一种动物脑组织切片库的建立方法
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种动物脑组织切片库的建立方法。
背景技术
在神经研究领域，基于脑组织切片的免疫组织化学染色是一项不可或缺的技术。常规的组织切片方法分为石蜡切片和冰冻切片，冰冻切片在神经研究领域中更常用。基于小鼠脑组织的冰冻切片，一次可以切150-250张切片，一般一次免疫组织化学染色只需5-10张脑片，剩下的脑片短期内(一周左右)会腐烂，会导致大量脑组织切片的浪费。对于珍贵的脑组织(如转基因小鼠、模型小鼠、猴脑等)，这种浪费显得尤为可惜。如果我们能通过特殊保鲜技术将这些脑组织切片保存下来，后期如果再需要进行类似实验时，则可直接使用；而且，对于进行课题探索阶段的研究人员，如果有这种脑库中心可直接提供现成的组织切片，将可大大缩短探索周期并节约大量人力物力成本。目前针对脑组织样本的存储方式为-80℃保存或进行石蜡包埋等，每次根据需要切一部分脑组织，剩下的组织原样保存。虽然已存在一些针对人脑组织块基于-80℃保存的人脑库，但对实验动物脑组织还没有相应的脑组织库。目前脑组织库主要是针对脑组织块的保存，脑组织库的维持和运行成本高，而且对脑组织的再次利用极不便利。
有鉴于此，有必要提供一种针对实验动物的脑组织切片进行保存的脑切片库的建立方法。
发明内容
针对现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提供一种动物脑组织切片库的建立方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的一个方面提供了一种动物脑组织切片库的建立方法，包括以下步骤：选取合适的脑组织切片，经过长久保存的前期处理后入库，建立电子档案保存。
所述合适的脑组织切片的标准如下：第一.动物灌流成功；第二.动物造模成功；第三.脑组织切片无破损。
所述经过长久保存的前期处理后入库包括以下步骤：
吸去脑片保存瓶内的磷酸盐缓冲液，加入干净的PBS溶液，并将小瓶放置在摇床上，如此重复三次；
吸去PBS溶液，加入0.3％的H2O2-PBS溶液，摇床上放置；
吸去0.3％的H2O2-PBS溶液，再用PBS溶液洗涤三次；
吸去PBS溶液，再加入50％甘油-PBS溶液(0.4μm过滤器过滤，并加入0.02％的NaN3)；
将脑片存储于储样杯中，最后归类放置，做好标记，并放入4℃冰箱保存。
所述归类放置的统一标准如下：第一.按照动物造模方式归类；第二.根据动物背景分类；第三.每一类脑组织按照入库时间先后顺序摆放。
所述建立电子档案包括以下内容：存放位置、处理方式、处理时间、品系、基因型、性别、年龄、切片厚度、切片方向、处理人、入库时间、出库时间。
由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：
本发明的动物脑组织切片库的建立方法利用组织切片长久保存技术可以将试验时剩下的脑组织切片进行及时有效保存，通过大量收集脑组织切片，将其合理归类存储，并对存储信息进行及时记录、存档和上传到网络数据库，向广大科研工作者有偿提供现成的脑组织切片。
本发明的动物脑组织切片库的建立方法利用了组织切片长久保存技术、信息化管理手段，及时保存实验动物脑组织切片，通过合理的管理和规模效应，使得脑组织切片得到充分利用，提高科研工作者的研究效率。
本发明的动物脑组织切片库的建立方法使得脑组织切片得到有效长久保存，珍贵脑组织材料得到充分利用，节省大量的人力物力成本，提高科研效率。
附图说明
图1是本发明的动物脑组织切片库的建立方法所使用的储样杯的一种结构示意图；
图2是本发明的动物脑组织切片库的建立方法所使用的储样杯盖的一种结构示意图；
以及，
图3是本发明的动物脑组织切片库的建立方法所使用的存放上述储样杯的储样盒的一种结构示意图。
其中：1为储样杯；2为储样杯盖；3为储样杯盖耳；4为储样盒盖；5为存放储样杯的储样盒。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
实施例1
本实施例以大脑中动脉缺血再灌大鼠模型(MCAO)脑组织为例进行详细说明。
1、选取合适的脑组织切片
衡量是否是合适的脑组织切片的标准如下：1.动物灌流应成功；2.动物造模应成功；3.脑组织切片应无破损。
选取造模成功后不同时间段的大鼠，经灌流取脑并固定后，根据需要，使用冰冻切片机切10-100μm的脑片。
2、脑片长久保存的前期处理及入库，包括以下步骤：
2.1吸去脑片保存瓶内的磷酸盐缓冲液(PBS溶液；武汉普瑞美斯生物科技有限公司)，加入2mL干净的PBS溶液，并将小瓶放置在摇床上，如此重复三次(3×5min)。(注：务必在切片后24小时内处理)
2.2吸去PBS溶液，加入2mL 0.3％的H2O2(国药集团化学试剂有限公司)溶液(溶于PBS溶液)，摇床上放置30min。
2.3吸去0.3％的H2O2-PBS溶液，再用PBS溶液洗(3×5min)。
2.4吸去PBS溶液，再加入2mL的50％甘油-PBS溶液(0.4μm过滤器(美国Millipore公司)过滤，并加入0.02％的NaN3(国药集团化学试剂有限公司))。
2.5将脑片存储于图1中的储样杯1中，(如图1、图2所示；图1是本发明的动物脑组织切片库的建立方法所使用的储样杯的一种结构示意图；图2是本发明的动物脑组织切片库的建立方法所使用的储样杯盖的一种结构示意图；)，盖上储样杯盖2，储样杯盖2上设有储样杯盖耳3，然后将储样杯1放置于存放储样杯的储样盒5(如图3所示，图3是本发明的动物脑组织切片库的建立方法所使用的存放上述储样杯的储样盒的一种结构示意图。)中，盖上储样盒盖4，最后归类放置，做好标记，并放入4℃冰箱保存。
归类放置的统一标准如下：1.按照动物造模方式归类，如：大脑中动脉栓塞缺血模型、阿尔茨海默疾病(AD)转基因鼠、癫痫造模小鼠等；2.根据动物背景分类，如：C57BL/6小鼠、129小鼠、SD大鼠、猕猴等；3.每一类脑组织按照入库时间先后顺序摆放。
3、电子档案的建立
3.1配备脑库专用4℃冰箱，并做好分层标注。
3.2请专人来负责对脑组织的切片、入库和出库等管理，入库超过3年的组织切片应移出脑库。
3.3脑片保存盒放入相应的位置，并及时将信息登入电子档案，以表1内容为准。
表1
实施例2
本实施例以AD转基因小鼠脑组织为例进行详细说明。
1.选取合适的脑组织切片，经灌流取脑并固定后，根据需要，使用冰冻切片机切10-100μm的脑片。
合适的标准是：1.基因鉴定为转基因小鼠，2.灌流成功，3.切片完好，4.动物造模成功。
2.脑片长久保存的前期处理及入库，包括以下步骤：
2.1吸去脑片保存瓶内的磷酸盐缓冲液(PBS溶液；武汉普瑞美斯生物科技有限公司)，加入2mL干净的PBS溶液，并将小瓶放置在摇床上，如此重复三次(3×5min)。(注：务必在切片后24小时内处理)
2.2吸去PBS溶液，加入2mL 0.3％的H2O2(国药集团化学试剂有限公司)溶液(溶于PBS溶液)，摇床上放置30min。
2.3吸去0.3％的H2O2-PBS溶液，再用PBS溶液洗(3×5min)。
2.4吸去PBS溶液，再加入2mL的50％甘油-PBS溶液(0.4μm过滤器(美国Millipore公司)过滤，并加入0.02％的NaN3(国药集团化学试剂有限公司))。
2.5将脑片存储于储样杯中，然后将储样杯放置于储样盒中，最后归类放置，做好标记，并放入4℃冰箱保存。
归类放置的统一标准如下：1.按照动物造模方式归类，如：大脑中动脉栓塞缺血模型、阿尔茨海默疾病(AD)转基因鼠、癫痫造模小鼠等；2.根据动物背景分类，如：C57BL/6小鼠、129小鼠、SD大鼠、猕猴等；3.每一类脑组织按照入库时间先后顺序摆放。
3、电子档案的建立
3.1配备脑库专用4℃冰箱，并做好分层标注。
3.2请专人来负责对脑组织的切片、入库和出库等管理，入库超过3年的组织切片应移出脑库。
3.3脑片保存盒放入相应的位置，并及时将信息登入电子档案，以表2内容为准。
表2
实施例3
本实施例以猕猴脑组织为例进行详细说明。
1.经灌流取脑并固定后，根据需要对脑组织进行分割成脑组织块，使用冰冻切片机切10-100μm的脑片。
合适的标准是：1.造模成功，2.灌流成功，3.切片完好。
2.脑片长久保存的前期处理及入库，包括以下步骤：
2.1吸去脑片保存瓶内的磷酸盐缓冲液(PBS溶液；武汉普瑞美斯生物科技有限公司)，加入2mL干净的PBS溶液，并将小瓶放置在摇床上，如此重复三次(3×5min)。(注：务必在切片后24小时内处理)
2.2吸去PBS溶液，加入2mL 0.3％的H2O2(国药集团化学试剂有限公司)溶液(溶于PBS溶液)，摇床上放置30min。
2.3吸去0.3％的H2O2-PBS溶液，再用PBS溶液洗(3×5min)。
2.4吸去PBS溶液，再加入2mL的50％甘油-PBS溶液(0.4μm过滤器过滤(美国Millipore公司)过滤，并加入0.02％的NaN3(国药集团化学试剂有限公司))。
2.5将脑片存储于储样杯中，然后将储样杯放置于储样盒中，最后归类放置，做好标记，并放入4℃冰箱保存。
归类放置的统一标准如下：1.按照动物造模方式归类，如：大脑中动脉栓塞缺血模型、阿尔茨海默疾病(AD)转基因鼠、癫痫造模小鼠等；2.根据动物背景分类，如：C57BL/6小鼠、129小鼠、SD大鼠、猕猴等；3.每一类脑组织按照入库时间先后顺序摆放。
3、电子档案的建立
3.1配备脑库专用4℃冰箱，并做好分层标注。
3.2请专人来负责对脑组织的切片、入库和出库等管理，入库超过3年的组织切片应移出脑库。
3.3脑片保存盒放入相应的位置，并及时将信息登入电子档案，以表3内容为准。
表3
本发明利用组织切片长久保存技术，对重要脑组织切片进行长久保存处理，使科研资源得到充分利用。因为每个脑组织可以切成很多张脑片，而研究者个人一次只会用到极少的部分，大部分脑片都可以保存下来用于以后的研究或方便其他科研工作者使用，达到资源共享，提高研究效率。例如：如今盛行的“大数据”，如果能将广大科研工作者实验剩余的脑切片进行有效收集，当各种动物模型的脑组织都收集到一起时，将是神经科研领域的“大数据”，极大促进科研探索的效率。
举例说明如下：某位研究脑卒中方向的科研工作者希望能在脑缺血再灌14天后的模型鼠脑片上标记某种信号分子的蛋白，进行前期科研探索工作。如果不会操作这种脑缺血再灌的手术实验，专门学这项技术至少需要花费2个月左右的时间，成功实施手术造模后，还需要再等3周才能拿到组织切片进行蛋白的标记工作，总共需要近3个月的时间才能得到预实验的结果，时间成本太高。如果有这种“脑组织切片库”的存在，从产生科研想法直到预实验结果只需3周左右的时间，极大提高科研效率。这个时间比较短，有的模型建立周期长达1年以上(如老龄鼠模型)，这种预实验时间成本极高。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
