一种生物活性制剂、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及肥料领域，具体涉及一种生物活性制剂，更具体的涉及一种适用于石灰性土壤具有生物活性的重金属Cr(Ⅵ)固定剂制备的技术领域。
背景技术
重金属作为一种持久性污染物已越来越多地被关注和重视，土壤重金属污染是指由于人类活动将重金属带入到土壤中，致使土壤中重金属含量明显高于背景含量。近年来，随着人们环保意识的增长，电子废弃物回收处理过程中产生的二次污染受到广泛的关注，特别是土壤重金属污染和有机污染状况堪忧。在环境污染研究中的重金属主要是指Pb、Cd、Hg、Cr以及类金属As等生物毒性显著的元素，还包括具有一定毒性的重金属Zn、Cu、Co、Ni和Sn等元素。土壤中的Cd、Cr、Cu、Pb均超过《土壤环境质量标准》(GB15618-2008)二级标准。这些重金属通过多种途径进入大气、水体和土壤中，经过一系列迁移转化，对生物体和人体健康形成潜在威胁。为了保证生态环境和人体的健康，对破坏的土壤进行修复已变成迫不及待需要解决的问题。
发明201810626581.8公开了一种新型土壤重金属固定剂的制备方法，将活化硅胶与氯丙基三甲氧基硅烷混合反应得到氯甲基化的硅胶，将高纯凹凸棒粘土和七水硫酸铁混合，并用硼氢化钠溶液还原使零价铁负载于凹凸棒粘土，用负载零价铁的凹凸棒粘土的水悬浮液对多孔硅胶加压抽滤洗涤得到新型土壤重金属固定剂，利用剪切力和空穴作用减少静电引力和氢键互相作用，实现棒晶束的解离，羟基与金属离子发生络合作用，当与带正电荷的重金属离子接触时会发生静电作用，对重金属污染物的吸附活性提高，金属铁核心具有良好的减少或电子基力量，可以增加纳米颗粒的有效表面积并增强活性位点，从而提高吸附效率，具有广阔的应用前景。
发明201510511727.0提供了一种土壤重金属固定剂及其制备方法和应用，公开了一种土壤重金属固定剂，所述固定剂为组分A和组分B复合而成的复合物，其中，组分A为生物质电厂灰粒子，组分B为选自下组的物质：海藻酸、海藻酸盐、或其组合。
发明201910804279.1公开了一种重金属固定剂及重金属污染土壤的原位修复方法，所述的重金属固定剂包括以下重量份的原料：草炭50-70份，纳米分子筛1-5份，枯草芽孢杆菌1-8份，醋化醋杆菌1-5份，地衣芽孢杆菌4-10份，巴氏梭菌1-5份。而采用该重金属固定剂进行重金属污染土壤的原位修复方法则主要是将纳米分子筛和其他原料进行分步施加，施加的时候均需要翻土以使其混合均匀。但其对于菌剂中活菌数的要求较高，并且对于草炭具有一定有有机质的要求。在石灰质碱性土壤中，进入土壤环境的重金属呈现出难容态的氢氧化物，也可能以碳酸盐和磷酸盐的形式存在，它们的溶解度都较小。石灰质碱性土壤中部分重金属的溶出率会下降，导致了部分重金属的溶解度降低，因此无法迁移，导致沉积的问题。
目前土壤重金属固化/稳定化修复技术指运用物理或化学的方法将土壤中的有毒重金属固定起来，或者将重金属转化成化学性质不活泼的形态，阻止其在环境中迁移、扩散等过程，从而降低重金属的毒害程度的修复技术。固化/稳定化技术与其他修复技术相比，具有处理时间短、适用范围较广等优势。
发明内容
本发明的目的是提供一种生物活性制剂、制备方法及其在石灰性土壤中固定重金属Cr(Ⅵ)的应用，该生物活性制剂解决现有技术中重金属Cr(Ⅵ)固定剂使用量大、处理效率低，且工艺过程控制较困难，不能彻底消除其毒性的问题。同时将有毒重金属固定起来，或者将重金属转化成化学性质不活泼的形态，阻止其在环境中迁移、扩散。
本发明通过以下技术方案实现。
本发明涉及一种生物活性制剂，所述的生物活性制剂按照重量份数计，含有生物炭20-30份，麦饭石40-50份，腐植酸盐10-20份，聚丙烯酰胺5-10份。
优选的，所述的生物活性制剂按照重量份数计，含有生物炭30份、麦饭石50份，腐植酸盐10份，聚丙烯酰胺10份。
优选的，所述腐植酸盐为腐植酸钠或腐植酸钾一种或两种。
本发明还涉及所述生物活性制剂的制备方法，具体制备方法按下列步骤进行：
(1)将生活垃圾堆肥置于热解炉进行缺氧热解，保持热解温度300-600℃，热解时间1-2小时，得到生物炭；
(2)将步骤(1)中获得的生物炭20-30份，与麦饭石40-50份、腐植酸盐10-20份、聚丙烯酰胺5-10份分别粉碎至200目后，按比例混均匀，添加15-20％水分，挤压造粒，获得该生物活性制剂。
优选的，所述生物炭主要来源于有机生活垃圾堆肥。
优选的，所述的生物炭制备热解温度为600℃。
优选的，所述的生物炭制备热解时间为1小时。
本发明提供的生物活性制剂在石灰性土壤中的重金属Cr(Ⅵ)的固定中应用，通过在石灰性土壤中施用该固定剂可使玉米可食部位重金属含量降低到安全限量标准水平，促进土壤固相相结合的重金属Cr(Ⅵ)从活性高的形态向缓效态或无效态转化，降低作物吸收重金属Cr(Ⅵ)的剂量，减轻重金属Cr(Ⅵ)污染的风险。
进一步，本发明提供的生物活性制剂在种植玉米中石灰性土壤的重金属Cr(Ⅵ)固定中应用，玉米根部铬含量相对与对照组降低了31.50％，玉米地上部分铬含量相对与对照组降低了57.14％；玉米叶片中的丙二醛含量降低了14.7％，叶片中脯氨酸含量增加了132.14％；叶片可溶性糖下降50.2％；叶片超氧化物歧化酶(SOD)酶活降低了20.8％；叶片POD酶活降低了26.12％；叶片CAT酶活降低了10％。证明了本发明上述提供制备的生物活性制剂与氮肥、磷肥配施能够显著改善石灰性土壤中重金属铬胁迫对于玉米生长的抑制作用，有效促进玉米生长。
通过实施本发明具体的技术方案获得以下有益效果：
(1)本发明与现有技术相比，提供了适用于石灰性土壤的重金属Cr(Ⅵ)固定的生物活性制剂，本发明的优点是促进土壤固相相结合的重金属从活性高的形态向缓效态或无效态转化，降低作物吸收重金属的剂量，减轻重金属污染的风险。
(2)通过施用本发明所提供的适用于石灰性土壤的重金属Cr(Ⅵ)固定的生物活性制剂：在石灰性土壤中，玉米根长增长了12.7％；根鲜重增长了10.77％；株高增长了10.52％；地上部分鲜重增长了10.53％；玉米根部铬含量相对与对照组降低了31.50％，玉米地上部分铬含量相对与对照组降低了57.14％；玉米叶片中的丙二醛含量降低了14.7％，叶片中脯氨酸含量增加了132.14％；叶片可溶性糖下降50.2％；叶片超氧化物歧化酶(SOD)酶活降低了20.8％；叶片POD酶活降低了26.12％；叶片CAT酶活降低了10％。生物活性制剂与氮肥、磷肥配施能够显著改善石灰性土壤中重金属铬胁迫对于玉米生长的抑制作用，有效促进玉米生长。
附图说明
图1所示为不同处理Cr的变化图。
图中1为态包含了水溶态、交换态及碳酸盐结合态的金属，活性较高；2为主要是铁锰氧化物结合态，3为主要是有机物及硫化物结合态，4为态为残渣态。
图2所示为不同处理中铬含量变化图。
图中CK1为100ppmCr6+铬胁迫按纯量计算，重铬酸钾处理组、BC300为生物炭300℃热解，100ppmCr6+按纯量计算重铬酸钾处理组、BC450为生物炭450℃热解50ppmCr6+按纯量计算，重铬酸钾处理组、BC600为生物炭600℃热解50ppmCr6+按纯量计算，重铬酸钾处理组。
图3所示为不同处理组玉米丙二醛含量变化图。
图4所示为不同处理组玉米脯氨酸含量变化图。
图5所示为不同处理组玉米可溶性糖含量变化图。
图6所示为不同处理组玉米可溶性蛋白含量变化图。
图7所示为不同处理组玉米SOD酶活变化图。
图8所示为不同处理组玉米POD酶活变化图。
图9所示为不同处理组玉米CAT酶活变化图。
图中3-9中CK0为非铬胁迫处理组、CK1为100ppmCr6+铬胁迫按纯量计算，重铬酸钾处理组、BC300为生物炭300℃热解，100ppmCr6+按纯量计算重铬酸钾处理组、BC450为生物炭450℃热解50ppmCr6+按纯量计算，重铬酸钾处理组、BC600为生物炭600℃热解50ppmCr6+按纯量计算，重铬酸钾处理组。
具体实施方式
下面，举实施例说明本试验，但是，本试验并不限于下述的实施例。
本试验中涉及的设备和材料：麦饭石、腐植酸盐、聚丙烯酰胺、热解炉、研磨仪、0.25mm筛等。
本发明中选用的所有材料、试剂和仪器都为本领域熟知的，但不限制本发明的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例一：生物活性制剂
本发明涉及一种生物活性制剂，所述的生物活性制剂按照重量份数计，含有生物炭20-30份，麦饭石40-50份，腐植酸盐10-20份，聚丙烯酰胺5-10份。
本发明还涉及上述生物活性制剂的制备方法，具体制备方法按下列步骤进行：
(1)将生活垃圾堆肥置于热解炉进行缺氧热解，保持热解温度300-600℃，热解时间1-2小时，得到生物炭；
(2)将步骤(1)中获得的生物炭20-30份，与麦饭石40-50份、腐植酸盐10-20份、聚丙烯酰胺5-10份分别粉碎至200目后，按比例混均匀，添加15-20％水分，挤压造粒，获得该生物活性制剂。
实施例二：生物活性制剂
生物活性制剂含有生物炭30Kg、麦饭石50Kg，腐植酸钾(钠)20Kg，聚丙烯酰胺10Kg。
实施例三：生物活性制剂
生物活性制剂含有生物炭25Kg、麦饭石40Kg，腐植酸钾(钠)20Kg，聚丙烯酰胺5Kg。
实施例四：生物活性制剂
生物活性制剂含有生物炭25Kg、麦饭石50Kg，腐植酸钾(钠)15Kg，聚丙烯酰胺10Kg。
实施例五：生物活性制剂
生物活性制剂含有生物炭20Kg、麦饭石40Kg，腐植酸钾(钠)15Kg，聚丙烯酰胺10Kg。
实施例六：生物活性制剂
生物活性制剂含有生物炭30Kg、麦饭石50Kg，腐植酸钾(钠)10Kg，聚丙烯酰胺10Kg。
实施例七：生物活性制剂
生物活性制剂含有生物炭30Kg、麦饭石45Kg，腐植酸钾(钠)15Kg，聚丙烯酰胺10Kg。
实施例八：生物活性制剂的制备
将上述实施例三至实施例七中提供的技术方案配置的生物活性制剂分组为1-5组并进行效果检测，其中所述的生物炭采用将生活垃圾堆肥置于热解炉进行缺氧热解，保持热解温度大于600℃，热解时间1-2小时，得到生物炭。将生物炭、麦饭石、腐植酸盐、聚丙烯酰胺分别粉碎至200目，按比例均匀混合后，调节水分15-20％，挤压造粒，进行包装，即得到所述生物活制剂。供试土壤为石灰性土壤，采自新疆农业科学院灰漠土试验基地，土壤样品进行风干、混匀，过5mm土壤筛备用。镉胁迫模拟条件使用重铬酸钾。各组按照100ppmCr6+镉胁迫按纯量计算，生物活性制剂按照土壤重量的1.0％添加，将每个处理对应的土壤和生物活性制剂合均匀装于花盆中，每盆土重10kg，将氮肥100mg/kg(N，风干土重)和40mg/kg磷肥(P2O5，风干土重)配成营养液，按比例一次性均匀施入。试验玉米品种为新玉29号，将玉米催芽后，每盆种植玉米6棵，每个处理设置4个重复。20天后取玉米苗叶片分别测定收获后，测定玉米苗的地上生物量。测定结果如表1所示：
表1：铬胁迫条件下玉米苗生长状况
通过施用实施例三至实施例七中的生物活性制剂后，测定玉米苗的地上生物量结果显示，实施例六中所提供的技术方案所获得的生物活性制剂对于固定重金属Cr(Ⅵ)效果较优，玉米苗的地上生物量显著高于其他技术方案组。
采用上述实施例六中的生物活制剂后，测定不同状态重金属Cr(Ⅵ)的含量，测定结果参见附图1。通过施用本法宁提供的神格无活性制剂，该制剂可使玉米可食部位重金属Cr(Ⅵ)含量降低到安全限量标准水平。施用固定剂处理使土壤Cr(Ⅵ)的水溶态、可交换态和碳酸盐结合态减少，而有机结合态和残渣态增加，说明促进Cr(Ⅵ)从有效态向缓效/迟效态转化是固定剂抑制植物吸收重金属。。
实施例九：生物活性制剂中生物炭的制备工艺优化
1.材料与方法
1.1供试材料
供试土壤为灰漠土，采自新疆农业科学院灰漠土试验基地，土壤样品进行风干、混匀，过5mm土壤筛备用，采用实施例六中提供的生物活性制剂配方，其中生物炭的制备采用将生活垃圾堆肥置于热解炉进行缺氧热解，保持热解温度分别为600℃、450℃、300℃，热解时间1-2小时，将制备获得的生物炭、麦饭石、腐植酸盐、聚丙烯酰胺分别粉碎至200目，按比例混合均匀后，调节水分15-20％，挤压造粒，进行包装，即得到所述生物活制剂，各组分别命名为BC600组、BC450组、BC300组。
1.2试验方法
试验设施5个处理，分别为CK(非铬胁迫)、CK1(100ppmCr6+铬胁迫按纯量计算，重铬酸钾)、BC300(100ppmCr6+按纯量计算重铬酸钾)、BC450(50ppmCr6+按纯量计算，重铬酸钾)、BC600(50ppmCr6+按纯量计算，重铬酸钾)，生物活性制剂按照土壤重量的1.0％添加，将每个处理对应的土壤和生物活性制剂混合均匀装于花盆中，每盆土重10kg，将氮肥100mg/kg(N，风干土重)和40mg/kg磷肥(P2O5，风干土重)配成营养液，按比例一次性均匀施入。试验玉米品种为新玉29号，将玉米催芽后，每盆种植玉米6棵，每个处理设置4个重复。
20天后取玉米苗叶片分别测定收获后，测定玉米苗的地上和地下生物量，测定玉米叶片丙二醛、脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白、超氧化物歧化酶活(SOD)、过氧化物酶活(POD)、过氧化氢酶(CAT)，同时测定地上、地下部分的Cr含量。
1.3数据分析
采用Excel2003和SPSS17.0进行数据处理及统计分析。
2.结果与分析
2.1生物炭对玉米苗期生物量的影响
铬胁迫条件下，CK1的玉米根长、根鲜重、株高、地上部分鲜重均较非铬胁迫(CK0)有明显下降(P<0.05)，如表2所示，不同温度所产生的生物炭制备的生物活性制剂对玉米的生长状况影响不同，其中BC600处理，在铬胁迫条件下，各项指标与CK0比较无明显差异(P>0.05)，但与CK1比较呈现明显增加(P<0.05)，可见BC600处理能够在铬胁迫条件下，缓解Cr(Ⅵ)抑制玉米生长。BC300、BC450各项指标均较CK0有下降趋势，但趋势不明显(P>0.05)，但相对于CK1，生物活性制剂各处理均表现为缓解Cr(Ⅵ)抑制。
表2：铬胁迫条件下玉米苗期生长状况
2.2不同处理对玉米铬含量的影响
不同处理组玉米根部和地上部分铬含量相对与对照组CK1均显著降低。测定结果参见附图2所示。
Cr(Ⅵ)胁迫各处理根系铬吸收量分别为3.65mg/kg、2.38mg/kg、2.558mg/kg、1.258mg/kg，分别较Cr(Ⅵ)胁迫CK1下降34.79％、30.14％、65.75％，生物活性制剂能明显抑制玉米吸收铬(P<0.05)；而地上部分铬吸收与根系吸收趋势类似，生物活性制剂处理明显降低铬吸收，其中BC600处理效果最佳，地上部分吸收量仅为0.36mg/kg，低于食品重金属安全所要求的标准(小于0.5mg/kg)，与其他处理之间达到显著性差异(P<0.05)。
2.3不同处理对玉米叶片丙二醛和脯氨酸含量的影响
不同处理的叶片丙二醛含量均相对于CK0明显增加(P<0.05)，这说明玉米苗已经受到铬胁迫，使丙二醛含量有所积累，CK1相对于CK0丙二醛含量增加135％，达到显著性差异(P<0.05)；生物活性制剂处理能够降低叶片丙二醛含量，其中BC600处理较CK1丙二醛含量明显下降(P<0.05)，但BC300、BC450较CK1下降幅度较小，未达到显著性差异(P>0.05)。测定结果参见附图3所示。
不同处理的叶片脯氨酸含量均相对于CK0明显增加(P<0.05)，1.065、0.655、0.483、0.350mg/g，分别相对于CK0增加278.57％、132.14％、71.43％、25.00％；生物活性制剂处理相对于CK1处理能够显著降低叶片脯氨酸含量，各处理间均达到显著性差异(P<0.05)。
测定结果参见附图4所示。
2.4不同处理对叶片可溶性糖与可溶性蛋白含量的影响
Cr(Ⅵ)胁迫处理的叶片可溶性糖含量分别为0.282mg/g、0.316mg/g、0.347mg/g、0.408mg/g，较CK0分别下降50.2％、42.9％、37.5％、14.8％，达到显著性差异(P<0.05)，参见附图5所示；生物活性制剂处理能明显提高叶片可溶性糖含量(P<0.05)，温度越高的生物炭制备的生物活性制剂处理的叶片可溶性糖含量越高，其中BC300与BC450比较，未达到显著性差异(P>0.05)，BC300与BC600处理间可溶性糖含量达到显著性差异(P<0.05)。
可溶性蛋白含量变化与可溶性糖含量变化趋势类似，参见附图6所示，Cr(Ⅵ)胁迫处理叶片可溶性蛋白含量明显低于非Cr(Ⅵ)胁迫(P<0.05)，在Cr(Ⅵ)胁迫条件下，高温处理生物炭制备的活性制剂组较低温处理生物炭制备的活性制剂组能显著提高可溶性蛋白(P<0.05)，但BC300与BC450之间可溶性蛋白未见显著性差异(P>0.05)。
2.5不同处理对叶片保护酶活性变化的影响
SOD、POD、CAT是一类重要的抗氧化酶，在清除重金属等诱导产生的氧自由基和过氧化物、抑制膜脂过氧化、保护细胞免遭伤害等方面起着重要作用。Cr(Ⅵ)胁迫能显著提高叶片超氧化物歧化酶(SOD)酶活(P<0.05)，酶活相对与CK0分别增加163.89％、101.67％、113.33％、41.11％，参见附图7所示；生物活性制剂处理较Cr(Ⅵ)胁迫CK1能降低SOD酶活，呈现出高温处理生物炭制备的活性制剂组处理叶片SOD酶活降幅较大，其中BC300、BC600与CK1比较达到显著差异(P<0.05)，而BC450与CK1、BC300之间无显著性差异(P>0.05)。
POD酶活变化与SOD酶活变化趋势类似，Cr(Ⅵ)胁迫促使POD酶活显著提高，相对与非胁迫条件下，各处理酶活分别提高133.4U/(g.min)、42.7U/(g.min)、73.8U/(g.min)、20.1U/(g.min)，增幅达87.5％、28.29％、48.68％、13.16％；生物活性制剂处理较Cr(Ⅵ)胁迫CK1能明显降低POD酶活(P<0.05)；其中BC600处理与非Cr(Ⅵ)胁迫处理(CK0)的POD酶活无明显差异(P>0.05)。测定结果参见附图8所示。
Cr(Ⅵ)胁迫能使CAT酶活提高，随着施用的生物活性制剂中生物炭制备温度升高，CAT酶活逐渐下降，BC600处理叶片CAT酶活与CK0之间未见差异(P>0.05)；CK1与BC300处理CAT酶活无显著差异(P>0.05)，但BC450、BC600与CK1之间有明显差异(P<0.05)。
测定结果参见附图9所示。
通过以上试验可以证明生活垃圾堆肥采用600℃的炭化1小时获得的生物炭所制备的生物活性制剂具有较好的吸附固定Cr(Ⅵ)的特点，因此获得最优生物活性制剂中生物炭的最优化温度为600℃。
实施例十：重金属Cr(Ⅵ)吸附效果效果验证
将上述实施例三至实施例七中提供的技术方案配置的生物活性制剂结合实施例九中优化的最佳生物炭处理工艺分组为6-10组、并选用发明专利201910804279.1公开的一种重金属固定剂作为11组进行重金属Cr(Ⅵ)吸附效果验证。供试土壤为石灰性土壤，，土壤样品进行风干、混匀，过5mm土壤筛备用。镉胁迫模拟条件使用重铬酸钾。各组按照100ppmCr6+镉胁迫按纯量计算，生物活性制剂按照土壤重量的1.0％添加，将每个处理对应的土壤和生物活性制剂合均匀装于花盆中，每盆土重10kg，将氮肥100mg/kg(N，风干土重)和40mg/kg磷肥(P2O5，风干土重)配成营养液，按比例一次性均匀施入。试验玉米品种为新玉29号，将玉米催芽后，每盆种植玉米6棵，每个处理设置4个重复。20天后取玉米苗叶片分别测定收获后，测定玉米苗的地上生物量。测定结果如表3所示：
表3：铬胁迫条件下玉米苗期生长状况
通过施用本发明提供的生物活性剂后，在镉胁条件下，20天后取玉米苗叶片分别测定收获后，测定玉米苗的地上生物量。测定结果显示，施用本发明提供的生物活性剂后，玉米苗期的地上生长量显著高于使用发明专利201910804279.1公开的一种重金属固定，因此可见使用本发明提供的技术方案中制备的生物活性制剂能够改善重金属Cr(Ⅵ)胁迫对于玉米生长的抑制作用，有效促进玉米生长。
基于上述实施例三至实施例十，综合各项指标测定结果，即采用实施例六中所提供的重金属Cr(Ⅵ)吸附剂配方及实施例九中生物炭加工工艺优化的最佳制备工艺为：制备有机生活垃圾堆肥，先75℃烘干。将冷却的堆肥物放入铁制容器中，将容器放入马弗炉中，600℃的炭化1小时，后迅速取出，冷却后风干，粉碎研磨，过0.25mm筛备用。将制备获得的生物炭30kg，麦饭石50kg，腐植酸盐10kg，聚丙烯酰胺10kg。混合物均匀混合，调节水分15-20％，挤压造粒，进行包装，即得到所述生物活制剂。
通过施用最优方案制备的生物活性制剂在被Cr(Ⅵ)污染的石灰性土壤上施用，每亩施用500kg，种植作物为玉米。玉米根长增长了12.7％；根鲜重增长了10.77％；株高增长了10.52％；地上部分鲜重增长了13.53％，产量增长48％；玉米根部铬含量相对与对照组降低了31.50％，玉米地上部分铬含量相对与对照组降低了57.14％；玉米叶片中的丙二醛含量降低了14.7％，叶片中脯氨酸含量增加了132.14％；叶片可溶性糖下降50.2％；叶片超氧化物歧化酶(SOD)酶活降低了20.8％；叶片POD酶活降低了26.12％；叶片CAT酶活降低了10％。可见使用本发明提供的技术方案中制备的生物活性制剂能够改善重金属Cr(Ⅵ)胁迫对于玉米生长的抑制作用，有效促进玉米生长。
上述的对实例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
