin和克林霉素Clindamycin有抗性，对红霉素Erythromycin中性，对Penicillin、Ampicillin、Imipenem、Meropenem、Vancomycin和Linezolid敏感。LGG菌株对Imipenem、Meropenem、Vancomycin、Daptomycin、Clindamycin有抗性，对红霉素Erythromycin 中性，对Penicillin、Ampicillin和Linezolid敏感。LcS菌株对Vancomycin和Daptomycin有 抗性，对Imipenem、Meropenem和Erythromycin中性，对Penicillin、Ampicillin、Clindamycin 和Linezolid敏感。
实施例13：菌株抑制病原菌
瑞士乳杆菌WHH2580菌株抑菌实验：
事先分装灭菌的1.5％素琼脂于无菌培养皿。摆放好牛津杯。灭菌1％琼脂的MRS培养基或 NB培养基，50℃以下接种106-107CFU/mL浓度的五种指示菌(大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、藤黄微球菌)，振荡混匀后倾倒在之前倒好的有牛津杯的素琼脂培养基上。待以上培养基冷却凝固后，拔去牛津杯。在不同的小孔中分别加入100uL的相应菌液(WHH2580)和阳性对照(10g/mL多粘菌素B或1％Nisin)，放入4℃ 冰箱中扩散7h。放入37℃培养16h后，观察并记录抑菌圈的大小。
实验结果如下表，表格中的数值为抑菌圈的大小cm。
实验结果显示WHH2580菌株对5种致病菌均有抑制效果，其对乙型副伤寒沙门氏菌、 大肠埃希氏菌和福氏志贺氏菌的抑制作用和10g/mL多粘菌素B无明显差异，对金黄色葡 萄球菌的抑制作用和1％Nisin无明显差异，稍低于其他对照菌株。
实施例14：菌株增强免疫力功能
1.体外脾淋巴细胞增殖：
处死小鼠，无菌取脾脏，用眼科剪将脾脏剪碎后，用无菌的玻璃注射器芯将其碾碎，经200 目金属筛网过滤后，加入含10％胎牛血清的无菌Hank’s液，1000rpm，4℃离心5min，收获细胞。加入5倍于细胞体积的细胞裂解液，裂解5min，加入含10％胎牛血清的无菌Hank’s液终止裂解，1000rpm，4℃离心5min去上清。用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基洗涤，1000rpm，4℃离心5min。洗涤两次，沉淀重悬于5mL含10％胎牛血清的RPMI-1640培养 基。细胞计数，调整细胞浓度为5×106cells/mL。
乳酸菌活化菌液4000rpm室温下离心10min去上清，PBS洗涤两次，加入适量含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基，调整其OD600至0.50±0.10。将细胞悬液加入96孔细胞培养板，每个样品3个平行。设置调零组(细胞培养基)，空白对照组(细胞悬液+细胞培养基， 诱导剂组(细胞悬液+10μg/mL Con A)，乳酸菌组(细胞悬液+10μg/mL Con A+菌悬液)， 置二氧化碳培养箱37℃培养72h。每孔加入20μL MTT溶液(2.5mg/ml)，37℃显色4h后， 1500rpm，4℃离心10min，吸出上清，再加入100μL DMSO，用酶标仪于490nm下测定吸 光值。
数据分析：在Con A诱导和不诱导的情况下，均能显著促进脾淋巴细胞增殖的益生菌 作为优选菌株。
结果如下表所示，在Con A诱导和不诱导的情况下，瑞士乳杆菌WHH2580脾淋巴细胞增殖倍数高于两株商业菌株。
2体外脾淋巴细胞细胞因子IL-10和IL-12测定
细胞取材、红细胞裂解、洗涤、细胞计数、益生菌培养同上述体外脾淋巴细胞增殖步骤。将 细胞悬液加入96孔细胞培养板，每个处理5个重复，分为调零组(细胞培养基100μL)，空白对照组(1×107cells/mL的细胞悬液100μl，细胞培养基100μl)，益生菌组(1×107cells/mL 的细胞悬液100μL，1×108cfu/mL菌悬液100μL)，37℃5％CO2培养箱中培养24h。1500 rpm离心10min，吸取上清，0.22μm滤膜过滤，采用BD试剂盒测定IL-10和IL-12含量。
IL-12/IL-10比值高的菌株可作为免疫调节潜力菌株。
结果如下表所示，瑞士乳杆菌WHH2580 IL-12/IL-10比值与鼠李糖乳杆菌LGG接近， 没有显差。
3体外人结肠癌细胞HT-29细胞因子IL-8测定
将生长融合至70％-80％的人结肠癌细胞HT-29进行消化，调整细胞浓度，1*106cell/孔接入 24孔板，37℃培养，24h后换液。加入20ng/mL LPS处理6小时，再加入8*108CFU/mL菌液处理18小时后，3000r/min，5min离心得上清，用相应ELISA试剂盒检测白细胞介素IL-8的含量。
分泌IL-8高的菌株可作为免疫调节潜力菌株。
结果如下表所示。
瑞士乳杆菌WHH2580 IL-8高于商业菌株LGG。
实施例15：动物试验
采取随机分组设计，将近交系BALB/C雄性小鼠(6-8周龄，16-20g)，192只，适应期5天，随机分为8组，每组12只。动物饲养保持环境温度为21±2℃，湿度为30-70％，12h光照 交替，自由饮水，自由摄入饲料。每三天换一次垫料，及时添水和饲料。分组如下：
对照组1：空白对照组，灌胃水；
对照组2：模型对照组，灌胃水+腹腔注射50mg/kg环磷酰胺造模；
对照组3：阳性药物组，灌胃40mg/kg盐酸左旋咪唑+腹腔注射50mg/kg环磷酰胺造模；
实验组1：灌胃本发明菌株菌悬液，灌胃剂量为2*108CFU/d；
实验组2：灌胃本发明菌株灭活菌悬液，灌胃剂量为2*108CFU/d；
其中灭活菌是通过80℃10min处理的。经平板培养，证实无活菌存在。
采用免疫功能低下模型动物进行试验。连续给予受试物38天，在第32天后开始给予 免疫抑制剂。抑制剂前每周称一次体重，抑制剂后每天称一次体重。腹腔注射免疫抑制剂第 5天开始检测，检测指标有脏器比，脾淋巴细胞增殖，NK细胞活性。
实验结果如下：
体重结果见图9。除空白对照外的各实验组的体重变化趋势类似，在注射完抑制剂的第一天 体重下降，后面逐渐恢复。
脏器比结果见图10。模型组的胸腺/体重比和脾脏/体重比显著低于对照组。低剂量组 和阳性药物组的胸腺/体重比显著高于模型组(P<0.05)，高剂量组和死菌组的胸腺/体重比极 显著高于模型组(P<0.001)。低剂量组、中剂量组、死菌组和阳性药物组的脾脏/体重比显著 高于模型组(P<0.05)。
小鼠脾淋巴细胞增殖结果见图11。超低剂量组、低、中、高剂量组OD值显著高于模型组灭活菌组极显著高于模型组。表明WHH2580超低剂量、低、中、高剂量和灭活菌均能 显著促进免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖。
小鼠NK细胞活性的测定结果见图12。中剂量组的NK细胞活性极显著高于模型组，灭活菌组的NK细胞活性显著高于模型组。表明WHH2580中剂量和灭活菌均能显著提高免 疫低下小鼠NK细胞活性。
根据保健品功能评价方法，在免疫功能低下模型成立条件下，血液白细胞总数、细胞 免疫功能(小鼠脾淋巴细胞转化实验，迟发型变态反应实验)、体液免疫功能(抗体生成细胞 检测，血清溶血素测定)、单核－巨噬细胞功能(小鼠碳廓清实验，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧 光微球实验)、NK细胞活性，任两个方面试验结果为阳性，判定该受试样品对免疫功能低下 者具有增强免疫力作用。WHH2580菌株在细胞免疫功能和NK细胞活性两个方面试验结果为 阳性，可判定WHH2580菌株对免疫功能低下者具有增强免疫力作用。
WHH2580灭活菌株同样可以通过提高调节机体的脏器指数、非特异性免疫及特异性免 疫反应来提高机体免疫力。
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技 术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的 保护范围。
序列表
<110> 杭州娃哈哈科技有限公司
杭州娃哈哈集团有限公司
<120> 一种提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶及其制备方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1425
<212> DNA
<213> 瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)
<400> 1
ccttcccgaa ggttaggcca ccggctttgg gcattgcaga cttccatggt gtgacgggcg 60
gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcggcgttct gatccgcgat tactagcgat 120
tccagcttcg tgcagtcgag ttgcagactg cagtccgaac tgagaacagc tttcagagat 180
tcgcttgcct tcgcaggctc gcttctcgtt gtactgtcca ttgtagcacg tgtgtagccc 240
aggtcataag gggcatgatg acttgacgtc atccccacct tcctccggtt tatcaccggc 300
agtctcatta gagtgcccaa cttaatgctg gcaactaata acaagggttg cgctcgttgc 360
gggacttaac ccaacatctc acgacacgag ctgacgacag ccatgcacca cctgtcttag 420
cgtccccgaa gggaactcct aatctcttag gatggcacta gatgtcaaga cctggtaagg 480
ttcttcgcgt tgcttcgaat taaaccacat gctccaccgc ttgtgcgggc ccccgtcaat 540
tcctttgagt ttcaaccttg cggtcgtact ccccaggcgg agtgcttaat gcgttagctg 600
cagcactgag aggcggaaac ctcccaacac ttagcactca tcgtttacgg catggactac 660
cagggtatct aatcctgttc gctacccatg ctttcgagcc tcagcgtcag ttgcagacca 720
gagagtcgcc ttcgccactg gtgttcttcc atatatctac gcattccacc gctacacatg 780
gagttccact ctcctcttct gcactcaaga aaaacagttt ccgatgcagt tcctcggtta 840
agccgagggc tttcacatca gacttattct tccgcctgcg ctcgctttac gcccaataaa 900
tccggacaac gcttgccacc tacgtattac cgcggctgct ggcacgtagt tagccgtgac 960
tttctggttg attaccgtca aataaaggcc agttactacc tctatccttc ttcaccaaca 1020
acagagcttt acgatccgaa aaccttcttc actcacgcgg cgttgctcca tcagacttgc 1080
gtccattgtg gaagattccc tactgctgcc tcccgtagga gtttgggccg tgtctcagtc 1140
ccaatgtggc cgatcagtct ctcaactcgg ctatgcatca ttgccttggt aagccgttac 1200
cttaccaact agctaatgca ccgcggggcc atcccatagc gacagcttac gccgcctttt 1260
ataagctgat catgcgatct gctttcttat ccggtattag cacctgtttc caagtggtat 1320
cccagactat ggggcaggtt ccccacgtgt tactcaccca tccgccgctc gcgtccccag 1380
cgtcattacc gaagtaaatc tgctggttct gctcgctcga cttgc 1425
