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一种同步制备鱼籽精油和鱼籽功能肽的方法

2021-02-01 09:11:14

一种同步制备鱼籽精油和鱼籽功能肽的方法

  技术领域

  本发明属于分离纯化技术领域,具体涉及一种制备鱼籽精油和鱼籽功能肽的方法。

  背景技术

  我国是水产品加工的大国,在鱼类加工过程中,产生了大量的鱼类副产物如鱼鳞、鱼头、内脏和鱼籽。这些副产物主要用于生产鱼油、鱼粉、肥料、宠物食品和鱼饲料。据报道,海洋中的副产物是保健品和功能性食品配料最好的来源。目前,有关鱼皮和内脏等的高值化利用较多,而鱼籽的利用报道很少。

  鱼籽是鱼类加工业中的一种非常重要的副产物,富含高品质的必须氨基酸和脂肪酸。据报道,鱼籽中蛋白质约占其干重的50-85%,脂肪约占干重的8-32%。鱼籽精油是鱼籽中不饱和脂肪酸,其中富含DHA和EPA,可降低发炎反应,降低血脂肪、预防心脏血管疾病。鱼籽功能肽是鱼籽蛋白经蛋白酶水解后得到的一定分子量范围的功能肽混合物,以分子量小于1000Da的小分子肽为主。鱼籽功能肽不仅可以补充体内所需的氨基酸,还具有多种生理学活性。但目前还是分别从鱼籽中提取精油和蛋白,提取方法复杂,导致提取成本高。

  发明内容

  本发明的目的是提供一种制备鱼籽精油和鱼籽功能肽的方法,从而弥补现有技术的不足。

  本发明所提供的制备鱼籽精油和鱼籽功能肽的方法,包括如下的步骤:

  1)粉碎:将鱼籽粉碎后得到鱼籽粉;

  2)亚临界提取:将步骤1)中制备的鱼籽粉使用萃取剂进行亚临界流体萃取;萃取结束后分离萃取剂,回收鱼籽精油;

  所述的提取剂为丁烷等食品行业中允许使用的提取试剂;

  所述的萃取,是在45℃条件下萃取45min

  3)酶解:步骤2)中鱼籽残渣去除萃取剂后,加入胰蛋白酶和胶原蛋白酶进行酶解,得到酶解液,离心取上清液;

  其中胰蛋白酶和胶原蛋白酶在匀浆液的加入量比为1:50—5:1;

  作为优选,所述的胰蛋白酶和胶原蛋白酶的酶活比为1:10;

  所述的酶解条件,其一种是在35-55℃酶解3-5h;

  所述的离心的转速为6000-12000rpm;

  4)膜过滤:对步骤3)制备的上清液进行膜过滤,过滤液即为鱼籽功能肽溶液。

  上述步骤4)中膜分离是先用3500Da的膜分离,然后用360Da的膜分离。

  本发明可以同时提取鱼籽精油和鱼籽功能肽,并且步骤简单,可操作性强,同步提取有利于资源的高值化利用,降低成本,增强产品竞争力。

  附图说明

  图1:多肽分子量的标准品图;

  图2:鱼籽功能肽的分子量分布图。

  具体实施方式

  下面结合实施例对本发明进行详细的描述。

  实施例1:

  称取黄鱼干鱼籽100g,利用粉碎机粉碎,装滤布袋中放入亚临界流体萃取实验室成套设备萃取罐中,加丁烷至淹没滤布袋,在45℃条件下,萃取45min,分离萃取剂,回收鱼籽精油,得率为19.87%。鱼籽残渣去除丁烷后,加入1000ml蒸馏水后,加入3g胰蛋白酶和胶原蛋白酶(酶活比1:10),50℃酶解5h,酶解结束后加热至90℃灭酶,酶解液经离心后,收集上清液,上清液用膜过滤仪分离,得到360Da-3500Da鱼籽功能肽溶液,溶液浓缩至原体积的1/10,喷雾干燥得到30.98g鱼籽功能肽,得率为30.98%。

  实施例2:

  称取干鱼籽500g,利用粉碎机粉碎,装滤布袋中放入亚临界流体萃取实验室成套设备萃取罐中,加丁烷至淹没滤布袋,在45℃条件下,萃取45min,分离萃取剂,回收鱼籽精油,得率为20.37%。鱼籽残渣去除丁烷后,加入1000ml蒸馏水后,加入20g胰蛋白酶和胶原蛋白酶(酶活比1:10),50℃酶解5h,酶解结束后加热至90℃灭酶,酶解液经离心后,收集上清液,上清液用膜过滤仪分离,得到360Da-3500Da鱼籽功能肽溶液,溶液浓缩至原体积的1/10,真空减压干燥得到137.72g鱼籽功能肽,得率为27.54%。

  实施例3:

  称取干鱼籽1000g,利用粉碎机粉碎,装滤布袋中放入亚临界流体萃取实验室成套设备萃取罐中,加丁烷至淹没滤布袋,在45℃条件下,萃取45min,分离萃取剂,回收鱼籽精油,得率为22.19%。鱼籽残渣去除丁烷后,加入1000ml蒸馏水后,加入30g胰蛋白酶和胶原蛋白酶(酶活比1:10),50℃酶解5h,酶解结束后加热至90℃灭酶,酶解液经离心后,收集上清液,上清液用膜过滤仪分离,得到360Da-3500Da鱼籽功能肽溶液,溶液浓缩至原体积的1/10,冷冻干燥得到263.31g鱼籽功能肽,得率为26.33%。

  实施例4:鱼籽精油和鱼籽功能肽的研究

  一、鱼籽精油中DHA和EPA含量测定

  根据国标(GB5009.168-2016)中的第一种方法,检测实施例1鱼籽精油中的DHA和EPA,实验结果显示,鱼籽精油中DHA含量(g/100g)为13.4,EPA含量(g/100g)为4.35。

  二、鱼籽功能肽分子量分布分析

  根据国标(GB/T 22729-2008)方法测定实施例1中制备鱼籽功能肽的分子量,如图1所示,利用细胞色素C(12384Da),抑肽酶(6512Da),杆菌酶(1423Da),乙-乙-酪-精氨酸(451Da),乙-乙-乙氨酸(189Da)为标准品,建立标准曲线,得到保留时间和分子量对数值的标准曲线,方程式为y=-0.2678x+7.4913(R2=0.974)。按照标准曲线的方法,分析鱼籽功能肽的分子量分布,如图2所示,分子量小于3500Da的鱼籽功能肽占90.34%。

  三、鱼籽功能肽营养价值分析

  对实施例1中制备的鱼籽功能肽进行营养价值分析。

  ①必需氨基酸(EAA)含量与氨基酸总量(TAA)之比。必需氨基酸与非必需氨基酸(NEAA)之比(E/N)按下式计算:

  

  

  ②氨基酸评价指标:根据WHO/FAO/UNU 1985年推荐的氨基酸评分模式[5],选择成人组评分模式按下式计算鱼籽功能肽中必需氨基酸评分(AAS)和化学评分(CS)。

  

  

  由表1可得鱼籽功能肽中色氨酸的综合评分最低,是鱼籽功能肽的第一限制性氨基酸。WHO/FAO/UNU推荐成人AAS为100,即AAS与CS越接近于100,表明所测蛋白样品营养价值越高。鱼籽功能肽中除去色氨酸外,其他氨基酸的AAS都高于100,表明鱼籽活性肽具有较高的营养价值。

  表1鱼籽功能肽氨基酸评价指标

  

  

  对实施例2和实施例3制备的功能肽的检测结果与是实施例1的功能肽类似,表明制备的鱼籽功能肽具有类似的效果。

  四、鱼籽功能肽改善记忆功能

  对实施例1中制备的鱼籽功能肽进行改善记忆功能的评价。

  4.1鱼籽功能肽对东莨菪碱致记忆障碍大鼠逃避潜伏期和跨原平台次数的影响

  水迷宫实验结果显示,模型组大鼠逃避潜伏期较对照组均明显延长,鱼籽功能肽高剂量组与模型组比较,逃避潜伏期显著小于模型组(P<0.01),中剂量组逃避潜伏期小于模型组(P<0.05)。实验第5天去掉平台,观察各组大鼠的空间探索能力,结果显示,模型组大鼠与对照组比较,跨越平台的次数显著降低(P<01),表明学习记忆能力衰退;与模型组比较,鱼籽功能肽高剂量组跨越平台的次数增加(P<0.01),中、低剂量跨越平台的次数均高于模型组,但无统计学意义,表明治疗组均能够提高东莨菪碱致记忆障碍大鼠的记忆能力(表2)。

  表2:鱼籽功能肽对AD大鼠遇避潜伏期和跨原平台次数的影响(x土s)

  

  注:与模型组(东莨菪碱)比较,*P<005。

  2.2鱼籽功能肽对东莨菪碱致早老型痴呆大鼠学习记忆能力的影响

  如表3所示,学习成绩实验中,模型组与对照组比较,大鼠的反应时间显著延长,错误次数明显增加,表明小鼠的学习成绩下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。各治疗组与模型组比较,反应时间均缩短,错误次数均减少,差异具有统计学意义(P<0.01)。高剂量组与阳性药物组比较,反应时间缩短错误次数增加,差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组与低剂量组比较,反应时间明显缩短,错误次数减少,有统计学意义(P<0.05),表明各治疗组均能提高早老性痴呆大鼠跳台实验学习能力,且在改善潜伏时间方面鱼籽功能肽呈显著量效关系。记忆能力实验中,模型组与对照组比较,大鼠的潜伏时间显著缩短,错误次数明显增加,表明记忆成绩下降,差异具有统计学意义(P<0.01);各治疗组与模型组比较,潜伏时间均延长,错误次数均减少,差异有统计学意义(P<0.01),高剂量组与阳性药物组比较,潜伏时间延长,错误次数明显减少,差异有统计学意义(P<005),高剂量组与低剂量组比较,错误次数明显减少,但差异无统计学意义。

  表3:各组大鼠学习记忆能力的比较表(x±s)

  

  注:与模型组(东莨菪碱)比较*P<0.05。

  实验结果表明各治疗组均可提高早老性痴呆大鼠跳台记忆成绩,且在增加潜伏时间有量效关系的趋势。

  对本发明说明书中其它实施例中制备的鱼籽功能肽的功能进行检测,表明本发明制备的鱼籽功能肽都具有类似的改善记忆功能的效果。

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